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放射诱导启动子的合成与鉴定及质粒pcDNA3.1(+)/E-CDglyTK的构建 被引量：4
1
作者 余东升 黄洪章 +2 位作者 潘朝斌 王安训 王建广 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期502-505,共4页
【目的】合成放射诱导启动子序列并构建其调控双自杀基因的真核表达质粒pcDNA3.1(+)/E-CDglyTK。【方法】利用人工寡核苷酸片段合成放射诱导启动子,以绿色荧光蛋白(GFP)作为报告基因转染Tca8113细胞,经流式细胞仪鉴定其辐射诱导特性。将... 【目的】合成放射诱导启动子序列并构建其调控双自杀基因的真核表达质粒pcDNA3.1(+)/E-CDglyTK。【方法】利用人工寡核苷酸片段合成放射诱导启动子,以绿色荧光蛋白(GFP)作为报告基因转染Tca8113细胞,经流式细胞仪鉴定其辐射诱导特性。将pCEA-CDglyTK中双自杀基因CDglyTK亚克隆到pcDNA3.1(+),然后把合成启动子插入到CDglyTK上游构建质粒pcDNA3.1(+)/E-CDglyTK并酶切鉴定,阳离子脂质体介导其转染舌鳞癌Tca8113细胞,RT-PCR观察CDglyTK表达及诱导放疗的增效作用。【结果】合成启动子序列分析与设计序列完全一致;低剂量放射线照射可诱导这种人工启动子增强GFP在Tca8113细胞中的表达;重组质粒的酶切图谱与预期一致;3Gy放疗显著增强CDglyTK在Tca8113细胞中的表达。【结论】成功合成放射诱导启动子并构建由其调控双自杀基因的真核表达质粒pcDNA3.1(+)/E-CDglyTK,为进一步研究肿瘤放射-基因治疗奠定了基础。 展开更多
关键词 放射诱导启动子 自杀基因 基因表达 CDGLYTK
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放射诱导启动子介导p53上调凋亡调控因子基因靶向治疗舌鳞状细胞癌裸鼠移植瘤 被引量：3
2
作者 陈小华 江方方 +2 位作者 刘斌 吴晓林 余东升 《中华口腔医学研究杂志（电子版）》 CAS 2012年第5期21-24,共4页
目的探讨放射诱导启动子介导p53上调凋亡调控因子(PUMA)基因靶向治疗舌鳞状细胞癌(简称舌鳞癌)裸鼠移植瘤的疗效。方法构建放射诱导启动子介导PUMA基因表达的真核表达质粒pcDNA(+)3.1/E-PUMA,建立人舌鳞癌裸鼠移植瘤模型,以脂质体为载... 目的探讨放射诱导启动子介导p53上调凋亡调控因子(PUMA)基因靶向治疗舌鳞状细胞癌(简称舌鳞癌)裸鼠移植瘤的疗效。方法构建放射诱导启动子介导PUMA基因表达的真核表达质粒pcDNA(+)3.1/E-PUMA,建立人舌鳞癌裸鼠移植瘤模型,以脂质体为载体进行瘤内转染,辅以3Gy放疗,描述肿瘤生长曲线,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测PUMA的mRNA水平,免疫组化检测细胞核增殖抗原的表达,原位末端标记法检测细胞凋亡。数据分析采用SPSS 11.0统计软件,两样本均数比较采用χ2检验。结果放射诱导启动子介导的PUMA基因转染对舌鳞癌裸鼠移植瘤生长有明显抑制作用,诱导放疗显著增强了PUMA的mRNA表达水平,RT-PCR检测发现其电泳条带灰度值从(0.325±0.075)上调至(0.371±0.096),P<0.01;诱导放疗可显著提高疗效,增殖指数由32.27%下降至22.77%,P<0.01;凋亡指数从14.43%上升为27.98%,P<0.01。结论放射诱导启动子作为基因治疗分子开关可介导PUMA基因在人舌鳞癌裸鼠移植瘤中靶向表达促进细胞凋亡,为舌鳞癌放射基因治疗提供了新思路。 展开更多
关键词 放射诱导启动子 p53上调凋亡调控因子 舌 癌 鳞状细胞 基因治疗
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放射诱导调控序列的合成及其辐射诱导特性的研究 被引量：2
3
作者 余东升 黄洪章 +3 位作者 潘朝斌 王建广 马健 王安训 《口腔颌面外科杂志》 CAS 2004年第1期1-4,共4页
目的　合成放射诱导调控序列并鉴定其辐射诱导特性。方法　利用人工寡核苷酸片段合成含有 6个重复CArG元件的放射诱导调控序列 ,以绿色荧光蛋白 (GFP)作为报告基因转染Tca8113细胞检测其辐射诱导特性。结果　低剂量放射线照射可诱导这... 目的　合成放射诱导调控序列并鉴定其辐射诱导特性。方法　利用人工寡核苷酸片段合成含有 6个重复CArG元件的放射诱导调控序列 ,以绿色荧光蛋白 (GFP)作为报告基因转染Tca8113细胞检测其辐射诱导特性。结果　低剂量放射线照射可诱导这种人工调控序列增强GFP在Tca8113细胞中的表达 ,且 3Gy剂量最为明显 ,提高到放射前的 16 1%。结论　人工合成放射诱导调控序列在低剂量放射线照射下能明显增强其下游外源性基因的表达 ,为进一步研究放射 -基因治疗奠定了基础。 展开更多
关键词 放射诱导启动子 放射-基因治疗 绿色荧光蛋白 放射诱导调控序列
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pE_6/p53/GFP重组真核表达载体的构建及其对肺腺癌细胞周期的影响 被引量：2
4
作者 毛丽伟 王卫东 +1 位作者 李德志 陈正堂 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第24期2323-2326,共4页
目的构建放射诱导启动子序列所调控的wt-p53抑癌基因的真核表达载体pE6-p53/GFP,并研究其功能。方法全基因合成方法获得放射敏感性增强子E6;PCR法从pcDNA3.1(+)/p53质粒中扩增p53cDNA全长序列;双酶切IRES2-EGFP双顺反子表达载体,获得IRE... 目的构建放射诱导启动子序列所调控的wt-p53抑癌基因的真核表达载体pE6-p53/GFP,并研究其功能。方法全基因合成方法获得放射敏感性增强子E6;PCR法从pcDNA3.1(+)/p53质粒中扩增p53cDNA全长序列;双酶切IRES2-EGFP双顺反子表达载体,获得IRES2-EGFP报告基因片段,以pCI-neo为载体构建重组pE6/p53/GFP。重组体经双酶切、测序鉴定其正确性。采用脂质体法将重组质粒转染H1299(p53-/-)细胞,G418筛选出稳定表达细胞株。RT-PCR分析基因整合;Western blot方法分析不同放射剂量后P53蛋白表达情况及持续时间;流式细胞技术分析E6对肺腺癌细胞周期的影响。结果正确构建pE6/p53/GFP重组质粒,并在被转染细胞核内检测到p53基因表达;4Gy照射12h后p53基因表达显著增强;放疗后转染组细胞发生显著G1期阻滞,克隆形成率下降。结论成功构建了放射反应元件E6控导的pE6/p53/GFP重组质粒。 展开更多
关键词 放射敏感性增强子 RT—PCR WESTERN BLOT
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放射诱导启动子介导双自杀基因治疗舌鳞癌的实验研究
5
作者 余东升 黄洪章 +2 位作者 刘习强 唐海阔 胡晓文 《中华口腔医学研究杂志（电子版）》 CAS 2009年第1期14-17,共4页
目的探讨放射诱导启动子介导双融合自杀基因CDglyTK靶向治疗人舌鳞癌裸鼠移植瘤的疗效。方法构建人舌鳞癌裸鼠移植瘤模型,以脂质体为载体介导携放射诱导启动子调控双融合自杀基因的真核表达质粒pcDNA3.1(+)/E-CDglyTK瘤内转染,辅以3Gy放... 目的探讨放射诱导启动子介导双融合自杀基因CDglyTK靶向治疗人舌鳞癌裸鼠移植瘤的疗效。方法构建人舌鳞癌裸鼠移植瘤模型,以脂质体为载体介导携放射诱导启动子调控双融合自杀基因的真核表达质粒pcDNA3.1(+)/E-CDglyTK瘤内转染,辅以3Gy放疗,腹腔注射5-氟胞嘧啶和丙氧鸟苷,描绘肿瘤生长曲线,RT-PCR检测CDglyTK的mRNA水平,免疫组化检测细胞核增殖抗原的表达,原位末端标记法检测肿瘤细胞凋亡。结果放射诱导启动子介导的CDglyTK对肿瘤生长有明显抑制作用,RT-PCR可检测到转染后肿瘤细胞CDglyTK的mRNA表达,诱导放疗增强了其表达水平,电泳条带灰度值从0.213±0.023上调至0.279±0.038(P<0.01);诱导放疗显著提高疗效,凋亡指数从21.52%上升为32.23%(P<0.01),增殖指数由28.36%下降至20.07%(P<0.01)。结论放射诱导启动子可作为基因治疗分子开关调节CDglyTK基因在人舌鳞癌裸鼠移植瘤中靶向表达,低剂量放射性照射可显著提高其疗效。 展开更多
关键词 放射诱导启动子 自杀基因 舌鳞癌 移植瘤
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放射诱导启动子介导CDglyTK基因治疗Tca8113细胞的实验研究
6
作者 余东升 黄洪章 +3 位作者 谢谦 王安训 胡晓文 刘习强 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期269-272,共4页
目的观察人工放射诱导启动子介导CDglyTK双自杀融合基因治疗Tca8113细胞的疗效,为舌鳞癌治疗探索新的途径。方法构建人工放射诱导启动子调控双融合自杀基因的真核表达质粒pcDNA3.1(+)/E-CDglyTK,用脂质体为载体转染Tca8113细胞后予以3G... 目的观察人工放射诱导启动子介导CDglyTK双自杀融合基因治疗Tca8113细胞的疗效,为舌鳞癌治疗探索新的途径。方法构建人工放射诱导启动子调控双融合自杀基因的真核表达质粒pcDNA3.1(+)/E-CDglyTK,用脂质体为载体转染Tca8113细胞后予以3Gy诱导放疗,描绘细胞生长曲线,RT-PCR检测CDglyTK的表达,流式细胞仪检测细胞的凋亡和增殖。结果诱导放疗可显著增强双自杀基因CDglyTK对Tca8113细胞的毒性作用;RT-PCR半定量分析诱导放疗增强了CDglyTK基因的mRNA表达;流式细胞检测发现治疗组细胞的凋亡指数明显高于对照组,而增殖指数则低于对照组,诱导放疗显著提升了这种差距。结论人工合成放射诱导启动子可作为基因治疗中的分子开关调节CDglyTK基因在Tca8113细胞中靶向表达。低剂量放射性照射可显著提高放射诱导启动子调控的CDglyTK基因治疗Tca8113细胞的疗效。 展开更多
关键词 放射诱导启动子 放疗 舌鳞癌
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Egr-1调控元件启动的造血因子基因转移对辐射损伤的骨髓基质细胞的保护作用 被引量：3
7
作者 杜楠 裴雪涛 +2 位作者 罗成基 周进民 程天民 《中华放射医学与防护杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期80-81,共2页
目的　观察基因修饰的骨髓基质细胞对辐射的耐受作用。方法　通过辐射对CFU F形成的影响制作细胞存活曲线分析造血因子双顺反子基因修饰的基质细胞 (HFCL FG和HFCL EFG)对辐射的耐受 ,采用3H TdR掺入法验证上述结果 ,观察转染细胞对粒... 目的　观察基因修饰的骨髓基质细胞对辐射的耐受作用。方法　通过辐射对CFU F形成的影响制作细胞存活曲线分析造血因子双顺反子基因修饰的基质细胞 (HFCL FG和HFCL EFG)对辐射的耐受 ,采用3H TdR掺入法验证上述结果 ,观察转染细胞对粒系祖细胞生长的影响。结果　HFCL FG和HFCL EFG细胞生存曲线的肩明显增宽 ,D0 值增大 ,N和Dq值增大 ,3H TdR掺入实验也验证了该结果。这种细胞对粒系祖细胞的扩增作用明显增强。结论　造血因子基因修饰的骨髓基质细胞具有抗辐射和支持造血作用。 展开更多
关键词 Egr-1调控元件启动 造血因子 基因转移 辐射损伤 骨髓基质细胞 保护作用
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