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细粒棘球绦虫EgM123基因重组狂犬病病毒SRV9株基因组全长cDNA的构建 被引量：3
1
作者 翟少华 阿尔祖古丽·阿卜力孜 +3 位作者 王楠 胡美荷 赵魁 贺文琦 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第10期3095-3102,共8页
试验旨在通过反向遗传学技术构建EgM123基因重组狂犬病病毒SRV9疫苗株,为中国农牧区的狂犬病和包虫病的有效防控提供技术手段。本试验参照狂犬病病毒SRV9株全基因组序列,利用基因合成技术分别合成狂犬病病毒的结构蛋白N、P、L基因,以及N... 试验旨在通过反向遗传学技术构建EgM123基因重组狂犬病病毒SRV9疫苗株,为中国农牧区的狂犬病和包虫病的有效防控提供技术手段。本试验参照狂犬病病毒SRV9株全基因组序列,利用基因合成技术分别合成狂犬病病毒的结构蛋白N、P、L基因,以及N-P-M基因融合片段和狂犬病病毒G基因、细粒棘球绦虫EgM123基因与增强型绿色荧光蛋白eGFP融合片段基因,通过载体酶切插入连接方法,依次将狂犬病病毒L基因、N-P-M基因融合片段和G+EgM123+eGFP基因融合片段重组于pcDNA3.1(-)表达载体上,构建EgM123基因重组狂犬病病毒SRV9全长cDNA。将合成的基因分别构建于pcDNA3.1(-)表达载体,经转化、质粒酶切、基因测序鉴定结果表明,狂犬病病毒N、P、L、N+P+M和G+EgM123+eGFP基因片段长度分别为1365、1107、6471、3160和3256 bp;EgM123基因重组狂犬病病毒全长cDNA片段长度为12465 bp,各基因片段测序结果为100%。本试验成功构建了EgM123基因重组狂犬病病毒全长cDNA片段和狂犬病病毒N、P、L基因的真核表达载体,为通过反向遗传学拯救EgM123基因重组狂犬病病毒及狂犬病和包虫病二联基因重组口服活疫苗的研制提供参考。 展开更多
关键词 狂犬病病毒srv9株 细粒棘球绦虫 EgM123基因 基因重组
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狂犬病病毒糖/核蛋白基因疫苗和IL-18在犬的免疫试验研究 被引量：2
2
作者 袁慧君 扈荣良 +2 位作者 张守峰 包世俊 涂长春 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第12期1075-1078,共4页
目的　检测狂犬病病毒糖 /核蛋白“二价”基因疫苗及IL - 18在犬体内的免疫效果 ,并确定不同包裹剂对基因疫苗免疫效果的影响。方法　本试验以 pIRES1neo和人用灭活苗分别作为阴、阳性对照 ,以糖 /核蛋白双基因共表达载体 pIGN单独或与I... 目的　检测狂犬病病毒糖 /核蛋白“二价”基因疫苗及IL - 18在犬体内的免疫效果 ,并确定不同包裹剂对基因疫苗免疫效果的影响。方法　本试验以 pIRES1neo和人用灭活苗分别作为阴、阳性对照 ,以糖 /核蛋白双基因共表达载体 pIGN单独或与IL - 18的真核表达载体pIIL18混合 ,以司苯 -甘油混合或以生理盐水溶液形式 ,按每条犬 2 0 0 μgDNA/ml,接种 3次 (其中 1组第 3次加强免疫时采用浓缩的狂犬病灭活苗 ) ,间隔 2周的免疫程序 ,经股四头肌进行注射免疫。通过间接ELISA、细胞中和试验及淋巴细胞转化试验分别检测体液和细胞免疫水平。结果与结论　结果显示 ,1.所有试验组在第 3次加强免疫后特异性抗体和中和抗体水平显著高于阴性对照组 ;pIGN pIIL18组诱导的细胞免疫水平高于无 pIIL18的 pIGN免疫组 ;2 .以司苯 -甘油作为包裹剂的基因疫苗诱导产生的免疫应答水平与裸质粒 (生理盐水溶液 )形式的基因疫苗间无显著差异 ;3.以糖 /核蛋白二价基因疫苗pIGN作为基础免疫 ,再以狂犬病浓缩灭活苗加强免疫后 ,能迅速诱导较高的体液免疫应答水平。以上结果说明 ,狂犬病病毒糖 /核蛋白“二价”DNA疫苗具有实际应用于免疫预防的潜力。 展开更多
关键词 狂犬病病毒 糖/核蛋白DNA疫苗 IL-18 犬 免疫
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狂犬病病毒SRV_9株磷酸化蛋白P基因和基质蛋白M基因重组质粒的构建
3
作者 苏晓慧 夏婷婷 +1 位作者 翟少华 简子健 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期2296-2300,共5页
【目的】重组狂犬病病毒SRV9株磷酸化蛋白的P基因和基质蛋白的M基因,为构建狂犬病毒(SRV9)全长c DNA提供技术支撑。【方法】设计重组PCR引物,分别扩增SRV9的P基因和M基因,构建重组质粒p MD18-PM,并对重组质粒进行酶切、测序鉴定。【结果... 【目的】重组狂犬病病毒SRV9株磷酸化蛋白的P基因和基质蛋白的M基因,为构建狂犬病毒(SRV9)全长c DNA提供技术支撑。【方法】设计重组PCR引物,分别扩增SRV9的P基因和M基因,构建重组质粒p MD18-PM,并对重组质粒进行酶切、测序鉴定。【结果】PCR扩增的SRV9的P基因和M基因大小分别为893 bp和608 bp,与Gen Bank已发表的狂犬病病毒SRV9(登录号:AF499686)序列比较,同源性分别为99.66%和99.67%。融合基因PM片段大小为1 501 bp,与预期大小相同,且融合完全。【结论】应用重组PCR成功融合狂犬病病毒SRV9磷酸化蛋白P基因和基质蛋白M基因,为后续构建病毒全长c DNA及感染性克隆奠定基础。 展开更多
关键词 狂犬病病毒srv9 磷酸化蛋白 基质蛋白 重组PCR 基因融合
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狂犬病弱毒SRV9对街毒暴露小鼠的治疗效果 被引量：2
4
作者 黄飞 李莹莹 +3 位作者 李芸 段铭 关振宏 张茂林 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期566-570,共5页
为评估狂犬病弱毒SRV9对狂犬病街毒暴露小鼠的治疗效果,首先将SRV9通过脑内和肌肉接种3周龄ICR小鼠检测其安全性,然后应用狂犬病街毒接种小鼠,随后在暴露后不同时间用SRV9治疗,研究其保护率。结果显示,SRV9对3周龄ICR小鼠安全,在街毒暴... 为评估狂犬病弱毒SRV9对狂犬病街毒暴露小鼠的治疗效果,首先将SRV9通过脑内和肌肉接种3周龄ICR小鼠检测其安全性,然后应用狂犬病街毒接种小鼠,随后在暴露后不同时间用SRV9治疗,研究其保护率。结果显示,SRV9对3周龄ICR小鼠安全,在街毒暴露后1、2、3d,SRV9的保护率分别为70%、60%、30%,而相同暴露时间下单剂量灭活疫苗联合免疫球蛋白的保护率分别是30%、20%、10%。对应用SRV9治疗而成活小鼠的中和抗体检测,发现所有小鼠的抗体水平均达到0.5IU以上,这些数据初步显示活弱毒SRV9具有用于暴露后治疗的潜力。 展开更多
关键词 狂犬病弱毒srv9 街毒 暴露后免疫
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狂犬病病毒SRV_9株N、P、G和L蛋白基因的克隆及表达载体构建 被引量：8
5
作者 魏玉荣 易忠 +6 位作者 符子华 马素贞 王晓萍 简子健 魏婕 王海烽 朱晶晶 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期354-358,共5页
以狂犬病病毒RNA为模板,采用RT-PCR方法克隆获取N、P、G及L蛋白编码基因核苷酸序列,应用定向克隆技术,构建真核表达载体pcDNA3.1-N、pcDNA3.1-P、pcDNA3.1-G及pcDNA3.1-L。经测序鉴定证实获取的N、P、G及L蛋白区全长核苷酸序列与文献报... 以狂犬病病毒RNA为模板,采用RT-PCR方法克隆获取N、P、G及L蛋白编码基因核苷酸序列,应用定向克隆技术,构建真核表达载体pcDNA3.1-N、pcDNA3.1-P、pcDNA3.1-G及pcDNA3.1-L。经测序鉴定证实获取的N、P、G及L蛋白区全长核苷酸序列与文献报道的一致,并成功构建了其真核表达载体。 展开更多
关键词 狂犬病病毒srv9 RT—PCR 基因序列分析 表达载体构建
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狂犬病病毒口服疫苗株SRV9全长基因质粒的构建 被引量：3
6
作者 魏玉荣 易忠 +5 位作者 符子华 马素贞 王晓萍 简子健 王海烽 魏婕 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期203-207,共5页
狂犬病病毒(Rabies Virus)是一种致死性的人畜共患病。为了深入研究狂犬病病毒的基因组特性及构建新型病毒载体,研究根据GenBank中已公布的狂犬病病毒口服疫苗株SRV9(登录号:AF499686)基因组序列设计数对引物,以SRV9病毒为材料,通过RT-... 狂犬病病毒(Rabies Virus)是一种致死性的人畜共患病。为了深入研究狂犬病病毒的基因组特性及构建新型病毒载体,研究根据GenBank中已公布的狂犬病病毒口服疫苗株SRV9(登录号:AF499686)基因组序列设计数对引物,以SRV9病毒为材料,通过RT-PCR技术将总RNA中SRV9全长基因组11,928 bp分5段扩增,分别克隆到pMD18-T或pGEM-T载体测序鉴定。测序正确后,再克隆至pBluescript skⅡ(+)载体,利用扩增片段自身内切酶切位点顺次进行全长连接,获得含SRV9全长基因组的质粒pBLSRV9。通过基因组序列同源性比较分析,SRV9株具有稳定的遗传特性,为进一步探索狂犬病病毒的复制、感染、致病及免疫分子机制和研制新型狂犬病病毒疫苗奠定良好的基础。 展开更多
关键词 狂犬病病毒srv9 RT-PCR 基因序列分析 全长基因质粒构建
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狂犬病病毒SRV_9株修饰全长基因组cDNA克隆的构建 被引量：2
7
作者 魏玉荣 易忠 +7 位作者 符子华 马素贞 简子健 胡尔玛西 王海烽 魏婕 朱晶晶 张先锋 《新疆农业大学学报》 CAS 北大核心 2010年第5期416-421,共6页
为获得狂犬病病毒(rabies virus,RV)SRV9株的基因组全长cDNA克隆并对其进行基因修饰,深入研究狂犬病病毒的基因组特性及构建新型病毒载体,本研究根据GenBank中公布的SRV9基因组序列设计数对引物,以SRV9病毒为材料,从病毒总RNA中将全长... 为获得狂犬病病毒(rabies virus,RV)SRV9株的基因组全长cDNA克隆并对其进行基因修饰,深入研究狂犬病病毒的基因组特性及构建新型病毒载体,本研究根据GenBank中公布的SRV9基因组序列设计数对引物,以SRV9病毒为材料,从病毒总RNA中将全长基因组11 928 bp分5段扩增,克隆至载体测序鉴定。测序正确后,设计引物缺失基因组Ψ区并在缺失位置插入人细胞色素C基因,又设计引物删除糖蛋白(G)胞质区(CD区)。利用引物在病毒基因组起始处添加锤头状核酶序列,在病毒序列结尾处添加了丁型肝炎核酶序列。再次测序后克隆至pcDNA3.1(+)载体,利用扩增片段自身内切酶位点顺次进行修饰后全长连接,从而获得含修饰SRV9全长基因组的质粒pcDNA3.1-SRV9,为RV感染性克隆的建立奠定了基础。 展开更多
关键词 狂犬病病毒srv9株 修饰基因组 全长基因质粒构建
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狂犬病病毒SRV_9突变株的构建与拯救
8
作者 魏玉荣 易忠 +3 位作者 符子华 马素贞 简子健 胡尔玛西 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期345-350,共6页
为构建人工修饰的狂犬病病毒,首先用人细胞色素C基因替换狂犬病病毒SRV9株基因间隔区中的非必需区域Ψ区并缺失基因组全长cDNA的糖蛋白CD编码区,得到突变型SRV9cDNA质粒。然后,该质粒与表达野生型SRV9四种结构蛋白N、P、G和L的质粒共转... 为构建人工修饰的狂犬病病毒,首先用人细胞色素C基因替换狂犬病病毒SRV9株基因间隔区中的非必需区域Ψ区并缺失基因组全长cDNA的糖蛋白CD编码区,得到突变型SRV9cDNA质粒。然后,该质粒与表达野生型SRV9四种结构蛋白N、P、G和L的质粒共转染BHK-21细胞。免疫荧光试验显示转染细胞中有大量特异性荧光,电子显微镜观察可见大量典型的狂犬病病毒粒子。上述结果表明已成功地拯救出了人工修饰的狂犬病病毒。狂犬病病毒SRV9突变株的成功构建与拯救,为新型狂犬病减毒活疫苗的研究提供了重要的实验工具。 展开更多
关键词 狂犬病病毒srv9 CD编码区 Ψ区 突变株构建 拯救
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