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治疗性双质粒HBV DNA疫苗工程菌的中试发酵工艺研究 被引量:5
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作者 饶桂荣 黄英 +4 位作者 王鹏 何晓嫱 杨富强 莫国玉 陈光明 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2007年第2期110-113,共4页
目的研究双质粒HBV DNA疫苗工程菌的中试发酵工艺。方法首先通过计算质粒拷贝数,检测工程菌DH5α/pS2.S和DH5α/pFP在传代过程中的遗传稳定性,通过摇瓶培养确定培养基组成,再在30L发酵罐内,通过改变培养基成分、培养时间、补料方... 目的研究双质粒HBV DNA疫苗工程菌的中试发酵工艺。方法首先通过计算质粒拷贝数,检测工程菌DH5α/pS2.S和DH5α/pFP在传代过程中的遗传稳定性,通过摇瓶培养确定培养基组成,再在30L发酵罐内,通过改变培养基成分、培养时间、补料方式,确定最佳发酵参数。并将确定的最佳发酵参数应用于50L发酵罐连续3批中试规模的发酵,同时考察在发酵培养过程中质粒稳定性和超螺旋质粒DNA的比例。结果工程菌DH5α/pS2.S和DH5α/pFP在连续传代30次后,质粒拷贝数保持稳定。确定最佳发酵参数为以甘油为碳源的培养基培养,梯度恒速流加方式补料,培养时间为10h。通过3批稳定发酵,最终可获得湿菌58.0~71.8g/L,质粒含量可达到1.11~1.58mg/g菌,超螺旋质粒DNA的比例达93%以上。结论已建立了稳定的双质粒HBV DNA疫苗工程菌中试发酵工艺,为进一步规模化生产奠定了基础。 展开更多
关键词 治疗性HBV DNA疫苗 工程菌 发酵
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表达MAGE-1/HSP70/MAGE-3工程菌的稳定性 被引量:1
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作者 胡沛臻 隋延仿 +3 位作者 李侠 张建芳 司少艳 张秀敏 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2006年第6期586-588,共3页
目的检测重组工程菌pET28a-MAGE-1/HSP70/MAGE-3/BL21(DE3)生物学性状的稳定性。方法将工程菌菌株连续传50代,每隔10代挑取单克隆菌落进行诱导表达,并计算质粒丢失率。提取不同代次的质粒,扫描电镜观察,检测融合蛋白表达水平,并进行工... 目的检测重组工程菌pET28a-MAGE-1/HSP70/MAGE-3/BL21(DE3)生物学性状的稳定性。方法将工程菌菌株连续传50代,每隔10代挑取单克隆菌落进行诱导表达,并计算质粒丢失率。提取不同代次的质粒,扫描电镜观察,检测融合蛋白表达水平,并进行工程菌的染色镜检及生化鉴定。结果pET28a-MAGE-1/HSP70/MAGE-3/BL21(DE3)融合蛋白工程菌呈典型的大肠杆菌形态,各代次菌的各项检测结果与原始菌种差异无显著意义。结论重组工程菌pET28a-MAGE-1/HSP70/MAGE-3/BL21(DE3)生物学性状稳定,可作为生产用菌种。 展开更多
关键词 黑色素瘤抗原相关基因 重组工程菌 生物学特性 稳定性
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重组人B7-H1IgV工程菌生物学特性的稳定性 被引量:1
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作者 陈霖 李伯安 +2 位作者 毛远丽 张伟 张英起 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2012年第3期273-275,共3页
目的检测重组人B7-H1IgV(rhB7-H1)工程菌生物学特性的稳定性。方法将重组质粒pQE30-B7-H1IgV转化的大肠杆菌rhB7-H1/DH5α工程菌连续传代50代,每隔10代进行工程菌B7-H1IgV蛋白表达量检测、扫描电镜观察、革兰染色、各项生化反应及质粒... 目的检测重组人B7-H1IgV(rhB7-H1)工程菌生物学特性的稳定性。方法将重组质粒pQE30-B7-H1IgV转化的大肠杆菌rhB7-H1/DH5α工程菌连续传代50代,每隔10代进行工程菌B7-H1IgV蛋白表达量检测、扫描电镜观察、革兰染色、各项生化反应及质粒的酶切鉴定。结果各代工程菌中B7-H1IgV蛋白的表达量均为菌体总蛋白的10%左右;各代工程菌提取的质粒双酶切后均可见381 bp的目的基因片段;各代工程菌均呈典型的大肠杆菌形态,革兰染色显示为阴性杆菌,各项检测结果与原始菌种无显著差异。结论该工程菌生物学特性稳定,可作为生产用菌种用于大规模生产。 展开更多
关键词 B7-H1 工程菌 生物学特性
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IL-2基因工程菌生长密度对rhIL-2表达的影响
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作者 史明珍 蒋立云 +2 位作者 宗燕伟 储月琴 施产甫 《南京军医学院学报》 1999年第4期201-203,共3页
目的观察不同培养时间和细菌密度对重组人白细胞介素-2(rhIL-2)基因工程菌的收获量和rhIL-2表达量的影响。方法:用40L发酵罐进行了3批发酵试验。结果:工程菌于30℃培养4.5~5h,细菌生长密度(OD600)在1.7~2.0之间。在此条件... 目的观察不同培养时间和细菌密度对重组人白细胞介素-2(rhIL-2)基因工程菌的收获量和rhIL-2表达量的影响。方法:用40L发酵罐进行了3批发酵试验。结果:工程菌于30℃培养4.5~5h,细菌生长密度(OD600)在1.7~2.0之间。在此条件下,工程菌再经42℃诱导培养4h,菌体的收获量和表达水平都比较理想,其湿重和表达量的均值分别可达6.3g/L(菌液)和31.6%。结论:诱导前不同培养时间和细菌密度能显著影响rhIL-2基因工程菌的产量和rhIL-2的表达率。 展开更多
关键词 基因工程菌 细菌密度 IL-2
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基因重组人IL-6工程菌发酵培养的实验研究
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作者 韩俊宏 王一理 司履生 《西安医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期502-504,共3页
目的 优化基因重组人IL 6 (rhIL 6 )工程菌的发酵和表达条件。方法 选择五种不同的细菌培养基研究rhIL 6工程菌的发酵培养和诱导表达靶蛋白的最佳时间 ,并监测重组质粒在工程菌中的遗传稳定性。结果  1 .5×LB培养基收获的生物... 目的 优化基因重组人IL 6 (rhIL 6 )工程菌的发酵和表达条件。方法 选择五种不同的细菌培养基研究rhIL 6工程菌的发酵培养和诱导表达靶蛋白的最佳时间 ,并监测重组质粒在工程菌中的遗传稳定性。结果  1 .5×LB培养基收获的生物菌量最大 ,rhIL 6在工程菌中表达率最高 ;42℃诱导 5hrhIL 6表达量最大 ;所构建的重组质粒在工程菌DH5a中传代稳定 ,未见质粒丢失 ,靶蛋白表达未受影响。结论 提示培养基的成分对构建的工程菌生长影响较大 ,应对发酵培养基及诱导表达条件进行优化。 展开更多
关键词 质粒 IL-6 培养基 工程菌
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高效表达人IL-2工程菌株的稳定性监测
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作者 关晓峰 郭桥 +3 位作者 徐福平 魏宪志 宋昌玲 冷梅 《深圳中西医结合杂志》 2003年第4期264-266,共3页
目的 为IL - 2的规模化生产提供可靠的生产用菌种。方法 冻干 2年的工作种子批经理化、微生物、生物学活性等分子水平的检测 ,进行定期监测。结果 经全面检测 ,包括基因序列分析等与原始菌种一致。结论 高效重组人IL - 2生产用菌种 ... 目的 为IL - 2的规模化生产提供可靠的生产用菌种。方法 冻干 2年的工作种子批经理化、微生物、生物学活性等分子水平的检测 ,进行定期监测。结果 经全面检测 ,包括基因序列分析等与原始菌种一致。结论 高效重组人IL - 2生产用菌种 ,符合《中国生物制品规程》2 0 0 0版检标准 ,冻干菌种 - 2 0℃保存 2年 。 展开更多
关键词 工程菌 IL-2质粒 表达
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培养温度对基因工程菌生长密度和rhG-CSF表达的影响 被引量:11
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作者 刘社际 葛永红 杨立明 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 1999年第1期29-31,共3页
观察培养温度对重组人粒细胞集落刺激因子的基因工程菌 p CG- 1/ rh G- CSF/ DH5α生长密度和 rh G-CSF表达的影响发现 ,在培养阶段采用不同的培养温度有利于提高细菌的生长密度和重组产物的表达量 ,并可缩短培养周期。通过在 NBS MPP-... 观察培养温度对重组人粒细胞集落刺激因子的基因工程菌 p CG- 1/ rh G- CSF/ DH5α生长密度和 rh G-CSF表达的影响发现 ,在培养阶段采用不同的培养温度有利于提高细菌的生长密度和重组产物的表达量 ,并可缩短培养周期。通过在 NBS MPP- 40大罐中进行 3批发酵 ,每批发酵 15 h,平均菌密度 A6 0 0 为 2 5 .0 ,菌干重 2 3g/L ,rh G- CSF表达量可达 2 6 .93%。 展开更多
关键词 培养温度 基因工程菌 细菌密度
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导向性人干扰素α2a工程菌生物学特性的稳定性 被引量:9
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作者 孟洁如 颜真 +2 位作者 赵宁 李波 张英起 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2003年第4期222-224,共3页
目的 全面观察了解pBV220-IFNN/DH5α工程菌生物学特性的稳定性。方法 工程菌菌株连续传至50代后,进行质粒性状、扫描电镜观察、干扰素表达水平、革兰氏染色及各项生化反应检测。结果 pBV220-IF-NN/DH5α工程菌呈现典型的大肠杆菌形态,... 目的 全面观察了解pBV220-IFNN/DH5α工程菌生物学特性的稳定性。方法 工程菌菌株连续传至50代后,进行质粒性状、扫描电镜观察、干扰素表达水平、革兰氏染色及各项生化反应检测。结果 pBV220-IF-NN/DH5α工程菌呈现典型的大肠杆菌形态,各代次菌的各项检测结果与原始菌种差异无显著意义。结论 该菌种可作为生产用菌种。 展开更多
关键词 导向性人干扰素α 工程菌 生物学特性 稳定性 抗肿瘤药物
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重组人干扰素α_(2b)工程菌的生物学特性检测 被引量:2
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作者 郭桥 张春丽 +2 位作者 石晓丽 陈云声 郭德本 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2002年第5期284-286,共3页
目的 观察和了解重组人干扰素α2b(以下简称rhIFN-α2b)工程菌的生物学性质,保证产品质量稳定。方法 通过对rhIFN-α2b工程菌的微生物学、分子生物学和免疫学检测,全面了解工程菌的性质。结果rhIFN-α2b工程菌呈现典型的大肠杆菌形态... 目的 观察和了解重组人干扰素α2b(以下简称rhIFN-α2b)工程菌的生物学性质,保证产品质量稳定。方法 通过对rhIFN-α2b工程菌的微生物学、分子生物学和免疫学检测,全面了解工程菌的性质。结果rhIFN-α2b工程菌呈现典型的大肠杆菌形态,在甘油中可以贮存1年,在冻干条件下可以保存2年,其生物学特性比较稳定。结论 rhIFN-α2b工程菌生物学特性稳定不变。 展开更多
关键词 重组人干扰素Α2B 工程菌 生物学特性 检测
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重组人睫状神经营养因子突变体及其聚乙二醇修饰物的制备及其对ob/ob肥胖小鼠体重、糖脂代谢的影响 被引量:1
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作者 郑秀玉 柳森 +3 位作者 李素贞 张夕燕 晁华 王健 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2019年第12期1361-1369,共9页
目的 制备重组人睫状神经营养因子(recombinant human ciliary neurotrophic factor,rhCNTF)突变体[rhCNTF(R^6315)]及其聚乙二醇修饰物[P-rhCNTF(R^6315)],探讨两者对ob/ob肥胖小鼠体重及糖脂代谢的影响。方法 采用rhCNTF(R^6315)突变... 目的 制备重组人睫状神经营养因子(recombinant human ciliary neurotrophic factor,rhCNTF)突变体[rhCNTF(R^6315)]及其聚乙二醇修饰物[P-rhCNTF(R^6315)],探讨两者对ob/ob肥胖小鼠体重及糖脂代谢的影响。方法 采用rhCNTF(R^6315)突变体工程菌株E.coli BL21(DE3)表达rhCNTF(R^6315),经硫酸铵沉淀、Butyl HP和Q HP纯化后采用PEG修饰剂Y-40KD-MAL-mPEG对其C17游离巯基进行定点修饰,经QH P层析纯化获得P-rhCNTF(R^6315)。上述产物进行SDS-PAGE、纯度、修饰率、二级结构表征、修饰位点、体外活性、体内药代动力学检测。将ob/ob小鼠分为P-rhCNTF(R^6315)组(0.05、0.1、0.2 mg/kg)、rhCNTF(R^6315)组及赋形剂组,均采用高脂饲料喂养,同时设C57BL/6J组(普通饲料喂养C57BL/6J小鼠),检测各组小鼠的体重、摄食量及糖脂代谢情况。结果 rhCNTF(R^6315)及P-rhCNTF(R^6315)纯度分别为97.4%和99.3%,平均比活分别为9. 5×10^5和6. 9×10^5 IU/mg,相对比活分别为100%和72.6%;rhCNTF(R6315)修饰率达90%以上,大多数为单修饰产物,PEG修饰未影响rhCNTF(R^6315)的二级结构,修饰位点发生在DLCSR肽段的C17上;P-rh CNTF(R^6315)经皮下及静脉途径给药的血药浓度均在注射后约72 h降至给药前水平。与赋形剂组比较,P-rhCNTF(R^6315)0. 05、0.1、0.2 mg/kg剂量组小鼠在疗程结束时体重组分别减轻了10%、11%和21%(P <0.05),rh CNTF(R^6315)组减轻了30%(P<0.01);治疗后15 d,rhCNTF(R^6315)及P-rhCNTF(R^6315)各剂量组小鼠摄食量明显降低(P<0.05),随后逐渐恢复正常水平;P-rhCNTF(R^6315)各剂量组从给药后8 d起,小鼠随机血糖有所降低,呈一定的量效关系,rhCNTF(R^6315)组从给药后4 d开始有所下降;P-rh CNTF(R^6315) 0.2 mg/kg剂量组和rhCNTF(R^6315)组的口服糖耐量(oral glucose resistant test,OGTT)曲线下面积(AUC0~2 h)及腹腔内脂肪重量显著降低(P<0.05),rhCNTF(R^6315)及P-rhCNTF(R^6315)各剂量组小鼠皮下脂肪均显著降低(P<0.01)。结论 制备了较高纯度的rhCNTF(R^6315) 展开更多
关键词 重组人睫状神经营养因子 突变体工程菌 定点聚乙二醇修饰 肥胖 脂肪代谢 糖代谢
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