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骨形态发生蛋白-2单克隆抗体的制备及评价
1
作者 刘启省 张东刚 +3 位作者 南南 王金恒 陈亮 徐丽明 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期1310-1317,共8页
目的:制备骨形态发生蛋白-2(BMP-2)单克隆抗体,并对其进行评价。方法:用重组人源BMP-2蛋白(rh BMP-2)对小鼠进行免疫;确认小鼠血清BMP-2抗体检测阳性后,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞按3∶1的比例融合得到杂交瘤细胞株;用间接竞争ELISA法... 目的:制备骨形态发生蛋白-2(BMP-2)单克隆抗体,并对其进行评价。方法:用重组人源BMP-2蛋白(rh BMP-2)对小鼠进行免疫;确认小鼠血清BMP-2抗体检测阳性后,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞按3∶1的比例融合得到杂交瘤细胞株;用间接竞争ELISA法筛选BMP-2阳性单克隆杂交瘤细胞;用常规Protein G进行纯化得到BMP-2单克隆抗体,并对其纯度、表位构相,特异性进行评价。结果:成功制备BMP-2单克隆抗体,其亚型为IgG2a,κ,纯化后的SDS-PAGE纯度大于90%。评价结果表明,本课题组研制的BMP-2抗体与rhBMP-2的结合位点为非线性表位,且特异性优于市售抗体,与BMP家族的BMP-4、BMP-5、BMP-7无交叉反应。结论:本课题组研制的单克隆抗体特异性好,效价高,可用于建立酶联免疫方法,检测骨修复材料中BMP-2含量。 展开更多
关键词 单克隆抗体 骨形态发生蛋白-2(bmp-2) 重组人源bmp-2蛋白(rhbmp-2) 表位构相 特异性 骨修复材料 bmp-2含量
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抑制性ELISA法检测药械组合产品中rhBMP-2的含量
2
作者 陈亮 刘启省 +2 位作者 苑晓佩 张东刚 徐丽明 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期1304-1309,共6页
目的:建立抑制性酶联免疫吸附分析法检测药械组合产品(骨植入物)中rhBMP-2的含量。方法:将含rhBMP-2的骨植入物匀浆后,先与rhBMP-2抗体溶液反应,再将剩余抗体与包被的rhBMP-2进行显色反应,骨修复材料对显色反应的抑制程度与其所含的rhBM... 目的:建立抑制性酶联免疫吸附分析法检测药械组合产品(骨植入物)中rhBMP-2的含量。方法:将含rhBMP-2的骨植入物匀浆后,先与rhBMP-2抗体溶液反应,再将剩余抗体与包被的rhBMP-2进行显色反应,骨修复材料对显色反应的抑制程度与其所含的rhBMP-2含量成正比,从而能准确测定组合产品中rhBMP-2的含量。通过对rhBMP-2包被浓度、rhBMP-2抗体浓度的优化,建立该方法的基本实验条件;并对检测方法的标准曲线范围、检测回收率、精密度、可重复性进行验证;用该方法对复合不同rhBMP-2含量的骨修复材料进行检测。结果:建立的抑制性酶联免疫吸附分析方法标准曲线线性良好(R^2=0.998),质量浓度范围为0.078～10μg·mL^(-1),检测回收率均在理论值±20%范围内,实验内精密度和实验间精密度验证数据RSD均小于15%,不同操作人员对检测结果无显著影响。用该方法实现了对rhBMP-2含量分别5、10、50μg·g^(-1)的骨修复材料的准确检测。结论:本研究建立了抑制性酶联免疫吸附分析方法,弥补了仅通过工艺参数计算间接确定药械组合产品中rhBMP-2含量的不足,实现了药械组合产品中rhBMP-2含量的直接准确检测。 展开更多
关键词 组合产品 重组人骨形态发生蛋白-2(rhbmp-2) 抑制性酶联免疫吸附分析方法(ELISA) rhbmp-2含量 骨植入物
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