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3型腺病毒免提取核酸重组酶介导的等温扩增实时荧光检测方法的建立及应用 被引量：5
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作者 王瑞欢 张益 +10 位作者 向星宇 湛志飞 李鑫娜 申辛欣 朱贞 张瑞卿 白雪丁 段青霞 凡国豪 张红 马学军 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2019年第6期653-657,共5页
目的 建立3型腺病毒(human adenovirus 3,HAdV-3)免提取核酸的重组酶介导的等温扩增(recmbinase acid amplification,RAA)实时荧光检测方法。方法 根据HAdV-3基因保守序列分别设计1对引物和1条探针,通过对免提核酸的条件摸索和优化,建立... 目的 建立3型腺病毒(human adenovirus 3,HAdV-3)免提取核酸的重组酶介导的等温扩增(recmbinase acid amplification,RAA)实时荧光检测方法。方法 根据HAdV-3基因保守序列分别设计1对引物和1条探针,通过对免提核酸的条件摸索和优化,建立1种免提取核酸,重组酶介导的等温扩增实时荧光检测方法;通过对培养的毒株进行系列稀释,免提取核酸分析该方法的灵敏度;通过检测其他呼吸道病毒的原始样本,评价该方法的特异性;并检测HAdV-3临床样本,与传统的提核酸实时荧光定量PCR方法进行比较。结果 本研究建立的免提取核酸实时荧光RAA方法对10倍系列稀释的HAdV-3毒株进行检测,和实时荧光定量PCR方法相比,灵敏度相当,对应的最低浓度稀释样本的Ct值为36.87,对常见其他型别的呼吸道病毒检测无交叉反应。两种方法对56例HAdV-3阳性临床样本同时检测,结果完全一致。结论 本文首次报道了免提取核酸的实时荧光RAA检测HAdV-3的方法,该方法具有较高的灵敏度和特异性,适合应用于临床实验室及基层单位快速检测HAdV-3。 展开更多
关键词 腺病毒3型 免提取核酸 重组酶介导的等温扩增 检测
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柑橘黄龙病菌RAA检测技术研究与应用 被引量：2
2
作者 陈海云 邱英华 +1 位作者 滕丽琼 郑苏华 《农业技术与装备》 2022年第9期41-44,47,共5页
以柑橘黄龙病亚洲韧皮杆菌保守基因序列为靶基因设计特异性引物,经引物筛选和反应条件的优化,建立黄龙病菌的重组酶等温扩增的快速检测方法。该方法在39℃反应温度下20min即可实现靶标基因片段的有效扩增。特异性分析结果表明RAA方法检... 以柑橘黄龙病亚洲韧皮杆菌保守基因序列为靶基因设计特异性引物,经引物筛选和反应条件的优化,建立黄龙病菌的重组酶等温扩增的快速检测方法。该方法在39℃反应温度下20min即可实现靶标基因片段的有效扩增。特异性分析结果表明RAA方法检测柑橘黄龙病病菌与其他常见致病菌菌株间不存在交叉反应,结果表明,RAA方法操作简单、费用低廉、特异性强、灵敏度高、快速高效、操作简单、检测结果直观、对仪器设备要求低等特点,是一项具有广泛前景的方法,为检验黄龙病菌的检测提供新的发展方向。 展开更多
关键词 柑橘 黄龙病 鉴定 检测方法 等温核酸扩增
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施马伦贝格病毒实时荧光RT-RAA快检方法的建立
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作者 陈嘉仪 黄晓琪 +8 位作者 王炜杰 莫竣喻 王苏艳 丹珍翁姆 陈劲松 张瑞 周泷 李彦敏 张志东 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期3740-3744,共5页
旨在建立一种快速检测施马伦贝格病毒(SBV)的方法。本研究对于SBV S基因,设计特异性引物和探针,通过优化反应条件,建立SBV反转录重组酶介导核酸恒温扩增(RT-RAA)检测方法。结果显示,该方法在38℃条件下,8 min内即可特异性检出SBV,与口... 旨在建立一种快速检测施马伦贝格病毒(SBV)的方法。本研究对于SBV S基因,设计特异性引物和探针,通过优化反应条件,建立SBV反转录重组酶介导核酸恒温扩增(RT-RAA)检测方法。结果显示,该方法在38℃条件下,8 min内即可特异性检出SBV,与口蹄疫病毒(FMDV)、小反刍兽疫病毒(PPRV)、非洲马瘟病毒(AHSV)、塞内卡谷病毒(SVV)、水疱性口炎病毒(VSV)无交叉反应,其敏感性为103拷贝/反应,且批内和批间重复性变异系数均小于5%。对模拟阳性和阴性绵羊样品的检出率为100%,与SBV的RT-qPCR检测结果一致。本研究成功建立了一种快速、敏感、特异的SBV实时荧光RT-RAA方法,为SBV防控提供新技术手段。 展开更多
关键词 施马伦贝格病毒 重组酶介导核酸恒温扩增方法 快速检测
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甲状腺癌患者外周血中OXTR基因甲基化状态的研究 被引量：2
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作者 廖萍 贾明磊 +5 位作者 刘茶珍 何欣 朱佩云 何悦 罗全勇 王文静 《中国临床研究》 CAS 2016年第1期13-16,共4页
目的验证前期筛选到的甲状腺癌患者外周血DNA差异甲基化谱中的差异基因OXTR甲基化程度,并探讨其作为甲状腺癌患者外周血分子诊断标志物的可能性。方法以2013年10月至2014年5月上海市第六人民医院等三家医院诊治的甲状腺癌患者14例为病例... 目的验证前期筛选到的甲状腺癌患者外周血DNA差异甲基化谱中的差异基因OXTR甲基化程度,并探讨其作为甲状腺癌患者外周血分子诊断标志物的可能性。方法以2013年10月至2014年5月上海市第六人民医院等三家医院诊治的甲状腺癌患者14例为病例组,以同期健康体检者14例为正常对照组。提取外周血中小片断DNA并选取OXTR基因,利用重组酶聚合酶扩增技术扩增甲基化(M)和非甲基化(U)OXTR基因,并比较两组甲基化程度差异。结果病例组14例甲状腺癌病例中有10例皆有OXTR-M及OXTR-U基因甲基化条带扩增,其余4例为OXTR非甲基化条带扩增,甲基化率达到71.4%;14例正常对照中仅2例呈现OXTR基因甲基化条带扩增,其余12例皆为OXTR非甲基化条带扩增,甲基化率仅为14.3%。Fisher精确检验示两组甲基化率比较差异有统计学意义(P=0.006)。结论 OXTR为甲状腺癌患者外周血DNA差异甲基化谱中的一种基因,其在甲状腺癌病例中呈现较高的甲基化率,可能与甲状腺癌的发生发展有关,并有可能成为甲状腺癌血液诊断的分子标志物之一。 展开更多
关键词 表观遗传学 甲状腺癌 DNA甲基化 生物标志物 重组酶聚合酶扩增技术
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