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SIK2 cDNA及其截短体原核表达重组体的构建及表达
1
作者
王建校
李珊珊
+6 位作者
刘旭
王攀
刘晓丹
王豫
赵珊珊
周平坤
顾永清
《西安交通大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第3期290-294,共5页
目的构建SIK2cDNA及其截短体的原核表达重组质粒，在大肠杆菌中诱导表达。方法分别设计SIK2及其截短体引物，采用PCR方法分别扩增SIK2、SIK2-△1（280-926）、SIK2-△2（400-926）、SIK2-△3（1-400）、SIK2-△4（700-926）五个cDNA片...
目的构建SIK2cDNA及其截短体的原核表达重组质粒，在大肠杆菌中诱导表达。方法分别设计SIK2及其截短体引物，采用PCR方法分别扩增SIK2、SIK2-△1（280-926）、SIK2-△2（400-926）、SIK2-△3（1-400）、SIK2-△4（700-926）五个cDNA片段，并将扩增的cDNA片段插入原核表达载体pGEX4T2，构建GST标签的重组质粒。将构建好的重组质粒转化到大肠杆菌BL21中，用IPTG诱导SIK2、SIK2A1、SIK2-A2、SIK2-A3和SIK2A4五个截短体的原核表达，用考马斯亮蓝染色和Westernblot进行鉴定。结果成功构建了SIK2全长及其截短体cDNA的重组质粒，用考马斯亮蓝染色及Westernblot鉴定显示，SIK2全长及其截短体重组质粒均在大肠杆菌中诱导表达。结论在大肠杆菌中成功地诱导表达了SIK2重组蛋白及其截短体，为进一步研究SIK2各结构域的功能提供了实验基础。
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关键词
盐诱导激酶
sik
2
GST
融和蛋白
诱导表达
重组质粒
下载PDF
职称材料
SIK2在脂质和糖代谢及应激反应中的调节作用
被引量：
2
2
作者
谭伟
周丽君
+2 位作者
让蔚清
顾永清
周平坤
《生命的化学》
CAS
CSCD
2013年第5期509-513,共5页
盐诱导激酶2(salt-inducible kinase 2,SIK2)是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,属于AMP活化蛋白激酶(adenosine monophosphate-activated protein kinase,AMPK)亚家族成员之一。SIK2基因在脂肪组织中的表达水平最高,通过磷酸化负调节cAMP反...
盐诱导激酶2(salt-inducible kinase 2,SIK2)是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,属于AMP活化蛋白激酶(adenosine monophosphate-activated protein kinase,AMPK)亚家族成员之一。SIK2基因在脂肪组织中的表达水平最高,通过磷酸化负调节cAMP反应元件结合蛋白(cAMP-responsive element-binding protein,CREB)调节转录共激活子(CREB-regulated transcription co-activator,CRTC/TORC)2、3的活性;通过磷酸化p300/CBP,影响糖原异生和脂质合成相关基因的表达,在脂肪和糖代谢中发挥重要作用。另一方面,在营养缺乏等状态下,SIK2的Lys-53可被p300/CBP乙酰化暂时失去激酶活性并向胞浆中自吞噬体内聚集,在此被组蛋白去乙酰化酶6(histone deacetylase 6,HDAC6)去乙酰化而激活,参与自吞噬体与溶酶体融合及细胞自吞噬过程的调节。SIK2可望成为肥胖、糖尿病等代谢性疾病治疗的新靶点。
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关键词
盐诱导激酶
2
脂代谢
糖代谢
自吞噬
原文传递
人SIK2重组质粒的构建和真核细胞转染
3
作者
谭伟
王豫
+4 位作者
刘晓丹
黄波
顾永清
周平坤
让蔚清
《实用预防医学》
CAS
2013年第5期528-530,共3页
目的构建人SIK2基因真核表达载体。方法利用PCR扩增目的基因SIK2,PCR产物经纯化后与pC-MV-Tag-2B线性质粒进行连接,连接产物转化大肠杆菌DH5α,涂卡那抗性琼脂糖平板;菌落PCR、酶切及测序鉴定阳性克隆后,抽提质粒,利用Lipofectamnie 200...
目的构建人SIK2基因真核表达载体。方法利用PCR扩增目的基因SIK2,PCR产物经纯化后与pC-MV-Tag-2B线性质粒进行连接,连接产物转化大肠杆菌DH5α,涂卡那抗性琼脂糖平板;菌落PCR、酶切及测序鉴定阳性克隆后,抽提质粒,利用Lipofectamnie 2000TM试剂瞬转293T细胞,24 h后,Western Blot方法检测其在真核细胞内的表达。结果成功构建pCMV-Tag-2B-SIK2重组质粒,并在真核细胞内成功表达。结论 SIK2外源表达载体的构建成功,为进一步研究其功能奠定了实验基础。
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关键词
sik
2
重组质粒
蛋白表达
原文传递
题名
SIK2 cDNA及其截短体原核表达重组体的构建及表达
1
作者
王建校
李珊珊
刘旭
王攀
刘晓丹
王豫
赵珊珊
周平坤
顾永清
机构
石河子大学医学院
军事医学科学院放射与辐射医学研究所
中国人民解放军第
出处
《西安交通大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第3期290-294,共5页
基金
国家自然科学基金资助项目(No.30960093
31160183
31270894)~~
文摘
目的构建SIK2cDNA及其截短体的原核表达重组质粒，在大肠杆菌中诱导表达。方法分别设计SIK2及其截短体引物，采用PCR方法分别扩增SIK2、SIK2-△1（280-926）、SIK2-△2（400-926）、SIK2-△3（1-400）、SIK2-△4（700-926）五个cDNA片段，并将扩增的cDNA片段插入原核表达载体pGEX4T2，构建GST标签的重组质粒。将构建好的重组质粒转化到大肠杆菌BL21中，用IPTG诱导SIK2、SIK2A1、SIK2-A2、SIK2-A3和SIK2A4五个截短体的原核表达，用考马斯亮蓝染色和Westernblot进行鉴定。结果成功构建了SIK2全长及其截短体cDNA的重组质粒，用考马斯亮蓝染色及Westernblot鉴定显示，SIK2全长及其截短体重组质粒均在大肠杆菌中诱导表达。结论在大肠杆菌中成功地诱导表达了SIK2重组蛋白及其截短体，为进一步研究SIK2各结构域的功能提供了实验基础。
关键词
盐诱导激酶
sik
2
GST
融和蛋白
诱导表达
重组质粒
Keywords
salt
-
inducible
kinase
sik
2
GST
fusion
protein
induc
ed
expression
recombinant
plasmid
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
SIK2在脂质和糖代谢及应激反应中的调节作用
被引量：
2
2
作者
谭伟
周丽君
让蔚清
顾永清
周平坤
机构
南华大学公共卫生学院环境医学与放射卫生研究所
军事医学科学院放射与辐射医学研究所
中国人民解放军海军总医院中心实验科
出处
《生命的化学》
CAS
CSCD
2013年第5期509-513,共5页
基金
国家自然科学基金项目(81172119
31270894)
文摘
盐诱导激酶2(salt-inducible kinase 2,SIK2)是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,属于AMP活化蛋白激酶(adenosine monophosphate-activated protein kinase,AMPK)亚家族成员之一。SIK2基因在脂肪组织中的表达水平最高,通过磷酸化负调节cAMP反应元件结合蛋白(cAMP-responsive element-binding protein,CREB)调节转录共激活子(CREB-regulated transcription co-activator,CRTC/TORC)2、3的活性;通过磷酸化p300/CBP,影响糖原异生和脂质合成相关基因的表达,在脂肪和糖代谢中发挥重要作用。另一方面,在营养缺乏等状态下,SIK2的Lys-53可被p300/CBP乙酰化暂时失去激酶活性并向胞浆中自吞噬体内聚集,在此被组蛋白去乙酰化酶6(histone deacetylase 6,HDAC6)去乙酰化而激活,参与自吞噬体与溶酶体融合及细胞自吞噬过程的调节。SIK2可望成为肥胖、糖尿病等代谢性疾病治疗的新靶点。
关键词
盐诱导激酶
2
脂代谢
糖代谢
自吞噬
Keywords
salt
-
inducible
kinase
2
（
sik
2）
lipid
metabolism
glucose
metabolism
autophagy
分类号
R363 [医药卫生—病理学]
原文传递
题名
人SIK2重组质粒的构建和真核细胞转染
3
作者
谭伟
王豫
刘晓丹
黄波
顾永清
周平坤
让蔚清
机构
南华大学公共卫生学院环境医学与放射卫生研究所
军事医学科学院放射与辐射医学研究所
出处
《实用预防医学》
CAS
2013年第5期528-530,共3页
基金
国家863项目(2012AA063501)
国家自然科学基金项目(81272994
31270894)
文摘
目的构建人SIK2基因真核表达载体。方法利用PCR扩增目的基因SIK2,PCR产物经纯化后与pC-MV-Tag-2B线性质粒进行连接,连接产物转化大肠杆菌DH5α,涂卡那抗性琼脂糖平板;菌落PCR、酶切及测序鉴定阳性克隆后,抽提质粒,利用Lipofectamnie 2000TM试剂瞬转293T细胞,24 h后,Western Blot方法检测其在真核细胞内的表达。结果成功构建pCMV-Tag-2B-SIK2重组质粒,并在真核细胞内成功表达。结论 SIK2外源表达载体的构建成功,为进一步研究其功能奠定了实验基础。
关键词
sik
2
重组质粒
蛋白表达
Keywords
salt
-
inducible
kinase
2（
sik
2）
Recombinant
plasmid
Protein
expression
分类号
Q243 [生物学—细胞生物学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
SIK2 cDNA及其截短体原核表达重组体的构建及表达
王建校
李珊珊
刘旭
王攀
刘晓丹
王豫
赵珊珊
周平坤
顾永清
《西安交通大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2014
0
下载PDF
职称材料
2
SIK2在脂质和糖代谢及应激反应中的调节作用
谭伟
周丽君
让蔚清
顾永清
周平坤
《生命的化学》
CAS
CSCD
2013
2
原文传递
3
人SIK2重组质粒的构建和真核细胞转染
谭伟
王豫
刘晓丹
黄波
顾永清
周平坤
让蔚清
《实用预防医学》
CAS
2013
0
原文传递
已选择
0
条
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引用分析
参考文献
引证文献
统计分析
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