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猪瘟病毒中和性单克隆抗体制备及阻断ELISA方法建立 被引量：3
1
作者 杨利 张浩明 +2 位作者 李丁 郑其升 芮荣 《畜牧与兽医》 北大核心 2022年第5期68-74,共7页
采用毕赤酵母表达的猪瘟病毒(CSFV)重组E2蛋白免疫BALB/c小鼠,经间接免疫荧光(IFA)筛选,获得了17株特异性单抗。经病毒中和试验(VNT)验证,上述单抗均具有CSFV中和活性,其中单克隆抗体3H9的病毒中和效价最高,大于1∶10240。采用HRP标记的... 采用毕赤酵母表达的猪瘟病毒(CSFV)重组E2蛋白免疫BALB/c小鼠,经间接免疫荧光(IFA)筛选,获得了17株特异性单抗。经病毒中和试验(VNT)验证,上述单抗均具有CSFV中和活性,其中单克隆抗体3H9的病毒中和效价最高,大于1∶10240。采用HRP标记的CSFV单抗3H9为阻断抗体,配合酵母表达的CSFV E2蛋白作为包被抗原,建立了一种用于检测猪血清中CSFV中和抗体的阻断ELISA方法。该方法优化后的抗原包被浓度为0.5μg/mL,阻断抗体稀释度为1∶8000。通过对100份阴性猪血清的检测,确定该方法的阻断率cut-off值为30%。该方法敏感性高,对中和抗体效价低至1∶16的血清检测仍呈阳性;特异性强,仅与CSFV抗体阳性猪血清呈阳性反应,与其他猪病病毒及牛病毒性腹泻病毒(BVDV)抗体阳性猪血清均呈阴性反应;良好的可重复性,批内、批间变异系数分别为0.90%~3.21%、1.89%~6.57%,均小于10%。对188份现有猪血清检测结果显示,该方法与病毒中和试验和IDEXX猪瘟病毒抗体检测试剂盒的符合率分别为96.3%、94.7%。用该方法对南京市浦口区某养殖场猪瘟疫苗免疫猪血清进行检测,抗体阳性率为80.8%(189/234),证明了该疫苗免疫效果良好。此外,该方法为一步法,与现有方法相比,检测过程缩短至40 min。试验结果表明,利用酵母表达E2蛋白并制备中和抗体,建立了一种更加高效检测猪瘟中和抗体的阻断ELISA方法。 展开更多
关键词 CSFV 高效中和抗体 阻断eLISA 毕赤酵母 重组CSFV e2蛋白
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猪瘟病毒E2重组蛋白纯化和复性条件的研究 被引量：1
2
作者 胡慧 邱昌庆 张彦明 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2005年第4期251-255,共5页
对猪瘟病毒(CSFV) C株、LT株E2基因主要抗原区在pGEX系列表达载体中原核表达的融合蛋白进行了变性、复性和纯化回收试验。用建立的变性、复性和纯化方法,获得了可溶性的纯化蛋白E2,其纯度达70%,回收率为10%。对复性纯化的E2蛋白进行了... 对猪瘟病毒(CSFV) C株、LT株E2基因主要抗原区在pGEX系列表达载体中原核表达的融合蛋白进行了变性、复性和纯化回收试验。用建立的变性、复性和纯化方法,获得了可溶性的纯化蛋白E2,其纯度达70%,回收率为10%。对复性纯化的E2蛋白进行了免疫活性检测,结果表明,其比未纯化蛋白的免疫活性高20倍左右。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 e2重组蛋白 包涵体 复性 纯化
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猪瘟病毒重组E2蛋白PPA-ELISA抗体检测试剂盒的研制及应用 被引量：16
3
作者 李娇 王金良 +2 位作者 祖立闯 谢金文 沈志强 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期1390-1394,1399,共6页
以纯化的猪瘟病毒(CSFV)重组E2蛋白为包被抗原,辣根过氧化物酶标记葡萄球菌A蛋白为二抗,组装了检测CSFV抗体的PPA-ELISA诊断试剂盒。该试剂盒与其他7种常见猪病毒(PRRSV、PPV、JEV、PCV-2、PEDV、PRV、TGEV)及牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的... 以纯化的猪瘟病毒(CSFV)重组E2蛋白为包被抗原,辣根过氧化物酶标记葡萄球菌A蛋白为二抗,组装了检测CSFV抗体的PPA-ELISA诊断试剂盒。该试剂盒与其他7种常见猪病毒(PRRSV、PPV、JEV、PCV-2、PEDV、PRV、TGEV)及牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的阳性血清不发生交叉反应;批内重复性试验的变异系数小于5%,批间重复性试验的变异系数小于10%;与间接血凝试验相比较,符合率、敏感性和特异性分别为86.2%,85.4%,87.2%;与IDEXX ELISA试剂盒相比较,符合率、敏感性和特异性分别为91.3%,93.2%,88.7%。表明本试验研制的E2-PPA-ELISA抗体检测试剂盒具有良好的重复性、敏感性和特异性,将为CSFV的快速诊断、免疫猪群抗体水平监测和CSFV流行病学调查提供一种快速、简便的血清学诊断方法。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 重组e2蛋白 PPA-eLISA
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