微囊化大鼠胰岛异种移植于糖尿病小鼠的实验观察 被引量：12

1

作者 何立敏 薛毅珑 +4 位作者 张莉 李新建 崔忻 刘成贵 潘长玉 《军医进修学院学报》 CAS 1999年第2期98-100,共3页

目的：观察海藻酸钠－聚赖氨酸－海藻酸钠（ＡＰＡ）微胶囊对异种胰岛组织移植的免疫隔离作用。方法：采用ＳＵＮ氏ＡＰＡ微胶囊技术包裹大鼠胰岛细胞团，移植于链脲霉素（ＳＴＺ）诱发的糖尿病模型小鼠腹腔。结果：糖尿病组小鼠及植入... 目的：观察海藻酸钠－聚赖氨酸－海藻酸钠（ＡＰＡ）微胶囊对异种胰岛组织移植的免疫隔离作用。方法：采用ＳＵＮ氏ＡＰＡ微胶囊技术包裹大鼠胰岛细胞团，移植于链脲霉素（ＳＴＺ）诱发的糖尿病模型小鼠腹腔。结果：糖尿病组小鼠及植入空囊或注射生理盐水的对照组小鼠血糖无明显变化；用微胶囊包裹及未包裹的大鼠胰岛异种移植于糖尿病小鼠腹腔内，移植后血糖明显下降９～１２ｍｍｏｌ／Ｌ，未包囊胰岛移植组受试鼠血糖降低仅维持２～３ｄ，微囊化胰岛移植组血糖下降可持续１１０ｄ。移植后１个月从腹腔回收的微囊胰岛呈圆型，表面光滑，无明显的纤维组织包绕，囊内胰岛ＤＴＺ染色呈桔黄色。结论：采用ＳＵＮ氏静电ＡＰＡ微胶囊制作技术制作的胶囊，可明显延长大鼠胰岛作为异种移植物在小鼠体内的存活时间，表明这种微囊具有较好的免疫隔离作用和生物相容性。 展开更多

关键词 微囊 异种移植 糖尿病 异种移植

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芙蓉菊化学成分对体外培养大鼠胰岛分泌胰岛素作用的研究 被引量：4

2

作者 邹磊 吴琦 +1 位作者 杨秀伟 傅德贤 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期1401-1405,共5页

目的:研究芙蓉菊化学成分在体外对培养的大鼠胰岛分泌胰岛素的作用。方法:体外培养大鼠胰岛,通过受试化合物作用前后胰岛分泌胰岛素水平的比较,考察芙蓉菊化学成分艾菊素、万寿菊黄素-3,6,7-三甲醚、5-O-甲基-myo-肌醇、东莨菪素和东莨... 目的:研究芙蓉菊化学成分在体外对培养的大鼠胰岛分泌胰岛素的作用。方法:体外培养大鼠胰岛,通过受试化合物作用前后胰岛分泌胰岛素水平的比较,考察芙蓉菊化学成分艾菊素、万寿菊黄素-3,6,7-三甲醚、5-O-甲基-myo-肌醇、东莨菪素和东莨菪苷对胰岛分泌胰岛素的作用,并与阳性对照药格列苯脲进行比较。结果:万寿菊黄素-3,6,7-三甲醚对胰岛分泌胰岛素的促进作用约为空白对照组分泌水平的2倍。5-O-甲基-myo-肌醇对胰岛分泌胰岛素亦有促进作用,约为空白对照组分泌水平的1.5倍。但是,东莨菪素对胰岛分泌胰岛素有抑制作用,约比空白对照低1.9倍。结论:对体外培养的大鼠胰岛分泌胰岛素功能,艾菊素、万寿菊黄素-3,6,7-三甲醚和5-O-甲基-myo-肌醇有促进作用;东莨菪素有抑制作用。 展开更多

关键词 芙蓉菊 万寿菊黄素-3 6 7-三甲醚 5—O-甲基-myo-肌醇 大鼠胰岛 胰岛素

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实验大鼠胰岛分离移植技术方法的比较分析 被引量：2

3

作者 宋京海 韦军民 +3 位作者 朱明伟 黄美雄 苏伟 李大军 《中华肝胆外科杂志》 CAS CSCD 2008年第1期46-48,共3页

目的探索高效的大鼠胰岛分离移植技术方法。方法应用Wistar-Furth大鼠，于体内或体外胶原酶经胰管灌注膨化胰腺，联合不同密度Ficoll液或Histopaque液纯化胰岛细胞，评估胰岛的数量、纯度、胰岛当量以及肾被膜下胰岛移植的有效性。结果... 目的探索高效的大鼠胰岛分离移植技术方法。方法应用Wistar-Furth大鼠，于体内或体外胶原酶经胰管灌注膨化胰腺，联合不同密度Ficoll液或Histopaque液纯化胰岛细胞，评估胰岛的数量、纯度、胰岛当量以及肾被膜下胰岛移植的有效性。结果体外经胰管灌注膨化胰腺结合Histopaque液纯化提取胰岛的数量、纯度和胰岛当量值均显著高于体内灌注组各数值（P〈0.01），其提取时间无显著差别。1000个胰岛细胞移植进入左肾被膜下，有效的逆转了糖尿病大鼠高血糖，其远期糖耐受结果优于500和800个胰岛细胞移植组。结论体外灌注膨化消化胰腺结合Histopaque液纯化胰岛的分离方法是一种满意的分离技术。1000个胰岛细胞是保证肾被膜下胰岛移植成功的最低有效数量。 展开更多

关键词 胰岛移植 大鼠胰岛 提纯 肾被膜下

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高产的大鼠胰岛提取法 被引量：2

4

作者 刘杰 江红 +3 位作者 孔庆学 李洪波 吴靖芳 孙诚谊 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期462-465,共4页

目的探寻经济、高产的大鼠胰岛分离纯化方法。方法Wistar大鼠分别以质量浓度为0.1%、0.05%及0.03%的!型胶原酶胆管灌注,灌注量6～8mL,经过静态及震荡2步消化法后,用Dextran不连续密度梯度法纯化胰岛。通过DTZ和AO/PI染色及葡萄糖刺激试... 目的探寻经济、高产的大鼠胰岛分离纯化方法。方法Wistar大鼠分别以质量浓度为0.1%、0.05%及0.03%的!型胶原酶胆管灌注,灌注量6～8mL,经过静态及震荡2步消化法后,用Dextran不连续密度梯度法纯化胰岛。通过DTZ和AO/PI染色及葡萄糖刺激试验对分离纯化胰岛进行体外检测;通过体内肾被膜下移植检测其体内活性。结果3种胶原酶浓度平均胰岛收获量分别为(835±183)、(1243±339)及(711±103)个/只,通过体内外检测表明以0.1%、0.05%胶原酶分离纯化胰岛功能良好,0.05%收获量最大,0.05%和0.1%与0.03%之间比较P<0.05。结论以0.05%的胶元酶V6～8mL胆管灌注消化的方法是一种收获量较大,同时所提取胰岛数量多、活性良好,酶耗量较低的胰岛提取方法。 展开更多

关键词 大鼠胰岛 分离 胆管灌注消化法

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PDX-1蛋白对TNF-α和IL-1β诱导的大鼠胰岛凋亡的保护作用 被引量：1

5

作者 张丰姣 张珊珊 +3 位作者 李曾一 汤喻 付冬霞 王守俊 《中国实用神经疾病杂志》 2010年第9期11-13,共3页

目的探讨PDX-1蛋白对细胞因子(TNF-α、IL-1β)诱导的大鼠胰岛凋亡的保护作用。方法 PDX-1基因克隆及表达质粒的构建,PDX-1蛋白的表达、纯化和鉴定,PDX-1蛋白保护TNF-α和IL-1β引起的胰岛细胞凋亡的研究。结果 PDX-1蛋白可以延缓胰岛... 目的探讨PDX-1蛋白对细胞因子(TNF-α、IL-1β)诱导的大鼠胰岛凋亡的保护作用。方法 PDX-1基因克隆及表达质粒的构建,PDX-1蛋白的表达、纯化和鉴定,PDX-1蛋白保护TNF-α和IL-1β引起的胰岛细胞凋亡的研究。结果 PDX-1蛋白可以延缓胰岛细胞的自然凋亡,降低处理后的胰岛Caspase-3活性和荧光细胞的数目;PDX-1蛋白干预后的细胞因子组的葡萄糖刺激胰岛素释放为(1.586±0.129)μI U/ml,与对照组(1.375±0.131)μI U/ml,相比有显著差异(P<0.05)。结论表明PDX-1蛋白可以减少细胞因子诱导的胰岛凋亡,保护β细胞功能。 展开更多

关键词 PDX-1蛋白 基因克隆 凋亡 细胞因子 大鼠胰岛

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推进式离心管结合单密度梯度法快速纯化大鼠胰岛 被引量：3

6

作者 张桦 陈宏 +5 位作者 孙嘉 杨力 鲁辛 张振 刘宏 蔡德鸿 《广东医学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期349-351,共3页

目的探索用简化的单一密度梯度法建立快速纯化大鼠胰岛细胞的方法。方法用胶原酶P消化分离SD大鼠胰腺,采用自制的推进式离心管以及单一密度(1.090g/cm3)的HCA-Ficoll-400密度梯度液来纯化大鼠胰岛细胞。通过DTZ染色,在倒置显微镜下计数... 目的探索用简化的单一密度梯度法建立快速纯化大鼠胰岛细胞的方法。方法用胶原酶P消化分离SD大鼠胰腺,采用自制的推进式离心管以及单一密度(1.090g/cm3)的HCA-Ficoll-400密度梯度液来纯化大鼠胰岛细胞。通过DTZ染色,在倒置显微镜下计数胰岛细胞的数量和纯度,用胰岛素释放试验检测胰岛细胞的功能。结果纯化后平均每条SD大鼠胰腺可获得(731±89)个胰岛细胞当量(IEQ),平均纯度为(73.2±9.4)%,平均活率为(92.8±2.4)%。纯化后的胰岛细胞对胰岛素释放刺激反应良好,高糖时胰岛素的释放量为低糖时的3.54±0.79倍(P<0.001)。结论为各种胰岛细胞的实验研究建立了快速分离纯化胰岛细胞的方法,纯化的胰岛细胞功能良好。 展开更多

关键词 大鼠 胰岛细胞 纯化

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一种经济高效的SD大鼠胰岛细胞分离技术 被引量：3

7

作者 张剑波 杨谦 +4 位作者 陈杰 母得志 张林 毛萌 屈艺 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期610-613,共4页

目的建立一种经济高效的大鼠胰岛细胞分离纯化方法,为胰腺的修复重建奠定实验基础。方法成年雄性SD大鼠25只,体重230～380g,共进行5次实验,每5只大鼠一组进行消化和分离。采用医用复方氯化钠注射液(compound sodium chloride injection,... 目的建立一种经济高效的大鼠胰岛细胞分离纯化方法,为胰腺的修复重建奠定实验基础。方法成年雄性SD大鼠25只,体重230～380g,共进行5次实验,每5只大鼠一组进行消化和分离。采用医用复方氯化钠注射液(compound sodium chloride injection,CSCI)经胰总管灌注大鼠胰腺,0.5mg/mLⅤ型胶原酶消化后,分别采用浓度为27.0%、23.0%、20.5%和11.0%的Ficoll 400形成不连续密度梯度介质,离心纯化胰岛细胞。双硫腙(dithizon,DTZ)染色行纯化前后胰岛细胞计数和纯度检测;荧光染料碘化丙啶(propidium iodide,PI)和二乙酸荧光素(fluorescein diacetate,FDA)储存液双染色鉴定胰岛细胞活性;RPMI1640培养基培养3d后,分别用浓度为2.8mmol/L的低糖和25.0mmol/L的高糖行葡萄糖刺激胰岛素释放实验检测胰岛细胞功能。结果5次实验胰岛细胞消化时间为(13.8±1.6)min。DTZ染色鉴定纯化前胰岛细胞数为(5626±422)个,纯化后为(2914±485)个,纯化后的胰岛细胞数较纯化前明显减少(P<0.01),回收率51.6%±6.0%,每个胰腺收获胰岛细胞数为(583±97)个/只。5次分离获得的胰岛细胞纯度为90.2%±3.4%,活性为81.6%±7.0%。培养3d后,葡萄糖刺激胰岛素释放实验显示:低糖环境下胰岛素水平为(39.7±7.5)EU/L,高糖环境为(116.1±17.4)EU/L,比较差异有统计学意义(P<0.01);刺激指数为3.0±0.4。结论采用CSCI作为大鼠胰岛细胞分离纯化的主要液体试剂,并采用低浓度Ⅴ型胶原酶消化,不仅可降低实验成本,同时可获得高质量的胰岛细胞。 展开更多

关键词 大鼠胰岛细胞 分离纯化 细胞培养

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胰淀素对高糖刺激下大鼠胰岛细胞瘤细胞系Ins-1ATP敏感性钾通道的影响 被引量：1

8

作者 肖金凤 李晓通 +6 位作者 赵新 贺秉军 商学良 韩丽鑫 吴广彦 丁雪梅 朱铁虹 《中华糖尿病杂志》 CAS CSCD 2015年第11期694-697,共4页

目的观察胰淀素短时间作用对高糖刺激的大鼠胰岛细胞瘤细胞系Ins-1的ATP敏感性钾通道fK。通道）的影响。方法以Ins-1细胞为研究对象，随机分为16．7mmol／L葡萄糖处理组及0．1、1、10μmol／L胰淀素预处理组，采用全细胞膜片钳技术分析... 目的观察胰淀素短时间作用对高糖刺激的大鼠胰岛细胞瘤细胞系Ins-1的ATP敏感性钾通道fK。通道）的影响。方法以Ins-1细胞为研究对象，随机分为16．7mmol／L葡萄糖处理组及0．1、1、10μmol／L胰淀素预处理组，采用全细胞膜片钳技术分析不同浓度胰淀素短时间作用对高糖刺激下Ins-1细胞KKIP通道电生理学特性的影响，同时收集细胞培养上清液应用酶联免疫吸附法（ELISA）测定孵育液中的胰岛素含量。组间数据比较采用t检验。结果与16．7mmol／L葡萄糖组相比，0．1μmol／L胰淀素预处理组胰岛索释放量及KNTP通道半数激活电压（V0.5，）差异均无统计学意义[分别为（5．57±0．93）比（4．95±0．49）μg／L和（9．4±1．4）比（13．0±2．4）mV，t=1．022、-2．244，均P〉0、05]；而1μmol／L及10μmol／L胰淀素预处理组胰岛素释放量分别显著下降为（3．44＋0．32）和（2．23±0．55）gg／L（t=3．751、5．354，均P〈0．05），而V。则分别显著提高到（28．2±2．7）和（33．3±2．1）mV（t=-5．053、-10．707，均P〈0．05）。结论高浓度咦淀素短时间作用可通过抑制高糖对K。，通道的关闭作用进而抑制Ins．1细胞胰岛素分泌。 展开更多

关键词 胰淀素 大鼠胰岛细胞瘤细胞系Ins-1 ATP敏感性钾通道

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间歇性高糖对大鼠胰岛细胞瘤细胞系Ins-1的损伤作用及对第10号染色体缺失的张力同源性磷酸酶表达的影响 被引量：1

9

作者 邵晨 王晓黎 +3 位作者 王涤非 李国姣 郭妍 董玉梅 《中华糖尿病杂志》 CAS CSCD 2015年第11期689-693,共5页

目的探讨间歇性高糖对大鼠胰岛细胞瘤细胞系Ins-1的损伤作用及对第10号染色体缺失的张力同源性磷酸酶（PTEN）表达的影响。方法将Ins．1细胞分为正常组（CG组，11．1mmol／L葡萄糖培养）、持续高糖组（SHG组，33．3mmol／L葡萄糖培养）... 目的探讨间歇性高糖对大鼠胰岛细胞瘤细胞系Ins-1的损伤作用及对第10号染色体缺失的张力同源性磷酸酶（PTEN）表达的影响。方法将Ins．1细胞分为正常组（CG组，11．1mmol／L葡萄糖培养）、持续高糖组（SHG组，33．3mmol／L葡萄糖培养）、间歇性高糖组（IHG组，11．1mmol／L及33-3mmol／L葡萄糖交替培养12h），3组细胞均培养3d。欧文比色法（MTS）~定细胞增殖活性，膜联蛋白v-异硫氰酸荧光素／碘化丙啶（AnnexinV／PI）双染细胞后，以流式细胞仪测定各组细胞的凋亡率，放免法测各组细胞胰岛素分泌，2’，7’．二氯荧光黄双乙酸盐（DCFH—DA）荧光探针测定各组细胞内活性氧簇（ROS）水平，倒置相差显微镜下观察各组细胞形态，钙离子荧光探针法（Fluo3-AM）测定细胞内钙离子浓度，Westernblotting法测定各组细胞PTEN蛋白表达。各组内均数比较采用单因素方差分析。结果SHG组细胞凋亡率、细胞内ROS水平、细胞内钙离子浓度及PTEN表达均较CG组显著增加（t=8．310、10．261、17．890、5．123，均P〈0．05），细胞增殖活性、胰岛素分泌均较CG组显著降低（t=-19．630、-2．053，均P〈0．05）。IHG组细胞凋亡率、细胞内ROS水平以及钙离子浓度及PTEN表达均较CG组及SHG显著增加（t=6．200～18．227，均P〈0．05），细胞增殖活性、胰岛素分泌均较CG组及SHG组均显著降低（t=-27．800、-2．790、-8．167、-1．503，均P〈0．05）。IHG组较SHG组及CG组Ins-1细胞异型性明显、细胞数量显著减少且排列紊乱。结论氧化应激参与高糖对Ins．1细胞的损伤作用，可能与PTEN表达增高有关，间歇性高糖对INS．1细胞的损伤作用较持续性高糖严重。 展开更多

关键词 间歇性高糖 大鼠胰岛细胞瘤细胞系Ins-1 第10号染色体缺失的张力同源性磷酸酶

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大鼠胰岛分离与纯化的实验研究

10

作者 周茂华 陈景芝 +1 位作者 陈东明 夏兆骥 《武警后勤学院学报（医学版）》 CAS 1996年第1期39-42,47,共5页

本实验经胰管注射胶原酶、胰腺静止消化方法。分离成年Wistar大鼠胰岛,葡聚糖密度梯度离心纯化。大鼠胰腺消化后,胰岛收获量为710～1015个/胰腺,纯化后胰岛收获量为610—820个/胰腺,纯度达92%。纯化胰岛形态结构完整,内分泌细胞超微结... 本实验经胰管注射胶原酶、胰腺静止消化方法。分离成年Wistar大鼠胰岛,葡聚糖密度梯度离心纯化。大鼠胰腺消化后,胰岛收获量为710～1015个/胰腺,纯化后胰岛收获量为610—820个/胰腺,纯度达92%。纯化胰岛形态结构完整,内分泌细胞超微结构保持良好;对葡萄糖刺激反应,胰岛素释放量是基础分泌水平的8倍;异体移植可逆转实验性糖尿病小鼠的高血糖达一周。 展开更多

关键词 大鼠胰岛 分离 纯化 异种移植 葡聚糖

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SGA微囊制备及其与大鼠胰岛生物相容性的体外观测

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作者 陈晰 张雷 +2 位作者 刘旸 单世光 张建国 《现代生物医学进展》 CAS 2009年第11期2027-2030,共4页

目的:制备硫酸酯化葡甘聚糖-海藻酸钡(SGA)微囊,包裹大鼠胰岛,对比观测SGA微囊的体外生物相容性。方法:溶液共混法制备硫酸酯化葡甘聚糖-海藻酸盐混合凝胶液,改良Omer法制作SGA微囊。X射线衍射分析SGA二元共混膜结构;SGA微囊化SD大鼠胰... 目的:制备硫酸酯化葡甘聚糖-海藻酸钡(SGA)微囊,包裹大鼠胰岛,对比观测SGA微囊的体外生物相容性。方法:溶液共混法制备硫酸酯化葡甘聚糖-海藻酸盐混合凝胶液,改良Omer法制作SGA微囊。X射线衍射分析SGA二元共混膜结构;SGA微囊化SD大鼠胰岛,体外培养14d后,胰岛素刺激释放实验对比SGA微囊和APA、AB(a海藻酸钡)微囊对大鼠胰岛的影响。结果:衍射图谱显示硫酸酯化葡甘聚糖-海藻酸钡共混膜在原属于海藻酸钡的2θ11°、20.3°结晶峰变小,在2θ29.8。出现新结晶峰,说明SGA二元共混膜相互作用强烈,融合较好;胰岛素刺激释放实验显示,体外培养后SGA微囊对大鼠胰岛的影响与APA、ABa微囊无差别(P>0.05)。结论:SGA微囊膜结构稳定,融合度较好,对大鼠胰岛体外生物相容性较高,可以为下一步体内移植所应用。 展开更多

关键词 硫酸酯化葡甘聚糖 SGA微囊 大鼠胰岛 生物相容性

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对大鼠实验性胃溃疡期间胰岛β-EP细胞的免疫组织化学研究

12

作者 吴靖芳 王建伟 +2 位作者 任君旭 周济远 白雪梅 《张家口医学院学报》 1999年第1期25-27,共3页

成年雄性Wistar大鼠41只。分为实验性胃溃疡组和对照组,后者又分为盐水对照组和空白对照组。于胃溃疡手术后1、4、10、23d分批取胰尾.以免疫细胞化学PAP法对胃溃疡自愈期间胰岛β-EP免疫反应细胞进行研究。结果:溃疡组β-EP细胞面数密... 成年雄性Wistar大鼠41只。分为实验性胃溃疡组和对照组,后者又分为盐水对照组和空白对照组。于胃溃疡手术后1、4、10、23d分批取胰尾.以免疫细胞化学PAP法对胃溃疡自愈期间胰岛β-EP免疫反应细胞进行研究。结果:溃疡组β-EP细胞面数密度在术后4、10d均增加,4d达最高峰.与对照相比为P<0.01,23d基本恢复正常。邻片单染显示:β-EP阳性细胞分别与部分Glu、Ins 阳性细胞重叠。本研究结果提示:胰岛β-EP细胞参与了大鼠实验性胃溃疡时期的内分泌调制。 展开更多

关键词 实验性胃溃疡 Β-内啡肽 免疫细胞化学 大鼠 胰岛

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