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应用LAMP实时浊度法检测转基因大豆 被引量：17
1
作者 袁瑛娜 单潇潇 +3 位作者 王宗德 石磊 袁秀金 谭贵良 《现代食品科技》 EI CAS 2011年第10期1264-1267,共4页
DNA环介导等温扩增(Loop Mediated Isothermal Amplification,LAMP)方法是一种新型的核酸扩增检测方法,该方法操作简便、所需时间短、灵敏度高、特异性强。实时浊度法可以实时检测反应过程中所产生的白色沉淀,从而实现对LAMP整个反应过... DNA环介导等温扩增(Loop Mediated Isothermal Amplification,LAMP)方法是一种新型的核酸扩增检测方法,该方法操作简便、所需时间短、灵敏度高、特异性强。实时浊度法可以实时检测反应过程中所产生的白色沉淀,从而实现对LAMP整个反应过程的实时监控。本研究以抗草甘膦转基因大豆为研究对象,针对外源基因cp4-epsps的保守区域设计特异性引物,通过实时浊度法在63℃恒温条件下完成转基因大豆的检测工作。结果显示,LAMP实时浊度法能够特异性检测cp4-epsps基因,其检测灵敏度是常规定性PCR方法的10倍。本研究建立了针对转基因大豆cp4-epsps基因的LAMP实时浊度检测方法,该方法具有高度的稳定性与特异性,结果准确,适合于转基因抗草甘膦大豆的快速检测。 展开更多
关键词 环介导等温核酸扩增技术 实时浊度仪 转基因大豆 检测
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海产品中霍乱弧菌实时浊度LAMP检测方法的建立 被引量：6
2
作者 胡兴娟 沈飚 +3 位作者 江玲丽 王莲芳 滕跃 朱竹君 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2014年第10期127-130,共4页
为建立一种快速、敏感、特异、有效的检测霍乱弧菌方法,以有效预防及控制霍乱弧菌感染,针对霍乱弧菌ctxA基因的保守区域设计引物,应用实时浊度仪进行环介导等温扩增(LAMP),研究其特异性与灵敏性,并利用该体系检测海产品中的霍乱弧菌。... 为建立一种快速、敏感、特异、有效的检测霍乱弧菌方法,以有效预防及控制霍乱弧菌感染,针对霍乱弧菌ctxA基因的保守区域设计引物,应用实时浊度仪进行环介导等温扩增(LAMP),研究其特异性与灵敏性,并利用该体系检测海产品中的霍乱弧菌。结果显示,含ctxA基因的霍乱弧菌可得到特异性扩增,而其他与霍乱弧菌(含ctxA基因)共存于海产品中的7种细菌均未得到扩增,DNA检测下限为81fg/μL。用建立的实时浊度LAMP检测方法对150份海产品进行检测,检出含霍乱弧菌的海产品2份,与荧光定量PCR结果一致。表明建立的LAMP检测方法可用于海产品中霍乱弧菌的检测。 展开更多
关键词 霍乱弧菌 环介导等温扩增 实时浊度 ctxA 基因 检测方法
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LAMP实时浊度法快速检测肠出血性大肠杆菌O157的研究 被引量：5
3
作者 李碧霞 游淑珠 +5 位作者 邝筱珊 冯家望 王小玉 唐食明 成晓维 许喜林 《现代食品科技》 EI CAS 北大核心 2014年第7期268-272,305,共6页
采用环介导等温扩增(Loop Mediated Isothermal Amplification,LAMP)技术,利用实时浊度仪实时检测LAMP反应过程中所产生的焦磷酸镁白色沉淀,实现对扩增反应全过程的监控,建立食品中肠出血性大肠杆菌(Enterohemorrhagic Escherichia coli... 采用环介导等温扩增(Loop Mediated Isothermal Amplification,LAMP)技术,利用实时浊度仪实时检测LAMP反应过程中所产生的焦磷酸镁白色沉淀,实现对扩增反应全过程的监控,建立食品中肠出血性大肠杆菌(Enterohemorrhagic Escherichia coli,EHEC)O157的LAMP实时浊度法快速检测方法。针对EHEC O157抗原基因rfbE的序列设计4条特异性LAMP引物。通过实时浊度仪在恒温63℃下1小时完成检测,对方法的特异性、灵敏度、稳定性进行了评价,并进行了食品样品添加试验以评价其应用于实际样品的效果。结果显示,经优化后,该方法的最低检出限为2.8×103 CFU/mL,与PCR法灵敏度比较高100倍。样品添加试验能检出的最低添加菌量为2.8×102 CFU/25 g(或mL)。LAMP实时浊度法具有快速、灵敏、特异性高、操作简便的优势,为食源致病菌快速筛查提供了一种良好的检测模式。 展开更多
关键词 环介导等温扩增技术 实时浊度仪 大肠杆菌O157 检测
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LAMP实时浊度法快速检测食品中产志贺毒素大肠埃希氏菌 被引量：4
4
作者 游淑珠 王小玉 +5 位作者 冯家望 蔡教英 姚丽锋 唐食明 丁琦 符家忍 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2018年第22期241-246,共6页
针对产志贺毒素大肠埃希氏菌(Shiga toxin-producing Escherichia coli,STEC) stx1和stx2基因的特异性序列分别设计4条特异性引物,采用环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术,利用实时浊度仪建立食品中STEC... 针对产志贺毒素大肠埃希氏菌(Shiga toxin-producing Escherichia coli,STEC) stx1和stx2基因的特异性序列分别设计4条特异性引物,采用环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术,利用实时浊度仪建立食品中STEC的LAMP实时浊度法快速检测方法。LAMP反应在实时浊度仪63℃恒温下1 h可完成。对方法的特异性、灵敏度、稳定性进行了评价,并在实际样品检测中进行应用。经优化该方法的检测灵敏度可达150拷贝/反应,4株STEC菌株LAMP扩增结果与其基因型一致,其他21株非STEC菌株均未出现非特异性扩增。395份食品样品检出STEC阳性68份(阳性率为17.2%),所检食品类别中畜产品阳性率最高(达31.3%),禽产品、水产品和可生食蔬菜均有少量阳性样品检出,阳性样品中以stx2基因阳性型为主。结果表明,LAMP实时浊度法具有快速、灵敏、特异性强、操作简便的优势,适用于食品中STEC的快速筛查。 展开更多
关键词 食品 环介导等温扩增(LAMP) 实时浊度仪 产志贺毒素大肠埃希氏菌(STEC) 检测
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食品过敏原大豆成分LAMP实时浊度检测法的建立 被引量：3
5
作者 邝筱珊 成晓维 +3 位作者 游淑珠 王小玉 刘李登 冯家望 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2014年第22期65-68,72,共5页
根据过敏原大豆的保守内源基因Lectin的序列,设计6条特异性LAMP引物,利用实时浊度仪对反应体系中扩增产物的实时监控筛选出最佳引物,建立食品中过敏原大豆成分的环介导等温扩增(LAMP)检测方法,并对该方法的特异性、灵敏度、稳定性进行... 根据过敏原大豆的保守内源基因Lectin的序列,设计6条特异性LAMP引物,利用实时浊度仪对反应体系中扩增产物的实时监控筛选出最佳引物,建立食品中过敏原大豆成分的环介导等温扩增(LAMP)检测方法,并对该方法的特异性、灵敏度、稳定性进行了评价。结果表明:该方法能够特异性检出食品中的过敏原大豆成分,特异性高,灵敏度达0.1%(w/w)。对含有大豆成分为10%、1%、0.1%、0%(w/w)的样品分别进行20次重复实验,其稳定性好,假阳性和假阴性率为0%。本实验建立的LAMP方法适用于特异性快速检测食品中的过敏原大豆成分。 展开更多
关键词 环节导等温扩增法(LAMP) 实时浊度仪 过敏原 大豆 检测
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传染性法氏囊病病毒RT-LAMP检测方法的建立及其应用 被引量：1
6
作者 陈艳艳 陈盛峰 +3 位作者 陈果 陈博文 何秀苗 韦平 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期169-175,共7页
为建立一种用于快速检测鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)的逆转录环介导等温扩增技术(RTLAMP)方法,设计了针对VP1基因保守序列的5组引物,采用荧光检测试剂通过实时浊度仪监测阳性扩增结果。结果显示,从5组引物中筛选出了1组对IBDV有效扩增... 为建立一种用于快速检测鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)的逆转录环介导等温扩增技术(RTLAMP)方法,设计了针对VP1基因保守序列的5组引物,采用荧光检测试剂通过实时浊度仪监测阳性扩增结果。结果显示,从5组引物中筛选出了1组对IBDV有效扩增的引物,利用该引物能够在63℃、1 h条件下实现IBDV VP1基因片段的特异性扩增,与其他病毒的核酸无扩增反应;样品RNA的最低检出量为5×10-5ng/L;利用建立的检测方法对14份临床样品进行检测,其阳性检出率为100%。结果表明,建立的IBDV RT-LAMP检测方法具有快速、准确、特异性强、灵敏度高和便捷的特点,可用于IBD临床样品的检测。 展开更多
关键词 传染性法氏囊病病毒 RT—LAMP 实时浊度仪 检测
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LAMP实时浊度法检测转基因水稻Bt63品系 被引量：9
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作者 吴少云 唐大运 +1 位作者 李琳 石磊 《食品与机械》 CSCD 北大核心 2012年第5期79-82,共4页
采用环介导等温扩增技术(LAMP),针对转基因水稻Bt63品系外源基因与内源基因结合处序列设计4条特异性引物,利用浊度仪实时监测扩增过程,建立Bt63品系的快速检测技术体系,并对反应温度、灵敏度、特异性、稳定性和实际样品检测能力进行初... 采用环介导等温扩增技术(LAMP),针对转基因水稻Bt63品系外源基因与内源基因结合处序列设计4条特异性引物,利用浊度仪实时监测扩增过程,建立Bt63品系的快速检测技术体系,并对反应温度、灵敏度、特异性、稳定性和实际样品检测能力进行初步探索。结果表明,LAMP实时浊度法能够特异性检测转基因水稻Bt63品系,其最低检出限为0.01%,是普通PCR方法的10倍,具有广泛的应用价值。 展开更多
关键词 环介导等温扩增技术 转基因水稻 实时浊度法 外源基因 内源基因 检测
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LAMP实时浊度法快速检测转基因玉米MON810 被引量：6
8
作者 王小玉 邝筱珊 +5 位作者 胡松楠 余以刚 成晓维 冯家望 张璜 肖性龙 《现代食品科技》 EI CAS 北大核心 2013年第12期3002-3005,3069,共5页
LAMP实时浊度法是采用环介导等温扩增(Loop Mediated Isothermal Amplification,LAMP)技术通过实时浊度仪实时检测反应过程中所产生的白色沉淀,从而实现对扩增全过程的监控,弥补了显色法只能观看反应终点的缺陷,使引物筛选和反应体系的... LAMP实时浊度法是采用环介导等温扩增(Loop Mediated Isothermal Amplification,LAMP)技术通过实时浊度仪实时检测反应过程中所产生的白色沉淀,从而实现对扩增全过程的监控,弥补了显色法只能观看反应终点的缺陷,使引物筛选和反应体系的优化有数据可依。本研究以转基因玉米MON810为研究对象,针对外源基因苏云金芽孢杆菌杀虫毒蛋白CryIA(b)与内源基因边界序列设计6条特异性引物,通过实时浊度法在63℃的恒温条件下完成检测,对检测的灵敏度、特异性、稳定性进行了评价。建立了转基因玉米MON810的LAMP实时浊度检测方法,该方法最低检出限为0.5%,与LAMP显色法和实时荧光PCR法进行结果比对,符合率为100%,经评价具有特异性高、稳定性强、准确简便等优点,非常适合转基因玉米MON810的快速检测,有较好的应用价值。 展开更多
关键词 环介导等温扩增技术 实时浊度仪 转基因玉米 MON810 检测
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嗜水气单胞菌与温和气单胞菌的LAMP检测方法的建立 被引量：5
9
作者 李嘉彬 马艳平 +5 位作者 柯浩 郝乐 刘振兴 马江耀 梁志凌 李玉谷 《南方水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期8-16,共9页
利用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)分别建立嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila,AH)与温和气单胞菌(A.sobria,AS)的快速检测方法。针对嗜水气单胞菌pilin基因、温和气单胞菌zipA基因设计特异性LAMP... 利用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)分别建立嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila,AH)与温和气单胞菌(A.sobria,AS)的快速检测方法。针对嗜水气单胞菌pilin基因、温和气单胞菌zipA基因设计特异性LAMP引物。在恒温条件下利用实时浊度仪对2组引物进行特异性和灵敏度试验,并以琼脂糖凝胶电泳和核酸染料颜色变化对扩增结果进行判定。结果显示,LAMP实时浊度法能够特异地检测嗜水气单胞菌和温和气单胞菌,最低检出限分别为46 fg·mL-1和320 fg·mL-1,是普通PCR方法的104倍和102倍;并能应用于已知临床样品检测。该研究建立的嗜水气单胞菌与温和气单胞菌LAMP快速检测方法具有高效、特异、灵敏的特点。 展开更多
关键词 环介导等温扩增技术 嗜水气单胞菌 温和气单胞菌 实时浊度法 检测
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LAMP实时浊度法检测转基因植物NPTⅡ基因 被引量：1
10
作者 邝筱珊 胡松楠 +3 位作者 王小玉 唐食明 成晓维 冯家望 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期60-64,共5页
根据转基因植物常用的选择标记基因NPTⅡ(HE582394.1)的序列,设计6条特异性LAMP引物,利用实时浊度仪对反应体系中扩增产物的实时监控筛选出最佳引物,最终建立转基因植物NPTⅡ基因的LAMP检测方法,并对该方法的特异性、灵敏度、稳定性进... 根据转基因植物常用的选择标记基因NPTⅡ(HE582394.1)的序列,设计6条特异性LAMP引物,利用实时浊度仪对反应体系中扩增产物的实时监控筛选出最佳引物,最终建立转基因植物NPTⅡ基因的LAMP检测方法,并对该方法的特异性、灵敏度、稳定性进行了评价。结果表明,该方法能够特异性检出含有NPTⅡ基因的植物及其加工产品,特异性高,灵敏度达0.5%。对转基因玉米MON863(含NPTⅡ基因)含量为10%、1%、0.5%、0%(W/W)的样品DNA分别进行扩增,其稳定性好,无假阳性和假阴性。所建立的LAMP方法适用于特异性筛选检测含NPTⅡ基因的植物及其加工样品。 展开更多
关键词 环节导等温扩增法(LAMP)实时浊度仪 新霉素-3'-磷酸转移酶基因 转基因 检测
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