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蜡样芽孢杆菌YF-2对荧光假单胞菌群体感应的淬灭活性
1
作者 王扬蕊 温馨 +9 位作者 白凤翎 檀茜倩 吕欣然 励建荣 董浩 孟玉琼 马睿 王树林 应米燕 杨旭 《中国食品学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2024年第8期187-196,共10页
荧光假单胞菌是生鲜水产品中常见的优势腐败菌,其致腐能力受N-酰基高丝氨酸内酯(AHLs)类群体感应系统调控。以群体感应淬灭活性为导向,利用热灭活和酸敏感试验分析菌株YF-2分泌的淬灭活性物质类型。采用结晶紫染色法和激光共聚焦显微镜... 荧光假单胞菌是生鲜水产品中常见的优势腐败菌,其致腐能力受N-酰基高丝氨酸内酯(AHLs)类群体感应系统调控。以群体感应淬灭活性为导向,利用热灭活和酸敏感试验分析菌株YF-2分泌的淬灭活性物质类型。采用结晶紫染色法和激光共聚焦显微镜技术探究菌株YF-2对荧光假单胞菌生物膜的抑制和清除作用。通过生理生化和16S rDNA对菌株YF-2进行鉴定。结果表明:菌株YF-2对荧光假单胞菌AHLs具有较强的淬灭作用,降解率为100%,且淬灭活性物质在细胞提取物(CCE)中,通过热灭活及酸敏感试验初步判断淬灭活性物质为酰基转移酶或氧化还原酶。蛋白质量浓度为20,40μg/mL和80μg/mL的CCE对C4-HSL、C6-HSL及C8-HSL的降解率在52.8%~100%范围,对荧光假单胞菌生物膜的抑制率和清除率分别在25.84%~56.63%和26.12%~59.35%范围。此外,激光共聚焦图像表明CCE使荧光假单胞菌生物膜厚度减少,生物膜结构被破坏。同时,菌株YF-2被鉴定为蜡样芽孢杆菌。本研究为应用芽孢杆菌控制水产品腐败菌荧光假单胞菌提供一定的理论依据。 展开更多
关键词 群体感应 蜡样芽孢杆菌 荧光假单胞菌 群体感应淬灭酶
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金属离子对群体感应淬灭菌Serratia sp.Z4中AisZ酶的影响
2
作者 赵一竹 刘栋 +2 位作者 杨惠婷 李亚茹 葛世玫 《温州大学学报（自然科学版）》 2023年第2期38-46,共9页
微生物通过信号分子的传递来进行群体感应交流从而调控多种生理行为活动.群体感应淬灭菌体内具有的群体感应淬灭酶可以降解信号分子,从而破坏群体感应系统,对微生物的多种活动产生影响.前期从群体感应淬灭菌Serratia sp.Z4(沙雷氏属)中... 微生物通过信号分子的传递来进行群体感应交流从而调控多种生理行为活动.群体感应淬灭菌体内具有的群体感应淬灭酶可以降解信号分子,从而破坏群体感应系统,对微生物的多种活动产生影响.前期从群体感应淬灭菌Serratia sp.Z4(沙雷氏属)中克隆到一个群体感淬灭基因aisZ并在大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)中进行了异源表达.现以aisZ基因为研究对象,以异源表达菌株E.coli BL21(DE3)/AisZ-pET-28a(+)为实验材料,通过在0.1 mmol/L的IPTG诱导菌株表达时,分别添加Zn^(2+)、Ca^(2+)和Co^(2+)等三种金属离子,从SDS-PAGA直接观察蛋白条带、生物传感器平板检测菌株对信号分子的降解、RT-qPCR检测aisZ的表达量三个方面来探究金属离子对淬灭酶AisZ的影响.结果表明,AisZ异源表达菌株在IPTG诱导时,加入0.2 mmol/L的Ca^(2+)或Co^(2+)都会抑制淬灭酶基因aisZ的表达,但Ca^(2+)和Co^(2+)在一定程度上可以提高淬灭酶的降解活性,这可能与淬灭酶的金属活性位点相关,还需要进一步研究. 展开更多
关键词 群体淬灭酶 蛋白诱导 C6-HSL 金属离子 RT-PCR
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不动杆菌3-59中群体感应信号分子淬灭酶基因克隆及其生物信息学分析
3
作者 张清霞 张迎 +2 位作者 何玲玲 蒋天萍 童蕴慧 《扬州大学学报（农业与生命科学版）》 CAS 北大核心 2018年第1期105-110,共6页
N-酰基高丝氨酸内酯(AHL)在许多植物病原细菌中作为群体感应信号分子调控致病因子的表达。在淬灭群体感应系统中,AHL可控制依赖于群体感应的植物细菌病害。以实验室保存的4个群体淬灭酶产生菌为研究对象,对β-半乳糖苷酶活性进行测定,... N-酰基高丝氨酸内酯(AHL)在许多植物病原细菌中作为群体感应信号分子调控致病因子的表达。在淬灭群体感应系统中,AHL可控制依赖于群体感应的植物细菌病害。以实验室保存的4个群体淬灭酶产生菌为研究对象,对β-半乳糖苷酶活性进行测定,结果表明菌株3-59对信号分子降解能力最强。根据16SrDNA相似性,将该菌株鉴定为不动杆菌(Acinetobactersp.)3-59。采用PCR法从菌株3-59中克隆到AHL淬灭酶基因aciJ,该基因全长1 491bp,编码496个氨基酸,预测分子量约为55.69ku,估测等电点为9.52。氨基酸序列比对结果显示,其与不动杆菌的单加氧酶相似性在90%以上。AciJ蛋白有跨膜结构域,N端无信号肽,有1个糖基化位点位于285位,有43个磷酸化位点均匀分布于整个多肽链中。 展开更多
关键词 不动杆菌 群体感应淬灭酶 酰基高丝氨酸内酯 单加氧酶
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群体感应淬灭酶YtnP对草鱼肠道菌群结构的影响 被引量：1
4
作者 赵祯 肖翎 +4 位作者 戚建华 刘韵怡 王年 郁小娟 宋增福 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第11期2817-2826,共10页
【目的】揭示群体感应淬灭作用与宿主肠道菌群结构间的作用关系,为具有群体感应淬灭作用益生菌及其淬灭酶在水产养殖上的推广应用提供理论依据。【方法】选取30尾规格为25±1 g/尾的草鱼随机分为对照组和试验组,试验组每尾草鱼腹腔... 【目的】揭示群体感应淬灭作用与宿主肠道菌群结构间的作用关系,为具有群体感应淬灭作用益生菌及其淬灭酶在水产养殖上的推广应用提供理论依据。【方法】选取30尾规格为25±1 g/尾的草鱼随机分为对照组和试验组,试验组每尾草鱼腹腔注射100μL溶解稀释后的YtnP(25μg/mL),对照组每尾草鱼腹腔注射等量的300 mmol/L分子筛缓冲液,分别在注射后24和48 h采集草鱼前肠、中肠和后肠的肠道组织及内容物,提取各肠段总DNA及PCR扩增16S rRNA序列V3~V4可变区,然后基于Illumina MiSeq高通量测序技术分析外源添加YtnP对草鱼肠道菌群多样性与丰度的影响。【结果】12份草鱼肠道样品测序共获得原始序列(Raw reads)660205条,有效序列(Valid reads)416614条;对照组和试验组样品的OTU数目分别为142±102和143±67个。在门分类水平上,对照组和试验组草鱼肠道优势菌群均为放线菌门(Actinobacteria)、梭杆菌门(Fusobacteria)、变形菌门(Proteobacteria)和厚壁菌门(Firmicutes);相对于对照组,试验组草鱼肠道中浮霉菌门(Planctomycetes)相对丰度显著增加(P<0.05,下同),放线菌门、梭杆菌门和变形菌门的相对丰度也呈升高趋势,但差异不显著(P>0.05,下同),厚壁菌门、TM7和拟杆菌门(Bacteroidetes)的相对丰度则呈下降趋势。在属分类水平上,对照组和试验组草鱼肠道均以鲸杆菌属(Cetobacterium)和诺卡氏菌属(Nocardia)为优势菌群;相对于对照组,试验组草鱼肠道中鲸杆菌属相对丰度呈升高趋势、诺卡氏菌属相对丰度呈下降趋势,但变化差异均不显著,未特指微杆菌属(UnspecifiedMicrobacteriaceae)相对丰度则显著增加。草鱼肠道菌群结构Alpha多样性分析发现,试验组样品的Chao1和ACE指数低于对照组样品,Shannon和Simpson指数略高于对照组样品,但差异均不显著;Beta多样性分析结果显示,对照组与试验组间的菌群特点存在差异,且组间区分效果明显。� 展开更多
关键词 草鱼 群体感应淬灭酶 YtnP 肠道菌群 微生态平衡
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群体感应淬灭酶AiiO的克隆表达及其发酵工艺优化
5
作者 田唱 郭婉萍 +2 位作者 陈阳 赵晶 陈明 《大连工业大学学报》 CAS 北大核心 2023年第6期409-413,共5页
群体感应淬灭酶AiiO具有降解信号分子N-酰基高丝氨酸内酯(AHL)的活性,从而抑制病原菌的致病性。为提高AiiO表达量,构建了重组工程菌Escherichia coli BL21(DE3)-pET-28a(+)-aiiO,对其发酵生产AiiO过程中诱导温度、氮源质量浓度、诱导时... 群体感应淬灭酶AiiO具有降解信号分子N-酰基高丝氨酸内酯(AHL)的活性,从而抑制病原菌的致病性。为提高AiiO表达量,构建了重组工程菌Escherichia coli BL21(DE3)-pET-28a(+)-aiiO,对其发酵生产AiiO过程中诱导温度、氮源质量浓度、诱导时机和乳糖添加量进行了优化。结果表明,在诱导温度25℃、蛋白胨20g/L和酵母粉10g/L、发酵初始时添加乳糖、乳糖添加量为5g/L的优化条件下,胞内可溶性AiiO的表达量达到374.26mg/L。 展开更多
关键词 群体感应淬灭酶 克隆表达 发酵工艺 优化
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群体感应淬灭酶克隆表达及其对铜绿假单胞菌的影响
6
作者 张宝 王志航 储卫华 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期2927-2932,共6页
【背景】由于抗生素的大量使用,导致细菌耐药性越来越强,寻找新的抗细菌感染药物成为研究热点。【目的】克隆表达群体感应淬灭酶,探究其对铜绿假单胞菌毒力及致病性的影响。【方法】利用PCR技术从产群体感应淬灭酶的芽孢杆菌QSI-1基因组... 【背景】由于抗生素的大量使用,导致细菌耐药性越来越强,寻找新的抗细菌感染药物成为研究热点。【目的】克隆表达群体感应淬灭酶,探究其对铜绿假单胞菌毒力及致病性的影响。【方法】利用PCR技术从产群体感应淬灭酶的芽孢杆菌QSI-1基因组DNA中克隆出aiiA基因,将其克隆到表达载体pET30a并导入大肠杆菌E.coliBL21(DE3)中进行诱导表达,通过镍柱亲和层析获得纯化的N-酰基高丝氨酸内酯酶。用不同浓度的淬灭酶作用于铜绿假单胞菌,检测其对铜绿假单胞菌毒力因子产生以及生物膜形成能力的影响;以秀丽隐杆线虫为模型,考察其对线虫感染铜绿假单胞菌存活率的影响。【结果】克隆表达出群体感应淬灭酶,该酶能显著抑制铜绿假单胞菌毒力因子产生和生物膜的形成,并能降低铜绿假单胞菌对感染线虫的致死率。【结论】群体感应淬灭酶可作为一种能高效抑制细菌致病性的物质,为临床治疗细菌性感染提供新的策略。 展开更多
关键词 群体感应淬灭酶 铜绿假单胞菌 毒力因子 生物膜 秀丽隐杆线虫
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