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多鳍鱼Shh基因克隆与同源性分析
被引量：
3
1
作者
张昌盛
刘群
+3 位作者
李湘涛
翟红
王俊杰
孙永华
《科技导报》
CAS
CSCD
2007年第12期23-27,共5页
根据已报道的软骨鱼、硬骨鱼、两栖类、鸟类、哺乳类和人的Sonichedgehog(Shh)基因序列,在Shh基因保守区设计一对简并性引物,利用PCR技术从多鳍鱼cDNA中扩增Shh基因。结果显示,多鳍鱼Shh基因全长1263bp,编码421个氨基酸。通过同源性比...
根据已报道的软骨鱼、硬骨鱼、两栖类、鸟类、哺乳类和人的Sonichedgehog(Shh)基因序列,在Shh基因保守区设计一对简并性引物,利用PCR技术从多鳍鱼cDNA中扩增Shh基因。结果显示,多鳍鱼Shh基因全长1263bp,编码421个氨基酸。通过同源性比较发现,多鳍鱼与肺鱼的同源性最高,为82.5%,二级结构分析表明,Shh蛋白含有30.71%的α螺旋,21.67%的扩展线条和47.62%的无规卷曲,不含β片层;并以蛋白质结构数据库(PDB)中已解析的Shh蛋白的三维结晶结构(3D)为模板,利用http://www.expasy.org/swissmod/SWISS-MODEL.html同源模建Shh蛋白的三维结构,为进一步研究Shh基因在胚胎体节发育和肢芽图式形成中的功能奠定了基础。
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关键词
多鳍鱼
Shh基因
分子进化
同源性分析
下载PDF
职称材料
实时荧光定量PCR检测多鳍鱼Shh基因表达标准品质粒和标准曲线的构建
被引量：
1
2
作者
张昌盛
王俊杰
+2 位作者
李湘涛
翟红
刘群
《科技导报》
CAS
CSCD
2007年第13期41-44,共4页
为了快速、准确定量多鳍鱼Shh基因在机体组织中的表达水平,根据笔者克隆的Shh基因序列,选择其高度保守区域设计一对引物,对多鳍鱼各组织提取mRNA,经RT-PCR扩增,产物纯化后与pGEM-T-easy连接,转化大肠杆菌DH5α。筛选后得到重组标准品质...
为了快速、准确定量多鳍鱼Shh基因在机体组织中的表达水平,根据笔者克隆的Shh基因序列,选择其高度保守区域设计一对引物,对多鳍鱼各组织提取mRNA,经RT-PCR扩增,产物纯化后与pGEM-T-easy连接,转化大肠杆菌DH5α。筛选后得到重组标准品质粒,对重组标准品质粒进行酶切、PCR和测序鉴定,表明Shh基因保守区段已经成功克隆。将重组标准品质粒进行倍比稀释,然后以此为模板,进行荧光定量PCR,系统自动分析软件显示Ct值与标准品浓度的对数之间存在良好的线性关系。回归方程为y=-0.32x+10.47,回归系数为1.00。构建Shh基因表达检测标准品质粒和标准曲线,建立检测多鳍鱼Shh基因荧光定量PCR方法,为进一步研究Shh基因在组织中的动态分布和研究多鳍鱼系统发育奠定了基础。
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关键词
Shh基因
实时荧光定量PCR
标准曲线
多鳍鱼
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职称材料
题名
多鳍鱼Shh基因克隆与同源性分析
被引量：
3
1
作者
张昌盛
刘群
李湘涛
翟红
王俊杰
孙永华
机构
中国农业大学动物医学院
北京自然博物馆
出处
《科技导报》
CAS
CSCD
2007年第12期23-27,共5页
基金
北京市科学技术研究院萌芽计划项目资助
文摘
根据已报道的软骨鱼、硬骨鱼、两栖类、鸟类、哺乳类和人的Sonichedgehog(Shh)基因序列,在Shh基因保守区设计一对简并性引物,利用PCR技术从多鳍鱼cDNA中扩增Shh基因。结果显示,多鳍鱼Shh基因全长1263bp,编码421个氨基酸。通过同源性比较发现,多鳍鱼与肺鱼的同源性最高,为82.5%,二级结构分析表明,Shh蛋白含有30.71%的α螺旋,21.67%的扩展线条和47.62%的无规卷曲,不含β片层;并以蛋白质结构数据库(PDB)中已解析的Shh蛋白的三维结晶结构(3D)为模板,利用http://www.expasy.org/swissmod/SWISS-MODEL.html同源模建Shh蛋白的三维结构,为进一步研究Shh基因在胚胎体节发育和肢芽图式形成中的功能奠定了基础。
关键词
多鳍鱼
Shh基因
分子进化
同源性分析
Keywords
senegal
bichir
Shh
gene,
molecular
evolution
polymorphistic
analysis
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
Q953
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职称材料
题名
实时荧光定量PCR检测多鳍鱼Shh基因表达标准品质粒和标准曲线的构建
被引量：
1
2
作者
张昌盛
王俊杰
李湘涛
翟红
刘群
机构
北京自然博物馆
中国农业大学动物医学院
出处
《科技导报》
CAS
CSCD
2007年第13期41-44,共4页
基金
北京市科学技术研究院萌芽计划项目
文摘
为了快速、准确定量多鳍鱼Shh基因在机体组织中的表达水平,根据笔者克隆的Shh基因序列,选择其高度保守区域设计一对引物,对多鳍鱼各组织提取mRNA,经RT-PCR扩增,产物纯化后与pGEM-T-easy连接,转化大肠杆菌DH5α。筛选后得到重组标准品质粒,对重组标准品质粒进行酶切、PCR和测序鉴定,表明Shh基因保守区段已经成功克隆。将重组标准品质粒进行倍比稀释,然后以此为模板,进行荧光定量PCR,系统自动分析软件显示Ct值与标准品浓度的对数之间存在良好的线性关系。回归方程为y=-0.32x+10.47,回归系数为1.00。构建Shh基因表达检测标准品质粒和标准曲线,建立检测多鳍鱼Shh基因荧光定量PCR方法,为进一步研究Shh基因在组织中的动态分布和研究多鳍鱼系统发育奠定了基础。
关键词
Shh基因
实时荧光定量PCR
标准曲线
多鳍鱼
Keywords
Shh
gene
real-time
quantitative
PCR
standard
curve
senegal
bichir
分类号
Q344 [生物学—遗传学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
多鳍鱼Shh基因克隆与同源性分析
张昌盛
刘群
李湘涛
翟红
王俊杰
孙永华
《科技导报》
CAS
CSCD
2007
3
下载PDF
职称材料
2
实时荧光定量PCR检测多鳍鱼Shh基因表达标准品质粒和标准曲线的构建
张昌盛
王俊杰
李湘涛
翟红
刘群
《科技导报》
CAS
CSCD
2007
1
下载PDF
职称材料
已选择
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引用分析
参考文献
引证文献
统计分析
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