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过量表达乳酸脱氢酶的重组干酪乳杆菌构建及发酵性能 被引量：1
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作者 朱龙宝 葛飞 +1 位作者 李婉珍 陶玉贵 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第9期245-249,共5页
乳酸脱氢酶(LDH)是干酪乳酸菌(L.casei)合成L-乳酸途径中的关键酶,通过构建过量表达乳酸脱氢酶的重组干酪乳杆菌,提高干酪乳杆菌发酵产乳酸的能力。根据干酪乳杆菌乳酸脱氢酶的基因序列设计引物,PCR扩增获得乳酸脱氢酶基因(ldh),将其连... 乳酸脱氢酶(LDH)是干酪乳酸菌(L.casei)合成L-乳酸途径中的关键酶,通过构建过量表达乳酸脱氢酶的重组干酪乳杆菌,提高干酪乳杆菌发酵产乳酸的能力。根据干酪乳杆菌乳酸脱氢酶的基因序列设计引物,PCR扩增获得乳酸脱氢酶基因(ldh),将其连接到乳酸杆菌穿梭质粒pMG36e,构建重组质粒pMG-ldh,电转入L.casei,利用红霉素MRS平板筛选阳性克隆,获得表达乳酸脱氢酶的重组菌L.casei pMG-ldh,SDS-PAGE和酶活分析结果表明成功表达了一个约37kD的乳酸脱氢酶蛋白,重组酶活力最高达95U/mL,较原始菌23U/mL提高了近3.1倍。为进一步提高其产乳酸能力,添加4mmol/L激活剂FBP和8mg/L烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)前体物烟酸,结果表明:重组菌L.caseipMG-ldh乳酸积累128.2g/L,生产强度达到3.04g/(L.h),较原始菌株L.casei分别提高了35%和53%,发酵周期缩短6h。 展开更多
关键词 乳酸脱氢酶 重组干酪乳酸菌 高效表达 发酵特性
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猪传染性胃肠炎病毒S截短蛋白在干酪乳杆菌表面展示表达的研究
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作者 田斌 余丽芸 +6 位作者 侯喜林 王桂华 刘振格 郭东伟 刘秋晨 齐浩 林红丽 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期874-877,共4页
为构建细菌外膜展示表达猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S截短蛋白的重组干酪乳杆菌(Lactobacillus casei),本研究采用RT-PCR扩增TGEV S基因的截短片段BC和AD,构建了重组pLA-BC/L.casei和pLA-AD/L.casei,利用western blot、间接免疫荧光法(IFA... 为构建细菌外膜展示表达猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S截短蛋白的重组干酪乳杆菌(Lactobacillus casei),本研究采用RT-PCR扩增TGEV S基因的截短片段BC和AD,构建了重组pLA-BC/L.casei和pLA-AD/L.casei,利用western blot、间接免疫荧光法(IFA)和流式细胞术(FACS)检测外源蛋白在干酪乳杆菌的表面表达与定位。IFA和FACS结果显示重组菌株pLA-BC/L.casei和pLA-AD/L.casei表面均能够检测到截短的S和PgsA融合表达蛋白与TGEV阳性血清的特异性荧光信号,而对照菌没有检测到荧光信号。表明本研究构建的的TGEV重组L.casei具有胞外展示表达TGEV抗原蛋白的功能,可以作为TGEV候选疫苗应用于动物试验研究。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 重组干酪乳杆菌 表面展示表达
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