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鸡传染性支气管炎病毒研究进展 被引量：20
1
作者 贺会利 魏小兵 +5 位作者 欧长波 徐敏 闫艺婷 刘明成 勾肖晶 刘兴友 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第7期73-77,共5页
鸡传染性支气管炎病毒(IBV)主要侵害鸡的呼吸系统和泌尿生殖系统,可以引起鸡的呼吸道症状、肾脏损害、产蛋量和蛋的品质下降。由于IBV基因组的RNA酶缺乏严密的校正功能,容易发生变异,使该病毒的基因型、血清型复杂,给该病的防控带来很... 鸡传染性支气管炎病毒(IBV)主要侵害鸡的呼吸系统和泌尿生殖系统,可以引起鸡的呼吸道症状、肾脏损害、产蛋量和蛋的品质下降。由于IBV基因组的RNA酶缺乏严密的校正功能,容易发生变异,使该病毒的基因型、血清型复杂,给该病的防控带来很大的困难,从而给养殖业造成了重大经济损失。从2003年起对IBV的分子生物学方面的研究也成了热点,寻找防控此病的有效措施。论文概述了近年来在IBV的基因组、结构蛋白、分子诊断及反向遗传学技术等方面的研究进展,为IBV的研究和防控提供参考。 展开更多
关键词 鸡传染性支气管炎病毒 基因组结构 结构蛋白 分子生物学诊断 反向遗传学技术
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RNA病毒的反向遗传学 被引量：5
2
作者 薛强 仇华吉 童光志 《生物技术通报》 CAS CSCD 2001年第4期1-4,共4页
反向遗传操作作为一种新兴技术在RNA病毒的研究中发挥着重要作用 ,本文介绍了RNA病毒反向遗传学的研究方法以及RNA病毒反向遗传技术的最新研究进展。
关键词 RNA病毒 反向遗传学 反向遗传操作 感染性分子克隆
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利用反向遗传技术构建细胞高适应性的H9N2流感病毒 被引量：1
3
作者 任超超 滕巧泱 +5 位作者 申伟霞 李雪松 李国新 杨健美 闫丽萍 李泽君 《中国动物传染病学报》 CAS 2014年第2期7-12,共6页
H9N2亚型禽流感病毒通常在鸡胚上增值性能高,但在细胞上增值能力差。为了获得在细胞上高效表达H9N2亚型禽流感HA和NA抗原的疫苗株,通过反向遗传操作技术将A/Chicken/Shanghai/441/2009(H9N2,SH441)的HA和NA基因与A/Puerto Rico/8/34(H1N... H9N2亚型禽流感病毒通常在鸡胚上增值性能高,但在细胞上增值能力差。为了获得在细胞上高效表达H9N2亚型禽流感HA和NA抗原的疫苗株,通过反向遗传操作技术将A/Chicken/Shanghai/441/2009(H9N2,SH441)的HA和NA基因与A/Puerto Rico/8/34(H1N1,PR8)的6个内部基因进行人工重组,拯救并获得了1株禽流感重组病毒441-PR8,并对它的生物学特性进行了研究。结果表明,重组病毒441-PR8株在细胞上的增殖能力明显高于野生毒株SH441,该重组病毒有望成为H9N2亚型禽流感疫苗研制的候选毒株。 展开更多
关键词 禽流感病毒 H9N2亚型 H1N1亚型 反向遗传操作 重组病毒
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反向遗传技术在猪繁殖与呼吸综合征研究中的应用
4
作者 谷元兴 王猛 +1 位作者 刘永生 张杰 《中国农学通报》 CSCD 北大核心 2011年第7期364-368,共5页
猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起,严重危害全世界养猪业。PRRSV与宿主细胞的相互作用、致病机理,其基因组及蛋白质对致病性的影响等仍是未解之谜。反向遗传技术为研究PRRSV提供了技术支撑。现基于病毒拯... 猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起,严重危害全世界养猪业。PRRSV与宿主细胞的相互作用、致病机理,其基因组及蛋白质对致病性的影响等仍是未解之谜。反向遗传技术为研究PRRSV提供了技术支撑。现基于病毒拯救、疫苗研制、分子病原学诊断等方面的内容,对反向遗传技术在PRRS研究中的应用作一综述。 展开更多
关键词 反向遗传技术 病毒拯救 RNA病毒 猪繁殖与呼吸综合征 应用
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一株H9N2禽流感病毒HA、NA感染性克隆的构建
5
作者 井波 李呈军 陈化兰 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第11期10-12,共3页
为了构建重组禽流感病毒,试验选取具有代表性的禽流感毒株A/chicken/Shanghai/10/01(H9N2),通过RNA提取和RT-PCR获取HA、NA完整基因,并将其克隆至经SapⅠ酶切、Klenow(大片段)处理、小牛碱性磷酸酶(CIAP)处理后的载体质粒pBD中,构建pBD... 为了构建重组禽流感病毒,试验选取具有代表性的禽流感毒株A/chicken/Shanghai/10/01(H9N2),通过RNA提取和RT-PCR获取HA、NA完整基因,并将其克隆至经SapⅠ酶切、Klenow(大片段)处理、小牛碱性磷酸酶(CIAP)处理后的载体质粒pBD中,构建pBD-HA和pBD-NA质粒;将克隆产物分别进行EcoRⅠ+BamHⅠ(pBD-HA)和EcoRⅠ+NotⅠ(pBD-NA)双酶切鉴定及序列测定。结果表明:所克隆的基因大小和序列均与理论值相符,说明感染性克隆构建成功。 展开更多
关键词 反向基因操作技术 H9N2亚型 感染性克隆
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以T7 RNA聚合酶为基础的病毒拯救系统研究进展 被引量：6
6
作者 郑海学 常艳艳 +2 位作者 靳野 刘湘涛 谢庆阁 《动物医学进展》 CSCD 2007年第11期62-65,共4页
文章界定了与病毒拯救相关的一些概念,对T7RNA聚合酶(RNAP)为基础的病毒拯救系统研究进行概述。介绍了体外拯救方法及其缺点,并以最常用的痘病毒载体表达T7RNAP为基础的体内拯救方法为例,介绍了该方法对病毒拯救的研究进展及缺点,进一... 文章界定了与病毒拯救相关的一些概念,对T7RNA聚合酶(RNAP)为基础的病毒拯救系统研究进行概述。介绍了体外拯救方法及其缺点,并以最常用的痘病毒载体表达T7RNAP为基础的体内拯救方法为例,介绍了该方法对病毒拯救的研究进展及缺点,进一步介绍了无痘病毒表达T7RNAP细胞系的RNA病毒拯救体系的建立和研究,为病毒拯救,特别是以T7RNAP为基础的病毒拯救试验方案提供参考。 展开更多
关键词 T7 RNA聚合酶 病毒拯救 感染性克隆 反向遗传操作技术
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茶尺蠖小RNA病毒全长cDNA克隆的构建 被引量：1
7
作者 林美娟 谢键 +2 位作者 张珈敏 叶姗 胡远扬 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期818-823,共6页
为了初步研究茶尺蠖小RNA病毒(Ectropis oblique picorna-like virus,EoPV)的复制机制,从被EoPV感染致死的茶尺蠖幼虫中分离并纯化病毒粒子,提取病毒RNA,根据已公布的EoPV核苷酸序列,利用基因组上单一的酶切位点,设计特异性引物,应用RT-... 为了初步研究茶尺蠖小RNA病毒(Ectropis oblique picorna-like virus,EoPV)的复制机制,从被EoPV感染致死的茶尺蠖幼虫中分离并纯化病毒粒子,提取病毒RNA,根据已公布的EoPV核苷酸序列,利用基因组上单一的酶切位点,设计特异性引物,应用RT-PCR扩增出5个覆盖全长的片段。随后采用融合PCR将5个片段拼接,最终将全长定向克隆到低拷贝质粒载体上,成功构建cDNA全长克隆p-EoPV。双酶切及测序鉴定证明全长克隆构建成功。与原序列比较发现,该克隆在氨基酸水平上有8个突变和1个缺失。本研究为深入探讨EoPV病毒生物学特性、病毒复制机理等奠定了基础。 展开更多
关键词 茶尺蠖小RNA病毒 全长CDNA克隆 传染性软化病毒科 反向遗传学
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NDVLaSota株P、NP蛋白基因表达载体的构建及鉴定
8
作者 周媛 贾润清 +2 位作者 滕智平 张晓梅 曾毅 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期62-64,共3页
目的 构建新城疫病毒LaSota株NP、P基因的真核表达载体,为研究NP、P蛋白机理及反向遗传操作系统奠定基础.方法 利用RT-PCR法扩增出新城疫病毒LaSota株的NP、P基因,并将其克隆到pGEM-T easy载体中,并再次亚克隆到真核载体pcDNA3.1（＋）... 目的 构建新城疫病毒LaSota株NP、P基因的真核表达载体,为研究NP、P蛋白机理及反向遗传操作系统奠定基础.方法 利用RT-PCR法扩增出新城疫病毒LaSota株的NP、P基因,并将其克隆到pGEM-T easy载体中,并再次亚克隆到真核载体pcDNA3.1（＋）上,得到重组质粒pcDNA3.1（＋）-NP、pcDNA3.1（＋）-P,瞬时转染到293、BHK-21 细胞中,免疫酶法及Western Blot法检测表达情况.结果 经免疫酶法及Western Blot法分别检测到了P、NP蛋白在两种细胞的表达.结论 构建的两个重组质粒pcDNA3.1（＋）-NP、pcDNA3.1（＋）-P 在293、BHK-21两种细胞中均可稳定表达,为即将进行的NDV反向遗传操作系统奠定基础. 展开更多
关键词 新城疫病毒 病毒蛋白质类 反向遗传操作系统
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