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一株产耐有机溶剂脂肪酶伯克霍尔德氏菌的分子鉴定及酶学性质分析 被引量：2
1
作者 柏晓辉 樊燕 +5 位作者 周娟 徐庆辉 邵杨 张鑫 洪光明 郑志 《中国油脂》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期90-95,共6页
为筛选具有潜在应用价值的产脂肪酶菌株,采用三丁酸甘油酯固体培养基从黄山松树林土壤中筛选产脂肪酶菌株,利用16S rDNA测序对筛选的菌株进行鉴定,并对其产脂肪酶酶活力参数以及酶学性质进行分析。结果表明:筛选的产脂肪酶菌株HSU-7为... 为筛选具有潜在应用价值的产脂肪酶菌株,采用三丁酸甘油酯固体培养基从黄山松树林土壤中筛选产脂肪酶菌株,利用16S rDNA测序对筛选的菌株进行鉴定,并对其产脂肪酶酶活力参数以及酶学性质进行分析。结果表明:筛选的产脂肪酶菌株HSU-7为伯克霍尔德氏菌(Burkholderia sp. HSU-7);菌株HSU-7所产脂肪酶的最适反应温度为45℃,最适pH为5,为一种耐酸性的中温脂肪酶;菌株HSU-7发酵5 d,所产脂肪酶酶活力最大,为72.22 U/mL。同时,K^(+)、Ca^(2+)和Mg^(2+)对菌株HSU-7所产脂肪酶酶活力具有显著的促进作用,而Ni^(2+)、Cu^(2+)、Fe^(3+)和Zn^(2+)具有一定的抑制作用,该脂肪酶可耐受有机溶剂甲醇、乙醇、异丙醇和二甲基亚砜,但Triton X-100可显著抑制其酶活力;此外,该脂肪酶能耐受65℃的高温。综上,菌株HSU-7可高产脂肪酶,且该脂肪酶有较强的热稳定性,可耐受多种有机溶剂,具有很好的工业应用价值。 展开更多
关键词 菌株 脂肪酶 分子鉴定 酶活力 耐热性 耐有机溶剂 耐酸性
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南海深海新颖低温脂肪酶的克隆、表达及酶学性质鉴定 被引量：2
2
作者 曹莹莹 邓盾 +3 位作者 张云 孙爱君 夏方亮 胡云峰 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期43-52,共10页
从南海深海放线菌Pseudonocardia antitumoralis SCSIO 01299中克隆一个脂肪酶基因lipase B5。lipase B5基因片段大小为972bp,编码的蛋白质具有323个氨基酸残基并与Pseudonocardia sp.HH130629-09中假定脂肪酶有98%的同源性。以p ET28a... 从南海深海放线菌Pseudonocardia antitumoralis SCSIO 01299中克隆一个脂肪酶基因lipase B5。lipase B5基因片段大小为972bp,编码的蛋白质具有323个氨基酸残基并与Pseudonocardia sp.HH130629-09中假定脂肪酶有98%的同源性。以p ET28a（＋）为载体,将重组质粒转化到E.coli BL21（DE3）中,实现lipase B5高效表达,并利用Ni-NTA亲和层析纯化lipase B5。Lipase B5最适反应底物为对硝基苯酚癸酸酯（p-NPD）,最适温度为30℃,最适反应p H为7.5。Lipase B5催化p-NPD水解反应的活性达到140.14U/mg,Vmax和Km分别为109.8μmol/min、0.976mmol/L,催化橄榄油的活力为32.019 7U/mg。Lipase B5在p H7.5~8.5保持良好的p H稳定性;在10～20℃低温下保持较高的酶活力,在10~40℃内具有温度稳定性。Lipase B5对大部分金属离子有很好的耐受性,低浓度的Li^＋、Mg^2＋对该酶活性有促进作用。Lipase B5对高浓度的Na Cl有很好的耐受性,在100mmol/L的Na Cl存在下,酶活性大约保持在103%。Lipase B5对多种短链醇类有机溶剂和表面活性剂有很好的耐受性,Triton X-100、Tween-80和Tween-20对lipase B5酶有激活作用。 展开更多
关键词 深海低温脂肪酶 金属离子耐受性 盐耐受性 有机溶剂耐受性 表面活性剂耐受性
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新颖微生物低温酯酶EstP8的酶学性质研究与在手性催化中的应用 被引量：2
3
作者 公颜慧 马三梅 +2 位作者 张云 王永飞 胡云峰 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期35-44,共10页
从假单胞菌Pseudonocardia antitumoralis HUP007基因组中克隆了一个1 041bp的酯酶基因Est P8,编码的蛋白具有377个氨基酸残基。在E.coli BL21(DE3)中实现酯酶Est P8的高效异源表达和纯化。Est P8为脂肪酶家族Ⅳ中的一员,具有HGGG保守... 从假单胞菌Pseudonocardia antitumoralis HUP007基因组中克隆了一个1 041bp的酯酶基因Est P8,编码的蛋白具有377个氨基酸残基。在E.coli BL21(DE3)中实现酯酶Est P8的高效异源表达和纯化。Est P8为脂肪酶家族Ⅳ中的一员,具有HGGG保守序列。Est P8最适底物为对硝基苯酚乙酸酯(p-NPO),最适温度和p H分别为50℃和8.0。Est P8催化p-NPO水解反应的活性、Vmax和Km分别达到105.19U/mg、89.4μM/min、1.144m M。Est P8在p H7.0~8.0范围内具有良好的p H稳定性;在4℃时,酯酶相对活力为41.78%,在10~40℃内具有很好温度稳定性。Est P8对大部分金属离子有很好的耐受性,低浓度的Cu^(2+)、Mn^(2+)、Zn^(2+)对该酶的活性有激活作用。辛烷、庚烷、甲苯、丙酮、DMF等有机溶剂对Est P8的活性同样具有激活作用。酯酶Est P8还可以通过水解拆分高效地制备手性(R)-1-苯基乙醇;添加有机溶剂可以很好地促进该酯酶的光学选择性和产率,在共溶剂甲苯的存在下,所制备的(R)-1-苯基乙醇的e.e.和产率可达91%和18%;在共溶剂DMSO的存在下,所制备的(S)-乙酸苏合香酯的e.e.和产率可达98%和60%。酯酶Est P8在手性生物催化等诸多工业领域有很好的应用潜力。 展开更多
关键词 低温酯酶 金属离子耐受性 有机溶剂耐受性 手性拆分 高对映选择性
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南海深海链霉菌Streptomyces sp.SCSIO 13580脂肪酶的酶学性质
4
作者 王召贺 杨再昌 +2 位作者 张云 孙爱君 胡云峰 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期31-37,共7页
对从南海深海链霉菌Streptomyces sp.SCSIO 13580中的新颖脂肪酶L-1进行了酶学性质鉴定。脂肪酶L-1对对硝基苯酚己酸酯的催化活性最高,最适反应温度为40℃,最适反应p H为8.0,在最适条件下的酶活力为51.5 U/mg。脂肪酶L-1对大部分有机溶... 对从南海深海链霉菌Streptomyces sp.SCSIO 13580中的新颖脂肪酶L-1进行了酶学性质鉴定。脂肪酶L-1对对硝基苯酚己酸酯的催化活性最高,最适反应温度为40℃,最适反应p H为8.0,在最适条件下的酶活力为51.5 U/mg。脂肪酶L-1对大部分有机溶剂和表面活性剂具有极好的耐受性。同时该南海深海微生物脂肪酶能在温和条件下催化制备多种短链酯食品香料产品,具有较好的工业应用前景。 展开更多
关键词 深海微生物 脂肪酶 有机溶剂耐受性 短链酯合成
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