-
题名灵杆菌非特异性核酸酶的原核表达、纯化及活性分析
被引量：7
- 1
-
-
作者
陈鹏
杨海艳
李慧婧
杨龙雨
李学俊
-
机构
西北农林科技大学生命科学学院
-
出处
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第8期1247-1257,共11页
-
基金
西北农林科技大学基本科研业务费专项(No.QN2009064)
国家自然科学基金(No.30400282)资助~~
-
文摘
以灵杆菌基因组DNA为模板,PCR扩增非特异性核酸酶(Non-specific nuclease,NU)基因,并克隆到pMAL-c4X载体上构建重组表达载体pMAL-c4X-NU。经测序及BLASTN发现其与灵杆菌Serratia marcescens核酸酶基因的同源性为97%。将构建的表达载体pMAL-c4X-NU转入大肠杆菌BL21,经IPTG诱导实现了胞内表达78 kDa的麦芽糖结合蛋白-NU融合蛋白(Maltose-binding protein-NU,MBP-NU),其最佳诱导表达条件为37℃,0.75 mmol/L IPTG诱导1.5 h。用Amylose resin纯化得到了目的蛋白。活性检测表明MBP-NU具有同时降解DNA和RNA的活性,在37℃、pH 8.0时活性最高,比活力为1.11×106 U/mg,目标蛋白的纯化效率可达10.875 mg/L。纯化的目标蛋白中无蛋白酶活性存在。0.5 mmol/L乙二胺四乙酸(Ethylene diamine tetraacetic acid,EDTA)、1 mmol/L苯甲基磺酰氟(Phenylmethanesulfonyl fluoride,PMSF)以及150 mmol/L KCl对MBP-NU的活性几乎无影响,因此MBP-NU可作为蛋白质纯化过程中核酸的高效降解酶。
-
关键词
灵杆菌核酸酶
载体构建
融合蛋白
亲和纯化
-
Keywords
serratia nuclease
vector construction
fusion protein
affinity purification
-
分类号
Q78
[生物学—分子生物学]
-
