miR-34a通过激活lncRNA NORHA转录诱导猪卵巢颗粒细胞早期凋亡

1

作者 王思琪 周春雪 +3 位作者 李玉琦 杜星 潘增祥 李齐发 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期1000-1009,共10页

【目的】探索miR-34a诱导GCs凋亡的RNA激活机制,为揭示猪卵泡闭锁的分子机理、筛选调控母猪繁殖的小核酸调节物提供依据。【方法】利用生物信息学方法分析猪miR-34a特征及其与潜在靶基因lncRNA NORHA启动子的结合情况。利用核质分离技... 【目的】探索miR-34a诱导GCs凋亡的RNA激活机制,为揭示猪卵泡闭锁的分子机理、筛选调控母猪繁殖的小核酸调节物提供依据。【方法】利用生物信息学方法分析猪miR-34a特征及其与潜在靶基因lncRNA NORHA启动子的结合情况。利用核质分离技术分析猪GCs中miR-34a的亚细胞定位。qPCR检测miR-34a对猪GCs中NORHA、凋亡标志基因BCL-2和BAX表达的影响。利用荧光素酶活性分析验证miR-34a对NORHA启动子转录活性的靶向调控关系。利用染色质免疫沉淀(ChIP)检测miR-34a对猪GCs中NORHA启动子miRNA反应元件(MRE)处AGO2和组蛋白修饰因子富集情况。利用western blot和流式细胞术分析miR-34a通过NORHA对下游因子FOXO1的表达和细胞凋亡的调控作用。【结果】猪miR-34a为基因间miRNA,其序列在哺乳动物中具有高度保守性。亚细胞定位分析显示,miR-34a在猪GCs中细胞核与细胞质均有分布。生物信息学分析显示miR-34a的MRE位于NORHA启动子-194 nt至-173 nt处,且两者结合自由能为-23.9 kcal·mol^(-1)。qPCR结果表明miR-34a显著上调猪GCs中NORHA的表达。荧光素酶活性分析显示,miR-34a极显著上调NORHA启动子报告载体活性,而对MRE突变型启动子活性没有显著影响。ChIP试验显示,miR-34a可增加NORHA启动子MRE处RNA诱导转录激活(RITA)复合物核心成员AGO2和转录激活型组蛋白H3K4me3的富集,而减少转录抑制型组蛋白H3K9me3的富集。共转试验显示,敲减NORHA可显著或极显著逆转由miR-34a过表达引起的FOXO1蛋白水平和早期凋亡率的上调,以及BCL-2/BAX比值的下调。【结论】细胞核miR-34a是猪GCs中的内源性小激活RNA(saRNA),通过靶向激活促凋亡lncRNA NORHA的转录,诱导猪GCs早期凋亡(细胞膜完整),可能参与猪卵泡闭锁的启动。 展开更多

关键词 猪GCs凋亡 MIR-34A sarna NORHA

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saRNA激活ABCG2表达增强肾和肠细胞排泄尿酸的研究

2

作者 贾少平 葛科立 +3 位作者 杨柳 张志霞 张金玉 葛银林 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期713-723,共11页

目的筛选、研究小激活RNA(small activating RNA,saRNA)增强ABCG2基因表达对肾、肠细胞排泄尿酸(uric acid,UA)的影响,探索促进UA排泄的全新一类治疗机制药物。方法设计靶向小鼠和人ABCG2基因的saRNA,转染小鼠肾小管上皮细胞(TCMK-1)和... 目的筛选、研究小激活RNA(small activating RNA,saRNA)增强ABCG2基因表达对肾、肠细胞排泄尿酸(uric acid,UA)的影响,探索促进UA排泄的全新一类治疗机制药物。方法设计靶向小鼠和人ABCG2基因的saRNA,转染小鼠肾小管上皮细胞(TCMK-1)和人肾小管上皮细胞(HK-2)细胞,逆转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western Blot筛选强激活效果的saRNA;检测强激活saRNA增强TCMK-1和HK-2细胞排泄UA的作用。筛选的saRNA通过尾静脉注射高尿酸血症(hyperuricemia,HUA)模型小鼠,检测血尿酸(serum uric acid,SUA)、尿尿酸(urine uric acid,UUA)、肠道UA、血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)和血清肌酐(serum creatinine,SCr)含量,以及肝脏黄嘌呤氧化酶(xanthine oxidase,XOD)活性,验证所选saRNA促进UA排泄的作用。苏木精-伊红染色法(H&E)染色观察小鼠肾脏和小肠病理改变。RT-qPCR,Western blot和免疫组化分析肾脏和小肠ABCG2基因表达水平。结果筛选到小鼠和人ABCG2 saRNA各2条,分别命名为saRNA-1/2和hsaRNA-1/2,能够提高TCMK-1和HK-2细胞ABCG2基因的表达(P<0.05),促进胞内UA排泄(P<0.05)。saRNA-1/2能够提高HUA模型小鼠UUA和肠道UA含量(P<0.05),降低SUA,BUN和SCr的含量(P<0.05),改善HUA对肾脏和小肠的损伤。saRNA-1/2促进了小鼠肾脏和小肠中ABCG2基因的表达,但对小鼠肝脏中XOD的活性没有明显影响(P>0.05)。结论所筛选的saRNA能够提高ABCG2基因的表达,并促进细胞内和小鼠体内UA的排泄,降低SUA水平。 展开更多

关键词 高尿酸血症 尿酸 小激活RNA ABCG2 基因表达

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miRNA，siRNA，saRNA与基因表达调控 被引量：1

3

作者 黄益玲 王艳林 黄利鸣 《医学分子生物学杂志》 CAS CSCD 2010年第4期360-363,共4页

近年来的研究发现，生物体内存在着大量的非编码RNA（non．codingRNAs，ncRNA），它们在染色质修饰、基因转录、RNA剪接和mRNA翻译等多种水平上参与了基因表达的调控。ncRNA中的小分子RNA如miRNA能够识别特定的目标mRNA，通过与mRNAs3... 近年来的研究发现，生物体内存在着大量的非编码RNA（non．codingRNAs，ncRNA），它们在染色质修饰、基因转录、RNA剪接和mRNA翻译等多种水平上参与了基因表达的调控。ncRNA中的小分子RNA如miRNA能够识别特定的目标mRNA，通过与mRNAs3’非翻译区结合，影响mRNA转录及蛋白质翻译；siRNA是RNA干扰的引发物，能够导致与dsRNA同源的mRNA降解，进而抑制相应基因表达；saRNA是目前最新发现的一种靶向目的基因启动子区的在转录水平激活目的基因表达的dsRNA。miRNA、siRNA和saRNA在生成机制、作用途径等方面关系密切，既区别又相互联系，小分子RNA的研究将是今后分子生物学的研究热点之一。 展开更多

关键词 MIRNA SIRNA sarna 基因表达和调控

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p53表达下调对saRNA介导p21基因激活的影响研究 被引量：1

4

作者 吴嘉 陈忠 +3 位作者 杨为民 汪成合 盖强强 胡嘏 《现代泌尿生殖肿瘤杂志》 2015年第6期350-353,共4页

目的研究抑制p53基因的表达是否影响小双链RNA(dsRNA)分子dsP21-322对p21基因表达的激活效应。方法体外培养人肾癌ACHN细胞(p53野生型)和膀胱癌5637细胞(p53突变型)。采用RT-PCR方法筛选具有抑制p53基因表达的干扰RNA分子dsP53-3。人工... 目的研究抑制p53基因的表达是否影响小双链RNA(dsRNA)分子dsP21-322对p21基因表达的激活效应。方法体外培养人肾癌ACHN细胞(p53野生型)和膀胱癌5637细胞(p53突变型)。采用RT-PCR方法筛选具有抑制p53基因表达的干扰RNA分子dsP53-3。人工合成具有激活效应的dsRNA分子dsP21-322,以及与人体已知RNA序列无同源性的阴性对照小dsRNA分子dsCon。将上述dsRNA分子转染到两种肿瘤细胞中,每种细胞均分为5组,即:1空白组;2阴性对照组;3dsP21-322单转染组;4dsP53单转染组;5dsP21-322与dsP53共转染组。通过荧光染色检测转染效率,采用Real-time PCR和Western-blot技术检测各组细胞中p53和p21转录和翻译水平上的表达差异。结果 1在单转染组中,dsP21-322能够激活ACHN细胞、5637细胞中p21基因表达;2dsP53-3能够抑制ACHN细胞、5637细胞中p53基因表达;3在共转染组中ACHN细胞、5637细胞中p53基因下调,而dsP21-322依然能够激活p21基因表达。结论外源合成的saRNA分子dsP21-322能激活ACHN细胞、5637细胞中p21基因表达,该激活效应不受p53蛋白表达量的影响。 展开更多

关键词 SIRNA sarna RNA干扰 RNA激活

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非编码RNAs与勃起功能障碍关系研究进展 被引量：1

5

作者 晏萧 姜睿 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期160-164,共5页

勃起功能障碍(ED)是一种与年龄、心理、躯体疾病、生活方式等众多因素相关的疾病,严重降低了患者的生活质量。以往认为一部分由基因转录而来但不翻译成蛋白的非编码RNAs(ncRNAs)是基因表达过程中的"废物",但近年来发现它们在... 勃起功能障碍(ED)是一种与年龄、心理、躯体疾病、生活方式等众多因素相关的疾病,严重降低了患者的生活质量。以往认为一部分由基因转录而来但不翻译成蛋白的非编码RNAs(ncRNAs)是基因表达过程中的"废物",但近年来发现它们在基因表达过程中起着至关重要的调节作用,ncRNAs对基因表达产物调节可影响阴茎的勃起功能,本文对ncRNAs与ED关系的研究进展进行了综述。 展开更多

关键词 非编码RNAS 勃起功能障碍 MICRORNA SHRNA SIRNA sarna lncRNA

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小分子双链RNA对人类细胞中抑癌基因p21表达的上调作用 被引量：1

6

作者 胡嘏 陈忠 +4 位作者 吴嘉 张勇 徐华 杨为民 叶章群 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期660-664,共5页

目的筛选更多的对小分子双链RNA(dsP21-322)介导抑癌基因p21WAF1/CIP1激活起效应的人类细胞系,并初步研究该过程是否依赖p53的表达。方法选择4种表达不同类型p53蛋白的人类细胞系,p53野生型(p53wild type)的人骨肉瘤细胞系U2-OS、人肾... 目的筛选更多的对小分子双链RNA(dsP21-322)介导抑癌基因p21WAF1/CIP1激活起效应的人类细胞系,并初步研究该过程是否依赖p53的表达。方法选择4种表达不同类型p53蛋白的人类细胞系,p53野生型(p53wild type)的人骨肉瘤细胞系U2-OS、人肾上皮细胞系293T,p53突变型(p53mutant type)的人宫颈癌细胞系HeLa及p53缺失(p53null)的人肺腺癌细胞系NCI-H1299,转染dsControl(阴性对照)或dsP21-322至以上细胞,RT-qPCR和Westernblot分别检测p21、p53mRNA和蛋白表达的变化。结果 dsP21-322的转染未明显影响上述细胞系p53的表达;而在U2-OS、HeLa和293T细胞系中均能激活p21的表达,相比dsControl,分别上调p21mRNA的表达3.97倍、4.94倍和4.64倍,Western blot进一步证明在这3种细胞系中p21蛋白表达水平的增加与p21mRNA水平的上调相一致,且与dsControl组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。但是在p53缺失的NCI-H1299细胞系中,dsP21-322则不能上调p21的表达。结论 dsP21-322介导p21激活现象存在于人类细胞,而其未能上调p53缺失细胞系中p21的表达是否提示该过程可能依赖p53的表达尚有待进一步研究。 展开更多

关键词 RNA激活 小激活RNA dsP21-322 P21 P53 人类细胞

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一种新的分子治疗方式——RNAa

7

作者 黄益玲 黄利鸣 李本义 《分子诊断与治疗杂志》 2011年第6期425-427,共3页

RNA激活是最近发现在转录水平激活目的基因表达的新的RNA调控方式,能够激活基因转录的小分子RNA被称为小激活RNA(saRNA)。和siRNA的沉默效果相比,RNAa的激活作用更为持久,具有更为广泛的肿瘤治疗范围,有可能成为基因功能研究及疾病治疗... RNA激活是最近发现在转录水平激活目的基因表达的新的RNA调控方式,能够激活基因转录的小分子RNA被称为小激活RNA(saRNA)。和siRNA的沉默效果相比,RNAa的激活作用更为持久,具有更为广泛的肿瘤治疗范围,有可能成为基因功能研究及疾病治疗的一种新的有效工具。 展开更多

关键词 RNA激活 小激活RNA 分子治疗

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RNA激活效应研究

8

作者 李子龙 陈亮 +2 位作者 杨涛 袁帅 李渝萍 《生命的化学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期385-388,共4页

RNAa(RNA activation)即RNA激活效应,是指某些小分子非编码RNA(non-coding RNA,ncRNA)在转录水平上激活基因表达的现象,这种发挥激活作用的小RNA分子又叫激活小RNA(small activating RNA,saRNA)。saRNA与干扰小RNA(small interfer-ing R... RNAa(RNA activation)即RNA激活效应,是指某些小分子非编码RNA(non-coding RNA,ncRNA)在转录水平上激活基因表达的现象,这种发挥激活作用的小RNA分子又叫激活小RNA(small activating RNA,saRNA)。saRNA与干扰小RNA(small interfer-ing RNA,siRNA)同属小分子双链非编码RNA家族,既有相似的分子特征,在靶序列、作用动力学和调控方式等方面又有显著差别。虽然RNAa的作用机制尚未完全明了,但其在肿瘤治疗中的应用前景吸引了人们的关注。本文就RNAa近年的研究进展进行了简要综述。 展开更多

关键词 RNA激活(RNAa) 激活小RNA(sarna) 干扰小RNA(siRNA) 非编码RNA(ncRNA)

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小激活RNA上调上皮钙黏蛋白在恶性肿瘤中表达的分子机制及其生物学意义 被引量：2

9

作者 郝家涛 王帅 蒋伟 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期109-115,共7页

侵袭与转移是影响恶性肿瘤患者预后最重要的因素之一,也一直是预测肿瘤预后和改善患者生存的热点与难点。上皮钙黏蛋白(E-cadherin)低表达是恶性肿瘤最常见的表型之一,在多种肿瘤的侵袭、转移中发挥重要作用。上调上皮钙黏蛋白表达可以... 侵袭与转移是影响恶性肿瘤患者预后最重要的因素之一,也一直是预测肿瘤预后和改善患者生存的热点与难点。上皮钙黏蛋白(E-cadherin)低表达是恶性肿瘤最常见的表型之一,在多种肿瘤的侵袭、转移中发挥重要作用。上调上皮钙黏蛋白表达可以降低恶性肿瘤的侵袭与转移能力,甚至改善肿瘤患者的预后,为肿瘤患者的治疗提供有效措施。近年来,以RNA诱导的基因激活(RNAa)为代表的基因调控技术的发展为肿瘤精准治疗提供更多可能,为特异、有效地上调上皮钙黏蛋白表达提供新的途径。本文就上皮钙黏蛋白与RNAa技术近年来的研究进展及小激活RNA(saRNA)上调上皮钙黏蛋白表达的分子机制与生物学意义作一综述。 展开更多

关键词 恶性肿瘤 上皮钙黏蛋白 小激活RNA(sarna) RNA诱导的基因激活(RNAa)

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10Sa　RNA——具有转运与信使双功能的RNA 被引量：1

10

作者 张文玲 丁志山 《生命的化学》 CAS CSCD 1997年第2期1-2,共2页

１０ＳａＲＮＡ——具有转运与信使双功能的ＲＮＡ张文玲丁志山（浙江中医学院分子医学研究所，杭州３１０００９）关键词１０ＳａＲＮＡ双重功能ＲＮＡ在现代化大生产中，有严格的质量管理体系。在生命体中，在分子水平上有类似的质控... １０ＳａＲＮＡ——具有转运与信使双功能的ＲＮＡ张文玲丁志山（浙江中医学院分子医学研究所，杭州３１０００９）关键词１０ＳａＲＮＡ双重功能ＲＮＡ在现代化大生产中，有严格的质量管理体系。在生命体中，在分子水平上有类似的质控体系。错译产生的蛋白质或被蛋白酶裂... 展开更多

关键词 RNA MRNA 10sarna 双重功能RNA

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小激活RNA(saRNA)与恶性肿瘤的研究进展 被引量：1

11

作者 孙雨沛 胡火军 +1 位作者 李格 黄益玲 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 2018年第1期52-55,共4页

在基因的表达调控过程中,一系列非编码RNA(non-coding RNA,ncRNA)发挥着广泛作用。RNA激活(RNA activation,RNAa)是近来发现的由小分子双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)靶向作用于基因启动子区域在转录水平诱导基因表达的基因调节现... 在基因的表达调控过程中,一系列非编码RNA(non-coding RNA,ncRNA)发挥着广泛作用。RNA激活(RNA activation,RNAa)是近来发现的由小分子双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)靶向作用于基因启动子区域在转录水平诱导基因表达的基因调节现象。具有激活功能的小dsRNA称之为小激活RNA(small activating RNA,saRNA)。与RNAi的沉默效果相比,RNAa的激活作用更为持久,它为肿瘤、代谢及遗传性疾病的治疗提供了一个崭新的思路和方法,将成为重要的分子生物学工具,应用于实验研究和疾病的基因治疗当中。本文将从saRNA的发现、saRNA的特征及其在肿瘤调控和治疗中的潜在作用予以综述。 展开更多

关键词 小激活RNA 基因激活 恶性肿瘤

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小激活RNA(saRNA)--肿瘤治疗新途径 被引量：1

12

作者 王运 黄文华 孙军 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期979-984,共6页

在基因的表达调控过程中,一系列非编码RNA(non-coding RNA,ncRNA)发挥着广泛作用.然而,作为其重要成员的小激活RNA(small activating RNA,saRNA)却没有得到足够的认识和关注.本篇综述旨在介绍saRNA的机制与功能,并评估它的应用前景.文... 在基因的表达调控过程中,一系列非编码RNA(non-coding RNA,ncRNA)发挥着广泛作用.然而,作为其重要成员的小激活RNA(small activating RNA,saRNA)却没有得到足够的认识和关注.本篇综述旨在介绍saRNA的机制与功能,并评估它的应用前景.文中归纳该领域的最新进展,特别是有关肿瘤治疗的研究.saRNA能识别基因启动子上特定序列、诱导相应基因的转录,从而实现基因激活.这不仅与siRNA(small interfering RNA)的抑制作用相反,而且有其独特的动力学特征.目前,saRNA研究主要集中于肿瘤领域,并发现它对某些肿瘤的生长和转移具有抑制作用,因而有望开辟肿瘤治疗的新途径.本文结尾简要探讨了saRNA在开发新抗癌药物等方面的应用潜力. 展开更多

关键词 非编码RNA 小激活RNA 基因激活 肿瘤

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