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神经元抑制性沉默元件双链RNA慢病毒载体的构建与鉴定
被引量：
1
1
作者
李宏图
刘晓玉
庞希宁
《中国医学科学院学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第6期760-764,803,共6页
目的构建神经元抑制性沉默元件(RE-1/NRSE)双链RNA的慢病毒载体。方法根据RE-1/NRSE序列合成靶序列的寡核苷酸序列,退火形成双链DNA,与经HpaⅠ和XhoⅠ双酶切后的pGC-LV载体连接产生L-smRE-1/NRSE慢病毒载体,采用PCR和测序对阳性克隆进...
目的构建神经元抑制性沉默元件(RE-1/NRSE)双链RNA的慢病毒载体。方法根据RE-1/NRSE序列合成靶序列的寡核苷酸序列,退火形成双链DNA,与经HpaⅠ和XhoⅠ双酶切后的pGC-LV载体连接产生L-smRE-1/NRSE慢病毒载体,采用PCR和测序对阳性克隆进行鉴定。用L-smRE-1/NRSE和包装质粒pHelper 1.0、pHelper2.0共转染293T细胞,包装产生慢病毒颗粒,在倒置荧光显微镜下观察293T细胞中绿色荧光蛋白的表达量,并计算病毒滴度,初步观察其对大鼠间充质干细胞的转染效率。结果PCR和测序证实,构建出了RE-1/NRSE双链RNA的慢病毒载体L-smNRSE/RE-1。包装慢病毒,浓缩病毒悬液的滴度为4×108TU/ml。慢病毒颗粒能稳定转染大鼠间充质干细胞,当感染复数为80时,感染效率达100%。结论成功构建了RE-1/NRSE dsRNA的慢病毒表达载体。
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关键词
神经元抑制性沉默元件
双链RNA
慢病毒载体
下载PDF
职称材料
题名
神经元抑制性沉默元件双链RNA慢病毒载体的构建与鉴定
被引量：
1
1
作者
李宏图
刘晓玉
庞希宁
机构
中国医科大学细胞生物学卫生部重点实验室发育生物学教研室
辽宁省计划生育科学研究院辽宁省生殖医学重点实验室
出处
《中国医学科学院学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第6期760-764,803,共6页
基金
辽宁省自然科学基金(20062090)
辽宁省教育厅科学技术研究项目(2004d227)~~
文摘
目的构建神经元抑制性沉默元件(RE-1/NRSE)双链RNA的慢病毒载体。方法根据RE-1/NRSE序列合成靶序列的寡核苷酸序列,退火形成双链DNA,与经HpaⅠ和XhoⅠ双酶切后的pGC-LV载体连接产生L-smRE-1/NRSE慢病毒载体,采用PCR和测序对阳性克隆进行鉴定。用L-smRE-1/NRSE和包装质粒pHelper 1.0、pHelper2.0共转染293T细胞,包装产生慢病毒颗粒,在倒置荧光显微镜下观察293T细胞中绿色荧光蛋白的表达量,并计算病毒滴度,初步观察其对大鼠间充质干细胞的转染效率。结果PCR和测序证实,构建出了RE-1/NRSE双链RNA的慢病毒载体L-smNRSE/RE-1。包装慢病毒,浓缩病毒悬液的滴度为4×108TU/ml。慢病毒颗粒能稳定转染大鼠间充质干细胞,当感染复数为80时,感染效率达100%。结论成功构建了RE-1/NRSE dsRNA的慢病毒表达载体。
关键词
神经元抑制性沉默元件
双链RNA
慢病毒载体
Keywords
repressor
element
-1/
neuron
-
restrictive
silencer
element
double-stranded
RNA
lentivirus
vector
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
神经元抑制性沉默元件双链RNA慢病毒载体的构建与鉴定
李宏图
刘晓玉
庞希宁
《中国医学科学院学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009
1
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