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BCL、RIP细胞凋亡基因向小麦中的导入和赤霉病抗性鉴定 被引量：12
1
作者 叶兴国 Shirley Sato +4 位作者 徐惠君 杜丽璞 黄益洪 陆维忠 Tom Clemente 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第11期1389-1393,共5页
利用农杆菌介导法将BCL和RIP 2个与细胞凋亡有关的基因分别导人了小麦品种扬麦10号和Bobwhite，转化效率分别为1．60％和1．25％。Southern检测结果表明，细胞凋亡基因已稳定整合到小麦染色体上，多数植株为单拷贝整合。Northern检测结... 利用农杆菌介导法将BCL和RIP 2个与细胞凋亡有关的基因分别导人了小麦品种扬麦10号和Bobwhite，转化效率分别为1．60％和1．25％。Southern检测结果表明，细胞凋亡基因已稳定整合到小麦染色体上，多数植株为单拷贝整合。Northern检测结果表明，细胞凋亡基因能够在小麦遗传背景中高水平转录为RNA。转基因植株T1代分离比例为2．11～2．33：1，表明外源基因在后代中能够稳定遗传。BCL转基因植株和RIP转基因植株对赤霉病均表现出一定抗性，其中BCL-20、BCL-21、RIP-8、RIP-18等15个T1代植株的小穗发病率为5．6％～16．1％，可望进一步培育抗赤霉病小麦新材料。 展开更多
关键词 小麦 BCL基因 rip基因 转化 赤霉病
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玉米(Zea mays L.)两个广谱抗病基因rip和pal1的原位杂交定位 被引量：3
2
作者 王玲 宋运淳 +2 位作者 宁顺斌 李立家 刘立华 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第5期639-642,共4页
本文以玉米自交系黄早四为供试材料,采用cDNA为探针,对低拷贝小片段的rip和pall基因进行了定位.用生物素标记和相应的酶联级联放大检测系统,在第8和第3染色体长臂上检测到rip基因的杂交信号,信号与着丝粒百分距离分别为23.66±1.32... 本文以玉米自交系黄早四为供试材料,采用cDNA为探针,对低拷贝小片段的rip和pall基因进行了定位.用生物素标记和相应的酶联级联放大检测系统,在第8和第3染色体长臂上检测到rip基因的杂交信号,信号与着丝粒百分距离分别为23.66±1.32和72.47±3.16.在第5和第4染色体长臂以及第2染色体短臂上检测到pal1基因位点,信号与着丝粒的百分距离分别为20.85±1.08、61.63±2.21和28.23±0.82. 展开更多
关键词 玉米 rip基因 pal1基因 原位杂交
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核糖体失活蛋白(RIP)基因克隆及其表达载体的构建 被引量：2
3
作者 孙亚卿 邵金旺 +1 位作者 张少英 张洪霞 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2007年第16期4770-4772,4803,共4页
以按玉米RIP基因(M83927)序列设计合成的特异性引物,用提取的玉米基因组DNA为模板,应用PCR技术扩增目的片段,测定并克隆玉米的RIP基因。序列分析表明,它们的核苷酸和氨基酸序列与GenBank中登录的CRIP(M83927)的同源性分别为99.90%和100%... 以按玉米RIP基因(M83927)序列设计合成的特异性引物,用提取的玉米基因组DNA为模板,应用PCR技术扩增目的片段,测定并克隆玉米的RIP基因。序列分析表明,它们的核苷酸和氨基酸序列与GenBank中登录的CRIP(M83927)的同源性分别为99.90%和100%。RIP与植物表达载体pCAMBIA2301相连构建成为带有35S启动子和polyA终止子的植物表达载体p2301-RIP。 展开更多
关键词 rip基因 DNA序列分析 克隆 载体构建
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大麦核糖体失活蛋白基因与天花粉蛋白基因双价植物表达载体的构建
4
作者 齐岩 李杰 +1 位作者 朱延明 柏锡 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 2006年第1期28-32,共5页
大麦核糖体失活蛋白(B-RIP)和天花粉蛋白(TCS)均具有广谱抗病毒作用,研究构建了分别由2×CaMV35S启动子调控的大麦核糖体失活基因(rip)和天花粉蛋白基因(tcs)双价植物表达载体pABTR,其植物选择标记为新霉素磷酸转移酶基因(NPTⅡ),... 大麦核糖体失活蛋白(B-RIP)和天花粉蛋白(TCS)均具有广谱抗病毒作用,研究构建了分别由2×CaMV35S启动子调控的大麦核糖体失活基因(rip)和天花粉蛋白基因(tcs)双价植物表达载体pABTR,其植物选择标记为新霉素磷酸转移酶基因(NPTⅡ),适用于双子叶植物的遗传转化。并通过三亲本杂交法将重组质粒导入根癌农杆菌LBA4404中,为通过农杆菌介导法将双价基因导入植物,培育理想的抗病毒转基因植物奠定基础。 展开更多
关键词 双价植物表达栽体 rip基因 tes基因 2x CaMV35S启动子
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抗真菌、抗渗透胁迫基因多价植物表达载体构建及对黄瓜遗传转化的研究 被引量：8
5
作者 东丽 李杰 朱延明 《农业科技通讯》 2008年第3期37-41,共5页
本研究以黄瓜为试材,建立黄瓜植株再生体系和遗传转化体系;构建了分别由双35S组成型启动子、E12强组成型启动子和rd29A诱导型启动子调控的核糖体失活蛋白基因、几丁质酶基因和DREB1A基因的多价基因植物表达载体;利用农杆菌介导入法将其... 本研究以黄瓜为试材,建立黄瓜植株再生体系和遗传转化体系;构建了分别由双35S组成型启动子、E12强组成型启动子和rd29A诱导型启动子调控的核糖体失活蛋白基因、几丁质酶基因和DREB1A基因的多价基因植物表达载体;利用农杆菌介导入法将其导入黄瓜优良品种,获得了转pBDCR T0及T1代PCR阳性植株。T1代转基因植株的抗逆性实验表明,DREB1A基因的表达可以提高黄瓜的抗旱性。本研究为培育抗逆境及抗真菌病转基因植株探索途径,并为进一步揭示核糖体失活蛋白基因、几丁质酶基因和DREB1A基因的分子机理提供了理论依据。 展开更多
关键词 黄瓜 chi和rip基因 DREBIA 载体构建 遗传转化 分子检测
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单增李斯特菌vip基因缺失菌株的构建与筛选 被引量：1
6
作者 李森 牟俊洁 刘武康 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2017年第4期16-22,共7页
单增李斯特菌(Listeria monocytogenes)是广泛存在于自然界及食物中的食源性致病菌,作为胞内寄生菌,它可以引起强烈的细胞免疫,是潜在的优良疫苗载体。vip是单增李斯特菌的毒力基因,与其侵袭能力密切相关。因此构建vip基因敲除株可为单... 单增李斯特菌(Listeria monocytogenes)是广泛存在于自然界及食物中的食源性致病菌,作为胞内寄生菌,它可以引起强烈的细胞免疫,是潜在的优良疫苗载体。vip是单增李斯特菌的毒力基因,与其侵袭能力密切相关。因此构建vip基因敲除株可为单增李斯特菌疫苗载体的研发打下重要基础。从单增李斯特菌EGDe基因组中扩增出vip基因上、下游序列,连接到穿梭载体p KSV7中得到敲除载体p KSV7-Δvip,将其以电穿孔的方式转入单增李斯特菌后,通过同源重组利用氯霉素和温度双重压力筛选得到vip基因的敲除突变株,并对敲除菌株的生长曲线进行分析发现vip敲除对细菌的生长没有显著影响,为进一步研究vip基因功能、单增李斯特的致病机制和疫苗载体的研发提供参考。 展开更多
关键词 单增李斯特菌 rip基因敲除 突变株 同源重组
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特异性小干扰RNA靶向沉默RIP1基因表达对人大肠癌Lovo细胞生物学行为的影响 被引量：2
7
作者 谭诗云 游红霞 周燕红 《中华临床医师杂志（电子版）》 CAS 2013年第9期109-112,共4页
目的探讨RNA干扰沉默RIP1基因表达对人大肠癌Lovo细胞生物学行为的影响。方法将人大肠癌Lovo细胞常规分为空白对照、阴性对照组和实验转染组。体外化学合成RIP1基因序列特异性小干扰RNA(siRNA),Hegene介导转染人大肠癌细胞株Lovo细胞;... 目的探讨RNA干扰沉默RIP1基因表达对人大肠癌Lovo细胞生物学行为的影响。方法将人大肠癌Lovo细胞常规分为空白对照、阴性对照组和实验转染组。体外化学合成RIP1基因序列特异性小干扰RNA(siRNA),Hegene介导转染人大肠癌细胞株Lovo细胞;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测特异性siRNA对RIP1基因在mRNA水平上沉默效果;转染后采用噻唑蓝(MrI'r)比色法检测siRNA对细胞增殖的影响;流式细胞周期法检测siRNA对细胞周期的影响;Transwell试验体外检测细胞迁移和侵袭能力。结果成功转染RIP1 siRNA的大肠癌Lovo细胞,RT-PCR显示RIP1 mRNA和蛋白表达在相应的癌细胞中明显下降;与阴性对照组比较,细胞增殖明显抑制(P<0.05);G0～G1期细胞[(54.68±1.54)%]明显多于阴性对照组[(48.48±1.96)%]和空白对照组[(43.92±1.68)%];RNA干扰明显抑制Lovo细胞迁移力和侵袭力(21±2.731vs.43±2.064)。结论 RIP1 siRNA可有效抑制大肠癌Lovo细胞RIP1基因的表达,从而抑制肿瘤细胞增殖,促进细胞凋亡,抑制细胞迁移和侵袭,RIP1siRNA能有效调控Lovo细胞恶性生物学行为。 展开更多
关键词 RNA 小分子干扰 rip1基因 结直肠肿瘤
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转chi+rip双价抗真菌病基因大豆遗传稳定性分析 被引量：2
8
作者 才华 朱延明 +3 位作者 郭玉双 柏锡 李勇 纪巍 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期107-113,共7页
外源基因在转基因植物中遗传和表达的稳定性直接关系到转基因材料的应用前景。研究以转chi+rip双价基因大豆株系G0431、G0433的T2、T3及T4连续世代为材料,通过PCR、Southern杂交、Real-time PCR进一步证明外源基因已经整合到大豆基因组... 外源基因在转基因植物中遗传和表达的稳定性直接关系到转基因材料的应用前景。研究以转chi+rip双价基因大豆株系G0431、G0433的T2、T3及T4连续世代为材料,通过PCR、Southern杂交、Real-time PCR进一步证明外源基因已经整合到大豆基因组中,并稳定遗传给后代;Real-time RT-PCR、Western杂交以及抗疫霉根腐病测定结果表明,外源抗真菌病双价基因在各个转基因世代已稳定表达。研究结果为该材料的育种应用打下了坚实基础。 展开更多
关键词 遗传稳定性 chi+rip双价基因 大豆 疫霉根腐病
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