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重组人胶原蛋白肽在大肠杆菌中的高效表达 被引量：7
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作者 陈光 吴铭 +1 位作者 王刚 孙旸 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期656-660,共5页
目的:构建含有胶原蛋白基因的原核表达载体pET32a-CP6,并转入大肠杆菌BL21(DE3)中进行高效表达,为获得大量可溶的胶原蛋白肽提供可靠依据。方法:将重组表达载体pET32a-CP6转化到大肠杆菌BL21中,以IPTG为诱导剂,对温度、接种量、诱导时机... 目的:构建含有胶原蛋白基因的原核表达载体pET32a-CP6,并转入大肠杆菌BL21(DE3)中进行高效表达,为获得大量可溶的胶原蛋白肽提供可靠依据。方法:将重组表达载体pET32a-CP6转化到大肠杆菌BL21中,以IPTG为诱导剂,对温度、接种量、诱导时机、IPTG诱导浓度等各种发酵参数进行优化,筛选高效表达的发酵条件,并通过Ni-NTA亲和层析进行纯化分析。结果:菌株在37℃、接种量为2%、摇瓶培养约2.5h后,加入终浓度为0.5mmol.L-1的IPTG,37℃诱导5h,收获的蛋白产量最高为31.52mg.L-1,Westernblotting分析该表达产物与人COL6A2单克隆抗体有特异结合能力。结论:优化工程菌高效表达重组人胶原蛋白,纯化重组蛋白。 展开更多
关键词 重组胶原蛋白肽 重组蛋白纯化 大肠杆菌
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