TGF-β_2干预的缺氧状态下补肾活血剂对Mller细胞及谷氨酰胺合成酶活性的影响 被引量：16

1

作者 马殿伟 谢学军 +1 位作者 李晓微 张梅 《眼科研究》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期407-411,共5页

目的观察在缺氧和(或)转化生长因子-β2(TGF-β2)干预条件对体外培养的Mller细胞活力以及谷氨酰胺合成酶(GS)的影响。方法用出生7d的SD大鼠体外培养视网膜Mller细胞,将第2代细胞在含20%胎牛血清的DMEM中培养24h后,换用无血清的DMEM... 目的观察在缺氧和(或)转化生长因子-β2(TGF-β2)干预条件对体外培养的Mller细胞活力以及谷氨酰胺合成酶(GS)的影响。方法用出生7d的SD大鼠体外培养视网膜Mller细胞,将第2代细胞在含20%胎牛血清的DMEM中培养24h后,换用无血清的DMEM孵育24h。分组为:空白血清对照组(20%正常SD大鼠血清的DMEM);TGF-β2组(20%正常SD大鼠血清的DMEM及终质量浓度为150ng/L的TGF-β2);模拟缺氧组(20%正常SD大鼠血清的DMEM及终浓度1.0mmol/L的连二亚硫酸钠);TGF-β2+缺氧组(20%正常SD大鼠血清的DMEM液、终浓度1.0mmol/L的连二亚硫酸钠和终质量浓度为150ng/L的TGF-β2);中药血清组(20%中药SD大鼠血清的DMEM);中药血清+TGF-β2+缺氧组(20%中药SD大鼠血清的DMEM、终浓度1.0mmol/L的连二亚硫酸钠和终质量浓度为150ng/L的TGF-β2)。以透射电镜观察视网膜Mller细胞超微结构、以490型酶标仪测定细胞外液乳酸脱氢酶(LDH)释放量及GS活性。结果在缺氧条件下Mller细胞的超微结构发生明显的改变,如:细胞核变形,固缩;细胞器破坏;微绒毛内糖原明显增多。与正常对照组比较,TGF-β2干预组、缺氧组、TGF-β2+缺氧组的LDH释放量均明显增加(P<0.05),缺氧组、TGF-β2+缺氧组的GS活性均明显下降(P<0.01);与缺氧组比较,TGF-β2+缺氧组的LDH释放量明显增加、GS活性明显下降(P<0.05、P<0.01)。补肾活血中药血清能降低24h及48h时正常以及TGF-β2与缺氧同时存在条件下LDH的释放量(P<0.05),增强12h时正常条件下以及12h和24h时TGF-β2与缺氧同时存在条件下GS的活性(P<0.05、P<0.01)。结论 TGF-β2可加重缺氧条件下Mller细胞活力与GS活性的降低;补肾活血中药含药血清能增强视网膜Mller细胞活力及GS活性。 展开更多

关键词 补肾活血中药 转化生长因子-Β2 缺氧 视网膜Mller细胞 乳酸脱氢酶 谷氨酰胺合成酶

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补肾活血中药复方对高糖及糖基化终末产物条件下视网膜Mller细胞的影响 被引量：11

2

作者 谢学军 宋明霞 +3 位作者 张梅 秦伟 万李 方杨 《中国中西医结合杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期735-740,共6页

目的应用血清药理学方法探讨补肾活血中药复方对体外培养的视网膜Mller细胞在高糖及糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)干预条件下乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)漏出量、血管内皮生长因子(vascular endot... 目的应用血清药理学方法探讨补肾活血中药复方对体外培养的视网膜Mller细胞在高糖及糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)干预条件下乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)漏出量、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)以及VEGF mRNA表达的影响。方法以改进酶消化法培养SD大鼠视网膜M(u|¨)ller细胞,将纯化的视网膜M(u|¨)ller细胞分别置于正常、高糖(50 mmol/L)以及AGEs(50 mg/L、100 mg/L)条件下进行培养,并以补肾活血中药复方含药血清进行干预,以酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定VEGF、LDH漏出量,以反转录-聚合酶链法(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)测定VEGF mRNA相对表达量。结果高糖组及高、低AGEs组VEGF和VEGF mRNA的表达量均较正常对照组升高(P<0.01);高AGEs组LDH漏出量较正常对照组及高糖组增加(P<0.01);补肾活血中药复方含药血清能减少高糖组及高、低AGEs组LDH漏出量、VEGF与VEGF mRNA的表达量(P<0.05,P<0.01),对正常条件下LDH漏出量、VEGF及VEGF mRNA均无明显影响(P>0.05)。结论 AGEs能明显降低视网膜M(u|¨)ller细胞膜的稳定性,高糖及AGEs均可致视网膜M(u|¨)ller细胞VEGF mRNA、VEGF的表达上调;补肾活血中药复方含药血清能增强高糖及AGEs条件下视网膜M(u|¨)ller细胞膜的稳定性、抑制VEGF mRNA的转录、进而减少VEGF蛋白表达,可能是其防治糖尿病性视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)的重要作用机制之一。 展开更多

关键词 糖基化终末产物 视网膜muller细胞 血管内皮生长因子 乳酸脱氢酶 补肾活血

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高糖对视网膜Müller细胞VEGF,EPO和EPOR mRNA表达的影响 被引量：4

3

作者 郭龙 许惠卓 +1 位作者 夏晓波 毛俊峰 《国际眼科杂志》 CAS 2010年第3期449-452,共4页

目的:观察高糖条件下VEGF mRNA,EPO mRNA和EPORmRNA在体外培养的Mller细胞中的表达情况。方法:胰蛋白酶将新生小鼠视网膜组织吹打消化后,制成单细胞悬液,体外培养Mller细胞,RT-PCR测定高糖条件下视网膜Mller细胞VEGF,EPO和EPOR基... 目的:观察高糖条件下VEGF mRNA,EPO mRNA和EPORmRNA在体外培养的Mller细胞中的表达情况。方法:胰蛋白酶将新生小鼠视网膜组织吹打消化后,制成单细胞悬液,体外培养Mller细胞,RT-PCR测定高糖条件下视网膜Mller细胞VEGF,EPO和EPOR基因的表达。结果:成功获得视网膜Mller细胞,传代后90%以上的细胞呈兔抗鼠谷氨酰胺合酶(GS)染色阳性。Mller细胞VEGF mRNA,EPO mRNA和EPOR mRNA在高糖条件下表达升高,且呈浓度依赖性(P<0.05),但糖浓度50mmol/L组较40mmol/L组差异无统计学意义,无明显时间依赖性。结论:Mller细胞在高糖条件下VEGF,EPO,EPOR的表达增加。 展开更多

关键词 视网膜Mller细胞 血管内皮生长因子 促红细胞生成素 促红细胞生成素受体 新生血管

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补肾活血中药复方对AGEs及缺氧状态下体外纯化培养视网膜Müller细胞活力的影响 被引量：2

4

作者 秦伟 谢学军 +7 位作者 李志英 杨宇琦 宋明霞 曹新伟 马殿伟 荣素然 陈一兵 王雪菁 《中国中医眼科杂志》 2016年第4期215-218,共4页

目的观察补肾活血中药对体外晚期糖基化终末产物(AGEs)及缺氧条件下视网膜Müller细胞活力的影响。方法采用SD大鼠制备补肾活血中药含药血清和空白血清,以终浓度为1 mmol/L的连二亚硫酸钠制作细胞缺氧环境,以终浓度50 mg/L的AGEs作... 目的观察补肾活血中药对体外晚期糖基化终末产物(AGEs)及缺氧条件下视网膜Müller细胞活力的影响。方法采用SD大鼠制备补肾活血中药含药血清和空白血清,以终浓度为1 mmol/L的连二亚硫酸钠制作细胞缺氧环境,以终浓度50 mg/L的AGEs作为低AGEs条件,终浓度100 mg/L的AGEs作为高AGEs条件,将体外纯化培养的P2代视网膜Müller细胞分为6组,分别置于加入空白血清、中药含药血清、空白血清+低AGEs+连二亚硫酸钠、空白血清+高AGEs+连二亚硫酸钠、中药含药血清+低AGEs+连二亚硫酸钠、中药含药血清+高AGEs+连二亚硫酸钠的DMEM培养基中,培养48 h后检测各组乳酸脱氢酶(LDH)漏出量,比较差异。结果 (1)低AGEs+缺氧组较正常对照组LDH值有升高趋势,但差异无统计学意义(P>0.05);高AGEs+缺氧组较正常对照组LDH值明显升高,其差异有统计学意义(P<0.05)。(2)正常中药干预组LDH数值与正常对照组接近,差异无统计学意义(P>0.05)。(3)两组不同剂量AGEs+缺氧中药干预组LDH漏出量均较对应的低、高AGEs+缺氧组明显降低,其差异有统计学意义(P<0.05)。结论 AGEs及缺氧条件可导致体外纯化培养的大鼠视网膜Müller细胞细胞膜稳定性下降,通透性增加,细胞活力降低,补肾活血中药含药血清可提高AGEs及缺氧条件下视网膜Müller细胞活力,这可能是补肾活血中药防治糖尿病性视网膜病变(DR)的机制之一。 展开更多

关键词 补肾活血 muller细胞 糖基化终末产物 缺氧 乳酸脱氢酶

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ApoAI对原代培养人Müller细胞生长的影响 被引量：2

5

作者 张红花 刘瑶 《东南大学学报（医学版）》 CAS 2014年第5期609-612,共4页

目的:研究ApoAI对原代培养人Müller细胞生长的影响。方法:原代培养人的视网膜Müller细胞后用不同浓度的ApoAI刺激Müller细胞24 h,采用流式细胞术检测ApoAI作用24 h后Müller细胞的细胞周期,比较各组细胞的细胞周期;... 目的:研究ApoAI对原代培养人Müller细胞生长的影响。方法:原代培养人的视网膜Müller细胞后用不同浓度的ApoAI刺激Müller细胞24 h,采用流式细胞术检测ApoAI作用24 h后Müller细胞的细胞周期,比较各组细胞的细胞周期;采用流式细胞术和荧光照相法检测各组Müller细胞细胞凋亡水平,采用单因素方差分析方法比较各组间不同细胞周期间不同细胞数的变化以及各组细胞的凋亡数。结果与结论:流式细胞术结果显示,ApoAI可以抑制人Müller细胞的增殖,且随ApoAI浓度的增加抑制作用增强(P<0.05);ApoAI对细胞的凋亡无明显作用(P>0.05)。 展开更多

关键词 糖尿病视网膜病变 增殖性糖尿病视网膜病变 视网膜muller细胞 载脂蛋白AI 流式细 胞术

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中药血清对体外缺氧条件下纯化培养的RGCs的保护作用研究

6

作者 李颖 邸红莲 《中国药物警戒》 2015年第8期454-457,共4页

目的探讨补肾活血中药血清对体外缺氧条件下纯化培养的视网膜神经节细胞(RGCs)的保护作用及其机制。方法选取出生1 d的新生乳鼠30只,采用"两步筛选法"纯化培养SD新生乳鼠视网膜神经节细胞(RGCs),选取出生7 d的SD大鼠6只,采用&... 目的探讨补肾活血中药血清对体外缺氧条件下纯化培养的视网膜神经节细胞(RGCs)的保护作用及其机制。方法选取出生1 d的新生乳鼠30只,采用"两步筛选法"纯化培养SD新生乳鼠视网膜神经节细胞(RGCs),选取出生7 d的SD大鼠6只,采用"改进的酶消化法"纯化培养新生SD大鼠视网膜Muller细胞,然后按照1:25的比例将RGCs接种于被视网膜Muller细胞包被的培养基中建立共同培养模型,在体外培养基中分别加入葡萄糖(50mmol·L^(-1))和连二亚硫酸钠(1.0mmol·L^(-1))(高糖缺氧组);仅加入葡萄糖(50mmol·L^(-1))(高糖组);加入连二亚硫酸钠(1.0mmol·L^(-1))(缺氧组);在上述基础分别加入制定好的20%体积分数的补肾活血中药血清进行干预,分别测定24、48、72 h培养模型外液中的乳酸脱氢酶(LDH)漏出量和谷氨酰胺合成酶(GS)活性。结果在第48 h、72 h正常对照组、高糖组、缺氧组3组的LDH漏出量较第24h均有显著的增高趋势(P<0.05),正常对照组、高糖组、缺氧组、高糖缺氧组在同一时刻与各自对应的中药干预组比较,可以发现LDH漏出量均显著的高于各中药干预组(P<0.05)。在第48 h、72 h正常对照组、高糖组、缺氧组、高糖缺氧组及其中药干预组的GS活性较第24 h均有显著的增高趋势(P<0.05),正常对照组、高糖组、缺氧组、高糖缺氧组随着时问的延长其GS活性均显著的低于中药干预组。结论高糖或缺氧条件下可以造成RGCs、视网膜Muller细胞的细胞膜稳定性变差,通透性增加,补肾活血中药可以改善细胞膜的稳定性,提高GS的活性,从而达到保护RGCs细胞的目的 。 展开更多

关键词 补肾活血中药 缺氧 视网膜神经节细胞 视网膜 muller 细胞

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缺氧对鼠视网膜Müller细胞GLAST和GS表达及功能的影响 被引量：1

7

作者 戴敏 夏晓波 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2011年第2期134-141,共8页

研究了缺氧对鼠视网膜Müller细胞谷氨酸转运体(L-glutamate/L-aspartate transporter,GLAST)和谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase,GS)表达的影响,及对谷氨酸摄取的作用.采用出生3～7天的小鼠视网膜组织进行Müller细胞培养... 研究了缺氧对鼠视网膜Müller细胞谷氨酸转运体(L-glutamate/L-aspartate transporter,GLAST)和谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase,GS)表达的影响,及对谷氨酸摄取的作用.采用出生3～7天的小鼠视网膜组织进行Müller细胞培养,采用125μmol/L的氯化钴(CoCl2)溶液分别进行缺氧干预6、12、24、48和72 h,不加CoCl2溶液培养的Müller细胞为正常对照.采用RT-PCR法、Western blot法和免疫细胞化学染色法检测GLAST和GS的表达,并检测谷氨酸摄取及细胞凋亡情况.结果显示,缺氧早期GLAST表达较正常对照组增强(P<0.001),CoCl2溶液干预12 h后达到最强(P<0.05),之后逐渐降低.CoCl2溶液干预72 h后GLAST表达与正常对照组相比无明显差异(P>0.05).而缺氧也使GS的表达较正常对照组增加(P<0.001),CoCl2溶液干预48 h后GS表达最强(P<0.001),之后开始下降.缺氧促进Müller细胞对谷氨酸的摄取,CoCl2溶液干预48 h后L-[3,4-3H]-谷氨酸的摄取量最大(P<0.005),之后开始下降.CoCl2溶液干预后,Müller细胞死亡数较正常对照组无明显差异(P>0.05).结果表明,在一定时间范围内缺氧能够增强Müller细胞GLAST及GS的表达,增加谷氨酸的摄取.但持续缺氧最终会引起Müller细胞功能失代偿,从而导致谷氨酸的代谢能力降低. 展开更多

关键词 缺氧 视网膜muller细胞 谷氨酸转运体 谷氨酰胺合成酶 谷氨酸

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大鼠视网膜Müller细胞在高糖、氧化应激、缺氧中的表现 被引量：1

8

作者 李春花 冯朝晖 +4 位作者 张雪 田冰玉 雷晓琴 周婷洁 马为梅 《中国医药导报》 CAS 2019年第15期18-20,40,F0003,F0004,共6页

目的观察Sprague-Dawley(SD)大鼠视网膜Müller细胞在高糖、氧化应激、缺氧三种病理环境下的特征,为糖尿病视网膜病变的防治提供新的研究依据。方法体外培养SD大鼠视网膜Müller细胞,并用谷氨酰胺合成酶(GS)鉴定。将传2代的细... 目的观察Sprague-Dawley(SD)大鼠视网膜Müller细胞在高糖、氧化应激、缺氧三种病理环境下的特征,为糖尿病视网膜病变的防治提供新的研究依据。方法体外培养SD大鼠视网膜Müller细胞,并用谷氨酰胺合成酶(GS)鉴定。将传2代的细胞随机分为四组:对照组、高糖组、氧化应激组、缺氧组。倒置显微镜观察细胞形态学改变,免疫荧光染色法观察细胞GS和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的变化,Transwell小室观察细胞迁移能力。结果体外成功培养并鉴定鼠Müller细胞,四组Müller细胞功能均受损,氧化应激组以及缺氧组结构受损明显,失去正常形态。缺氧组中α-SMA的表达呈阳性,并且在Transwell小室中发生迁移的细胞数明显多于其他组,差异有统计学意义(P < 0.05)。结论高糖、氧化应激、缺氧均可导致Müller细胞功能受损,缺氧可诱导Müller细胞转化为具有迁移能力的肌纤维样细胞,提示Müller细胞参与了增生性糖尿病视网膜病变的发病过程。 展开更多

关键词 SD大鼠 视网膜MÜLLER细胞 糖尿病视网膜病变 上皮细胞间质转化 Transwell小室

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视网膜Müller细胞与谷氨酸代谢

9

作者 李芳梅 谢学军 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2010年第8期789-791,共3页

视网膜Mller细胞作为重要的星形胶质细胞,在维持视网膜正常功能方面具有重要的作用,在病理状态下也可以通过蛋白表达、反应性胶质增生、谷氨酸(glutamate,Glu)转运体的表达、谷氨酰胺合成酶的改变和分泌神经营养因子等途径对Glu代谢... 视网膜Mller细胞作为重要的星形胶质细胞,在维持视网膜正常功能方面具有重要的作用,在病理状态下也可以通过蛋白表达、反应性胶质增生、谷氨酸(glutamate,Glu)转运体的表达、谷氨酰胺合成酶的改变和分泌神经营养因子等途径对Glu代谢进行干预,从而起到保护视网膜神经元免受Glu神经性毒性损伤的作用。 展开更多

关键词 视网膜mullerr细胞 谷氨酸 保护

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高糖对培养的大鼠视网膜Muller细胞的影响 被引量：3

10

作者 沈玺 徐格致 《中华内分泌代谢杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期74-77,共4页

目的探讨高糖对体外培养的大鼠视网膜Muller细胞的活力和谷氨酸代谢功能有否改变及其可能机制。方法将体外培养的大鼠视网膜Muller细胞随机分为正常葡萄糖组（5mmol／L）和高糖组（25mmol／L），培养24h后MTT自动比色法测定两组细胞的... 目的探讨高糖对体外培养的大鼠视网膜Muller细胞的活力和谷氨酸代谢功能有否改变及其可能机制。方法将体外培养的大鼠视网膜Muller细胞随机分为正常葡萄糖组（5mmol／L）和高糖组（25mmol／L），培养24h后MTT自动比色法测定两组细胞的活力，采用间接荧光免疫组化法和Western蛋白印迹法检测两组细胞胶质纤维酸性蛋白（GFAP）和磷酸化的信号转导及转录活化因子3（pSTAT3）的表达情况；采用间接荧光免疫组化法实时PCR检测两组细胞谷氨酰胺合成酶（GS）和c-Jun的蛋白和mRNA表达变化。结果MTT结果显示高糖状态下细胞活力提高，与对照组相比差异有统计学意义；与对照组相比，高糖组细胞GFAP、pSTAT3、c-Jun蛋白和mRNA的表达均升高，而GS蛋白和mRNA的表达降低。结论经高糖处理的Mailer细胞活力提高，其机制可能与GFAP和pSTAT3的表达升高有关；GS表达下降的可能机制为高糖激活了c-Jun基因。Mtiller细胞由于谷氨酸循环中的关键酶GS的表达减少而代谢谷氨酸的能力下降，这可能是糖尿病视网膜病变中导致神经节细胞死亡的机制之一。 展开更多

关键词 高糖 视网膜muller细胞 细胞培养 谷氨酰胺合成酶 大鼠

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体外内层血视网膜屏障模型中Müller胶质细胞对紧密连接的影响 被引量：4

11

作者 郭斌 惠延年 王应利 《国际眼科杂志》 CAS 2006年第2期311-316,共6页

目的:建立体外内层血视网膜屏障(iBRB)模型并研究视网膜Müller胶质细胞(RMGC)对紧密连接(TJ)的影响。方法:采用免疫磁珠方法原代纯化和培养大鼠视网膜微血管内皮细胞(RMEC),采用改良酶消化方法培养RMGC,RMEC和RMGC在微孔膜的两侧... 目的:建立体外内层血视网膜屏障(iBRB)模型并研究视网膜Müller胶质细胞(RMGC)对紧密连接(TJ)的影响。方法:采用免疫磁珠方法原代纯化和培养大鼠视网膜微血管内皮细胞(RMEC),采用改良酶消化方法培养RMGC,RMEC和RMGC在微孔膜的两侧共培养建立iBRB模型,通过相差显微镜和透射电子显微镜(TEM)观察两种细胞的生长和TJ的形态。采用跨内皮细胞电阻(TER)测量和TJ相关蛋白ZO-1荧光染色和蛋白电泳来评价TJ的变化情况。结果:RMEC和RMGC均可在膜上正常生长,RMGC间紧密连接。TEM观察高TER值样品中相邻RMEC形成典型的TJ结构。RMEC层TER在8d时达到最高,为(86.3±7.9)Ω·cm2,此后保持相对稳定。在RMGC存在的共培养组TER7d时为(97.6±3.6)Ω·cm2,约为7d时RMEC组的2倍,8d达到峰值(113.5±5.3)Ω·cm2。在iBRB模型发展过程中,ZO-1的表达强度随时间延长而增加。结论:通过RMEC和RMGC的共培养可以建立体外iBRB模型,RMGC加快RMEC间的TJ成熟。 展开更多

关键词 视网膜 胶质细胞 微血管内皮细胞

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