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保健品中牛羊源性成分的PCR检测 被引量:21
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作者 陈颖 钱增敏 +3 位作者 徐宝梁 吴亚君 王晶 苏宁 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2004年第10期215-218,共4页
本文根据牛、羊线粒体mtDNA中的保守序列,设计了针对牛羊源性成分检测的特异性扩增引物,通过聚合酶链反应技术 (Polymerase Chain Reaction, PCR)建立了保健品中牛羊源性成分的快速检测方法。通过内切酶DpnII和SspI可分别对牛羊成分的... 本文根据牛、羊线粒体mtDNA中的保守序列,设计了针对牛羊源性成分检测的特异性扩增引物,通过聚合酶链反应技术 (Polymerase Chain Reaction, PCR)建立了保健品中牛羊源性成分的快速检测方法。通过内切酶DpnII和SspI可分别对牛羊成分的扩增结果进行进一步验证,该方法对牛源性成分的检测低限为0.05%,对山羊和绵羊源性成分的检测低限分别为0.005%和和0.5%,可作为保健品中牛羊源性成分检测有效方法,也可作为保健品及动物源性产品中成分真伪鉴别的准确、可靠方法。 展开更多
关键词 保健品 牛源性成分 羊源性成分 PCR检测
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快速、高效的羊绒羊毛织品DNA提取方法的建立 被引量:14
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作者 邵碧英 林志武 +2 位作者 陈文炳 缪婷玉 柯家骥 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期38-39,共2页
目的:建立一种快速、高效的羊绒羊毛纺织品DNA提取的方法。方法:采用chelex-100法的3种处理、试剂盒法分别提取羊绒羊毛织品的DNA,用18S rDNA片段、山羊和绵羊源性成分PCR扩增结果来比较提取效果。结果:试剂盒法提取DNA的效果优于chelex... 目的:建立一种快速、高效的羊绒羊毛纺织品DNA提取的方法。方法:采用chelex-100法的3种处理、试剂盒法分别提取羊绒羊毛织品的DNA,用18S rDNA片段、山羊和绵羊源性成分PCR扩增结果来比较提取效果。结果:试剂盒法提取DNA的效果优于chelex-100法,整个提取过程约需2h。9种供试材料均提取到DNA,且含有山羊和/或绵羊源性成分,与显微镜观察结果的符合率为100%。结论:建立的试剂盒法是一种快速、高效的适用于羊绒羊毛织品DNA提取的方法,为应用分子生物学方法鉴别山羊绒和绵羊毛奠定了基础。 展开更多
关键词 羊绒羊毛织品 DNA提取 山羊和绵羊源性成分 聚合酶链式反应(PCR)
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荧光定量PCR方法鉴别肉制品中羊源性成分 被引量:24
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作者 赵新 王永 +4 位作者 兰青阔 刘娜 陈锐 朱珠 李欧静 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期299-302,308,共5页
根据羊线粒体DNA细胞色素b基因序列,设计特异性引物和Taqman探针。通过反应条件的优化筛选,构建标准曲线,建立灵敏、可靠的肉制品中羊源性成分的实时荧光PCR鉴别方法。结果表明,所设计的引物可有效地进行肉制品中羊肉成分的鉴别,特异性... 根据羊线粒体DNA细胞色素b基因序列,设计特异性引物和Taqman探针。通过反应条件的优化筛选,构建标准曲线,建立灵敏、可靠的肉制品中羊源性成分的实时荧光PCR鉴别方法。结果表明,所设计的引物可有效地进行肉制品中羊肉成分的鉴别,特异性强,灵敏度高达16pg/μL;标准曲线扩增效率达98.561%,R2=1,符合《实时荧光定量国际化标准-MIQE指南》要求;本研究建立的方法检测结果与国标GB/T 20190-2006方法结果符合率达100%,且不需电泳、酶切和测序等步骤。通过对市售肉制品样本的鉴别验证了方法的实用价值,为肉制品质量的有效控制提供了新的途径。 展开更多
关键词 荧光定量PCR方法 羊源性成分 鉴别
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动物产品中牛、羊源性成分多重PCR检测方法的建立 被引量:15
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作者 邵碧英 陈文炳 +3 位作者 郑腾 江树勋 张志灯 李寿崧 《畜牧与兽医》 北大核心 2004年第3期7-9,共3页
以肉骨粉、鱼粉、猪肉干和鱼肉干为研究对象,异硫氰酸胍法提取总DNA,18S rDNA片段的扩增结果表明提取到的DNA中不存在抑制PCR的物质。应用梯度PCR技术对牛、羊源性成分检测的退火温度进行了优化,在单一PCR检测技术的基础上分别进行了18S... 以肉骨粉、鱼粉、猪肉干和鱼肉干为研究对象,异硫氰酸胍法提取总DNA,18S rDNA片段的扩增结果表明提取到的DNA中不存在抑制PCR的物质。应用梯度PCR技术对牛、羊源性成分检测的退火温度进行了优化,在单一PCR检测技术的基础上分别进行了18S rDNA片段和牛、羊源性成分的多重PCR分析,得到了预期的结果。试验表明,本文建立的多重PCR方法具有快速、简便、准确等特点,对动物产品牛、羊源性成分检测具有重要意义。 展开更多
关键词 动物产品 牛源性成分 羊源性成分 多重PCR 检测方法 动物性食品安全 饲料安全
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基于TaqMan实时荧光PCR检测肉制品中羊源性成分 被引量:8
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作者 郭梁 郭元晟 +6 位作者 钱俊平 海小 罗建兴 刘国强 李春冬 徐伟良 雅梅 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2018年第4期938-942,共5页
随着动物源性产品(农产品、食品和饲料)中掺假造假事件不断增多以及动物来源性疾病的传播风险逐渐加大,作为保障食品安全和维护消费者权益的高效检测手段,动物源性成分的定性和定量检测技术已成为国内外的研究热点。本研究通过比对分析... 随着动物源性产品(农产品、食品和饲料)中掺假造假事件不断增多以及动物来源性疾病的传播风险逐渐加大,作为保障食品安全和维护消费者权益的高效检测手段,动物源性成分的定性和定量检测技术已成为国内外的研究热点。本研究通过比对分析8种动物的线粒体全基因组序列筛选出羊源性成分特异性的引物和探针组合进行基于实时荧光PCR技术的羊源性成分鉴定。结果表明,所研发的羊源性成分检测的引物和探针具有高度的特异性,同时具有较好的灵敏度(可检测到1 pg的DNA)。羊肉制品中羊源性定量检测试验结果说明,此方法具有较好的定量检测能力。综上所述,以此引物和探针为基础的检测方法适用于羊源性食品和农畜产品的动物源性成分检测。 展开更多
关键词 羊源性成分 引物 探针 鉴定 TAQMAN
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动物产品及饲料中牛源和羊源性成分PCR检测方法的优化 被引量:6
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作者 邵碧英 张体银 +2 位作者 杨婕 陈文炳 郑腾 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2005年第3期225-229,共5页
   以牛肉、山羊肉为试验材料,对动物产品及饲料中牛源、羊源性成分 PCR检测方法进行了优化。结果,牛源性成分的最低检测限可达 10μg/g,羊源性成分的最低检测限达 0. 1μg/g。PCR检测和酶切鉴定结果表明,在水平测试的混合饲料粉中可...    以牛肉、山羊肉为试验材料,对动物产品及饲料中牛源、羊源性成分 PCR检测方法进行了优化。结果,牛源性成分的最低检测限可达 10μg/g,羊源性成分的最低检测限达 0. 1μg/g。PCR检测和酶切鉴定结果表明,在水平测试的混合饲料粉中可检出牛源、羊源性成分。 展开更多
关键词 PCR 牛源性成分 羊源性成分
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动物油脂中DNA的提取及牛、羊源性成分的PCR检测 被引量:5
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作者 邵碧英 张体银 +2 位作者 李志方 郑腾 陈文炳 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期300-302,共3页
用异硫氰酸胍法提取鱼油、加入牛肉DNA的鱼油、加入山羊肉DNA的鱼油和牛油中的DNA。18SrDNA片段以及牛、羊源性成分的PCR扩增结果表明,建立的动物油脂DNA提取方法是可行的。用建立的DNA提取方法提取3份送检鱼油的DNA,牛、羊源性成分的PC... 用异硫氰酸胍法提取鱼油、加入牛肉DNA的鱼油、加入山羊肉DNA的鱼油和牛油中的DNA。18SrDNA片段以及牛、羊源性成分的PCR扩增结果表明,建立的动物油脂DNA提取方法是可行的。用建立的DNA提取方法提取3份送检鱼油的DNA,牛、羊源性成分的PCR检测结果均为阴性。 展开更多
关键词 动物油脂 DNA提取 羊源性成分 PCR
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多重实时荧光PCR检测牛、山羊和绵羊源性成分 被引量:43
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作者 曾少灵 秦智锋 +9 位作者 阮周曦 花群义 卢体康 吕建强 陈书琨 曹琛福 张彩虹 孙洁 陈兵 吴绍精 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期139-146,共8页
根据牛、山羊和绵羊线粒体细胞色素b基因序列,设计特异性引物和以不同荧光素标记的Taqman探针。通过对PCR反应体系和反应条件的优化筛选,建立能同时鉴别牛、山羊和绵羊源性成分的多重实时荧光PCR方法。采用本文方法与国标GB/T20190-200... 根据牛、山羊和绵羊线粒体细胞色素b基因序列,设计特异性引物和以不同荧光素标记的Taqman探针。通过对PCR反应体系和反应条件的优化筛选,建立能同时鉴别牛、山羊和绵羊源性成分的多重实时荧光PCR方法。采用本文方法与国标GB/T20190-2006方法分别对17种不同源性动物DNA和200份不同来源样品DNA进行牛羊源性成分检测,数据显示两者检测结果符合率达100%,特异性相当。与国标方法相比,本试验方法不需电泳、酶切和测序,即可在一个PCR反应中同时鉴别检测牛、山羊和绵羊3种源性成分,检测效率提高近3倍;灵敏度更高,比国标方法灵敏10倍;适用性更广,除了饲料,还适用于肉品、奶品、生皮和动物油脂等动物产品的牛羊源性成分检测。 展开更多
关键词 细胞色素B基因 多重实时荧光PCR 山羊和绵羊源性成分
原文传递
应用多重PCR同时检测牛、羊源性成分 被引量:16
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作者 宗卉 范万红 温燕辉 《中国草食动物》 2006年第6期21-23,共3页
我们选择了3对引物A,B,C。A可扩增大多数脊椎动物(哺乳类、鸟类、爬行类、两栖类和鱼类)细胞色素b基因上一个371bp的区段,B可扩增位于牛mtDNAD-loop区段内的一个274bp的区段,C可扩增羊mtDNA基因上一个199bp的区段。由于3对引物扩增的产... 我们选择了3对引物A,B,C。A可扩增大多数脊椎动物(哺乳类、鸟类、爬行类、两栖类和鱼类)细胞色素b基因上一个371bp的区段,B可扩增位于牛mtDNAD-loop区段内的一个274bp的区段,C可扩增羊mtDNA基因上一个199bp的区段。由于3对引物扩增的产物分别相差约100bp左右,可通过琼脂糖凝胶电泳分离来并观察结果,建立了基于内对照的同时检测牛、羊源性成分的三重PCR方法。 展开更多
关键词 牛羊源性成分 内对照 多重PCR
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运用SYBR Green Ⅰ熔解曲线法检测饲料中牛、羊源性成分的研究 被引量:7
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作者 班付国 刘宏伟 +1 位作者 高延玲 马俊 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第2期128-131,共4页
试验旨在建立SYBR GreenⅠ熔解曲线法对饲料中牛、羊源成分进行检测,以SYBR GreenⅠ为荧光染料,通过优化PCR反应体系,提高了检测灵敏度。在随机抽检的145批样品中,与国标法(GB/T20190-2006)相比,SYBR GreenⅠ熔解曲线法的准确性达到了10... 试验旨在建立SYBR GreenⅠ熔解曲线法对饲料中牛、羊源成分进行检测,以SYBR GreenⅠ为荧光染料,通过优化PCR反应体系,提高了检测灵敏度。在随机抽检的145批样品中,与国标法(GB/T20190-2006)相比,SYBR GreenⅠ熔解曲线法的准确性达到了100%,此方法可作为饲料中牛羊源成分检测的一种方法。 展开更多
关键词 牛羊源成分 SYBR Green 荧光染料 熔解曲线
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应用两种PCR方法检测饲料中牛、羊源性成分 被引量:5
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作者 金凌艳 顾欣 +1 位作者 蔡金华 刘雅妮 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 2008年第S2期76-80,共5页
对普通PCR和实时(realtime)PCR两种方法在饲料中牛、羊源性成分检测中的应用进行了比较。分别设计并合成相应的引物和探针,对饲料中的牛、羊源性成分进行检测。结果表明,用普通PCR最低可以从饲料中检出0.1%的牛、羊源性成分,realtime PC... 对普通PCR和实时(realtime)PCR两种方法在饲料中牛、羊源性成分检测中的应用进行了比较。分别设计并合成相应的引物和探针,对饲料中的牛、羊源性成分进行检测。结果表明,用普通PCR最低可以从饲料中检出0.1%的牛、羊源性成分,realtime PCR最低可以从饲料中检出0.01%的牛、羊源性成分。 展开更多
关键词 牛、羊源性成分 普通PCR 实时PCR
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动物产品及饲料中牛源和羊源性成分三重荧光PCR检测方法的建立 被引量:16
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作者 赵冉 蔡振鸿 陈永锋 《畜牧与兽医》 北大核心 2012年第7期18-22,共5页
为鉴定和区分饲料及动物产品中牛、山羊、绵羊源性成分,根据线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)种间保守序列,设计合成了3对特异性引物与TaqMan探针,通过对荧光PCR反应体系和反应条件的优化筛选,建立了三重荧光PCR方法,在同一个荧光PC... 为鉴定和区分饲料及动物产品中牛、山羊、绵羊源性成分,根据线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)种间保守序列,设计合成了3对特异性引物与TaqMan探针,通过对荧光PCR反应体系和反应条件的优化筛选,建立了三重荧光PCR方法,在同一个荧光PCR反应中完成3种动物源性成分的检测。用该方法对16种不同源性的动物DNA进行检测,结果表明能特异地鉴别检测出牛、山羊和绵羊源性成分,且敏感性比现行国标PCR法高100倍。该方法适用于饲料、肉制品、奶制品等动物源性产品的检测。 展开更多
关键词 线粒体DNA 荧光PCR 山羊和绵羊源性成分
原文传递
利用荧光定量PCR进行饲料中牛羊源性成分检测的快速筛选 被引量:5
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作者 姜艳彬 王海 +4 位作者 李颖 侯东军 杨红菊 金秀娥 于雷 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第6期36-39,共4页
通过荧光定量PCR进行饲料中牛羊源性成分的快速筛选研究,其可以快速的检测饲料中是否含有牛羊源性成分,避免了常规检测中大量阴性样品造成的巨大工作量,并首次对饲料中牛羊源性成分进行定量分析,推导出定量计算公式,且灵敏度比常规的PC... 通过荧光定量PCR进行饲料中牛羊源性成分的快速筛选研究,其可以快速的检测饲料中是否含有牛羊源性成分,避免了常规检测中大量阴性样品造成的巨大工作量,并首次对饲料中牛羊源性成分进行定量分析,推导出定量计算公式,且灵敏度比常规的PCR检测方法高100倍以上。 展开更多
关键词 牛羊源成分 饲料 荧光定量PCR 快速筛选
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二重实时荧光PCR方法检测山羊和绵羊源性成分 被引量:2
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作者 曾少灵 秦智锋 +8 位作者 阮周曦 花群义 陈书琨 吕建强 张彩虹 曹琛福 孙洁 陈兵 吴绍精 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期810-813,830,共5页
本研究根据山羊、绵羊线粒体中的cytb基因序列,利用ABI primer express 3.0和DNAStar软件设计了特异性引物和探针。通过对引物和探针浓度、Mg2+浓度、dNTP浓度和Taq酶用量以及反应条件等因素的优化筛选,建立了能同时鉴别山羊和绵羊源性... 本研究根据山羊、绵羊线粒体中的cytb基因序列,利用ABI primer express 3.0和DNAStar软件设计了特异性引物和探针。通过对引物和探针浓度、Mg2+浓度、dNTP浓度和Taq酶用量以及反应条件等因素的优化筛选,建立了能同时鉴别山羊和绵羊源性成分的二重实时荧光PCR方法。所建方法灵敏性高、特异性好,对17种不同源性的动物DNA和50份不同来源的样品DNA进行实时荧光PCR检测,结果表明引物与探针能特异地鉴别检测出山羊和绵羊源性成分。实验结果表明该检测方法适用于饲料、肉制品、奶制品和生皮等动物源性产品的山羊和绵羊源性成分鉴定。 展开更多
关键词 CYTB基因 实时荧光PCR 山羊和绵羊源性成分
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