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saeRS对金黄色葡萄球菌临床分离株的hla和lukS-PV表达的影响 被引量:3
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作者 屠金晶 张协 +6 位作者 许园园 尚永朋 楼丹萍 武有聪 瞿涤 王良兴 余方友 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期91-96,共6页
目的研究双组分信号调控系统saeRS对金黄色葡萄球菌临床分离株a溶血素基因(hla)和Panton.Valentine杀白细胞素基因(1ukSIF-PV)表达的影响。方法利用同源重组技术敲除saeRS基因,获得金黄色葡萄球菌saeRS基因敲除株,并构建saeRS回... 目的研究双组分信号调控系统saeRS对金黄色葡萄球菌临床分离株a溶血素基因(hla)和Panton.Valentine杀白细胞素基因(1ukSIF-PV)表达的影响。方法利用同源重组技术敲除saeRS基因,获得金黄色葡萄球菌saeRS基因敲除株,并构建saeRS回复突变株。应用SDS-PAGE检测金黄色葡萄球菌saeR/S野生株、敲除株及回复突变株分泌蛋白的变化,采用RT—PCR检测金黄色葡萄球菌saeR/S野生株、敲除株及回复突变株hlamRNA和lukS—PVmRNA。结果成功构建了金黄色葡萄球菌saeRS基因敲除株SA75AsaeRS。与野生株SA75相比,SA75/XsaeRS的生长无明显差异,但分泌蛋白种类和数量有明显减少且溶血能力明显减弱。saeRS基因回复突变株SA75/XsaeRS—C可以基本恢复敲除株的溶血能力。在3、6和10h3个时间点与野生株相比,SA75AsaeRS的hlamRNA均有明显下降,分别是野生株的7.6%、0%和0.1%。lukS—PVmRNA也均有明显下降,分别是野生株lukS—PV表达量的37.2%、19.2%和20.4%。结论saeRS基因是调节金黄色葡萄球菌分泌蛋白的关键因子。saeRS基因对金黄色葡萄球菌的hla和lukS—PV的表达具有正调控作用。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 saers HLA lukS F-PV
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表皮葡萄球菌双组分信号转导系统saeRS对相关蛋白调控的研究 被引量:2
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作者 娄强 王艳歌 瞿涤 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期680-684,共5页
目的利用双向电泳技术对表皮葡萄球菌菌体蛋白进行蛋白质组学分析,寻找双组分信号转导系统saeRS的调控网络。方法对表皮葡萄球菌1457双组分信号转导系统saeRS删除株与野生株菌体蛋白进行双向电泳差异比较;电泳图谱采用Image Master 2DPl... 目的利用双向电泳技术对表皮葡萄球菌菌体蛋白进行蛋白质组学分析,寻找双组分信号转导系统saeRS的调控网络。方法对表皮葡萄球菌1457双组分信号转导系统saeRS删除株与野生株菌体蛋白进行双向电泳差异比较;电泳图谱采用Image Master 2DPlatinum软件分析;免疫印迹法验证saeRS调控的差异蛋白。结果在表皮葡萄球菌1457双组分信号转导系统saeRS删除株与野生株蛋白质图谱中共发现23个差异表达的蛋白点(10个下调,13个上调)。结论蛋白质双向电泳技术可以成功应用于分析表皮葡萄球菌双组分信号转导系统saeRS的调控网络;此图谱为进一步研究saeRS在表皮葡萄球菌中的调控机制奠定了基础。 展开更多
关键词 表皮葡萄球菌 双组分信号转导系统 saers 蛋白质组 双向电泳
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金黄色葡萄球菌双组份调节系统SaeRS对重要毒力基因的分子调控机制 被引量:1
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作者 许园园 丁宇 +3 位作者 刘云灵 李丹 王良兴 余方友 《温州医科大学学报》 CAS 2015年第9期625-630,共6页
目的:初步研究金黄色葡萄球菌双组份调节系统Sae RS对重要毒力基因的分子调控机制。方法:PCR扩增双组份调节系统Sae RS的反应调节蛋白Sae R基因,构建重组表达质粒pET28a-sae R,用限制性酶切、PCR和基因测序方法进行鉴定。用IPTG诱导表... 目的:初步研究金黄色葡萄球菌双组份调节系统Sae RS对重要毒力基因的分子调控机制。方法:PCR扩增双组份调节系统Sae RS的反应调节蛋白Sae R基因,构建重组表达质粒pET28a-sae R,用限制性酶切、PCR和基因测序方法进行鉴定。用IPTG诱导表达重组蛋白His Sae R,用镍离子螯合亲和层析法纯化,用Western blot法鉴定。用实时荧光定量RT-PCR方法检测金黄色葡萄球菌SA75及SA75Δsae RS突变株luk-PV、hla、coa、fnb B、sak、psmβ基因转录水平。凝胶迁移阻滞实验验证纯化蛋白His Sae R对这些毒力基因启动区序列的结合能力。结果:重组表达质粒p ET28a-sae R构建成功;在0.4 mmol/L IPTG,25℃培养12 h的条件下,重组蛋白His Sae R在大肠杆菌中以可溶形式高效表达;与SA75野生株相比,Dsae RS突变株luk-PV、hla、coa、fnb B基因转录水平均明显下降,分别为野生株的19.7%、0.3%、31.6%、3.5%;psmβ基因和sak基因转录水平无变化。反应调节蛋白Sae R能有效结合luk-PV、hla、coa、fnb B及其自身P1启动区序列。结论:金黄色葡萄球菌双组份调节系统Sae RS对luk-PV、hla、coa、fnb B基因表达具有正调控作用,而这种作用可能是通过反应调节蛋白Sae R与这些基因启动区序列直接结合而实现。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 双组份调节系统 saers 反应调节蛋白SaeR
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金黄色葡萄球菌coa和saeRS基因对小鼠部分生物学指标的影响
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作者 刘影 郭海勇 计银铎 《家畜生态学报》 北大核心 2020年第8期64-68,共5页
试验旨在探索金黄色葡萄球菌saeRS和coa对小鼠体重、感染部位皮内细菌数、感染部位伤疤面积及机体产生IL-17a的影响。利用金黄色葡萄球菌923及其突变菌株923/coa、923/saeRS和923/coa/saeRS皮内感染小鼠背部皮肤,测定感染后不同时间点... 试验旨在探索金黄色葡萄球菌saeRS和coa对小鼠体重、感染部位皮内细菌数、感染部位伤疤面积及机体产生IL-17a的影响。利用金黄色葡萄球菌923及其突变菌株923/coa、923/saeRS和923/coa/saeRS皮内感染小鼠背部皮肤,测定感染后不同时间点各试验组小鼠体重、感染部位皮内细菌数、血清IL-17a浓度及感染部位的伤疤面积,计算小鼠血清IL-17a浓度与伤口面积之间的相关系数。结果表明:(1)923/coa/saeRS菌株感染组体重显著(P<0.05)/极显著(P<0.01)高于923/saeRS和923/coa感染组,923/saeRS感染组体重极显著(P<0.01)高于923/coa菌株感染组;(2)每克感染部位皮肤内细菌数,923菌株感染组显著(P<0.05)/极显著(P<0.01)高于923/coa、923/saeRS和923/coa/saeRS菌株感染组;(3)感染细菌后,小鼠血清IL-17a浓度逐渐升高,在24 h达到浓度峰值,随后逐渐下降;感染后8 h,菌株923组血清IL-17a浓度显著(P<0.05)低于923/saeRS组;(4)923/saeRS和923/coa/saeRS感染组小鼠皮肤伤疤面积显著(P<0.05)/极显著(P<0.01)低于923和923/coa感染组;(5)感染后24 h血清IL-17a浓度与感染后120 h小鼠感染部位伤疤面积的相关系数较强,并且达到极显著水平(P<0.01)。coa和saeRS基因缺失降低菌株923的毒性,使突变菌株感染小鼠体重提高,感染部位细菌含量降低,感染部位皮肤伤疤面积减小,血清IL-17a浓度降低。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 coa基因 saers基因 IL-17a
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金黄色葡萄球菌SaeRS二元调控系统促进细菌凝集和生物被膜形成
5
作者 胡刘平 刘倩 《国际检验医学杂志》 CAS 2021年第23期2817-2821,2829,共6页
目的探讨金黄色葡萄球菌SaeRS二元调控系统在人血浆蛋白调控细菌凝集和生物被膜形成中的作用机制。方法收集金黄色葡萄球菌感染常见的临床克隆菌株,Newman(NM)菌株中由于SaeS第一个跨膜区点突变(L18P)导致SaeRS二元调控系统处于持续活... 目的探讨金黄色葡萄球菌SaeRS二元调控系统在人血浆蛋白调控细菌凝集和生物被膜形成中的作用机制。方法收集金黄色葡萄球菌感染常见的临床克隆菌株,Newman(NM)菌株中由于SaeS第一个跨膜区点突变(L18P)导致SaeRS二元调控系统处于持续活化状态,为了探索不同菌株中SaeRS系统的调控功能,本研究分别以USA300和NM菌株为背景,构建SaeRS二元调控系统敲除菌株USA300Δsae和NMΔsae,在含有乏血小板血浆(PPP)和富血小板血浆(PRP)条件下分别检测不同菌株凝集和生物被膜形成的能力。采用反转录-聚合酶链反应检测不同菌株在PPP作用后其SaeRS二元调控系统调控的靶基因表达水平。结果人血浆PPP可促进金黄色葡萄球菌不同临床分离菌株凝集,人血浆PPP和PRP均可促进金黄色葡萄球菌不同临床分离菌株生物被膜形成,但不同菌株之间存在差异,如人血浆蛋白促进NM菌株凝集能力明显强于USA300菌株,提示NM菌株中SaeRS系统的高度活化状态可能参与血浆蛋白促进细菌的凝集过程。进一步研究发现,人血浆蛋白不能促进sae敲除菌株的凝集和生物被膜形成能力;sae敲除菌株中互补表达SaeRS和高度活化状态的SaeRS L18P均可回复人血浆蛋白促进细菌凝集活性;USA300菌株中SaeRS通过调控凝固酶coa表达促进金黄色葡萄球菌凝集和生物被膜形成,而在NM菌株中,高度活化的SaeRS二元调控系统通过调节多个基因(coa、eap、clfb、emp)的表达发挥功能。结论人血浆蛋白可促进金黄色葡萄球菌凝集和生物被膜形成,SaeRS二元调控系统单个氨基酸位点突变改变该系统的调控网络。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 saers二元调控系统 细菌凝集 生物被膜
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双组分信号转导系统saeRS对表皮葡萄球菌生存能力的影响
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作者 娄强 王耀辉 +1 位作者 瞿涤 马远方 《四川大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期27-30,共4页
目的研究不同浓度的葡萄糖对表皮葡萄球菌野生株、saeRS基因删除突变株及回复株生存能力的影响及机制。方法在BM培养基中添加不同浓度(7.0mmol/L、14mmol/L、28mmol/L、56mmol/L)的葡萄糖,分析3种表皮葡萄球菌的生存能力、生物膜形成能... 目的研究不同浓度的葡萄糖对表皮葡萄球菌野生株、saeRS基因删除突变株及回复株生存能力的影响及机制。方法在BM培养基中添加不同浓度(7.0mmol/L、14mmol/L、28mmol/L、56mmol/L)的葡萄糖,分析3种表皮葡萄球菌的生存能力、生物膜形成能力、培养基的酸度及抵抗抗生素生存的能力。结果与表皮葡萄球菌野生株相比,葡萄糖能明显促进saeRS删除突变株的生存能力和生物膜形成能力,但能够明显降低其对抗生素(比如青霉素、苯唑西林、庆大霉素、环丙沙星和丁胺卡那霉素)的抵抗能力;saeRS删除突变株和回复株在14mmol/L浓度时生存能力最强,在28mmol/L浓度时生物膜形成能力最强,而葡萄糖浓度对于野生株的生存能力及生物膜形成能力无显著影响。在添加14mmol/L葡萄糖时,saeRS删除突变株培养基(pH=8.07)的酸度比野生株(pH=7.0)明显降低。结论 SaeRS可能通过介导葡萄糖的利用影响了表皮葡萄球菌的生存能力;双组分信号转导系统saeRS影响抗生素如青霉素、苯唑西林、庆大霉素、环丙沙星和丁胺卡那霉素对表皮葡萄球菌的杀菌作用。 展开更多
关键词 葡萄糖代谢 双组分信号转导系统saers 生物膜形成 表皮葡萄球菌
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