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表达猪流感病毒血凝素基因的重组腺病毒的构建及免疫原性分析 被引量：3
1
作者 汪思钧 廖明 +3 位作者 任涛 张春红 黄忠 曹汉威 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期78-83,共6页
通过细菌内同源重组的方法成功构建了表达H3N2亚型猪流感病毒血凝素的重组腺病毒。首先将血凝素基因亚克隆到穿梭载体质粒pAdenoVator-CMV5-IRES-GFP上,与腺病毒基因组质粒pAdenoVatorΔE1/E3共转化大肠杆菌BJ5183菌株,经细菌内同源重... 通过细菌内同源重组的方法成功构建了表达H3N2亚型猪流感病毒血凝素的重组腺病毒。首先将血凝素基因亚克隆到穿梭载体质粒pAdenoVator-CMV5-IRES-GFP上,与腺病毒基因组质粒pAdenoVatorΔE1/E3共转化大肠杆菌BJ5183菌株,经细菌内同源重组产生重组腺病毒质粒pAd-HA-GFP。将该重组质粒转染293细胞以包装重组腺病毒。根据报告基因GFP的表达及Western-blot分析,证明获得了可正确表达猪流感病毒血凝素的重组腺病毒rAd-HA-GFP。重组腺病毒经一次性腹腔注射接种昆明鼠,2周后可检测到血凝抑制抗体,并且抗体至少可以持续12周,证实重组腺病毒介导表达的血凝素蛋白具有良好的免疫原性,可诱导小鼠产生高滴度的特异性抗体。 展开更多
关键词 猪流感病毒 血凝素基因 重组腺病毒
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表达猪圆环病毒2型Cap蛋白重组腺病毒的构建 被引量：1
2
作者 许晗 李海敏 +5 位作者 王爱玲 李春燕 李河林 吕其壮 张彦明 郭抗抗 《动物医学进展》 北大核心 2015年第9期1-7,共7页
为研制表达猪圆环病毒2型(PCV-2)Cap蛋白的重组腺病毒疫苗,根据PCV-2ORF2(Cap)基因序列和耶尔森菌侵袭素C端(InvC)序列,克隆获得Cap和InvC基因后,插入pAdShttle-CMV载体构建重组穿梭载体pAdShttle-Cap-InvC,经PmeI线性化后,转化入BJ518... 为研制表达猪圆环病毒2型(PCV-2)Cap蛋白的重组腺病毒疫苗,根据PCV-2ORF2(Cap)基因序列和耶尔森菌侵袭素C端(InvC)序列,克隆获得Cap和InvC基因后,插入pAdShttle-CMV载体构建重组穿梭载体pAdShttle-Cap-InvC,经PmeI线性化后,转化入BJ5183感受态细菌与腺病毒骨架载体pAdEasy-1同源重组获得重组腺病毒质粒pAd-Cap-InvC。重组质粒经PacⅠ线性化后,转染HEK293细胞,连续传代后获得重组腺病毒。应用PCR、Western blot和间接免疫荧光(IFA)技术分别检测重组腺病毒中Cap和InvC基因及表达。结果表明,成功构建了表达PCV-2Cap蛋白和InvC的重组腺病毒rAd-CapInvC,经过噬斑纯化和连续传代,重组腺病毒TCID50可达10-9.32/mL,为PCV-2重组腺病毒活载体疫苗的研发提供了基础材料。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 CAP蛋白 侵袭素蛋白C端 重组腺病毒
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