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一株引起普通棉耳狨猴死亡病毒的分离与鉴定 被引量：18
1
作者 石建党 李晓眠 +4 位作者 刘凤勇 金孟珏 张国际 刘民 李梅 《中国病毒学》 CSCD 2003年第4期357-361,共5页
1999年6月,天津医科大学动物中心饲养的珍贵灵长类实验动物——普通棉耳狨猴群体中暴发急性呼吸道传染病,病死率高达33％。在排除细菌感染的基础上,通过死亡狨猴肺组织匀浆接种鸡胚和MDCK细胞的分离培养,分离出一株具有高血凝效价的病... 1999年6月,天津医科大学动物中心饲养的珍贵灵长类实验动物——普通棉耳狨猴群体中暴发急性呼吸道传染病,病死率高达33％。在排除细菌感染的基础上,通过死亡狨猴肺组织匀浆接种鸡胚和MDCK细胞的分离培养,分离出一株具有高血凝效价的病毒株。经双份血清试验及动物接种试验,确认该病毒是本次疾病流行的病原体。又进一步通过与常见呼吸道病毒标准毒株及血清进行交叉血凝抑制试验、电镜观察、RT-PCR技术并结合生物信息学方法对该毒株进行鉴定,确认本次疾病流行的病原体是副流感1型病毒中的仙台病毒。 展开更多
关键词 棉耳狨猴 病毒 分离 鉴定 血凝抑制试验 仙台病毒
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仙台病毒在儿童急性呼吸道感染中的血清学调查 被引量：13
2
作者 刘春燕 张媛媛 +4 位作者 姚薇 李梅 李晓眠 何建民 石立莹 《天津医科大学学报》 2004年第3期378-379,共2页
目的 :检测仙台病毒在天津市儿童急性呼吸道感染中的情况。方法 :血凝抑制试验。结果 :39份患儿血清标本中检测出12份仙台病毒抗体阳性 ,阳性率30.77 % ;结论 :呼吸道疾病的高发季节 ,仙台病毒在儿童急性呼吸道感染中占重要地位。
关键词 血凝抑制试验 仙台病毒 呼吸道感染 儿童
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一株致普通棉耳狨猴严重下呼吸道感染的副粘病毒种系进化分析 被引量：9
3
作者 李梅 石建党 +4 位作者 石立莹 李晓眠 张国际 秦宇 袁立军 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期603-606,共4页
目的探讨副粘病毒Tianjin株的种系进化地位。方法将副粘病毒Tianjin株HN核苷酸、氨基酸序列与GenBank发布的副粘病毒相应序列进行比较,构建种系进化树,阐明副粘病毒Tianjin株在副粘病毒科中的分类地位。结果基于HN核苷酸序列的种系进化... 目的探讨副粘病毒Tianjin株的种系进化地位。方法将副粘病毒Tianjin株HN核苷酸、氨基酸序列与GenBank发布的副粘病毒相应序列进行比较,构建种系进化树,阐明副粘病毒Tianjin株在副粘病毒科中的分类地位。结果基于HN核苷酸序列的种系进化分析表明,副粘病毒Tianjin株属于副粘病毒科、副粘病毒亚科、呼吸道病毒属,与仙台病毒亲缘关系最近。Tianjin株与仙台病毒BB1株HN核苷酸、氨基酸序列同源性分别为94.8%、95.1%,与其他仙台病毒,在84.8%～88.7%和89.6%～91.7%之间。Tianjin株与BB1株HN核苷酸序列的差异明显大于同一进化分支内的仙台病毒之间的差异。Tianjin株HN蛋白存在18个独特的氨基酸残基变异。结论结合种系进化分析结果、病毒的宿主来源和致病特点,提示副粘病毒Tianjin株不属于仙台病毒现有的3个进化分支而自成独立的一支。 展开更多
关键词 副粘病毒 仙台病毒 HN序列 种系进化分析
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仙台病毒的结构和感染动物的诊断 被引量：9
4
作者 翟新验 卢胜明 刘钧 《实验动物科学与管理》 2005年第2期30-31,47,共3页
仙台病毒是引起啮齿类动物呼吸道疾病的病原,它是具有包膜、线性、非片段的负链RNA病毒,可通过血清学方法和分子生物学技术进行检测。
关键词 仙台病毒 RNA 血清学方法 分子生物学技术
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仙台病毒基因结构与功能的研究进展 被引量：9
5
作者 袁立军 李晓眠 李梅 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2006年第6期462-464,共3页
仙台病毒(SeV)是引起啮齿类动物呼吸道疾病的病原,属于副粘病毒科,单股负链RNA病毒。本文就组成SeV的基因结构和功能做一综述。
关键词 仙台病毒 基因结构 蛋白功能 综述
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仙台病毒BB1株基因组cDNA序列测定及比较分析 被引量：8
6
作者 杨宇 任鲁风 +2 位作者 张辉 侯云德 吴小兵 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期96-100,共5页
该研究对仙台病毒BB1分离株的cDNA全序列进行测序,通过RT-PCR法获得的4个相互重叠的质粒克隆覆盖了全长基因组,并将BB1全长序列与其它已知的仙台病毒序列进行比较。BB1株病毒的基因组为15 384个碱基构成,与其它已知仙台病毒基因组的基... 该研究对仙台病毒BB1分离株的cDNA全序列进行测序,通过RT-PCR法获得的4个相互重叠的质粒克隆覆盖了全长基因组,并将BB1全长序列与其它已知的仙台病毒序列进行比较。BB1株病毒的基因组为15 384个碱基构成,与其它已知仙台病毒基因组的基因排列与组成规律是一致的,未发现插入或缺失突变。与现已公布5个仙台病毒代表株全基因组序列比较发现,BB1株与其它仙台病毒株同源性均有较大差异。遗传进化分析结果显示,BB1株与Z株和Hamamatsu株的同源性仅为87%和91%,不属于这两株代表的进化分支而归属于第三个基因型。 展开更多
关键词 仙台病毒 基因组 核苷酸序列分析
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阳离子膜融合脂质体介导反义寡核苷酸在Hela细胞中的转染实验研究 被引量：8
7
作者 胡英 金一 +1 位作者 王华 李敏伟 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第11期892-896,共5页
目的　研究阳离子膜融合脂质体 (CFL)介导反义寡核苷酸 (ASON)的细胞转染效率及影响因素。方法逆相蒸发法制备 3种不同阳离子含量的脂质体 (CL) ,在CL上引入仙台病毒形成CFL ,将制得的阳离子膜融合脂质体与反义寡核苷酸混合得到复合物 ... 目的　研究阳离子膜融合脂质体 (CFL)介导反义寡核苷酸 (ASON)的细胞转染效率及影响因素。方法逆相蒸发法制备 3种不同阳离子含量的脂质体 (CL) ,在CL上引入仙台病毒形成CFL ,将制得的阳离子膜融合脂质体与反义寡核苷酸混合得到复合物 ,考察形态学及载药量 ,用MTT法考察该载体的细胞毒性 ,流式细胞仪测定阳性细胞百分率和平均荧光强度。结果　制得的CFL形态均匀 ,粒径为 (16 8± 6 5 )nm。载药量随着磷脂 ASON(+ - )电荷比增加而增加。CFL细胞毒性明显低于相同电荷比的CL ,细胞转染效率是随阳离子含量、磷脂 ASON(+ - )电荷比增加而增加 ,血清和低温均对CFL的细胞转染有影响。结论　阳离子膜融合脂质体作为载体在低电荷比条件下可降低细胞毒性并可提高细胞转染效率 ,可作为该ASON的给药系统而进一步研究。 展开更多
关键词 阳离子膜融合脂质体 反义寡核苷酸 仙台病毒 转染效率 实验研究 基因治疗
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CMV与T7启动子对仙台病毒微小基因组拯救效率的比较 被引量：8
8
作者 魏国超 田文洪 +5 位作者 王刚 柳云帆 尉迟捷 董小岩 凌虹 吴小兵 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期237-245,共9页
构建一种以分泌型荧光素酶基因(Gluc)作为报告基因的仙台病毒BB1株微小基因组质粒,比较了CMV启动子与T7启动子对仙台病毒微小基因组的拯救效率。首先设计并合成锤头状核酶序列,仙台病毒trailer、L基因非编码区、N基因非编码区和leader... 构建一种以分泌型荧光素酶基因(Gluc)作为报告基因的仙台病毒BB1株微小基因组质粒,比较了CMV启动子与T7启动子对仙台病毒微小基因组的拯救效率。首先设计并合成锤头状核酶序列,仙台病毒trailer、L基因非编码区、N基因非编码区和leader序列以及丁型肝炎病毒核酶序列,插入含有CMV和T7双启动子的质粒pVAX1中,获得仙台微小基因组的通用型载体pVAX-miniSeV。将Gluc基因插入pVAX-miniSeV中,分别获得正向插入的仙台病毒微小基因组载体pVAX-miniSeV-Gluc(+)和反向插入的pVAX-miniSeV-Gluc(-)。用pVAX-miniSeV-Gluc(+)转染BHK21细胞能在上清中检测到高水平的Gluc活性,表明其中的CMV启动子具有正常转录功能。将pVAX-miniSeVGluc(-)和仙台病毒N、P、L蛋白表达质粒共转染BSR T7/5细胞(稳定表达T7RNA聚合酶的BHK-21细胞)检测到Gluc的高效表达,表明pVAX-miniSeV-Gluc(-)能够被有效拯救;但在BHK-21细胞中却未检测到Gluc的有效表达,提示该载体中的CMV启动子对仙台病毒微小基因组的拯救效率可能没有明显作用。为了进一步了解CMV与T7启动子各自对于仙台病毒微小基因组拯救的作用,本研究又构建了单独含有CMV或T7启动子的仙台病毒微小基因组载体pCMV-miniSeV-Gluc(-)和pT7-miniSeV-Gluc(-)。将这两种载体和仙台病毒N、P、L蛋白表达质粒分别共转染BSR T7/5细胞,结果pT7-miniSeV-Gluc(-)共转染组检测到了Gluc的高效表达,而pCMV-miniSeV-Gluc(-)共转染组未检测到,证实了通用型载体pVAX-miniSeV中仅T7启动子对仙台病毒微小基因组的拯救起了关键作用,而CMV启动子作用不明显。本研究成功构建了一种通用型双启动子仙台病毒微小基因组载体pVAX-miniSeV,并证明了T7启动子系统对仙台病毒微小基因组拯救的关键作用。本研究为下一步构建仙台病毒全基因感染性克隆打下了基础。 展开更多
关键词 T7启动子 CMV启动子 仙台病毒 微小基因组
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基于微流控芯片技术的五种啮齿类动物疫病检测方法的建立 被引量：1
9
作者 薛俊欣 熊炜 +4 位作者 张秋蕾 林颖峥 王巧全 蒋静 李健 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2023年第1期78-85,共8页
为提升啮齿类实验动物的检疫效率,本研究拟建立鼠痘病毒、流行性出血热病毒、淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒、仙台病毒和鼠肝炎病毒联检的微流控芯片方法并进行评价。针对5种病毒基因保守序列设计特异性LAMP引物,将引物包埋于芯片反应槽内... 为提升啮齿类实验动物的检疫效率,本研究拟建立鼠痘病毒、流行性出血热病毒、淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒、仙台病毒和鼠肝炎病毒联检的微流控芯片方法并进行评价。针对5种病毒基因保守序列设计特异性LAMP引物,将引物包埋于芯片反应槽内,通过检测5种啮齿类动物病毒和另外3种病毒的样本来分析本方法的特异性,通过检测不同浓度的模板来评价本方法的灵敏度和重复性,通过检测35份小鼠的临床阳性样本和30份健康小鼠的肝组织样本来评价本方法的临床应用效果。结果表明,本研究建立的微流控芯片方法特异性好、灵敏度高、重复性佳,各指标间无相互干扰。本方法可提高啮齿类实验动物的检疫效率。 展开更多
关键词 鼠痘病毒 流行性出血热病毒 淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒 仙台病毒 鼠肝炎病毒 微流控芯片
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大鼠仙台病毒ELISA、间接免疫荧光和免疫印迹三种检测方法比较 被引量：7
10
作者 向志光 佟巍 +4 位作者 李雨函 刘先菊 张丽芳 王艳蓉 魏强 《中国比较医学杂志》 CAS 2013年第1期23-26,共4页
目的比较ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay)、IFA(immuno-fluorescence assay)和WB(Western blot)三种方法在大鼠仙台病毒血清学检测中的差异。方法仙台病毒蛋白抗原经凝胶电泳分离转移后用于血清学检测的WB方法;使用IFA、ELIS... 目的比较ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay)、IFA(immuno-fluorescence assay)和WB(Western blot)三种方法在大鼠仙台病毒血清学检测中的差异。方法仙台病毒蛋白抗原经凝胶电泳分离转移后用于血清学检测的WB方法;使用IFA、ELISA方法对20份无菌大鼠、227份SPF大鼠以及63份清洁级大鼠送检血清样品进行检测,阳性及可疑样品用WB方法进行了验证。结果 20份无菌大鼠血清样品被3种方法检测为仙台病毒抗体阴性;SPF级大鼠样品被IFA方法判定为阴性,1.32%(3/227)被ELISA方法判定为阳性,其中有2/3被WB确认为阳性;ELISA、IFA和WB在清洁级大鼠样品中检出仙台病毒的阳性率分别为为18.12%、11.34%和15.87%。结论三种检测方法灵敏度从高到低依次为ELISA、WB和IFA。WB方法可作为IFA和ELISA难以确定结果的替代方法。 展开更多
关键词 仙台病毒 ELISA IFA Westernblot
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小鼠仙台病毒标准化血清的制备及鉴定 被引量：7
11
作者 侯丽波 谢军芳 +5 位作者 佟巍 乔红伟 丛喆 蒋虹 王卫 魏强 《中国比较医学杂志》 CAS 2008年第9期57-59,I0011,共4页
目的制备标准化抗小鼠仙台病毒（Sendai Virus，SV）免疫血清，为清洁级及SPF级实验小鼠质量检测提供批量、稳定、敏感的质控血清。方法使用动物来源的仙台病毒（sv）感染BALB／c小鼠，获得高效价免疫血清，经IFA、IEA、ELISA等方法检... 目的制备标准化抗小鼠仙台病毒（Sendai Virus，SV）免疫血清，为清洁级及SPF级实验小鼠质量检测提供批量、稳定、敏感的质控血清。方法使用动物来源的仙台病毒（sv）感染BALB／c小鼠，获得高效价免疫血清，经IFA、IEA、ELISA等方法检测血清效价。结果制备多量抗SV血清，经多种方法检定，IFA效价达1：640，IEA效价达1：320，ELISA效价达1：102400～1：204800。结论本研究中制备的sV抗血清达到同批次大量高滴度的水平，可作为检测实验小鼠中sv病原的标准化质控血清。 展开更多
关键词 仙台病毒 血清 质量控制
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WNT1基因突变所致成骨不全症患者皮肤组织来源诱导多能干细胞系的建立
12
作者 杜松杰 管鑫 +2 位作者 张美丽 赵秀丽 黄粤 《中华医学遗传学杂志》 CSCD 2024年第1期38-41,共4页
目的建立WNT1基因突变(WNT1c.677C>T)所致成骨不全症患者皮肤组织来源的诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs)系,为疾病相关的分子机制研究和干细胞治疗提供新的细胞模型。方法通过Sanger测序明确患者的致病变异。... 目的建立WNT1基因突变(WNT1c.677C>T)所致成骨不全症患者皮肤组织来源的诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs)系,为疾病相关的分子机制研究和干细胞治疗提供新的细胞模型。方法通过Sanger测序明确患者的致病变异。在征得患者知情同意后,采集其皮肤组织样本,原代培养皮肤成纤维细胞。利用仙台病毒介导的非基因组整合的体细胞重编程方法,将皮肤成纤维细胞诱导为iPSCs,并对其进行多能性、分化能力以及核型鉴定。结果患者携带WNT1基因c.677C>T(p.Ser226Leu)纯合错义突变。由其皮肤成纤维细胞重编程建立的iPSCs系具备自我更新及体外分化能力,核型为正常的二倍体(46,XX)。结论建立了患者来源的WNT1基因突变(WNT1c.677C>T)iPSCs系,为该突变所致成骨不全症的研究提供了新的细胞模型。 展开更多
关键词 成骨不全症 WNT1 c.677C>T突变 诱导多能干细胞 仙台病毒
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副粘病毒Tianjin株F基因克隆及序列分析 被引量：6
13
作者 石立莹 李晓眠 +2 位作者 李梅 何健民 袁立军 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期751-757,共7页
目的探索副粘病毒Tianjin株的来源和种系进化地位。方法以副粘病毒Tianjin株基因组RNA为模板,通过RT-PCR方法获得包括F基因全长的两个质粒克隆,分别进行序列测定。将拼接得到的F基因核苷酸序列及推导出的氨基酸序列与GenBank中公布的15... 目的探索副粘病毒Tianjin株的来源和种系进化地位。方法以副粘病毒Tianjin株基因组RNA为模板,通过RT-PCR方法获得包括F基因全长的两个质粒克隆,分别进行序列测定。将拼接得到的F基因核苷酸序列及推导出的氨基酸序列与GenBank中公布的15株仙台病毒相应序列进行同源性比较,并构建系统进化树。结果副粘病毒Tianjin株与15株仙台病毒F基因核苷酸及氨基酸序列同源性分别在85.3%～94.5%和90.4%～95.4%之间。进化树分析表明,Tianjin株与仙台病毒BB1株亲缘关系较近,但仍有一定差距,与其他仙台病毒株关系较远。结论副粘病毒Tianjin株很可能不属于仙台病毒现有的Ohita株、Z株及BB1株所代表的3个进化分支,而是独立于这3个分支之外。 展开更多
关键词 副粘病毒 仙台病毒 F基因 系统进化树
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小鼠仙台病毒HN蛋白单克隆抗体的制备及鉴定
14
作者 李泽睿 王霄 +4 位作者 孙莉 费东亮 马跃宇 马鸣潇 李明 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2024年第9期66-70,共5页
为了制备小鼠仙台病毒(Sendai virus,SeV)HN蛋白单克隆抗体,试验采用SeV参考毒株HN基因(GenBank登录号为NC_001552.1)对编码HN蛋白的基因密码子优化后克隆重组至原核表达载体pGEX-6P-1上获得重组质粒pGEX-6P-1-HN,将其转化至大肠杆菌BL2... 为了制备小鼠仙台病毒(Sendai virus,SeV)HN蛋白单克隆抗体,试验采用SeV参考毒株HN基因(GenBank登录号为NC_001552.1)对编码HN蛋白的基因密码子优化后克隆重组至原核表达载体pGEX-6P-1上获得重组质粒pGEX-6P-1-HN,将其转化至大肠杆菌BL21感受态细胞中,用IPTG进行诱导表达,并对纯化的重组蛋白rHN进行SDS-PAGE分析。用重组蛋白rHN免疫Balb/c小鼠6次,取其脾脏细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,通过亚克隆技术和间接ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞,然后注入小鼠腹腔制备抗HN蛋白单克隆抗体,分析单克隆抗体的免疫活性、特异性和稳定性。结果表明:获得3株分泌抗SeV HN蛋白抗体的杂交瘤细胞2F9、5D8、10H2,分泌的抗体效价均为1∶16 000左右。3株单克隆抗体的亚型均为IgG1,均可特异性识别SeV,并不与其他小鼠病毒产生交叉反应,具有良好的特异性。经过10次传代,3株单克隆抗体的效价均在1∶8 000以上,稳定性较好。说明试验成功制备了具备良好免疫活性、特异性和稳定性的抗SeV HN蛋白单克隆抗体,可以为SeV的检测提供有效试剂。 展开更多
关键词 小鼠 仙台病毒 HN蛋白 单克隆抗体 原核表达 杂交瘤细胞
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ELISA法检测野生和驯养长爪沙鼠携带病毒情况 被引量：5
15
作者 段明丽 杜小燕 +3 位作者 王迎 路静 李胜利 王钜 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期366-368,374,共4页
目的检测野生长爪沙鼠和驯养长爪沙鼠的病毒携带情况,为制定长爪沙鼠微生物学检测北京市地方标准提供依据。方法制备兔抗长爪沙鼠IgG抗体并用辣根酶标记。分别采集银川市、呼和浩特周边地区的野生长爪沙鼠以及长期驯养的长爪沙鼠血清,... 目的检测野生长爪沙鼠和驯养长爪沙鼠的病毒携带情况,为制定长爪沙鼠微生物学检测北京市地方标准提供依据。方法制备兔抗长爪沙鼠IgG抗体并用辣根酶标记。分别采集银川市、呼和浩特周边地区的野生长爪沙鼠以及长期驯养的长爪沙鼠血清,用间接ELISA进行流行性出血热、淋巴细胞脉络丛脑膜炎等人兽共患病毒及仙台病毒、鼠痘病毒、小鼠肝炎病毒等啮齿类动物烈性传染病病毒抗体检测,并计算检出率。结果兔抗沙鼠的IgG抗体ELISA法效价1∶64 000以上,满足血清学检测要求。银川地区野生长爪沙鼠小鼠肝炎病毒抗体阳性(6.0%),而呼和浩特和驯养的则未检出;但呼和浩特地区的野生长爪沙鼠有淋巴脉络丛脑膜炎病毒抗体检出(13.3%),而银川和驯养长爪沙鼠则没有。仙台病毒抗体的检出率为呼和浩特地区的最低(40.0%),宁夏和驯养动物相等(53.3%)。结论两地区野生长爪沙鼠和人工驯养长爪沙鼠病毒抗体的检出种类和检出率有所不同,在制定北京市地方标准时要综合考虑。 展开更多
关键词 长爪沙鼠 汉坦病毒 淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒 仙台病毒 鼠痘病毒 小鼠肝炎病毒
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实验小鼠Sendai病毒抗体ELISA方法标准化的研究 被引量：4
16
作者 贺争鸣 卫礼 +2 位作者 吴惠英 刘佐民 张然 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 1992年第4期13-15,共3页
在建立Sendai病毒抗体ELISA检测方法的基础上,我们开展了对其敏感性、特异性、重复性等方面的研究,并应用于对不同等级实验小鼠群Sendai病毒抗体的检测中。通过对ELISA系统的测试和改进,使之达到标准化,提高了实验结果的准确性。
关键词 sendai病毒 ELISA 标准化 抗体
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诱导多能干细胞向尿道上皮细胞分化体系的建立 被引量：5
17
作者 蔡炳 李科 +1 位作者 脱颖 王德娟 《中华腔镜泌尿外科杂志（电子版）》 2016年第3期40-43,共4页
目的建立人脂肪干细胞(ADSCs)来源的诱导干细胞(i PSCs)分化为尿路上皮细胞的模型。方法经活检获取患者脂肪,制备原代ADSCs,采用仙台病毒法建立ADSCs来源的人诱导干细胞系(hi PS),对hi PS细胞进行向尿路上皮细胞的诱导分化,并使用免疫... 目的建立人脂肪干细胞(ADSCs)来源的诱导干细胞(i PSCs)分化为尿路上皮细胞的模型。方法经活检获取患者脂肪,制备原代ADSCs,采用仙台病毒法建立ADSCs来源的人诱导干细胞系(hi PS),对hi PS细胞进行向尿路上皮细胞的诱导分化,并使用免疫组化和流式细胞仪检测分化效果。结果脂肪干细胞高表达CD44,低表达CD45和CD105,使用仙台病毒法过表达脂肪干细胞OCT3/4,SOX2,KLF4和c-MYC的转录水平建立非整合的hiPS细胞系,证明其表达多能性标志,具有三胚层多向分化的能力。在相关因子和尿路上皮细胞专用培养基的处理下,诱导21 d的hiPS细胞已出现上皮样结构,其表达尿路上皮细胞特异标志UP1a达到70%以上,免疫组化见分化后的细胞大量表达尿路上皮细胞特异标志UP1a,UP1b和UP2。结论 ADSCs源性i PSCs具备向尿路上皮分化的能力,该细胞系的建立有望为尿道缺损患者开展个体化的尿道修补治疗提供优质的种子细胞。 展开更多
关键词 脂肪干细胞 诱导干细胞 尿路上皮细胞 仙台病毒法 尿道缺损
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仙台病毒F基因在昆虫/杆状病毒系统中的表达及抗原性分析 被引量：5
18
作者 曲连东 蒋良丰 +6 位作者 刘家森 司昌德 郭东春 姜骞 林欢 韩凌霞 刘娣 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期347-350,共4页
为真核表达仙台病毒(SeV)融合蛋白(F)基因,本研究根据GenBank登录的SeV F基因序列设计合成一对特异性引物,以pMD18-T-F阳性重组质粒为模板扩增F基因,并将其克隆至杆状病毒穿梭质粒pFastBac HTa中,经酶切、PCR及测序鉴定正确后,转化感受... 为真核表达仙台病毒(SeV)融合蛋白(F)基因,本研究根据GenBank登录的SeV F基因序列设计合成一对特异性引物,以pMD18-T-F阳性重组质粒为模板扩增F基因,并将其克隆至杆状病毒穿梭质粒pFastBac HTa中,经酶切、PCR及测序鉴定正确后,转化感受态细胞DH10Bac,提取重组杆粒rBacmid-F,经PCR鉴定正确将rBacmid-F转染Sf9细胞,连续传代后,细胞病变明显。经SDS-PAGE分析,成功表达了相对分子量为65ku左右的F蛋白,western blot和ELISA分析表明重组F蛋白具有良好的抗原性。 展开更多
关键词 仙台病毒 F基因 重组杆状病毒表达系统
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仙台病毒RT-PCR检测方法的建立及灰仓鼠中流行情况调查 被引量：5
19
作者 李晓波 付瑞 +5 位作者 王吉 卫礼 邢进 冯育芳 岳秉飞 贺争鸣 《中国比较医学杂志》 CAS 2012年第12期18-22,共5页
目的建立仙台病毒(SV)RT-PCR检测方法,并对灰仓鼠仙台病毒感染情况进行调查。方法根据NCBI发表的SV(gi:9627219)基因组序列设计引物,建立RT-PCR方法,对方法的特异性和灵敏性进行验证,并用该方法检测60份灰仓鼠的肺脏样本。结果建立的SV ... 目的建立仙台病毒(SV)RT-PCR检测方法,并对灰仓鼠仙台病毒感染情况进行调查。方法根据NCBI发表的SV(gi:9627219)基因组序列设计引物,建立RT-PCR方法,对方法的特异性和灵敏性进行验证,并用该方法检测60份灰仓鼠的肺脏样本。结果建立的SV RT-PCR方法显示有较好的敏感性和特异性:以仙台病毒为模板扩增产生197 bp的单一目的条带,经测序比对与NCBI数据库中SV相关序列的一致率为98%,而以猴副流感病毒(SV5)、犬瘟热病毒、小鼠肺炎病毒、呼肠孤病毒III型及腮腺炎病毒为对照无任何条带产生;能检出的SVcDNA最低浓度是96.8 ng/mL;用该方法检测60份灰仓鼠,SV的感染率为3.33%(2/60)。结论建立的SV RT-PCR方法可用于实验类啮齿动物动物SV的常规检测,自然条件下灰仓鼠感染SV的问题不容忽视。 展开更多
关键词 仙台病毒 感染 检测 逆转录-聚合酶链反应 灰仓鼠
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仙台病毒递送新型冠状病毒RBD蛋白鼻内免疫接种增强呼吸道黏膜和系统性免疫应答的初步研究
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作者 袁明城 张剑 +7 位作者 陈洋 薛潘 武福星 袁若栋 董阳超 徐志凯 张芳琳 雷迎峰 《空军军医大学学报》 CAS 2023年第7期609-614,共6页
目的 研究仙台病毒(SeV)作为递送载体在增强新型冠状病毒(SARS-CoV-2)RBD蛋白诱导呼吸道黏膜和系统性免疫应答的特征。方法 利用同源重组技术构建SARS-CoV-2 RBD与抗体Fc融合蛋白编码基因的真核表达质粒,将其转染293-T细胞中进行表达并... 目的 研究仙台病毒(SeV)作为递送载体在增强新型冠状病毒(SARS-CoV-2)RBD蛋白诱导呼吸道黏膜和系统性免疫应答的特征。方法 利用同源重组技术构建SARS-CoV-2 RBD与抗体Fc融合蛋白编码基因的真核表达质粒,将其转染293-T细胞中进行表达并用Western blotting验证;将RBD-Fc融合蛋白表达质粒转染293-T细胞大量表达并使用亲和层析进行蛋白纯化;通过SeV递送RBD-Fc蛋白进行鼻内免疫接种,同时设置RBD-Fc组、SeV组、PBS组作为对照,各组分别在2周后加强免疫1次,3周后检测血清样本和肺泡灌洗液(BALF)中特异性抗体水平。结果 RBD、Fc蛋白编码基因片段通过重叠PCR方法得到融合蛋白基因片段(RBD-Fc),成功构建pCAGGS-RBD-Fc真核表达质粒;Western blotting结果显示RBD-Fc融合蛋白的表达条带符合预期大小,大量表达后经亲和层析获得一条单一的接近Mr 60 000的条带,与预期大小一致,纯度高;与RBD-Fc组、SeV组、PBS组相比,SeV递送RBD-Fc蛋白通过鼻腔加强免疫小鼠后的血清样本和BALF中均可检测到RBD特异性IgG(血清样本:P<0.01;BALF样本:P<0.05),且BALF中RBD特异性IgA相比RBD-Fc组有一定升高。结论 SeV在递送SARS-CoV-2 RBD蛋白进行鼻内免疫接种方面能够诱导一定水平的黏膜免疫和系统性免疫,为呼吸道传染病的黏膜疫苗研究奠定了初步的实验基础。 展开更多
关键词 新型冠状病毒 RBD-Fc蛋白 黏膜免疫 仙台病毒
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