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结核分枝杆菌rESAT-6-CFP-10融合蛋白的制备及其血清学诊断价值 被引量：4
1
作者 石君帆 宋广忠 +3 位作者 泮结超 漏磊君 杨明瑾 李召东 《国际流行病学传染病学杂志》 CAS 2010年第6期365-367,共3页
目的 表达、纯化结核分枝杆菌rESAT-6-CFP-10（rEC）融合蛋白,评价其在结核病血清学诊断方面的应用价值.方法 用镍离子螯合亲和层析柱纯化融合蛋白,用ELISA法检测血清样本中的抗结核抗体,以37例PPD阴性患者正常血清A492＋2s为正常限值,... 目的 表达、纯化结核分枝杆菌rESAT-6-CFP-10（rEC）融合蛋白,评价其在结核病血清学诊断方面的应用价值.方法 用镍离子螯合亲和层析柱纯化融合蛋白,用ELISA法检测血清样本中的抗结核抗体,以37例PPD阴性患者正常血清A492＋2s为正常限值,评价rEC诊断的特异性及灵敏度.结果 rEC融合蛋白在大肠埃希菌中以可溶性非包涵体形式表达,表达浓度为0.19 mg/mL.rFC检测抗结核抗体在PPD阳性健康人群中的特异性为100%（30/30）,在痰涂片或细菌培养阳性和两法均阴性的结核病患者中灵敏度分别为75.56%（34/45）和67.3]%（35/52）.结论 结核分枝杆菌rEC融合蛋白以可溶性形式高效表达,具有较强的免疫反应性和较高的血清学诊断价值. 展开更多
关键词 分枝杆菌 结核 resat-6-cfp-10融合蛋白 血清学诊断
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结核分枝杆菌rESAT-6-CFP-10融合蛋白的构建和表达及其免疫反应性分析 被引量：2
2
作者 宋广忠 石君帆 +3 位作者 漏磊君 李召东 泮结超 John T.Belisle 《国际流行病学传染病学杂志》 CAS 2011年第2期100-104,共5页
目的构建结核分枝杆菌H37Rv株esat．6-cfp-10（简称ec）融合基因及其原核表达载体pET-23b（＋）．esat．6-cfp-10[以下简称pE％23b（＋）-ec]，表达、纯化融合蛋白rESAT-6-CFP-10（简称rEC），并分析其免疫反应性。方法采用基因拼接技术... 目的构建结核分枝杆菌H37Rv株esat．6-cfp-10（简称ec）融合基因及其原核表达载体pET-23b（＋）．esat．6-cfp-10[以下简称pE％23b（＋）-ec]，表达、纯化融合蛋白rESAT-6-CFP-10（简称rEC），并分析其免疫反应性。方法采用基因拼接技术将ESAT-6和CFP-IO编码基因用疏水甘氨酸接头（Gly4Ser），进行PCR扩增融合。构建TA克隆载体pMDR19-T-esat-6-cfp-10（简称pMD-19-T-ec），利用PCR、酶切和测序进行鉴定。经限制性内切酶NdeI、XhoI双酶切后将融合基因定向克隆入原核表达载体pET-23b（＋）。将构建正确的重导组质粒pET-23b（＋）-ec转化E-coliBL21（DE3）pLysE，异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPm）诱导rEC的表达。十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和Western印迹法分析其表达情况。用镍离子螯合亲和层析柱纯化融合蛋白。用Western印迹初步评价融合蛋白的免疫反应性。结果融合基因及其原核表达载体构建成功，融合蛋白以可溶性非包涵体形式表达，相对分子质量为21000，表达量约占菌体总蛋白的35％。经亲和层析后得到了纯度达97．2％的融合蛋白。Western印迹证实，融合蛋白能与确诊的肺结核患者血清发生特异性免疫应答。结论成功构建了原核表达载体pET-23b（＋）-ec，获得了rEC融合蛋白，为rEC融合蛋白在结核病诊断中的应用奠定了基础。 展开更多
关键词 分枝杆菌 结核 esttt-6-cfp10 融合基因 resat-6-cfp-10融合蛋白
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