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晚期氧化蛋白产物通过内质网应激调节人肾小管上皮细胞自噬的研究 被引量:1
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作者 李敏晖 汤珣 +3 位作者 姜婷婷 张雯英 谢唯 章俊 《重庆医学》 CAS 2018年第29期3735-3738,3742,共5页
目的探讨内质网应激(ERS)介导的晚期氧化蛋白产物(AOPPs)诱导肾小管上皮细胞(HK-2)的自噬抑制及其信号通路。方法 (1)AOPPs刺激HK-2细胞,检测信号通路腺苷酸活化蛋白激酶/乳动物雷帕霉素靶蛋白(AMPK/mTOR)的表达;(2)AMPK抑制剂Compoun ... 目的探讨内质网应激(ERS)介导的晚期氧化蛋白产物(AOPPs)诱导肾小管上皮细胞(HK-2)的自噬抑制及其信号通路。方法 (1)AOPPs刺激HK-2细胞,检测信号通路腺苷酸活化蛋白激酶/乳动物雷帕霉素靶蛋白(AMPK/mTOR)的表达;(2)AMPK抑制剂Compoun C和激活剂AICAR分别预处理细胞,并予AOPPs刺激,检测自噬标志物LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin1、P62及AMPK/mTOR蛋白的表达;(3)ERS激活剂Thapsigargin与抑制剂Salubrinal分别预处理细胞,并予AOPPs刺激,检测ERS标志蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、自噬及AMPK/mTOR蛋白的表达。结果 AOPPs可抑制AMPK的磷酸化和诱导mTOR的磷酸化(P<0.05)。Compoun C使LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin1表达下降,p62表达上升,同时抑制AMPK的磷酸化和诱导mTOR的磷酸化(P<0.05),而AICAR表现出相反的效果。Thapsigargin能抑制AMPK的磷酸化和诱导mTOR的磷酸化,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin1表达下降,p62表达上升,而Salubrinal表现出相反的效果。结论ERS可能通过激活AMPK/mTOR信号通路介导AOPPs诱导的自噬抑制的发生。 展开更多
关键词 晚期氧化蛋白产物 内质网应激 丝氨酸苏氨酸蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白通路 自噬
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微小RNA-199a对人胚肺成纤维细胞表型转化的抑制作用机制研究 被引量:1
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作者 武丹 罗馨 +1 位作者 贾金虎 曾林祥 《中国临床药理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期23-26,共4页
目的探讨微小RNA-199a(miR-199a)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人胚肺成纤维细胞(HELF)向肌成纤维细胞转化的作用及机制。方法将细胞分为6组:对照组、模型组(5 ng·mL^-1的TGF-β1诱导HELF细胞72 h)、第1转染组(转染150 nmol&#... 目的探讨微小RNA-199a(miR-199a)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人胚肺成纤维细胞(HELF)向肌成纤维细胞转化的作用及机制。方法将细胞分为6组:对照组、模型组(5 ng·mL^-1的TGF-β1诱导HELF细胞72 h)、第1转染组(转染150 nmol·L^-1的inhibitor NC质粒)、第2转染组(转染150 nmol·L^-1的miR-199a inhibitor质粒)、第3转染组(转染inhibitor NC质粒+TGF-β1诱导)和第4转染组(转染miR-199a inhibitor质粒+TGF-β1诱导)。用实时荧光定量-PCR法检测细胞中miR-199a基因的表达(2^-△△Ct值),以蛋白质印迹法检测细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、CollagenⅠ、磷酸化-丝氨酸/苏氨酸激酶(p-Akt)和磷酸化-哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)的表达水平(灰度值)。结果对照组、模型组、第1转染组、第2转染组、第3转染组和第4转染组的miR-199a表达水平分别为0.99±0.00,4.73±0.29,0.93±0.12,0.37±0.01,4.52±0.22和0.31±0.08,模型组与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.001)。模型组、第3转染组和第4转染组的α-SMA蛋白表达水平分别为0.58±0.13,0.58±0.10和0.36±0.03;这3组的CollagenⅠ蛋白表达水平分别为0.50±0.05,0.49±0.07和0.29±0.04;这3组的p-Akt(S473)/Akt蛋白表达水平分别为0.60±0.15,0.59±0.16和0.30±0.09;这3组的p-mTOR/mTOR蛋白表达水平分别为0.74±0.02,0.74±0.04,0.49±0.06,上述指标:第4转染组与第3转染组比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论miR-199a促进TGF-β1诱导的HELF细胞向肌成纤维细胞的转化,其机制可能与miR-199a激活PI3K/Akt/mTOR通路有关。 展开更多
关键词 微小RNA-199a 转化生长因子-β1 人胚肺成纤维细胞 肌成纤维细胞 磷脂酰肌醇3-激酶/丝氨酸/苏氨酸激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路
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