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茶树实时荧光定量PCR分析中内参基因的选择 被引量:100
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作者 孙美莲 王云生 +5 位作者 杨冬青 韦朝领 高丽萍 夏涛 单育 骆洋 《植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期579-587,共9页
选择合适的内参基因是提高实时荧光定量PCR分析(qRT-PCR)准确性的先决条件。该文以茶树(Camellia sinensis)芽、叶、幼根、嫩茎、花瓣、种子和愈伤组织为材料,应用实时荧光定量PCR技术,分析了18S rRNA、GAPDH、β-actin和α-tubulin4个... 选择合适的内参基因是提高实时荧光定量PCR分析(qRT-PCR)准确性的先决条件。该文以茶树(Camellia sinensis)芽、叶、幼根、嫩茎、花瓣、种子和愈伤组织为材料,应用实时荧光定量PCR技术,分析了18S rRNA、GAPDH、β-actin和α-tubulin4个常用内参基因在茶树不同器官组织中的表达情况。经GeNorm和NormFinder软件分析发现,当利用荧光定量PCR分析比较茶树不同器官组织中的基因表达差异时,可选择β-actin作为校正内参基因;而比较不同成熟度的叶片和愈伤组织时,可以选择GAPDH作为校正内参基因。 展开更多
关键词 茶树 实时荧光定量pcr 内参基因
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联合检测EB病毒相关抗体和抗原对诊断鼻咽癌的价值 被引量:41
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作者 罗耀凌 欧国萍 +3 位作者 池沛冬 梁永能 刘宇辉 黄马燕 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第1期96-99,共4页
背景与目的:近年来随着分子生物学的发展,提供了多项EB病毒(Epstein-Barr virus)相关的检测指标。本研究通过同时检测EB病毒VCA-IgA、EA-IgA、EBV-特异性DNA酶(EBV-DNase)抗体、EB病毒DNA(EBV-DNA),评价联合检测对诊断鼻咽癌的价值。方... 背景与目的:近年来随着分子生物学的发展,提供了多项EB病毒(Epstein-Barr virus)相关的检测指标。本研究通过同时检测EB病毒VCA-IgA、EA-IgA、EBV-特异性DNA酶(EBV-DNase)抗体、EB病毒DNA(EBV-DNA),评价联合检测对诊断鼻咽癌的价值。方法:收集160例治疗前的鼻咽癌患者和76例健康成人的血清和血浆,应用免疫酶染色法检测血清VCA-IgA、EA-IgA;用正丁酸与巴豆油激发Raji细胞方法检测EBV-DNase抗体;用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative PCR,RQ-PCR)分析血浆EBV-DNA,评估其在诊断鼻咽癌中的价值。结果:单项检测时对鼻咽癌患者诊断的敏感性和特异性分别为:VCA-IgA90.0%、89.5%,EA-IgA75.0%、94.7%,EBV-DNase抗体76.3%、90.8%,EBV-DNA68.8%、88.2%。联合检测的敏感性和特异性分别为98.8%和84.2%。VCA-IgA、EA-IgA阳性率与临床分期无关(P﹥0.05),各临床分期中EBV-DNase抗体阳性率、EBV-DNA水平与阳性率的差异有统计学意义(P<0.05)。结论:VCA-IgA、EA-IgA、EBV-DNase和EBV-DNA单项检测时VCA-IgA敏感性最高,EA-IgA特异性最好;四项指标联合检测可提高鼻咽癌诊断的敏感性和准确度。EBV-DNase抗体、EBV-DNA有助于评估鼻咽癌病程和协助判断临床分期。 展开更多
关键词 鼻咽肿瘤 诊断 EBV-特异性DNA酶抗体 EB病毒DNA 实时荧光定量聚合酶链反应
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我国20个梨品种(种质)对国外梨火疫病菌的抗病性评价 被引量:41
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作者 李洪涛 张静文 +4 位作者 盛强 唐章虎 张祥林 张春竹 罗明 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期629-637,共9页
【目的】选取Erwinia amylovora国外菌株及国内梨品种(种质),经室内接种,评价不同菌株的致病力及梨品种的抗病性,为研究梨火疫病防控技术提供技术资料。【方法】对供试的梨品种(种质)枝条采用离体接种、梨幼果半果接种法,比较3个不同来... 【目的】选取Erwinia amylovora国外菌株及国内梨品种(种质),经室内接种,评价不同菌株的致病力及梨品种的抗病性,为研究梨火疫病防控技术提供技术资料。【方法】对供试的梨品种(种质)枝条采用离体接种、梨幼果半果接种法,比较3个不同来源的国外菌株E.a 0001、E.a 0017、E.a 0055的致病力。通过离体枝条接种强致病力菌株E.a0017,结合实时荧光PCR定量检测病原菌数量,制定梨品种抗病性分级指标,综合评估梨品种的抗病水平。【结果】3个菌株对供试梨品种枝条均具有致病力,对‘库尔勒香梨‘’砀山梨‘’黑酸梨’、杜梨具有强致病力,对‘库尔勒香梨’的致病力最强;综合对梨枝条接种的病情指数均值,其致病力的强弱依次为E.a 0001>E.a 0055>E.a 0017。E.a 0017菌株对梨幼果的致病力较E.a 0001和E.a 0055强,而E.a 0001和E.a 0055对幼果的致病力相近。供试的20个梨品种(种质)对Erwinia amylovora的抗性水平普遍较低,其中14个品种都不同程度感病(占70%),没有发现高抗品种,2个表现出抗病性和4个具有耐病性的品种均为我国的地方品种。【结论】3个E. amylovora菌株对供试梨品种(种质)均具有强和较强的致病力。供试梨品种(种质)中‘,晋酥‘’绿梨’表现抗病性‘,霍城冬黄梨‘’八月酥‘’库车阿木特‘’棉梨’表现出耐病性,其他均为感病品种。 展开更多
关键词 ERWINIA amylovora 致病力 荧光定量pcr检测 抗性
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新型冠状病毒实验室核酸检测方法及实践 被引量:39
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作者 匡慧慧 于梅 +5 位作者 于帅 周汉王 王依函 朱乔 肖征 李慧灵 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期830-833,共4页
目的研究新型冠状病毒(2019-nCoV)实验室核酸检测的原理方法,探讨实时荧光定量PCR方法在新型冠状病毒实验室检测中的价值与实验室注意事项。方法采用实时荧光定量PCR方法检测2020年1月23日-2020年2月2日就诊于解放军总医院海南医院发热... 目的研究新型冠状病毒(2019-nCoV)实验室核酸检测的原理方法,探讨实时荧光定量PCR方法在新型冠状病毒实验室检测中的价值与实验室注意事项。方法采用实时荧光定量PCR方法检测2020年1月23日-2020年2月2日就诊于解放军总医院海南医院发热门诊的患者以及筛查的湖北旅居者的咽拭子,采用实时荧光定量PCR的方法检测新型冠状病毒开放读码框1ab(ORF1ab)、核壳蛋白(N)基因。结果共检测的3824例标本中,阳性病例35例,阳性率0.91%。结论疫情期间对发热门诊患者及湖北旅居者进行2019-nCoV核酸筛查是非常有必要的,实时荧光定量PCR是一种检测2019-nCoV科学可靠的方法,能快速准确地检测待检标本中的2019-nCoV核酸,对监测和控制疫情有重要意义。 展开更多
关键词 新型冠状病毒 新型冠状病毒肺炎 实时荧光定量pcr 核酸 实验室检测
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TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR快速检测布鲁氏菌 被引量:37
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作者 高正琴 邢进 +2 位作者 冯育芳 岳秉飞 贺争鸣 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期995-1000,共6页
目的利用新一代TaqMan MGB探针技术,建立特异敏感的实时荧光定量PCR方法,用于布鲁氏菌的快速检测。方法针对布鲁氏菌基因组中16SrRNA序列设计特异性引物和探针,建立一套基于TaqMan MGB探针技术的实时荧光定量PCR方法,验证方法的特异性... 目的利用新一代TaqMan MGB探针技术,建立特异敏感的实时荧光定量PCR方法,用于布鲁氏菌的快速检测。方法针对布鲁氏菌基因组中16SrRNA序列设计特异性引物和探针,建立一套基于TaqMan MGB探针技术的实时荧光定量PCR方法,验证方法的特异性、敏感性和稳定性,对2008-2010年期间采集的773份动物样本中的布鲁氏菌进行检测,并与普通PCR方法进行比较分析。结果建立的TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法对布鲁氏菌的检测具有高度的特异性,对小肠结肠耶尔森菌、假结核耶尔森菌、肠炎沙门氏菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、空肠弯曲菌、泰泽氏菌均无交叉反应。生成的标准曲线的相关系数为0.999,斜率为-3.301,TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR效率为100.872%。TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR能够准确地从布鲁氏菌阳性样本中检测到布鲁氏菌DNA,最低能够检测到的布鲁氏菌数量为9.3拷贝,比常规PCR方法的灵敏度高100倍。对773份动物样本进行检测,结果TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR能检出53份布鲁氏菌阳性样本,而常规PCR只检出37份阳性。结果显示,TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法比常规PCR方法更敏感,能够直接从动物样本中检出布鲁氏菌DNA,检测时间仅为2h。结论本研究首次建立了直接用于检测动物样本中布鲁氏菌的TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法,该技术适用于传染性病原体的快速检测与鉴定。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 小沟结合物(minor GROOVE binder MGB)探针 实时荧光定量pcr 检测
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荧光定量PCR检测淹涝胁迫下水稻Adh2基因的表达量变化 被引量:19
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作者 赵森 陈永华 +1 位作者 陈昊 肖国樱 《中国生态农业学报》 CAS CSCD 2008年第2期455-458,共4页
采用荧光定量PCR方法,应用特异性引物,对淹涝胁迫下水稻叶片中低丰度表达的乙醇脱氢酶基因Adh2(Alcohol dehydrogene2)进行转录水平上的定量分析。实验得到一组基线平整、斜率大、指数区明显的S形荧光曲线。结果显示,在淹涝胁迫前期,Adh... 采用荧光定量PCR方法,应用特异性引物,对淹涝胁迫下水稻叶片中低丰度表达的乙醇脱氢酶基因Adh2(Alcohol dehydrogene2)进行转录水平上的定量分析。实验得到一组基线平整、斜率大、指数区明显的S形荧光曲线。结果显示,在淹涝胁迫前期,Adh2基因表达持续增加,在水淹后8h表达量最大,随后下降。淹涝胁迫能诱导叶片中Adh2基因大量表达,且呈低-高-低的变化趋势。 展开更多
关键词 淹涝胁迫 乙醇脱氢酶 实时荧光pcr 基因表达
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荧光定量PCR法检测食管癌中Survivin基因的临床研究 被引量:17
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作者 钱志英 何流 +2 位作者 潘良熹 何晓松 张成阳 《肿瘤研究与临床》 CAS 2005年第2期86-88,共3页
目的探讨食管癌发生发展过程中凋亡抑制基因Survivin的表达及其与食管癌病理特征的关系。方法采用实时荧光定量PC R法,检测Survivin在78例食管病变患者胃镜标本中正常食管黏膜、不典型增生、原位癌及浸润癌组织的表达强度。结果Survivi... 目的探讨食管癌发生发展过程中凋亡抑制基因Survivin的表达及其与食管癌病理特征的关系。方法采用实时荧光定量PC R法,检测Survivin在78例食管病变患者胃镜标本中正常食管黏膜、不典型增生、原位癌及浸润癌组织的表达强度。结果Survivin在正常食管黏膜、不典型增生、原位癌及浸润癌组织中呈渐进性高表达。结论Survivin与食管癌的发生、发展密切相关,实时荧光定量PC R法检测食管癌中Survivin基因,可作为食管肿瘤早期诊断的可靠方法。 展开更多
关键词 食管癌 不典型增生 原位癌 荧光定量pcr 凋亡抑制基因SURVIVIN
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乳酸菌饮料中嗜酸乳杆菌的实时荧光定量PCR检测方法 被引量:23
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作者 张娜娜 刘洋 +5 位作者 俞漪 赵渝 窦同海 徐琼 段文锋 翁史昱 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第8期27-32,共6页
目的:为快速准确检测乳酸菌饮料中的嗜酸乳杆菌,建立实时荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chainreaction,PCR)检测方法。方法:根据嗜酸乳杆菌NCFM的SPIDR保守区域设计特异性引物与探针,借助建立的实时荧光定量PCR方法进行特异性、灵... 目的:为快速准确检测乳酸菌饮料中的嗜酸乳杆菌,建立实时荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chainreaction,PCR)检测方法。方法:根据嗜酸乳杆菌NCFM的SPIDR保守区域设计特异性引物与探针,借助建立的实时荧光定量PCR方法进行特异性、灵敏度、重复性以及抗干扰能力验证,并利用模拟样品对方法进行检验,最后对市售的实际样品进行检测。结果:该方法的特异性较好;方法的绝对灵敏度达到3 pg,相对灵敏度达103 CFU/mL;重复性检测表明相对标准偏差在2.6%以下。同时进行杂菌干扰实验,在纯基因组水平和培养物水平混合大肠杆菌,扩增均无明显影响,表明建立的方法抗干扰能力较好。利用建立的实时荧光定量PCR方法对模拟样品进行检测并建立标准曲线,得出R^2为0.987,线性较好,可进行实际样品的检测。对市售的11份样品进行检测,其中6份含有嗜酸乳杆菌菌株,5份不含嗜酸乳杆菌菌株,标记嗜酸乳杆菌的样品全部检测出嗜酸乳杆菌且含量在5.83×10~2~3.68×1~04 CFU/mL之间。结论:建立的实时荧光定量PCR方法可快速、准确地检测出乳酸菌饮料中嗜酸乳杆菌。 展开更多
关键词 实时荧光定量pcr 嗜酸乳杆菌 定量 检测
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实时荧光定量PCR法研究结直肠癌患者肠道拟杆菌属、梭杆菌属和梭菌属量的变化 被引量:23
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作者 郭世奎 包维民 +4 位作者 龚昆梅 胡大春 邵剑春 陈弟 王昆华 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2010年第1期24-28,共5页
目的通过研究结、直肠癌患者肠道拟杆菌属、梭杆菌属和梭菌属量的变化,揭示肠道相关菌群改变在大肠癌发病中的作用及意义。方法收集术前结、直肠癌患者粪便标本40例及正常对照标本40例,根据细菌的靶基因序列设计特异性引物。提取待测粪... 目的通过研究结、直肠癌患者肠道拟杆菌属、梭杆菌属和梭菌属量的变化,揭示肠道相关菌群改变在大肠癌发病中的作用及意义。方法收集术前结、直肠癌患者粪便标本40例及正常对照标本40例,根据细菌的靶基因序列设计特异性引物。提取待测粪便标本细菌DNA,应用SYBR Green I实时荧光定量PCR测定不同细菌的数量。结果正常对照组与实验组粪便中细菌数量分别为拟杆菌属(8.76±0.77;9.85±0.88)、梭杆菌属(7.94±1.25;10.0±1.65)、梭菌属(3.54±0.70;6.56±0.68),拟杆菌属中的脆弱拟杆菌为(2.12±0.48;4.07±1.77)、梭杆菌属中的坏死梭杆菌为(2.31±0.26;7.62±2.68)及梭菌属中的肉毒梭菌为(2.76±1.16;5.43±1.21),实验组数量均明显增多(P<0.05)。结论结、直肠癌患者粪便中拟杆菌属、梭杆菌属和梭菌属的数量较正常对照明显增多,提示结、直肠癌的发生发展与肠道菌群有明显关系。 展开更多
关键词 结直肠癌 拟杆菌属 梭杆菌属 梭菌属 实时荧光定量pcr
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水稻低丰度表达基因OsAMT1;3实时荧光定量PCR方法的建立及其应用 被引量:17
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作者 孙淑斌 李宝珍 +1 位作者 胡江 徐国华 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期8-12,共5页
采用实时荧光定量PCR技术,通过使用特异引物,对水稻中的低丰度表达基因OsAMT1;3进行了转录水平上的定量分析,成功建立了可检测低丰度表达基因的SYBR Green实时荧光定量PCR技术平台。该方法具有很好的准确性和实用性。获得的荧光定量... 采用实时荧光定量PCR技术,通过使用特异引物,对水稻中的低丰度表达基因OsAMT1;3进行了转录水平上的定量分析,成功建立了可检测低丰度表达基因的SYBR Green实时荧光定量PCR技术平台。该方法具有很好的准确性和实用性。获得的荧光定量PCR扩增曲线,基线平整,指数区明显,斜率大且固定;线性范围广,17~36个循环都能测出;稳定性、重复性好,变异系数仅为0.47%;标准曲线表明,循环阈值与PCR体系中起始模板量的对数值之间有着良好的线性关系,可对基因表达进行相对定量;缺氮条件下OsAMT1;3与纯NH4^+处理相比表达量增加4倍以上。 展开更多
关键词 实时荧光定量pcr 扩增曲线 标准曲线 铵转运蛋白基因 基因表达 研究方法
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诺如病毒检测方法研究进展 被引量:23
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作者 李志凯 苏国成 +1 位作者 苏文金 周常义 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期1417-1424,共8页
诺如病毒是引起人类非细菌性胃肠炎的主要病原之一,具有很高的传染性和变异性,可导致严重的公共卫生问题,尤其在抵抗力弱的人群中有很高的发病率,因此开发快速、准确的检测技术对预防和控制诺如病毒的传播是非常重要的。本文综述了近年... 诺如病毒是引起人类非细菌性胃肠炎的主要病原之一,具有很高的传染性和变异性,可导致严重的公共卫生问题,尤其在抵抗力弱的人群中有很高的发病率,因此开发快速、准确的检测技术对预防和控制诺如病毒的传播是非常重要的。本文综述了近年来RT-PCR、环介导等温扩增、实时荧光定量PCR、巢式PCR、ELISA、免疫层析、基因芯片等技术在诺如病毒检测中的应用及发展趋势。 展开更多
关键词 诺如病毒 检测方法 RT-pcr 环介导等温扩增 实时荧光定量pcr 巢式pcr ELISA 免疫层析 基因芯片
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高温胁迫下茄子qRT-PCR内参基因筛选及稳定性分析 被引量:22
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作者 庞强强 李植良 +6 位作者 罗少波 陈日远 金庆敏 黎振兴 李德明 孙保娟 孙光闻 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期475-486,共12页
为筛选茄子(Solanum melongena L.)高温胁迫下稳定表达的内参基因,以不同茄子品系(种)为研究对象,利用实时荧光定量PCR技术对来自茄子高温胁迫转录组数据库8个候选内参基因(SmEF1a、SmEF2、Sm40s RPS29、Sm60s RPL24、SmTRX、SmCK I、Sm... 为筛选茄子(Solanum melongena L.)高温胁迫下稳定表达的内参基因,以不同茄子品系(种)为研究对象,利用实时荧光定量PCR技术对来自茄子高温胁迫转录组数据库8个候选内参基因(SmEF1a、SmEF2、Sm40s RPS29、Sm60s RPL24、SmTRX、SmCK I、SmDAHPS I、SmUCP)和SmActin在不同试验情况下进行表达检测,并结合GeNorm、Norm Finder、Best Keeper和ReFinder软件综合评价9个内参基因的表达稳定性。结果表明,在茄子热敏品系05-1和耐热品系05-4经高温处理不同时间的样品和不同组织样品以及10个耐热性不同的茄子品系(种)中,9个内参基因的表达丰度及稳定性存在差异;茄子热敏品系05-1和耐热品系05-4高温胁迫处理不同时间样品中表达稳定性最好的是SmEF1a和SmUCP;其不同组织中表达水平最稳定的是SmEF1a和SmTRX;高温胁迫下不同茄子品系(种)中以SmTRX和SmEF2的表达稳定性最好。综合来看,SmEF1a和SmTRX在所有茄子试验样品中的表达稳定性最好,而SmActin和SmCK I的表达稳定性较差。 展开更多
关键词 茄子 高温胁迫 内参基因 表达稳定性 实时荧光定量pcr
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实时荧光定量PCR在植物病害中的应用 被引量:18
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作者 徐小刚 刘雅婷 《中国农学通报》 CSCD 北大核心 2009年第7期52-56,共5页
实时荧光定量PCR技术作为一项新兴技术,越来越受到人们的重视。它以快速、准确定量、便捷等优点广泛应用于科学研究各个领域,近年来,实时荧光定量PCR技术在植物病害研究上不断深入,大大提高了植物病害的检测效率和监测防治水平。结合了... 实时荧光定量PCR技术作为一项新兴技术,越来越受到人们的重视。它以快速、准确定量、便捷等优点广泛应用于科学研究各个领域,近年来,实时荧光定量PCR技术在植物病害研究上不断深入,大大提高了植物病害的检测效率和监测防治水平。结合了最近几年来应用于检测和鉴定植物病原病害的实时荧光定量PCR过程中引物与探针的设计、反应过程、结果评价情况,综合论述了实时荧光定量PCR技术在由真菌、细菌、病毒、线虫引发的植物病害的检测与应用。 展开更多
关键词 实时荧光定量pcr CT值 植物病害 引物设计 灵敏度
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结核分枝杆菌DNA实时定量PCR技术在临床病理诊断中的应用 被引量:19
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作者 林瀛 陈小岩 俞训彬 《实用检验医师杂志》 2015年第3期143-147,共5页
目的探讨实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,FQ-PCR)检测结核分枝杆菌(Mycobaeterium tuberculosis,MTB)在临床组织病理学诊断中的应用价值。方法收集我院2013年5月-2015年2月临床确诊的144例结核病(tuberculosi... 目的探讨实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,FQ-PCR)检测结核分枝杆菌(Mycobaeterium tuberculosis,MTB)在临床组织病理学诊断中的应用价值。方法收集我院2013年5月-2015年2月临床确诊的144例结核病(tuberculosis,TB)患者,对其石蜡包埋组织标本行组织病理学检查,并同时采用组织切片抗酸染色及FQ-PCR技术检测MTB-DNA,并对这三种方法的阳性检出率进行比较。结果在144例临床诊断TB患者的石蜡包埋组织中,FQ-PCR法检测MTB阳性68例,阳性率为47.22%,抗酸染色法检测阳性22例,阳性率为15.28%,组织病理学法检测阳性74例,阳性率为51.39%,三者阳性率比较差异有统计学意义(P<0.01)。FQ-PCR法对肺活检标本、肺叶切除标本和胸膜活检标本MTB的阳性检出率均高于组织病理学法和抗酸染色法;对淋巴结活检标本和其他组织标本的阳性检出率高于抗酸染色法,但低于组织病理学法。结论 FQ-PCR技术简便、快捷,敏感性明显好于传统抗酸染色法,可作为TB分子病理诊断的重要检测方法,为组织病理学诊断提供可靠的依据,具有较高的临床应用价值。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 结核病 实时荧光定量pcr 抗酸染色 组织病理学
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枯草芽孢杆菌对绵羊瘤胃上皮细胞β-防御素-1表达的影响 被引量:18
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作者 王佩 范燕茹 +1 位作者 金鑫 杨银凤 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期760-767,共8页
选用益生枯草芽孢杆菌研究其对体外培养的绵羊瘤胃上皮细胞β-防御素表达的调节作用。首先,在体外成功培养绵羊瘤胃上皮细胞,然后用枯草芽孢杆菌对体外培养的绵羊瘤胃上皮细胞进行不同浓度、不同时间的刺激,利用荧光定量PCR技术(Real-ti... 选用益生枯草芽孢杆菌研究其对体外培养的绵羊瘤胃上皮细胞β-防御素表达的调节作用。首先,在体外成功培养绵羊瘤胃上皮细胞,然后用枯草芽孢杆菌对体外培养的绵羊瘤胃上皮细胞进行不同浓度、不同时间的刺激,利用荧光定量PCR技术(Real-time fluorescence quantitative PCR,RT-PCR)从mRNA水平检测刺激后上皮细胞中绵羊β-防御素-1(Sheep beta-defensin-1,SBD-1)基因表达水平的差异。结果表明:当菌液浓度为1010 cfu·mL-1刺激上皮细胞8h后,SBD-1的表达量达到最高;不同的菌液浓度诱导下SBD-1的表达量均有显著增加,109、1010、1011 cfu·mL-1菌液浓度刺激下,SBD-1的表达量与空白相比差异极显著(P<0.01)。结果表明,枯草芽孢杆菌能够诱导绵羊瘤胃上皮细胞内SBD-1基因的表达。 展开更多
关键词 β-防御素-1 瘤胃上皮细胞 枯草芽孢杆菌 荧光定量pcr
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Taqman探针实时荧光定量PCR检测肝脏疾病患者血清中miR-122的表达水平及其临床意义 被引量:18
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作者 吴瑞珊 苏运钦 +4 位作者 余广超 林晓丹 李莉 陈文璟 温旺荣 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期348-353,共6页
目的:运用Taqman探针实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测肝脏疾病患者血清中miR-122的表达水平并探讨其临床意义。方法:设计miR-122及U6 snRNA的茎环引物和Taqman探针,运用Taqman探针实时荧光定量PCR检测27例肝癌术前(HCC)患者、15例... 目的:运用Taqman探针实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测肝脏疾病患者血清中miR-122的表达水平并探讨其临床意义。方法:设计miR-122及U6 snRNA的茎环引物和Taqman探针,运用Taqman探针实时荧光定量PCR检测27例肝癌术前(HCC)患者、15例乙型肝炎(hepatitis B)患者、15例丙型肝炎(hepatitis C)患者、15例正常对照者(HC)、11例肝癌术后(PHCC)患者及10例肝癌术后复发(recurrence)患者血清中miR-122的表达水平,并分析miR-122与肝脏疾病相关标志物的关系。结果:Taqman探针实时荧光定量PCR方法能检测血清中miR-122的表达。HCC、hepatitis B、hepatitis C及recurrence患者血清中miR-122的表达水平均高于HC和PH-CC患者(P<0.05),hepatitis C患者血清miR-122表达水平高于HCC、hepatitis B和recurrence患者(P<0.05),但HCC、hepatitis B和recurrence患者血清miR-122的表达水平无明显差异(P>0.05),PHCC患者血清miR-122的表达水平比HCC和recurrence患者低(P<0.05)。血清乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)阳性和(或)乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)阳性患者血清miR-122的表达水平高于阴性者(P<0.05)。血清丙型肝炎病毒抗体(HCV-Ab)阳性患者血清miR-122的表达水平高于阴性者(P<0.05)。血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)与miR-122的表达水平有正相关性(r=0.34,P<0.05)。血清甲胎蛋白(AFP)≥400μg/L组血清miR-122的表达高于AFP<400μg/L组(P<0.05)。结论:Taqman探针实时荧光定量PCR适用于检测血清miR-122的表达水平。在HCC、hepatitis B、hepatitisC及recurrence患者血清中miR-22均有不同程度的增高,尤其是hepatitis C患者,且PHCC患者血清miR-122表达下降,复发后升高。血清miR-122的表达与肝脏疾病的某些指标有关,提示血清miR-122可作为肝脏疾病,特别是肝癌早期诊断、手术疗效及预后判断的新指标。 展开更多
关键词 TAQMAN探针 实时荧光定量pcr MIR-122 肝细胞癌
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实时荧光定量PCR在测定艾滋病患者肠道菌群量变化中的应用及意义 被引量:18
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作者 雷毅 王昆华 +5 位作者 龚昆梅 肖乐 包维民 师义 郭世奎 白劲松 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2012年第1期69-71,共3页
目的:应用实时荧光定量PCR观察艾滋病患者肠道菌群量的变化,研究艾滋病对肠道微生态的影响及其在发病中的作用。方法:分别设计双歧杆菌属、乳酸杆菌属、大肠杆菌、粪肠球菌及屎肠球菌的特异性引物。收集艾滋病患者粪便标本30份及正常对... 目的:应用实时荧光定量PCR观察艾滋病患者肠道菌群量的变化,研究艾滋病对肠道微生态的影响及其在发病中的作用。方法:分别设计双歧杆菌属、乳酸杆菌属、大肠杆菌、粪肠球菌及屎肠球菌的特异性引物。收集艾滋病患者粪便标本30份及正常对照标本30份,提取细菌基因组DNA,应用实时荧光定量PCR反应测定5种细菌的数量。结果:艾滋病患者组双歧杆菌属、乳酸杆菌属的数量较正常对照组明显减少;大肠杆菌、粪肠球菌、屎肠球菌数量明显增多,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:艾滋病患者肠道微生态发生了明显变化,提示艾滋病患者肠道微生态紊乱。 展开更多
关键词 获得性免疫缺陷综合征 肠道菌群 实时荧光定量pcr
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乙肝病毒对人精液参数和精子DNA完整性的影响 被引量:17
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作者 刘浩 耿春惠 +5 位作者 王维 肖克林 熊礼宽 黄永祥 杨晓玲 李瑾 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 2013年第10期896-898,共3页
目的:探讨精液中乙肝病毒存在对精液参数和精子DNA完整性的影响。方法:采用实时荧光定量PCR技术对153例血清乙肝表面抗原阳性患者精液进行乙肝DNA定量检测,采用精子染色质扩散法检测精子DNA损伤指数(DFI),对比分析精液HBV DNA阳性组(A组... 目的:探讨精液中乙肝病毒存在对精液参数和精子DNA完整性的影响。方法:采用实时荧光定量PCR技术对153例血清乙肝表面抗原阳性患者精液进行乙肝DNA定量检测,采用精子染色质扩散法检测精子DNA损伤指数(DFI),对比分析精液HBV DNA阳性组(A组,n=43)与阴性组(B组,n=110)精液参数包括精液体积、精子浓度、存活率、前向运动精子百分率、平均直线速率(VSL)、平均路径速率(WAP)结果,以及HBV DNA拷贝数与精子DNA损伤指数的关系。结果:乙肝感染者精液HBV DNA检出率为28.1%(43/153);两组年龄、精液体积、精子浓度无统计学差异(P>0.05),A组精子存活率显著低于B组[(51.4±17.1)%vs(58.0±18.8)%,P>0.05],前向运动精子率显著低于B组[(24.5±10.1)%vs(29.6±13.3)%,P>0.05],VSL显著低于B组[(19.9±4.5)μm/s vs(23.7±4.0)μm/s,P<0.01],WAP显著低于B组[(23.4±5.3)μm/s vs(26.5±7.0)μm/s,P<0.01];A组精子DNA碎片指数显著高于B组[(24.2±9.4)%vs(19.3±8.0)%,P<0.01];精液中HBV DNA拷贝数与精子DNA碎片指数呈正相关(r=0.819,P<0.01)。结论:精液中HBV DNA存在对精子数量尚未构成显著影响,但可能改变一些精液参数,包括精子活力和运动速度以及精子DNA完整性,精液中乙肝病毒载量和精子DNA损伤之间呈现病毒载量-效应关系。 展开更多
关键词 乙肝病毒 精液参数 精子DNA完整性 实时荧光定量pcr
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microRNA在非小细胞肺癌组织中的表达及其临床应用研究 被引量:16
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作者 王亚南 史进方 +3 位作者 吴元健 徐卫东 蒋敏 顾国浩 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期516-519,共4页
目的探讨microRNA(miRNA)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及其临床意义。方法用实时荧光定量PCR技术检测40例NSCLC患者癌组织与癌旁组织中miR-21、miR-20a、miR-31、miR-222、miR-223、miR-145、miR-126的表达变化。结果 NSCLC患者... 目的探讨microRNA(miRNA)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及其临床意义。方法用实时荧光定量PCR技术检测40例NSCLC患者癌组织与癌旁组织中miR-21、miR-20a、miR-31、miR-222、miR-223、miR-145、miR-126的表达变化。结果 NSCLC患者癌组织中miR-21、miR-20a、miR-31、miR-222较癌旁组织呈高表达(P<0.05),而miR-223、miR-145、miR-126呈低表达(P<0.05)。随着病情进展,miR-21、miR-222表达升高,miR-126表达下降。结论 miR-21、miR-20a、miR-31、miR-222、miR-145、miR-126、miR-223在NSCLC癌组织中表达存在差异,且miR-21、miR-222和miR-126与NSCLC病情的恶化发展相关,有助于预后判断。 展开更多
关键词 微小RNA 非小细胞肺癌 实时荧光定量pcr
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铁皮石斛查尔酮合酶基因克隆与表达分析 被引量:17
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作者 孟衡玲 张薇 +2 位作者 卢丙越 苏一兰 薛春丽 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期2015-2019,共5页
【目的】克隆铁皮石斛中查尔酮合酶(CHS)基因,分析其基本生物学信息及组织表达特异性,为进一步研究CHS基因在铁皮石斛中的表达调控机理及其在铁皮石斛中的功能打下理论基础。【方法】采用铁皮石斛转录组序列与NCBI同源序列进行比对,根... 【目的】克隆铁皮石斛中查尔酮合酶(CHS)基因,分析其基本生物学信息及组织表达特异性,为进一步研究CHS基因在铁皮石斛中的表达调控机理及其在铁皮石斛中的功能打下理论基础。【方法】采用铁皮石斛转录组序列与NCBI同源序列进行比对,根据保守区段设计引物克隆铁皮石斛CHS基因的cDNA全长,采用实时荧光定量PCR定量表达分析不同生长年限、不同组织部位中CHS基因的表达水平。【结果】铁皮石斛CHS基因cDNA编码区1188 bp,编码395个氨基酸,GenBank登录号KT783451,分子量为43.2 kD,理论等电点6.05。铁皮石斛GHS氨基酸序列与同属植物金钗石斛(Dendrobium nobile)的CHS氨基酸序列同源性最高,达99%,与非同科植物欧洲大叶杨(Populus trichocarpa)、巨桉(Eucalyptus grandis)和紫玉兰(Magnolia liliiflora)等植物的同源性在83%左右。该基因编码的蛋白质属非分泌蛋白,定位于细胞质基质中,为非跨膜结构的亲水性不稳定蛋白。CHS基因在1年生铁皮石斛叶片中的表达量最高,随着植株年龄的增长,叶片中CHS基因的表达量降低,茎中的表达量升高。【结论】铁皮石斛CHS基因早期主要参与激素运输和器官形态建成,后期主要参与类黄酮物质合成。 展开更多
关键词 铁皮石斛 查尔酮合成酶 基因克隆 实时荧光定量pcr
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