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细胞自噬相关蛋白ATG9A对口蹄疫病毒侵入的影响
1
作者 邓欣雨 袁红 +10 位作者 王涛 宫晓华 赵俊芳 包慧芳 李平花 孙普 付元芳 李坤 刘在新 卢曾军 白兴文 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期285-291,共7页
为揭示细胞自噬相关蛋白9A(ATG9A)对口蹄疫病毒(FMDV)复制的影响,利用IFA、RT-qPCR和Western-blot等方法检测FMDV与ATG9A的共定位情况以及病毒感染对ATG9A的影响;通过构建ATG9A重组表达质粒和合成小干扰RNA,检测过表达及敲降ATG9A对FMD... 为揭示细胞自噬相关蛋白9A(ATG9A)对口蹄疫病毒(FMDV)复制的影响,利用IFA、RT-qPCR和Western-blot等方法检测FMDV与ATG9A的共定位情况以及病毒感染对ATG9A的影响;通过构建ATG9A重组表达质粒和合成小干扰RNA,检测过表达及敲降ATG9A对FMDV吸附、内化、基因组复制、蛋白翻译、子代病毒粒子产生的影响。结果显示,FMDV感染后与ATG9A共定位且抑制ATG9A的表达;ATG9A不影响FMDV的吸附,但极显著地抑制FMDV的内化过程;同时,过表达(或干扰)ATG9A能够在RNA与蛋白水平显著降低(或提高)FMDV的增殖和子代病毒粒子产生的能力。结论,ATG9A抑制FMDV的复制,为深入认识FMDV在细胞内的复制周期提供了线索。 展开更多
关键词 自噬相关蛋白9A 口蹄疫病毒 内化 复制
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归纳逻辑在管理案例研究中的应用:以AMJ年度最佳论文为例 被引量：23
2
作者 吕力 《南开管理评论》 CSSCI 北大核心 2014年第1期151-160,共10页
Yin的"复制逻辑"和Eisenhardt的"复制与扩展逻辑"是目前管理学顶级期刊中被使用最多的管理案例研究方法论,它们完全可以被看作古典归纳逻辑理论中契合差异法则的一个不严格的表述。增加考察的场合以及在理论抽样中... Yin的"复制逻辑"和Eisenhardt的"复制与扩展逻辑"是目前管理学顶级期刊中被使用最多的管理案例研究方法论,它们完全可以被看作古典归纳逻辑理论中契合差异法则的一个不严格的表述。增加考察的场合以及在理论抽样中尽量选择那些因素差异较大的场合可以增加归纳推理的广度,配合使用演绎逻辑可以增加归纳推理的深度。本文在以上归纳逻辑理论的基础上提出管理案例研究的七项基本原则,并使用上述原则对2005-2009年AMJ年度最佳论文进行分析和评价。 展开更多
关键词 归纳逻辑 案例研究 复制逻辑 复制扩展逻辑 方法论
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卫星RNA对黄瓜花叶病毒基因组RNA体外合成的影响 被引量：7
3
作者 杨海花 康良仪 +1 位作者 赵大健 田波 《中国病毒学》 CSCD 1996年第4期373-377,共5页
卫星ＲＮＡ对黄瓜花叶病毒基因组ＲＮＡ体外合成的影响杨海花，康良仪，赵大健，田波（中国科学院微生物研究所，北京１０００８０）关键词卫星ＲＮＡ，黄瓜花叶病毒，依赖ＲＮＡ的ＲＮＡ聚合酶，体外合成利用卫星ＲＮＡ生防制剂控制田... 卫星ＲＮＡ对黄瓜花叶病毒基因组ＲＮＡ体外合成的影响杨海花，康良仪，赵大健，田波（中国科学院微生物研究所，北京１０００８０）关键词卫星ＲＮＡ，黄瓜花叶病毒，依赖ＲＮＡ的ＲＮＡ聚合酶，体外合成利用卫星ＲＮＡ生防制剂控制田间的番茄、青椒、烟草等由黄瓜花叶病... 展开更多
关键词 黄瓜花叶病毒 卫星RNA RNA 体外合成 基因组
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猪流行性腹泻病毒nsp8蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备 被引量：1
4
作者 朱婷 洪润婧 +2 位作者 徐雅雯 范红结 蔺辉星 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期1279-1284,共6页
复制/转录复合物(RTC)在冠状病毒复制过程中具有重要作用。猪流行性腹泻病毒(PEDV)的非结构蛋白8(nsp8)参与病毒RTC的形成。因此,可将nsp8作为RTC的检测标志之一。为获得PEDV nsp8蛋白并制备其多克隆抗体,本研究通过同源重组的方法将PED... 复制/转录复合物(RTC)在冠状病毒复制过程中具有重要作用。猪流行性腹泻病毒(PEDV)的非结构蛋白8(nsp8)参与病毒RTC的形成。因此,可将nsp8作为RTC的检测标志之一。为获得PEDV nsp8蛋白并制备其多克隆抗体,本研究通过同源重组的方法将PEDV nsp8基因与质粒pET-28a(+)连接。将重组质粒pET-28a-nsp8转化至大肠杆菌BL21感受态细胞进行诱导表达。用镍柱纯化6His-nsp8蛋白并对其进行复性,然后用凝血酶酶切去除his标签,得到纯化的nsp8蛋白。SDS-PAGE结果显示,重组nsp8蛋白大小为27 ku。以纯化的nsp8蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。Western-blot结果表明,本研究制备的家兔抗nsp8多克隆抗体可与nsp8蛋白反应。用该多克隆抗体进行间接免疫荧光(IFA)试验,可在PEDV感染细胞的细胞核周围观察到明显的荧光,表明nsp8多克隆抗体可用于病毒RTC的检测。上述研究结果为冠状病毒RTC的形成机制及其功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 非结构蛋白8 多克隆抗体 复制/转录复合物
原文传递
HIV-1 Tat蛋白对人类疱疹病毒8型复制的影响 被引量：5
5
作者 卢春 黄丽 +1 位作者 贾雪梅 曾怡 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期306-312,共7页
用HindⅢ将HIV-1Tat101蛋白编码基因从pEV质粒中切出,BamHI、NotⅠ将绿色荧光蛋白(GFP)编码基因从表达质粒pcDNA3 1+/GFP中切出,分别插入到质粒LZRSpBMN-Z中,构建成重组反转录病毒表达质粒LZRS-Tat101和LZRS-GFP。采用磷酸钙转染法将两... 用HindⅢ将HIV-1Tat101蛋白编码基因从pEV质粒中切出,BamHI、NotⅠ将绿色荧光蛋白(GFP)编码基因从表达质粒pcDNA3 1+/GFP中切出,分别插入到质粒LZRSpBMN-Z中,构建成重组反转录病毒表达质粒LZRS-Tat101和LZRS-GFP。采用磷酸钙转染法将两重组质粒转染到含反转录病毒env、gal和pol编码基因的包装细胞Phoenix(ΦNX)中,嘌呤霉素筛选获得稳定细胞系。分别收集稳定细胞系分泌的病毒上清,并感染体外培养的原发性渗出性淋巴瘤(PEL)BCBL-1细胞。收集LZRS-GFP重组病毒感染的BCBL-1细胞进行流式细胞计数,检测GFP表达水平。收集LZRS-Tat101重组病毒感染的BCBL-1细胞,提取蛋白作Westernblot,检测Tat蛋白表达状况;取细胞总RNA作Northernblot和定量PCR,检查HHV-8次要衣壳蛋白ORF26mRNA转录水平。重组LZRS-Tat101病毒进一步感染HL3T1细胞(HeLa细胞包含HIV-1-LTR/CAT报告基因),收集感染细胞提取蛋白,检测CAT活性,评价Tat生物学功能。PCR扩增HHV-8复制和转录激活蛋白Rta启动子区上游序列,并克隆至pGL-3载体中,构建Rta启动子+虫荧光素酶(Luciferase)报告基因重组质粒。此重组质粒进一步电转染预先感染了LZRS-Tat101病毒的BC-3细胞,TPA刺激后收集细胞,检测Luciferase活性。结果显示:①重组反转录病毒感染BCBL-1细胞,一次感染? 展开更多
关键词 人类疱疹病毒8型 复制 可溶性周期复制 HIV-1Tat蛋白
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