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鼠伤寒沙门菌rpoN基因缺失株构建及生物学特性研究
被引量：
5
1
作者
苏洋洋
黄骏
+5 位作者
吴白
印云聪
刘珍
陈素娟
彭大新
刘秀梵
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第4期771-778,共8页
为了探索σ因子RpoN在鼠伤寒沙门菌生物被膜形成过程中的作用,对两株生物被膜形成能力较强的鼠伤寒沙门菌利用Red同源重组系统构建rpoN基因缺失株,利用原核表达载体构建回复株;比较野生株、缺失株和回复株的生物被膜形成能力和对环境应...
为了探索σ因子RpoN在鼠伤寒沙门菌生物被膜形成过程中的作用,对两株生物被膜形成能力较强的鼠伤寒沙门菌利用Red同源重组系统构建rpoN基因缺失株,利用原核表达载体构建回复株;比较野生株、缺失株和回复株的生物被膜形成能力和对环境应激抵抗力的差异,并通过建立的csgA和bcsA基因实时定量PCR方法检测编码生物被膜成分基因的表达差异。结果显示,与野生株相比,△rpoN缺失株生物被膜形成能力增强,主要由卷曲菌毛表达量显著增加引起。回复株生物被膜形成能力与野生株相似。△rpoN缺失株在酸性应激和碱性应激条件下对外界环境应激的抵抗力均显著增强。RpoN为鼠伤寒沙门菌中生物被膜形成相关σ因子之一,为进一步研究沙门菌生物被膜形成的调控机制提供理论基础。
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关键词
鼠伤寒沙门菌
生物被膜
rpon
基因
突变株
环境应激
下载PDF
职称材料
维氏气单胞菌TH0426株rpoN蛋白的生物学特性分析及原核表达
被引量：
1
2
作者
王冬雪
夏明
+2 位作者
姚贵哲
孟庆峰
单晓枫
《黑龙江畜牧兽医》
CAS
北大核心
2020年第1期17-21,26,154,共7页
为了深入研究维氏气单胞菌毒力蛋白rpoN的功能,试验采用邻近法构建rpoN基因的系统进化树,对rpoN蛋白进行生物学特性分析,PCR法扩增rpoN基因,将其与表达载体pET-32a(+)连接,再将连接产物转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行诱导表...
为了深入研究维氏气单胞菌毒力蛋白rpoN的功能,试验采用邻近法构建rpoN基因的系统进化树,对rpoN蛋白进行生物学特性分析,PCR法扩增rpoN基因,将其与表达载体pET-32a(+)连接,再将连接产物转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行诱导表达和制备抗体,测定抗体效价并进行Western-blot检测。结果表明:rpoN蛋白稳定,属于胞内蛋白,是全α型蛋白。重组表达质粒pET-32a-rpoN在大肠杆菌中成功表达,在约58 ku处可见明亮条带,rpoN多克隆抗体效价为1∶279 000,具有特异性。说明表达的rpoN蛋白具有一定的免疫原性。
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关键词
维氏气单胞菌
rpon
基因
生物信息学分析
Western-blot检测
原核表达
免疫反应
原文传递
维氏气单胞菌rpoN基因缺失株的构建及部分生物学特性分析
被引量：
2
3
作者
蔡金双
王冬雪
+3 位作者
单晓枫
康元环
张冬星
田佳鑫
《中国兽医科学》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第6期753-762,共10页
为了研究rpoN基因对维氏气单胞菌致病性的影响,采用同源重组的方法构建该基因缺失株。以该菌基因组DNA为模板,通过PCR扩增rpoN基因的上、下游同源臂;以上、下游同源臂胶回收产物为模板,P1-1/P2-2为引物进行重叠PCR扩增相应目的片段,从...
为了研究rpoN基因对维氏气单胞菌致病性的影响,采用同源重组的方法构建该基因缺失株。以该菌基因组DNA为模板,通过PCR扩增rpoN基因的上、下游同源臂;以上、下游同源臂胶回收产物为模板,P1-1/P2-2为引物进行重叠PCR扩增相应目的片段,从而获得rpoN上下游同源臂连接片段;将获取的连接片段连接pRE112,将连接产物转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞,提取重组质粒pRE112-rpoN,经同源重组和抗生素筛选获得维氏气单胞菌rpoN基因缺失株ΔrpoN。同时,依然利用重叠PCR将目的基因片段与启动子相连接,而后与质粒p BBR-MCS相连接,最后将重组质粒pBBR-MCS-rpoN转化至缺失株ΔrpoN中,构建互补株C-rpoN。PCR鉴定和测序结果显示,成功构建出维氏气单胞菌rpoN基因缺失株ΔrpoN和互补株C-rpoN。生物学特性分析试验结果表明rpoN的缺失导致维氏气单胞菌TH0426菌落形态改变、生物被膜形成能力下降、动物致病性减弱,鞭毛断裂,运动性丧失。本研究中成功构建了维氏气单胞菌TH0426株rpoN基因的缺失株ΔrpoN,为进一步研究维氏气单胞菌减毒疫苗和rpoN基因的功能奠定了基础。
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关键词
维氏气单胞菌
rpon
基因
基因
敲除
生物学特性
原文传递
题名
鼠伤寒沙门菌rpoN基因缺失株构建及生物学特性研究
被引量：
5
1
作者
苏洋洋
黄骏
吴白
印云聪
刘珍
陈素娟
彭大新
刘秀梵
机构
扬州大学兽医学院
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第4期771-778,共8页
基金
国家自然科学基金项目(31572530)
公益行业(农业)科研专项(201303044)
+1 种基金
江苏高校优势学科建设工程
江苏省家禽疫病防控工程技术研究中心(BM2013450)
文摘
为了探索σ因子RpoN在鼠伤寒沙门菌生物被膜形成过程中的作用,对两株生物被膜形成能力较强的鼠伤寒沙门菌利用Red同源重组系统构建rpoN基因缺失株,利用原核表达载体构建回复株;比较野生株、缺失株和回复株的生物被膜形成能力和对环境应激抵抗力的差异,并通过建立的csgA和bcsA基因实时定量PCR方法检测编码生物被膜成分基因的表达差异。结果显示,与野生株相比,△rpoN缺失株生物被膜形成能力增强,主要由卷曲菌毛表达量显著增加引起。回复株生物被膜形成能力与野生株相似。△rpoN缺失株在酸性应激和碱性应激条件下对外界环境应激的抵抗力均显著增强。RpoN为鼠伤寒沙门菌中生物被膜形成相关σ因子之一,为进一步研究沙门菌生物被膜形成的调控机制提供理论基础。
关键词
鼠伤寒沙门菌
生物被膜
rpon
基因
突变株
环境应激
Keywords
Salmonella Typhimurium
biofilm formation
rpon
gene
mutants
environmental stress
分类号
S852.612 [农业科学—基础兽医学]
下载PDF
职称材料
题名
维氏气单胞菌TH0426株rpoN蛋白的生物学特性分析及原核表达
被引量：
1
2
作者
王冬雪
夏明
姚贵哲
孟庆峰
单晓枫
机构
吉林农业大学动物科学技术学院
吉林出入境检验检疫局检验检疫技术中心
出处
《黑龙江畜牧兽医》
CAS
北大核心
2020年第1期17-21,26,154,共7页
基金
原国家质检总局科技项目(2016IK163)
国家自然科学基金项目(31201927)。
文摘
为了深入研究维氏气单胞菌毒力蛋白rpoN的功能,试验采用邻近法构建rpoN基因的系统进化树,对rpoN蛋白进行生物学特性分析,PCR法扩增rpoN基因,将其与表达载体pET-32a(+)连接,再将连接产物转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行诱导表达和制备抗体,测定抗体效价并进行Western-blot检测。结果表明:rpoN蛋白稳定,属于胞内蛋白,是全α型蛋白。重组表达质粒pET-32a-rpoN在大肠杆菌中成功表达,在约58 ku处可见明亮条带,rpoN多克隆抗体效价为1∶279 000,具有特异性。说明表达的rpoN蛋白具有一定的免疫原性。
关键词
维氏气单胞菌
rpon
基因
生物信息学分析
Western-blot检测
原核表达
免疫反应
Keywords
Aerornonas veronii
rpon
gene
bioinformatics analysis
Western-blot test prokaryotic expression
immune respon
分类号
S852.6 [农业科学—基础兽医学]
Q51 [农业科学—兽医学]
原文传递
题名
维氏气单胞菌rpoN基因缺失株的构建及部分生物学特性分析
被引量：
2
3
作者
蔡金双
王冬雪
单晓枫
康元环
张冬星
田佳鑫
机构
吉林农业大学动物科学技术学院
出处
《中国兽医科学》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第6期753-762,共10页
基金
国家自然科学基金项目(31201927)
吉林省教育厅“十三五”科学技术项目(JJKH20180694KJ,JJKH20190910KJ)
+1 种基金
吉林省科技厅自然科学基金学科布局项目(20170101016JC)
吉林农业大学博士启动基金项目(201801)。
文摘
为了研究rpoN基因对维氏气单胞菌致病性的影响,采用同源重组的方法构建该基因缺失株。以该菌基因组DNA为模板,通过PCR扩增rpoN基因的上、下游同源臂;以上、下游同源臂胶回收产物为模板,P1-1/P2-2为引物进行重叠PCR扩增相应目的片段,从而获得rpoN上下游同源臂连接片段;将获取的连接片段连接pRE112,将连接产物转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞,提取重组质粒pRE112-rpoN,经同源重组和抗生素筛选获得维氏气单胞菌rpoN基因缺失株ΔrpoN。同时,依然利用重叠PCR将目的基因片段与启动子相连接,而后与质粒p BBR-MCS相连接,最后将重组质粒pBBR-MCS-rpoN转化至缺失株ΔrpoN中,构建互补株C-rpoN。PCR鉴定和测序结果显示,成功构建出维氏气单胞菌rpoN基因缺失株ΔrpoN和互补株C-rpoN。生物学特性分析试验结果表明rpoN的缺失导致维氏气单胞菌TH0426菌落形态改变、生物被膜形成能力下降、动物致病性减弱,鞭毛断裂,运动性丧失。本研究中成功构建了维氏气单胞菌TH0426株rpoN基因的缺失株ΔrpoN,为进一步研究维氏气单胞菌减毒疫苗和rpoN基因的功能奠定了基础。
关键词
维氏气单胞菌
rpon
基因
基因
敲除
生物学特性
Keywords
Aeromonas veronii
rpo N gene
gene knock-out
biological characteristics
分类号
S852.615 [农业科学—基础兽医学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
鼠伤寒沙门菌rpoN基因缺失株构建及生物学特性研究
苏洋洋
黄骏
吴白
印云聪
刘珍
陈素娟
彭大新
刘秀梵
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016
5
下载PDF
职称材料
2
维氏气单胞菌TH0426株rpoN蛋白的生物学特性分析及原核表达
王冬雪
夏明
姚贵哲
孟庆峰
单晓枫
《黑龙江畜牧兽医》
CAS
北大核心
2020
1
原文传递
3
维氏气单胞菌rpoN基因缺失株的构建及部分生物学特性分析
蔡金双
王冬雪
单晓枫
康元环
张冬星
田佳鑫
《中国兽医科学》
CAS
CSCD
北大核心
2020
2
原文传递
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