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重组大肠杆菌高密度发酵研究进展 被引量:60
1
作者 李民 陈常庆 《生物工程进展》 CSCD 2000年第2期26-31,共6页
重组大肠杆菌的高密度发酵是提高基因工程产品产量的一个非常有效的手段 ,是现代发酵工程研究的一个热点。本文就高密度发酵中影响重组大肠杆菌发酵产率的几个因素 ,包括宿主菌、培养基、培养条件、补料方法以及高密度发酵过程中存在的... 重组大肠杆菌的高密度发酵是提高基因工程产品产量的一个非常有效的手段 ,是现代发酵工程研究的一个热点。本文就高密度发酵中影响重组大肠杆菌发酵产率的几个因素 ,包括宿主菌、培养基、培养条件、补料方法以及高密度发酵过程中存在的问题和对策加以讨论 ,着重探讨了高密度下大肠杆菌产生的有害代谢副产物———乙酸的产生机制、抑制作用机理 。 展开更多
关键词 重组大肠杆菌 高密度发酵 比生产率 乙酸
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重组E.coli工程菌高密度培养生产人源型胶原蛋白 被引量:66
2
作者 范代娣 段明瑞 +4 位作者 米钰 宋纪蓉 惠俊峰 王德伟 王国柱 《化工学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2002年第7期752-754,共3页
Several technical parameters were studied during the fermentation of recombinant E.coli for the production of collagen-like biopolymer.The effects of dissolved oxygen as well as glucose concentration on fermentation w... Several technical parameters were studied during the fermentation of recombinant E.coli for the production of collagen-like biopolymer.The effects of dissolved oxygen as well as glucose concentration on fermentation were observed.The OD 600 value could reach 98 when dissolved oxygen was controlled at 50% and glucose around 1%.The production of human-like collagen with a yield of 29.4% was obtained. 展开更多
关键词 重组e.coli工程菌 高密度发酵 类人胶原蛋白 培养工艺 发酵
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温度对重组大肠杆菌生长及外源蛋白表达的影响 被引量:41
3
作者 叶姣 陈长华 +2 位作者 夏杰 付水林 杨雅琴 《华东理工大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期364-367,共4页
对重组大肠杆菌 (E.coli) BL2 1 (DE3 )发酵生产 rh Cu/ Zn-SOD的诱导温度进行了优化 ,考察了 3 7°C和 3 0°C下重组菌的生长规律及产物表达。在 5 L自控发酵罐中的发酵结果表明 :较低温度时菌体的比生长速率较低 ,菌体活性与... 对重组大肠杆菌 (E.coli) BL2 1 (DE3 )发酵生产 rh Cu/ Zn-SOD的诱导温度进行了优化 ,考察了 3 7°C和 3 0°C下重组菌的生长规律及产物表达。在 5 L自控发酵罐中的发酵结果表明 :较低温度时菌体的比生长速率较低 ,菌体活性与质粒稳定性有很大程度的改善 ,外源蛋白稳定性与可溶性也有一定的提高 ;3 0°C诱导时 rh Cu/ Zn-SOD的酶活性最高 ,每毫升发酵液的酶活力为 475 7U,约为 3 7°C诱导时的 2 . 展开更多
关键词 外源蛋白 重组大肠杆菌 超氧化物歧化酶 诱导温度 发酵生产 基因重组 基因表达 酶活性
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重组大肠杆菌热稳定性过氧化氢酶的纯化及性质研究 被引量:18
4
作者 王凡强 王正祥 +3 位作者 邵蔚蓝 刘吉泉 徐成勇 诸葛健 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期348-353,共6页
将产热稳定性过氧化氢酶的重组大肠杆菌培养后菌体破碎得到的粗酶液经热处理、硫酸铵分级沉淀、DEAE SephadexA 5 0离子交换层析、HiPrep 1 6 1 0Phenyl疏水作用层析、Su perdex2 0 0HR 1 0 3 0凝胶层析提纯后得到电泳纯的酶 ,比酶... 将产热稳定性过氧化氢酶的重组大肠杆菌培养后菌体破碎得到的粗酶液经热处理、硫酸铵分级沉淀、DEAE SephadexA 5 0离子交换层析、HiPrep 1 6 1 0Phenyl疏水作用层析、Su perdex2 0 0HR 1 0 3 0凝胶层析提纯后得到电泳纯的酶 ,比酶活达到 1 5 6 2 9U mg。此酶的最适温度为 70℃ ,最适pH7 0 ,在 6 0℃保温 6 0min酶活力基本不变 ,在pH3~ 8的范围内比较稳定。此酶的Km 和Vmax分别为 7 75mmol L和 2 7 8mmol·min- 1·mg- 1。 1mmol L的Zn2 + 、Ba2 + 、Mn2 +可使该酶完全失活 ,KCN、NaN3 、Na2 S2 O4 、巯基乙醇对酶活力有抑制作用 ,5 0mmol 展开更多
关键词 重组大肠杆菌 热稳定性过氧化氢酶 纯化 性质
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谷胱甘肽合成酶在大肠杆菌中的高效表达及性质 被引量:10
5
作者 沈立新 魏东芝 +2 位作者 赵哲峰 张嗣良 王二力 《华东理工大学学报(自然科学版)》 EI CAS CSCD 北大核心 2000年第4期342-345,共4页
在成功构建了谷脱甘肽 ( GSH)合成酶基因表达质粒 ( p Trc- gsh)的基础上 ,对不同大肠杆菌宿主菌进行了比较 ,筛选出高效、稳定表达 GSH合成酶的工程菌并进行了最佳酶表达条件的研究。结果表明 :重组工程菌 E.coli BL2 1 ( p Trc- gsh)... 在成功构建了谷脱甘肽 ( GSH)合成酶基因表达质粒 ( p Trc- gsh)的基础上 ,对不同大肠杆菌宿主菌进行了比较 ,筛选出高效、稳定表达 GSH合成酶的工程菌并进行了最佳酶表达条件的研究。结果表明 :重组工程菌 E.coli BL2 1 ( p Trc- gsh)表达量最高 ,质粒稳定性好 ;以 5%接种量于37°C、p H7.2培养至 OD550 =0 .5左右 ,加入诱导剂 IPTG( 0 .1 mmol/ L) ,同时切换培养条件为 34°C、p H6 .7的两步培养法 ,培养 3h后 ,GSH酶表达量达菌体总蛋白的 2 5%,干细胞酶活为1 1 4.9μg/ ( mg·min) ;其最适 p H为 6 .7,最适温度为 37°C。 展开更多
关键词 谷胱甘肽合成酶 大肠杆菌 性质 工程菌 基因表达
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固定化E.coliBL21(pTrc-gsh)细胞催化合成谷胱甘肽 被引量:11
6
作者 沈立新 魏东芝 +1 位作者 张嗣良 王二力 《华东理工大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期24-27,50,共5页
分别以卡拉胶、明胶、海藻酸钠包埋 E.coli BL 2 1 ( p Trc- gsh)细胞催化合成谷胱甘肽( GSH)。从酶活收率及机械强度方面进行比较 ,选择卡拉胶为包埋载体 ,其最适 p H为 7.0 ,最适温度为 40°C。相关物质对 GSH的合成均有影响 :半... 分别以卡拉胶、明胶、海藻酸钠包埋 E.coli BL 2 1 ( p Trc- gsh)细胞催化合成谷胱甘肽( GSH)。从酶活收率及机械强度方面进行比较 ,选择卡拉胶为包埋载体 ,其最适 p H为 7.0 ,最适温度为 40°C。相关物质对 GSH的合成均有影响 :半胱氨酸、甘氨酸的最适浓度为 2 0 mmol/ L,谷氨酸的最适浓度为 60 mmol/ L;Mg2 + / ATP为 1~ 5 ( V/ V)较合适 ;腺苷二磷酸 ( ADP)浓度为 5 mmol/ L时对酶活的抑制为 2 0 %。优化条件下罐式反应器中 GSH的产量为 0 .84g/ L,操作稳定性较好 ;延迟加入甘氨酸时 GSH产量可提高 1 7.5 % ;与酵母生产 ATP体系相耦联的共固定化体系在填充床中反应 ,GSH合成量达 1 .2 4 g/ L,收率比直接加入 ATP提高 2 4 .2 % 展开更多
关键词 重组大肠杆菌 生物催化 谷胱甘肽 固定化细胞 合成 巯基化合物
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重组大肠杆菌BL21(DE3)-pET28a(+)-bgl诱导表达β-葡聚糖酶的条件优化 被引量:17
7
作者 李永仙 郑飞云 +1 位作者 李崎 顾国贤 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期250-255,共6页
研究自行构建的产β-葡聚糖酶的工程菌E.coliBL21(DE3)-pET28a(+)-bgl在LB培养基中的生长特性,考察种子液的菌龄、培养基起始pH、接种量及诱导起始时发酵液菌浓度等对β-葡聚糖酶产生水平的影响;通过正交试验确定诱导剂IPTG及乳糖添加... 研究自行构建的产β-葡聚糖酶的工程菌E.coliBL21(DE3)-pET28a(+)-bgl在LB培养基中的生长特性,考察种子液的菌龄、培养基起始pH、接种量及诱导起始时发酵液菌浓度等对β-葡聚糖酶产生水平的影响;通过正交试验确定诱导剂IPTG及乳糖添加量、诱导温度及诱导剂作用时间。结果表明:培养基起始pH7.0,对数生长中期的种子液(OD600为0.35)以接种量(体积分数)10%接入摇瓶发酵培养,37℃,200 r/min培养约3 h,菌液OD值达到1.0左右,添加终浓度分别为0.033 6 mmol/L的IPTG及10 mmol/L乳糖,24℃诱导6 h,发酵液清液中酶活达到最高(336.33 U/mL),菌体生长量为1.12 g/L,发酵液中总酶活达到459.32 U/mL,是原始菌株在相同条件下所产酶活的6.62倍。采用优化培养条件及诱导剂作用条件,重组菌在TB培养基中酶活水平进一步提高,诱导剂作用10 h,发酵清液中酶活为1 090.31 U/mL,总酶活1 570.83 U/mL,是原始菌在该条件下酶活的19.73倍,显示出重组菌具有广阔的工业化应用前景。 展开更多
关键词 重组大肠杆菌 发酵条件 优化 诱导 Β-葡聚糖酶
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超声破碎重组大肠杆菌释放包含体的过程研究 被引量:15
8
作者 吴蕾 雷鸣 +1 位作者 洪建辉 甘一如 《化学工业与工程》 CAS 2002年第6期422-425,共4页
重组人白细胞介素 (rhIL - 6 )基因表达产物在大肠杆菌的细胞浆中以包含体的形式存在。用超声破碎法提取rhIL - 6包含体系统研究了该过程中的物理和化学因素 ,包括破碎时间 ,输出功率 ,菌体浓度 ,缓冲液pH值 ,菌体冻融及悬浮液体系等。... 重组人白细胞介素 (rhIL - 6 )基因表达产物在大肠杆菌的细胞浆中以包含体的形式存在。用超声破碎法提取rhIL - 6包含体系统研究了该过程中的物理和化学因素 ,包括破碎时间 ,输出功率 ,菌体浓度 ,缓冲液pH值 ,菌体冻融及悬浮液体系等。得到了破碎提取包含体的最适条件为 :超声功率 4 80W ,菌体浓度为 1 0 0g L左右。在去离子水中经过 1 5min超声破碎 ,表达量为 2 0 %的菌体可获得包含体的含量为 4 0 %(质量分数 ,下同 ) 展开更多
关键词 超声破碎 重组大肠杆菌 释放 包含体 重组人白细胞介素-6
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乙酸积累对基因工程菌培养的影响及与培养基pH的关系 被引量:13
9
作者 吴军 于公义 冯尔玲 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第6期433-437,共5页
在rIL-2工程菌K_(802)(pLY—4)高密度培养中,发现培养液中有大量代谢副产物乙酸积累,乙酸的存在对工程菌的生长和产物的表达均有明显的抑制作用,这种抑制作用是制约工程菌高密度培养的重要因素。为了减小这种抑制作用,初步研究了培养基p... 在rIL-2工程菌K_(802)(pLY—4)高密度培养中,发现培养液中有大量代谢副产物乙酸积累,乙酸的存在对工程菌的生长和产物的表达均有明显的抑制作用,这种抑制作用是制约工程菌高密度培养的重要因素。为了减小这种抑制作用,初步研究了培养基pH与乙酸抑制作用的关系,发现适当提高培养基pH值,能减小乙酸的抑制作用;高密度培养时,提高培养基的pH后,虽然仍有大量乙酸积累,但产物的表达水平和菌密度都有提高。 展开更多
关键词 基因工程菌 乙酸 培养基 PH值 微生物培养
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乳糖诱导重组人SOD基因在大肠杆菌中的表达 被引量:7
10
作者 叶姣 陈长华 +2 位作者 杨雅琴 付水林 蔡宝菊 《中国医药工业杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第12期536-539,共4页
利用乳糖代替 IPTG诱导 rh Cu/ Zn- SOD在大肠杆菌 (Escherichia coli) BL2 1(DE3)中的表达 ,并将菌体生长情况及产物表达规律与 IPTG诱导进行比较。对诱导所需的乳糖浓度、金属离子浓度等因素进行了研究 ,并分析了低温下诱导对重组蛋... 利用乳糖代替 IPTG诱导 rh Cu/ Zn- SOD在大肠杆菌 (Escherichia coli) BL2 1(DE3)中的表达 ,并将菌体生长情况及产物表达规律与 IPTG诱导进行比较。对诱导所需的乳糖浓度、金属离子浓度等因素进行了研究 ,并分析了低温下诱导对重组蛋白表达的影响。最终在摇瓶发酵条件的基础上 ,实现了乳糖诱导重组菌的 5 L 全自动发酵罐培养 ,rh Cu/ Zn- SOD酶活性达到 1810 U/ ml(发酵液 )。结果表明 ,乳糖可以诱导 rh Cu/ Zn- SOD在 Escherichia coli中的表达 ,并且酶活性达到 IPTG诱导时的 89%。 展开更多
关键词 超氧化物歧化酶 重组大肠杆菌 乳糖 诱导剂 基因表达
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重组大肠杆菌全细胞催化合成莱鲍迪苷D 被引量:11
11
作者 杨玉凤 费理文 +3 位作者 李建华 郝千里 杨靖亚 王勇 《工业微生物》 CAS 2017年第5期1-7,共7页
莱鲍迪苷D(Rebaudioside D,RD)是一种稀有具有高甜度的甜菊糖苷类化合物。本文实现了重组大肠杆菌全细胞催化莱鲍迪苷A(Rebaudioside A,RA)合成RD。以水稻c DNA为模板,扩增得到葡萄糖基转移酶基因eugt11,构建了重组菌株E.coli BL21(p ET... 莱鲍迪苷D(Rebaudioside D,RD)是一种稀有具有高甜度的甜菊糖苷类化合物。本文实现了重组大肠杆菌全细胞催化莱鲍迪苷A(Rebaudioside A,RA)合成RD。以水稻c DNA为模板,扩增得到葡萄糖基转移酶基因eugt11,构建了重组菌株E.coli BL21(p ETDuet-eugt11),并成功表达了重组蛋白6His-EUGT11。通过Ni柱亲和层析纯化并在体外酶催化反应表征了其催化活性。将重组菌BL21(p ETDuet-eugt11)应用于催化合成RD研究。探讨了反应体系pH、温度、柠檬酸钠浓度、菌体密度、二价金属离子、二甲苯体积分数、UDPG添加浓度对反应效率的影响。单因素考察结果显示,在菌体密度0.16 g湿细胞/m L反应液,底物RA浓度为1.0 mmol/L,pH 8.0,60 mmol/L柠檬酸钠,1%二甲苯,0.1 mmol/L Zn Cl2,12.0 mmol/L UDPG,反应温度42℃,反应时间24 h的条件下,RD产量为123.6 mg/L(约0.1 mmol/L)。 展开更多
关键词 甜菊糖 莱鲍迪苷D eUGT11 重组大肠杆菌 全细胞催化
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重组大肠杆菌生产谷胱甘肽合成酶系的摇瓶发酵条件 被引量:6
12
作者 童群义 陈坚 《无锡轻工大学学报(食品与生物技术)》 CSCD 北大核心 2001年第3期228-232,共5页
研究了重组大肠杆菌E .coliⅡ 1摇瓶发酵生产谷胱甘肽合成酶系的工艺条件 ,确定了E .coliⅡ 1的最适产酶条件 .最佳发酵培养基组成 ( g/L)为 :葡萄糖 1 0 ,蛋白胨 5,酵母膏 2 .5,K2 HPO4·3H2 O 4.0 ,KH2 PO41 .0 ,FeCl30 .2 ,MnCl... 研究了重组大肠杆菌E .coliⅡ 1摇瓶发酵生产谷胱甘肽合成酶系的工艺条件 ,确定了E .coliⅡ 1的最适产酶条件 .最佳发酵培养基组成 ( g/L)为 :葡萄糖 1 0 ,蛋白胨 5,酵母膏 2 .5,K2 HPO4·3H2 O 4.0 ,KH2 PO41 .0 ,FeCl30 .2 ,MnCl2 0 .1 ,CoCl2 0 .1 ,CaCl2 0 .1 ,ZnCl2 0 .0 2 ,H3BO30 .0 1 ,NaMoO40 .0 1 ,NaCl1 .0 ,Na2 SeO30 .0 2 ;发酵起始 pH 7.2 ;灭菌后加入无菌氨苄青霉素至 1 0 0 μg/mL ;每个三角瓶装液量为 1 0 0mL ;培养前期的温度控制在 37℃ ,后期将温度降为35℃ ;摇床转速 2 0 0r/min ,发酵周期 1 6h .在此条件下 ,重组大肠杆菌E .coliⅡ 1的谷胱甘肽合成酶系的活性为 862 .3U/L . 展开更多
关键词 重组大肠杆菌 谷胱甘肽合成酶系 摇瓶发酵
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乙醇发酵重组大肠杆菌的构建——运动发酵单胞菌pdc基因在大肠杆菌中的高效表达 被引量:6
13
作者 李学凤 潘亚平 +2 位作者 张晶 钱名宇 杨秀山 《太阳能学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第11期1120-1123,共4页
为了使大肠杆菌代谢葡萄糖和木糖产乙醇,将运动发酵单胞菌乙醇发酵途径中的关键酶基因丙酮酸脱羧酶基因与质粒载体pGM-T连接转化至大肠杆菌TOP10中。丙酮酸脱羧酶基因在T7启动子的启动下得到了高效表达。构建的重组大肠杆菌不但能利用... 为了使大肠杆菌代谢葡萄糖和木糖产乙醇,将运动发酵单胞菌乙醇发酵途径中的关键酶基因丙酮酸脱羧酶基因与质粒载体pGM-T连接转化至大肠杆菌TOP10中。丙酮酸脱羧酶基因在T7启动子的启动下得到了高效表达。构建的重组大肠杆菌不但能利用葡萄糖也能利用木糖产乙醇,在葡萄糖和木糖同时存在时,优先利用葡萄糖。 展开更多
关键词 运动发酵单胞菌 丙酮酸脱羧酶基因 重组大肠杆菌 乙醇发酵
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大肠杆菌中乙醇合成途径的构建 被引量:8
14
作者 谢丽萍 诸葛健 王正祥 《无锡轻工大学学报(食品与生物技术)》 CSCD 北大核心 2002年第2期116-119,共4页
采用PCR技术扩增了运动发酵单孢菌Zymomonasmobilis的两个产乙醇的关键酶基因pdc和adhⅡ ,分别克隆到载体 pUC19和pUC18中 ,形成重组质粒 pUC19::pdc和 pUC18::adh ,从中分离出两基因并串联到经EcoRⅠ酶切的 pUC18中 ,转化大肠杆菌E .co... 采用PCR技术扩增了运动发酵单孢菌Zymomonasmobilis的两个产乙醇的关键酶基因pdc和adhⅡ ,分别克隆到载体 pUC19和pUC18中 ,形成重组质粒 pUC19::pdc和 pUC18::adh ,从中分离出两基因并串联到经EcoRⅠ酶切的 pUC18中 ,转化大肠杆菌E .coliDH5α获得重组质粒 pPA .携带pPA的重组菌Pp +a被证明具有丙酮酸脱羧酶酶活且提高了乙醇脱氢酶酶活 . 展开更多
关键词 乙醇 重组大肠杆菌 代谢工程 PCR技术 生物合成 运动发酵 单孢菌
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重组大肠杆菌高密度培养研究进展 被引量:4
15
作者 黎名元 郭新民 乔传令 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2006年第6期55-58,共4页
重组大肠杆菌细胞高密度培养(High cell-density cultivation,HCDC)是获得高外源蛋白产率的一种重要策略,影响重组大肠杆菌高密度培养的因素主要有以下几个方面:重组体的构建及其稳定性,培养基成分,培养方式,培养条件及培养过程中抑制... 重组大肠杆菌细胞高密度培养(High cell-density cultivation,HCDC)是获得高外源蛋白产率的一种重要策略,影响重组大肠杆菌高密度培养的因素主要有以下几个方面:重组体的构建及其稳定性,培养基成分,培养方式,培养条件及培养过程中抑制性代谢产物的积累等。从以上几个方面对近期的研究进展进行了综述。 展开更多
关键词 重组大肠杆菌 分批补料培养 高密度
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重组褐藻胶裂解酶基因工程菌超声波破碎条件研究 被引量:9
16
作者 石荣莲 汪立平 刘玉佩 《湖南农业科学》 2010年第11期98-101,104,共5页
褐藻胶裂解酶是制备褐藻胶寡糖的重要工具酶,利用工程菌进行褐藻胶裂解酶基因的克隆与高效表达是提高酶活的主要途径之一。工程酶位于胞内,需采取有效破碎手段获取。对重组褐藻胶裂解酶基因工程菌E.coli TOP10采用超声波破碎,分析了超... 褐藻胶裂解酶是制备褐藻胶寡糖的重要工具酶,利用工程菌进行褐藻胶裂解酶基因的克隆与高效表达是提高酶活的主要途径之一。工程酶位于胞内,需采取有效破碎手段获取。对重组褐藻胶裂解酶基因工程菌E.coli TOP10采用超声波破碎,分析了超声波破碎强度、总工作时间、NaCl浓度对菌体破碎程度及酶活力的影响。通过单因素试验和正交试验得出重组大肠杆菌的最佳破碎条件为:菌液浓度40 mg/mL,菌液体积50 mL,超声波工作时间4 s,间歇时间8 s,超声波破碎强度50%,总工作时间6min,NaCl浓度为0.15 mol/L。在该条件下获得褐藻胶裂解酶粗酶液的酶活为21 U/mL。 展开更多
关键词 褐藻胶裂解酶 重组大肠杆菌 超声波破碎
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不同流加发酵方式对重组大肠杆菌细胞外hEGF表达水平的影响 被引量:7
17
作者 徐志南 岑沛霖 WKR Wong 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期594-597,共4页
The effects of different glucose feeding modes on hEGF expression were evaluated in an excretory recombinant \%E.coli\% K12 system.The results showed that,compared with batch cultivation,the plasmid stability and dens... The effects of different glucose feeding modes on hEGF expression were evaluated in an excretory recombinant \%E.coli\% K12 system.The results showed that,compared with batch cultivation,the plasmid stability and density of plasmid\|retaining cells were improved by all three glucose feeding modes (intermittent,pH\|stat and constant\|rate).It was shown that hEGF yields were improved up to 25.5% and 28.1% by intermittent or pH\|stat glucose feeding respectively.Especially,up to 150% improvement of hEGF production was achieved by constant feeding of 200g/L glucose solution at a rate of 0.11 mL/min.The effects of further combined feeding with other medium components (ampicillin,nitrogen sources,and inorganic salts) and inducer on hEGF yield were also examined in the bench\|top fermentor. 展开更多
关键词 人表皮生长因子 重组大肠杆菌 流加发酵 HeGF 表达水平
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CPC酰化酶基因的人工合成与重组表达 被引量:8
18
作者 安明 于慧敏 +2 位作者 罗晖 宋文斯 沈忠耀 《清华大学学报(自然科学版)》 EI CAS CSCD 北大核心 2008年第9期1499-1503,共5页
7-氨基头孢烷酸(7-ACA)是头孢菌素类抗生素的中间体,在医药工业中具有重要的应用价值。该文通过人工设计、合成并在重组大肠杆菌中表达头孢菌素C(CPC)酰化酶基因来实现7-ACA的一步酶法催化合成。以Pseudomonassp.SE83菌株的CPC酰化酶蛋... 7-氨基头孢烷酸(7-ACA)是头孢菌素类抗生素的中间体,在医药工业中具有重要的应用价值。该文通过人工设计、合成并在重组大肠杆菌中表达头孢菌素C(CPC)酰化酶基因来实现7-ACA的一步酶法催化合成。以Pseudomonassp.SE83菌株的CPC酰化酶蛋白质序列为模板,对CPC酰化酶基因分两段进行了全局优化设计,包括密码子替换、鸟嘌呤和胞嘧啶含量调整以及酶切位点修改等。通过装配聚合酶链式反应方法最终获得了目标基因,并克隆至表达载体pET-28a,成功构建了诱导型重组大肠杆菌E.coli BL21(DE3)/pET28-acy。经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导,在Luria-Bertani培养基中,新建重组大肠杆菌所表达的可溶CPC酰化酶占菌体总蛋白的75%以上;经优化培养基摇瓶发酵,重组菌的CPC酰化酶酶活高达2956U/L。采用上述方法获得的CPC酰化酶,在一步酶法合成7-ACA的工业化生产中具有广阔的应用前景。 展开更多
关键词 7-氨基头孢烷酸 头孢菌素C酰化酶 重组大肠杆菌 基因合成 装配聚合酶链式反应 高表达
原文传递
Mg^(2+)和氨基酸对重组大肠杆菌BL21(DE3)生长及羧肽酶原B表达的影响 被引量:6
19
作者 张文超 陈长华 +1 位作者 李素霞 张晓彦 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2006年第1期81-83,共3页
目的研究Mg2+和氨基酸对重组菌株生长及表达pCPB的影响。方法通过摇瓶和发酵罐培养,观察不同Mg2+浓度和氨基酸对重组菌的生长和羧肽酶原B表达的影响。结果添加1g/L Mg2+能提高质粒的稳定性;添加氨基酸能使羧肽酶原B表达量由18·7g/... 目的研究Mg2+和氨基酸对重组菌株生长及表达pCPB的影响。方法通过摇瓶和发酵罐培养,观察不同Mg2+浓度和氨基酸对重组菌的生长和羧肽酶原B表达的影响。结果添加1g/L Mg2+能提高质粒的稳定性;添加氨基酸能使羧肽酶原B表达量由18·7g/L提高到24g/L。结论添加适量的Mg2+和氨基酸能促进重组菌的生长和提高目的蛋白的表达量。 展开更多
关键词 羧肽酶原B 重组大肠杆菌 发酵 表达
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重组大肠杆菌的分批补料培养方法 被引量:6
20
作者 丛春水 苏志国 邓继先 《微生物学杂志》 CAS CSCD 1998年第4期44-47,共4页
在重组大肠杆菌的培养过程中,存在着菌体的高浓度与外源蛋白的高表达这一矛盾,使得重组菌的比生长速率通常远远低于宿主菌,限制了基因工程菌由实验室规模向工业化规模的转变。要实现重组大肠杆菌的高密度培养,最常用和最有效的方法... 在重组大肠杆菌的培养过程中,存在着菌体的高浓度与外源蛋白的高表达这一矛盾,使得重组菌的比生长速率通常远远低于宿主菌,限制了基因工程菌由实验室规模向工业化规模的转变。要实现重组大肠杆菌的高密度培养,最常用和最有效的方法就是分批补料流加培养。 展开更多
关键词 重组大肠杆菌 培养 分批补料培养
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