基于肠道特异性丙酮酸激酶M2基因敲除小鼠研究布拉氏酵母菌治疗溃疡性结肠炎的作用及机制 被引量：6

1

作者 步楠 范彦秋 赵春红 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2020年第12期1628-1633,共6页

目的基于肠道特异性丙酮酸激酶M2(PKM2)基因敲除小鼠研究布拉氏酵母菌治疗溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)的作用及机制.方法选择野生型C57BL/6J小鼠并随机分为PKM2-WT组、PKM2-WT+UC组、PKM2-WT+UC+布拉氏酵母菌组,选择肠道特异性... 目的基于肠道特异性丙酮酸激酶M2(PKM2)基因敲除小鼠研究布拉氏酵母菌治疗溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)的作用及机制.方法选择野生型C57BL/6J小鼠并随机分为PKM2-WT组、PKM2-WT+UC组、PKM2-WT+UC+布拉氏酵母菌组,选择肠道特异性PKM2基因敲除小鼠并随机分为PKM2-KO组、PKM2-KO+UC组、PKM2-KO+UC+布拉氏酵母菌组,采用葡聚糖硫酸钠(dextran so-dium sulfate,DSS)诱导UC模型,给予布拉氏酵母菌灌胃干预.比较各组间疾病活动指数(disease activi-ty index,DAI)、肠黏膜组织病理评分、血清中二胺氧化酶及D-乳酸含量、肠黏膜中炎症因子及紧密连接蛋白表达量的差异.结果PKM2-WT+UC组的DAI指数、肠黏膜组织病理评分、血清中二胺氧化酶及D-乳酸含量、肠黏膜中TNF-α及IL-1β含量均高于PKM2-WT组,肠黏膜中PKM2、ZO-1、Occludin、Claudin-1的表达量低于PKM2-WT组;PKM2-WT+UC+布拉氏酵母菌组的DAI指数、肠黏膜组织病理评分、血清中二胺氧化酶及D-乳酸含量、肠黏膜中TNF-α及IL-1β含量均低于PKM2-WT+UC组,肠黏膜中PKM2、ZO-1、Occludin、Claudin-1的表达量高于PKM2-WT+UC组;PKM2-KO+UC+布拉氏酵母菌组肠黏膜中PKM2不表达,DAI指数、肠黏膜组织病理评分、血清中二胺氧化酶及D-乳酸含量、肠黏膜中TNF-α及IL-1β含量均高于PKM2-WT+UC+布拉氏酵母菌组,肠黏膜中ZO-1、Occludin、Claudin-1的表达量PKM2-WT+UC+布拉氏酵母菌组.结论布拉氏酵母菌治疗DSS诱导UC小鼠能够改善肠黏膜病理改变、减轻炎症反应及黏膜屏障损伤,且这一作用与增加PKM2的表达有关. 展开更多

关键词 溃疡性结肠炎 布拉氏酵母菌 丙酮酸激酶M2 基因敲除

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甲状腺乳头状癌中M2型丙酮酸激酶的表达及其与BRAF基因突变的关系 被引量：6

2

作者 张薇 王翠芳 关海霞 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期350-354,共5页

目的:检测甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)中M2型丙酮酸激酶(M2 isoform of pyruvate kinase,PKM2)的表达,并探讨其与临床病理特征及BRAF(B-type Rafkinase)基因突变之间的关系。方法:采用免疫组织化学法分别对82例PT... 目的:检测甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)中M2型丙酮酸激酶(M2 isoform of pyruvate kinase,PKM2)的表达,并探讨其与临床病理特征及BRAF(B-type Rafkinase)基因突变之间的关系。方法:采用免疫组织化学法分别对82例PTC组织、40例正常甲状腺组织及20例结节性甲状腺肿组织中PKM2的表达情况进行检测;应用PCR法扩增获得BRAF基因,并用直接测序的方法对BRAF基因突变的情况进行检测。结果:免疫组织化学结果提示,82例PTC组织中有75例(91.5%)具有不同程度PKM2蛋白的表达,在正常甲状腺组织及结节性甲状腺肿组织中PKM2蛋白表达均为阴性。PKM2的表达与T临床分期及淋巴结转移相关(P<0.05)。携带BRAF基因突变的PTC组织中PKM2表达强度更强,BRAF基因突变组为100.0%(46/46),而BRAF基因未突变组为86.1%(31/36)(P<0.05)。结论:PKM2在PTC中表达增加,其表达与PTC的恶性程度及BRAF基因是否突变密切相关。 展开更多

关键词 甲状腺肿瘤 丙酮酸激酶 免疫组织化学 核苷酸序列分析 BRAF基因

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中间球海胆丙酮酸激酶(PK)基因克隆及其对海水酸化的响应 被引量：6

3

作者 尹文露 崔东遥 +4 位作者 李莹莹 孙景贤 李雯琪 常亚青 湛垚垚 《大连海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期360-367,共8页

为明确中间球海胆Strongylocentrotus intermedius丙酮酸激酶(Pyruvate kinase,PK)基因(SiPK)的序列特征、组织表达规律及其对海水酸化胁迫的响应方式,采用cDNA末端快速扩增RACE技术方法获得了SiPK的cDNA全长序列,同时探究了该基因在不... 为明确中间球海胆Strongylocentrotus intermedius丙酮酸激酶(Pyruvate kinase,PK)基因(SiPK)的序列特征、组织表达规律及其对海水酸化胁迫的响应方式,采用cDNA末端快速扩增RACE技术方法获得了SiPK的cDNA全长序列,同时探究了该基因在不同海水酸化[自然海水(对照组)、ΔpH=-0.3(SA1)、ΔpH=-0.4(SA2)、ΔpH=-0.5(SA3),ΔpH表示与自然海水pH的差值]胁迫条件下的响应方式。结果表明:中间球海胆PK序列全长为3616 bp,其中,包含一个编码537个氨基酸的开放阅读框(1614 bp)和两个非编码区片段(5′非编码区长度为91 bp,3′非编码区长度为1911 bp);系统进化分析发现,中间球海胆PK氨基酸序列与紫球海胆Strongylocentrotus purpuratus PK的亲缘关系最近;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)发现,成体中间球海胆PK基因在4种组织中均有表达,其相对表达量依次为性腺>管足>体腔液>肠;总PK酶活性检测显示,中间球海胆4种组织中的总PK酶活性依次为管足>性腺>体腔液>肠;海水酸化胁迫试验显示,与对照组相比,随着海水酸化程度的加重,中间球海胆肠组织中PK基因的相对表达量呈先极显著降低后极显著升高的趋势(P<0.01),但肠组织中总PK酶活性则呈极显著升高的趋势(P<0.01),性腺组织中PK基因的相对表达量随海水pH的降低而极显著降低(P<0.01),但该组织中总PK酶活性却呈现先升高后降低的趋势(P<0.05),管足和体腔液组织中PK基因的相对表达量和总PK酶活性均随海水pH的降低总体呈降低的趋势(P<0.05)。研究表明,中间球海胆可通过调节PK基因的表达及总PK酶活性响应海水酸化胁迫。 展开更多

关键词 中间球海胆 丙酮酸激酶 基因克隆 酶活性 海水酸化

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金银花丙酮酸激酶基因的克隆与表达特性分析 被引量：5

4

作者 蒋向辉 冯仕彪 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期2373-2378,共6页

采用RT-PCR和RACE技术,首次从金银花中克隆丙酮酸激酶基因全长cDNA,命名为LjPkc(GenBank登录号JQ621946.1),LjPkc基因编码区序列全长为1 533bp,共编码510个氨基酸。基于基因序列亲缘关系分析结果显示,LjPkc基因与烟草Pkc基因亲缘关系最... 采用RT-PCR和RACE技术,首次从金银花中克隆丙酮酸激酶基因全长cDNA,命名为LjPkc(GenBank登录号JQ621946.1),LjPkc基因编码区序列全长为1 533bp,共编码510个氨基酸。基于基因序列亲缘关系分析结果显示,LjPkc基因与烟草Pkc基因亲缘关系最近,属于双子叶植物Pkc基因家族。蛋白质亚细胞定位分析认为LjPkc在线粒体或叶绿体中发挥作用。LjPkc蛋白质的三维空间结构预测结果显示,LjPkc蛋白主要由α-螺旋、不规则盘绕组成。定量PCR检测发现,LjPkc基因在金银花不同组织中广泛表达,但表达水平各有差异,黄花中表达量最高。该研究丰富了Pkc基因库资源,为揭示LjPkc基因在金银花糖代谢方面的生物学作用奠定了基础。 展开更多

关键词 金银花 丙酮酸激酶基因 表达特性 定量PCR

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铁皮石斛丙酮酸激酶基因的克隆与表达分析 被引量：5

5

作者 张琳 蔡茜 +2 位作者 张大为 张岗 郭顺星 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期990-995,共6页

目的克隆珍稀濒危药用植物铁皮石斛丙酮酸激酶(pyruvate kinase,PK)基因(DoPK),并进行生物信息学分析以及检测基因在不同器官中的表达情况。方法采用RACE技术获得基因的全长cDNA;利用生物信息学软件预测蛋白的理化性质、结构域及亚细胞... 目的克隆珍稀濒危药用植物铁皮石斛丙酮酸激酶(pyruvate kinase,PK)基因(DoPK),并进行生物信息学分析以及检测基因在不同器官中的表达情况。方法采用RACE技术获得基因的全长cDNA;利用生物信息学软件预测蛋白的理化性质、结构域及亚细胞定位等分子特性;用DNASTAR 6.0和MEGA 4.0分别进行氨基酸多序列比对和进化关系分析;借助r实时荧光(real-time quantitative)PCR(RT-qPCR)分析基因在不同器官中的表达情况。结果克隆获得DoPK(GenBank注册号KC178572)的cDNA全长1 895 bp,编码一条由511个氨基酸组成的多肽,相对分子质量为55 040,等电点7.00;DoPK基因与江南卷柏、拟南芥、马铃薯和葡萄等植物的PK基因有71%、86%、89%和91%的相似性;DoPK蛋白包含保守的丙酮酸激酶结构域(21~497)和活性位点(235~247);DoPK属于胞质型的CYTOSOLIC-1亚类,与单子叶植物亲缘关系较近;DoPK基因为组成型表达,其转录本在石斛茎中的相对表达量较高,为叶中的2.29倍,根中次之,为叶中的1.28倍。结论克隆了胞质型的铁皮石斛DoPK基因的全长cDNA序列,为进一步研究其在铁皮石斛生长发育中的作用奠定基础。 展开更多

关键词 铁皮石斛 丙酮酸激酶 基因克隆 表达分析 生物信息学

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基因诊断红细胞丙酮酸激酶缺乏症及PKLR基因新突变 被引量：4

6

作者 曹玮 陆文丽 +2 位作者 苏雯 张娇 李卫 《中华实用儿科临床杂志》 CSCD 北大核心 2018年第8期589-592,共4页

目的 通过对3例红细胞丙酮酸激酶缺乏症（pyruvate kinase deficiency,PKD）患儿临床症状及PKLR基因新突变类型分析,探讨PKD的基因诊断方法.方法 应用目标序列捕获和高通量测序技术对3例PKD患儿的血液系统疾病相关基因进行测序,并预测... 目的 通过对3例红细胞丙酮酸激酶缺乏症（pyruvate kinase deficiency,PKD）患儿临床症状及PKLR基因新突变类型分析,探讨PKD的基因诊断方法.方法 应用目标序列捕获和高通量测序技术对3例PKD患儿的血液系统疾病相关基因进行测序,并预测基因突变对蛋白质功能的影响,确定患儿的致病基因型后,应用Sanger测序技术对此基因型进行验证.结果 在3例患儿中发现了5种PKLR基因突变类型,分别为c.1529G ＞A（p.RS10Q）和c.1031T＞ G（p.I344S）复合杂合突变、c.847G＞ T（p.V283F）纯合突变,c.979delC（p.L327fs）和c.604_617del（p.V202fs）复合杂合突变,其中c.1529G＞ A（p.R510Q）突变已有文献报道,其余4种突变为PKLR基因新的突变类型.c.1031T＞G（p.I344S）、c.847G＞T（p.V283F）为可能致病变异,该基因突变致病的可能性＞90％;c.979delC （p.L327fs）和c.604_617del（p.V202fs）变异为致病变异.且这5种突变经预测对蛋白质功能影响较大,均为致病突变.结论 对于临床诊断困难的PKD患儿,可通过目标序列捕获和高通量测序技术发现PKLR基因变异,并评价其致病性. 展开更多

关键词 丙酮酸激酶 突变 PKLR基因

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油茶丙酮酸激酶基因全长cDNA克隆及序列分析 被引量：2

7

作者 罗茜 谢禄山 +1 位作者 谭晓风 田晓明 《中南林业科技大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期85-90,共6页

丙酮酸激酶是糖酵解途径的关键酶,在油料作物脂肪酸合成中有重要作用。在实验室构建的油茶EST文库基础上,采用5′RACE和交错延伸PCR技术获得了油茶PK基因的全长cDNA克隆。该基因序列长2 114 bp,开放读码框为1 737 bp,编码579个氨基酸,... 丙酮酸激酶是糖酵解途径的关键酶,在油料作物脂肪酸合成中有重要作用。在实验室构建的油茶EST文库基础上,采用5′RACE和交错延伸PCR技术获得了油茶PK基因的全长cDNA克隆。该基因序列长2 114 bp,开放读码框为1 737 bp,编码579个氨基酸,蛋白分子量为63 766.5 Da,分子式为C2774H4470N784O875S30,与其他植物的PK基因具有较高的相似性。PK基因系统进化树表明,油茶与蓖麻、杨树、葡萄的亲缘关系最近。 展开更多

关键词 经济林学 油茶 丙酮酸激酶基因 基因克隆 RACE 交错延伸PCR

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丙酮酸激酶缺乏症患儿PKLR基因新的杂合突变 被引量：3

8

作者 夏忆 梁琦 +7 位作者 史宏 高钰 徐倩 金晟娴 贺钰磊 李蕙 李丹 周敏 《中华妇幼临床医学杂志（电子版）》 CAS 2019年第5期547-553,共7页

目的 探讨丙酮酸激酶缺乏症(PKD)患儿的临床与基因检测特点。方法 选择2016年4月7日,因“发现贫血2+个月”,于成都市妇女儿童中心医院接受治疗的1例PKD男性患儿为研究对象。回顾性分析其临床病例资料,包括本次住院情况、确诊经过及随访... 目的 探讨丙酮酸激酶缺乏症(PKD)患儿的临床与基因检测特点。方法 选择2016年4月7日,因“发现贫血2+个月”,于成都市妇女儿童中心医院接受治疗的1例PKD男性患儿为研究对象。回顾性分析其临床病例资料,包括本次住院情况、确诊经过及随访情况。在知情同意情况下,采集患儿及其父母外周血,采用疾病相关基因目标序列捕获和二代测序技术,筛选患儿及其父母基因突变类型,再采用Sanger法测序进行验证。以“丙酮酸激酶”“溶血性贫血”“hemolyticanemia”“genesequencing”等为关键词,检索国内外相关数据库,对建库至2019年1月各数据库中,关于PKD并有基因检测结果的文献进行复习。本研究符合2013年修订的《世界医学协会赫尔辛基宣言》。结果 ①本例患儿此次入院年龄为2+个月,目前对其随访至2岁11个月。其主要临床表现:生后即出现严重黄疸,多次血常规检查均提示重度贫血、网织红细胞比例明显升高,提示溶血性贫血。实验室检查排除其葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症、地中海贫血等其他溶血性贫血相关疾病可能。针对初诊“自身免疫性溶血性贫血”的激素治疗无效,故临床考虑本例患儿为PKD,但是丙酮酸激酶(PK)活性检测结果正常。②基因检测结果:患儿父亲PKLR基因第10外显子c.1437-1G>A突变,患儿母亲PKLR基因第6外显子c.848T>C突变。患儿存在上述2处杂合突变,分别遗传自其父母。其中,患儿及其父亲共同存在的基因异常信息,在线人类孟德尔遗传数据库中尚未见收载。结合临床表现、实验室检查及基因检测结果,对患儿的PKD诊断明确。③PKD相关文献检索结果显示:PKD临床表现多样,并且PK活性受很多因素影响,因此迄今诊断并报道的PKD病例数较少。目前,我国已报道并且有基因检测结果的PKD患者共计12例(包括本例患儿),其基因检测结果均为PKLR基因突变,83.3%(10/12)� 展开更多

关键词 丙酮酸激酶 贫血 溶血性 先天性非球形红细胞性 PKLR蛋白 人 聚合酶链反应 基因测序 儿童

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红细胞丙酮酸激酶缺陷症基因变异型的研究(英文) 被引量：3

9

作者 曹永彬 李津婴 +2 位作者 闵碧荷 王健民 龚胜蓝 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第9期963-966,共4页

目的 :了解中国人红细胞丙酮酸激酶 (pyruvate kinase,PK)缺陷症的基因变异类型。方法 :应用聚合酶链反应 -单链构象多态性 (polym erase chain reaction- single strand conformation polymorphism ,PCR- SSCP)和限制性内切酶酶切方法 ... 目的 :了解中国人红细胞丙酮酸激酶 (pyruvate kinase,PK)缺陷症的基因变异类型。方法 :应用聚合酶链反应 -单链构象多态性 (polym erase chain reaction- single strand conformation polymorphism ,PCR- SSCP)和限制性内切酶酶切方法 ,分析上海地区 8个 PK缺陷症家系红细胞 PK基因变异的情况。 结果 :在 8例 PK缺陷症家系中发现 3个泳动变位片段 ,DNA直接测序证实 3例均为错义点突变 (c DNA1330 G→ T、1339C→ A、80 9G→ C)。 结论 :3个突变点分别位于 PKL R基因第 7和第 10外显子 ,导致相应的氨基酸发生置换 (4 43Ala→ Ser、44 6 L eu→ Ile、2 70 Arg→ Pro) ,造成酶活力下降 ,红细胞糖酵解途径受阻 ,临床出现慢性溶血性贫血。 展开更多

关键词 丙酮酸激酶 基因突变 聚合酶链反应-单链构象多态性 结构 功能关系

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牛支原体武威分离株丙酮酸激酶基因的原核表达及其表达产物的功能检测 被引量：3

10

作者 包世俊 冯娜 +2 位作者 邢小勇 温峰琴 武小椿 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期341-346,共6页

为研究牛支原体(Mb)威武分离株丙酮酸激酶(PK)的生物学功能,本研究采用PCR扩增Mb武威分离株PK基因(pyk),在测序的基础上利用over-lap PCR将Mb pyk基因中色氨酸密码子(TGA)突变为可在大肠杆菌中表达的同义密码子TGG,进而构建原核表达质粒... 为研究牛支原体(Mb)威武分离株丙酮酸激酶(PK)的生物学功能,本研究采用PCR扩增Mb武威分离株PK基因(pyk),在测序的基础上利用over-lap PCR将Mb pyk基因中色氨酸密码子(TGA)突变为可在大肠杆菌中表达的同义密码子TGG,进而构建原核表达质粒pET-pyk并转化大肠杆菌Rosseta(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达后利用SDS-PAGE检测,结果显示重组蛋白His-PK以可溶性形式表达,且其相对分子质量约为57 ku。纯化该重组蛋白免疫新西兰白兔制备抗血清,采用western blot分析了PK在Mb细胞内的分布,并采用补体依赖的细胞毒试验和粘附及粘附抑制试验分别检测His-PK抗血清介导的补体杀Mb作用及His-PK抗血清对Mb粘附胎牛肺细胞(EBL)的抑制作用,结果表明Mb PK在细胞膜及细胞质中均有分布,且His-PK抗血清具有明显的介导补体杀灭Mb作用和抑制Mb对EBL的粘附作用。本研究为进一步探究Mb的生物学功能奠定了基础。 展开更多

关键词 牛支原体 丙酮酸激酶 基因 原核表达 功能检测

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4个水稻线粒体丙酮酸激酶基因(mtOsPKs)表达分析 被引量：1

11

作者 吴金山 张艳 +1 位作者 朱传凤 罗丽娟 《热带作物学报》 CSCD 2010年第5期782-788,共7页

丙酮酸激酶(Pyruvate kinase,PK)为催化糖酵解途径中最后一步反应关键酶,是植物能量释放利用的关键步骤。本研究采用生物信息学方法对水稻基因组进行扫描,获得10个具有PK极保守区域(PK-PK-C)的基因。进行氨基酸序列比对结果表明该家族... 丙酮酸激酶(Pyruvate kinase,PK)为催化糖酵解途径中最后一步反应关键酶,是植物能量释放利用的关键步骤。本研究采用生物信息学方法对水稻基因组进行扫描,获得10个具有PK极保守区域(PK-PK-C)的基因。进行氨基酸序列比对结果表明该家族所有基因的氨基酸一致性为38.4%,系统进化树分析结果也暗示该家族存在4对旁系同源基因;MEME程序分析结果表明该家族都具有完全保守的基序,这些基序排列次序基本相同。对预测定位在线粒体的4个PK基因进行半定量RT-PCR分析,结果表明,Os04g0677500基因在各器官的表达量都很高,呈组成性表达;而Os10g0571200在各器官基本不表达;Os01g0276700和Os03g0672300表达在各器官中存在差异性。4个mtOsPKs表达情况的多样性可能是水稻在进化中适应不同生存环境而产生,使线粒体作为能量加工厂的正常运转提供保证。 展开更多

关键词 水稻 丙酮酸激酶 线粒体 表达分析

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MN合并ABO新生儿溶血病并丙酮酸激酶缺乏症的基因学诊断及文献复习 被引量：2

12

作者 李小燕 赖小丽 +2 位作者 王丹 张利娜 曾选 《中国输血杂志》 CAS 2022年第3期249-253,共5页

目的探讨抗-M引起的新生儿溶血病合并丙酮酸激酶缺乏症(PKD)的临床及遗传学特点。方法回顾分析1例不明原因反复妊娠晚期不良妊娠结局的孕妇临床资料,对其胎儿进行跟踪调查,监测贫血状态、输血情况等。在知情同意情况下,采集患儿及父母... 目的探讨抗-M引起的新生儿溶血病合并丙酮酸激酶缺乏症(PKD)的临床及遗传学特点。方法回顾分析1例不明原因反复妊娠晚期不良妊娠结局的孕妇临床资料,对其胎儿进行跟踪调查,监测贫血状态、输血情况等。在知情同意情况下,采集患儿及父母外周血进行血型和血型抗体检测、新生儿溶血病检测及疾病相关基因目标序列捕获和测序。复习相关文献,总结MN新生儿溶血病及PKD疾病临床及遗传学特点。结果患儿出生时表现重度贫血、肝脾肿大、高胆红素血症,血清学检测证实存在MN合并ABO新生儿溶血病。经换血、光疗等治疗痊愈出院后患儿表现出每月输血治疗需要,诊断为溶血性贫血。基因检测分析发现患儿PKLR基因存在复合杂合突变:c.1096C>T杂合突变及c.941T>C杂合突变。且复合杂合突变分别遗传自父亲和母亲。结论抗-M引起的严重新生儿溶血病的早期临床表现与丙酮酸激酶缺乏症有类似处,临床及输血科对抗-M引起的严重新生儿溶血病的诊断应结合基因学检测排除红细胞代谢异常疾病。 展开更多

关键词 丙酮酸激酶缺乏症 PKLR基因 MN新生儿溶血

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丙酮酸激酶缺乏症2家系基因变异分析 被引量：2

13

作者 邱局 程首超 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期120-122,共3页

目的探讨丙酮酸激酶缺乏症(PKD)的临床及遗传学特点。方法回顾分析2例PKD患儿的临床资料,复习相关文献总结PKD的临床及遗传学特点。结果2例患儿均为女孩,年龄3岁8个月和3岁10个月;均表现为巩膜黄染,中度贫血(血红蛋白<60 g/L)。全外... 目的探讨丙酮酸激酶缺乏症(PKD)的临床及遗传学特点。方法回顾分析2例PKD患儿的临床资料,复习相关文献总结PKD的临床及遗传学特点。结果2例患儿均为女孩,年龄3岁8个月和3岁10个月;均表现为巩膜黄染,中度贫血(血红蛋白<60 g/L)。全外显子测序分析发现,例1的PKLR基因存在c.106 G>T以及c.817 C>T复合杂合突变,其中c.106G>T突变遗传自父亲,而c.817C>T遗传自母亲,患儿姑姑为c.106G>T突变携带者;例2 PKLR基因存在c.1279G>T以及IVS 6-1 G>T复合杂合突变,其中c.1279 G>T突变遗传自母亲,IVS 6-1 G>T突变遗传自父亲。例1的复合杂合突变未影响患者PKLR基因表达,而例2剪接位点IVS 6-1 G>T突变可能影响PKLR基因的RNA水平。结论两个PKD家系均为PKLR基因变异,基因检测有助PKD诊断。 展开更多

关键词 丙酮酸激酶缺乏症 PKLR基因 临床特点 突变

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PKM2基因在乳腺癌中的表达及临床病理特征分析 被引量：2

14

作者 殷雷 齐燕 +4 位作者 党相国 孙喜波 苗鑫 胡潇方 李湘奇 《中国医药科学》 2022年第23期19-22,共4页

目的 检测M2型丙酮酸激酶(PKM2)分子在乳腺癌组织中的表达,并探讨PKM2与乳腺癌病情进展与预后的关系。方法 选取2018年10月至2020年10月在山东第一医科大学第二附属医院行手术治疗的乳腺癌患者63例,采用Real-time PCR方法检测PKM2 mRNA... 目的 检测M2型丙酮酸激酶(PKM2)分子在乳腺癌组织中的表达,并探讨PKM2与乳腺癌病情进展与预后的关系。方法 选取2018年10月至2020年10月在山东第一医科大学第二附属医院行手术治疗的乳腺癌患者63例,采用Real-time PCR方法检测PKM2 mRNA在乳腺癌组织、癌旁组织的表达,并分析各亚组间PKM2表达的差异及其与乳腺癌临床病理参数间的关系。结果 在乳腺癌组织中,高肿瘤增殖指数(Ki-67)组表达高于低Ki-67组,淋巴结阳性组表达高于淋巴结阴性组,但差异均无统计学意义(P> 0.05);PKM2 mRNA在乳腺癌组织中的表达量显著高于癌旁组织,差异有统计学意义(P <0.05)。低Ki-67组、高Ki-67组PKM2 mRNA在乳腺癌组织中的表达量均高于乳腺癌旁组织,差异均有统计学意义(P <0.05);淋巴结阴性组、淋巴结阳性组PKM2 mRNA在乳腺癌组织中的表达量均高于乳腺癌旁组织,差异均有统计学意义(P <0.05)。结论 PKM2 mRNA在乳腺癌组织中高表达,而在Ki-67、淋巴结转移的乳腺癌组织中表达各不相同,提示PKM2基因很可能是乳腺癌靶向治疗新的潜在靶点。 展开更多

关键词 M2型丙酮酸激酶 乳腺癌 实时荧光聚合酶链反应 基因表达

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PKLR Arg498His/Ile314Thr复合杂合突变致重型丙酮酸激酶缺乏症1例并文献复习 被引量：1

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作者 陆峥菁 唐清 +1 位作者 梁凯蓉 韦红英 《广西医科大学学报》 CAS 2020年第10期1923-1927,共5页

目的:探讨丙酮酸激酶缺乏症(PKD)的临床及遗传学特点。方法:回顾分析1例PKD患儿的临床病例资料,采用疾病相关基因目标序列捕获和二代测序技术,筛选患儿及其父母基因突变类型,再用Sanger测序法进行验证。复习相关文献总结PKD的临床及遗... 目的:探讨丙酮酸激酶缺乏症(PKD)的临床及遗传学特点。方法:回顾分析1例PKD患儿的临床病例资料,采用疾病相关基因目标序列捕获和二代测序技术,筛选患儿及其父母基因突变类型,再用Sanger测序法进行验证。复习相关文献总结PKD的临床及遗传学特点。结果:入院时,患儿年龄为1个月14 d,主要临床表现为生后即出现高胆红素血症,皮肤巩膜重度黄染,多次血常规检查提示重度贫血。基因检测结果显示,PKLR基因复合杂合突变:10号外显子上的c.1493G>A(Arg498His)突变以及7号外显子上的c.941T>C(Ile314Thr)。经预测两种突变对蛋白功能影响较大,均为致病突变,其中,Arg498His是内含子A与外显子3边界处的剪接位点突变。结论:PKD的血液学特征不明显,基因检测可帮助确诊。根据ACMG指南PKLR Arg498His、PKLR Arg498His均评为致病突变。PKLR Arg498His/Arg498His复合杂合突变可导致重型PKD。 展开更多

关键词 丙酮酸激酶缺乏症 PKLR基因 突变

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丙酮酸激酶缺乏症患儿PKLR基因新发突变分析及文献复习 被引量：1

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作者 李子丰 翟晓文 +2 位作者 钱茂祥 王宏胜 张红红 《世界临床药物》 CAS 2021年第2期108-112,共5页

目的通过对1例丙酮酸激酶缺乏症(pyruvate kinase deficiency,PKD)患儿的临床症状及其PKLR基因新发突变类型的分析,探讨基因检测对确诊PKD的重要性。方法报告1例PKD患儿的诊断及新发突变位点,检索国内外报道的PKD患者,汇总并分析PKD临... 目的通过对1例丙酮酸激酶缺乏症(pyruvate kinase deficiency,PKD)患儿的临床症状及其PKLR基因新发突变类型的分析,探讨基因检测对确诊PKD的重要性。方法报告1例PKD患儿的诊断及新发突变位点,检索国内外报道的PKD患者,汇总并分析PKD临床特征及基因突变类型。结果该PKD患儿出生后重度贫血入院,实验室检查后初步诊断为先天性溶血性贫血,基因检测结果显示患儿PKLR基因存在复合杂合突变,导致163位精氨酸突变为亮氨酸,536位甘氨酸突变为门冬氨酸。Sanger测序法验证表明,患儿父亲携带核苷酸变化c.1607 C>T(p.G536D),母亲携带核苷酸变化c.488C>A(p.R163L)。笔者推测这两种突变对丙酮酸激酶蛋白功能影响较大,且c.1607 C>T属首次报道的新型突变。结论对临床诊断困难且丙酮酸激酶活性正常的PKD患儿可通过全外显子基因检测明确诊断。 展开更多

关键词 丙酮酸激酶 突变 PKLR基因

原文传递

丙氨酸和三甲胺对林可霉素发酵的影响及部分相关基因的转录水平 被引量：1

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作者 张海丹 叶蕊芳 +3 位作者 毛全贵 吕和平 刘学威 冯汇 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2014年第5期1003-1009,共7页

为了研究添加丙氨酸和三甲胺对林可霉素工业生产菌株Streptomyce lincolnensis发酵过程中的工艺参数和相关基因转录的影响,对发酵液和菌体分别进行生物效价测定以及lmbG、PK和ASA基因的表达量测定。结果表明:15 L罐发酵水平,在发酵培养2... 为了研究添加丙氨酸和三甲胺对林可霉素工业生产菌株Streptomyce lincolnensis发酵过程中的工艺参数和相关基因转录的影响,对发酵液和菌体分别进行生物效价测定以及lmbG、PK和ASA基因的表达量测定。结果表明:15 L罐发酵水平,在发酵培养24 h时添加0.1 g/L的丙氨酸处理与对照相比效价提高了23%,林肯链霉菌生物合成基因簇中的基因lmbG的转录水平远高于对照,丙酮酸激酶(PK)的基因表达量明显降低;在发酵培养24 h时添加0.02%的三甲胺处理与对照相比效价提高了30%,lmbG的转录水平明显提高,邻氨基苯甲酸合成酶(ASA)的基因转录水平降低。说明添加丙氨酸和三甲胺可以明显提高林可霉素产量,且对其生物合成基因可能具有正向调控作用。 展开更多

关键词 林可霉素 丙氨酸 三甲胺 丙酮酸激酶 邻氨基苯甲酸合成酶 lmbG基因

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家蚕微孢子虫丙酮酸激酶基因的克隆与表达特征分析 被引量：1

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作者 张志林 齐静茹 +3 位作者 尚瑞沙 陈红丽 张轶岭 沈中元 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期212-217,共6页

丙酮酸激酶(pyruvate kinase,PK)在糖酵解最后一步起着不可逆的作用,可以催化磷酸烯醇式丙酮酸将高能磷酸基团转移给ADP生成ATP和丙酮酸。通过在NCBI和家蚕微孢子虫(Nosema bombycis)数据库中对丙酮酸激酶基因的比对分析,选择家蚕微孢... 丙酮酸激酶(pyruvate kinase,PK)在糖酵解最后一步起着不可逆的作用,可以催化磷酸烯醇式丙酮酸将高能磷酸基团转移给ADP生成ATP和丙酮酸。通过在NCBI和家蚕微孢子虫(Nosema bombycis)数据库中对丙酮酸激酶基因的比对分析,选择家蚕微孢子虫丙酮酸激酶M2亚型的一个基因(NbPK-2,GenBank登录号EOB11679.1)进行克隆。生物信息学分析显示,该基因序列长度为1 359 bp,包含一个完整的开放阅读框,编码452个氨基酸,预测蛋白质等电点为7.13,相对分子质量为51.7 kD,没有信号肽;NbPK-2蛋白的二级结构预测显示其含有38%的螺旋、21%的延伸片段和40%无规则卷曲。通过qRT-PCR检测感染微孢子虫后家蚕不同发育时期的NbPK-2表达水平,发现该基因在感染后24 h内处于相对较高的表达水平,而此后表达水平开始降低,至144 h达到最低值,在168 h又有所升高。研究结果可促进对家蚕微孢子虫糖酵解途径的研究,为家蚕微粒子病的防控奠定理论基础。 展开更多

关键词 家蚕微孢子虫 丙酮酸激酶 基因克隆 生物信息学分析 表达谱

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甘蓝型油菜G3PDH和PK基因对氮肥的响应

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作者 周晓婴 付三雄 《中国农学通报》 2019年第18期110-114,共5页

为了研究氮肥施用量对油菜含油量以及相关基因表达水平的影响,本研究以甘蓝型油菜‘宁油22号’作为材料,在0 kg/hm^2、320 kg/hm^2、640 kg/hm^2氮肥水平下分别测定‘宁油22号’种子和角果皮的含油量,同时检测G3PDH和PK基因在不同氮肥... 为了研究氮肥施用量对油菜含油量以及相关基因表达水平的影响,本研究以甘蓝型油菜‘宁油22号’作为材料,在0 kg/hm^2、320 kg/hm^2、640 kg/hm^2氮肥水平下分别测定‘宁油22号’种子和角果皮的含油量,同时检测G3PDH和PK基因在不同氮肥水平下以及不同组织中的表达含量。结果发现,随着施氮量的增加,‘宁油22号’含油量下降,在0 kg/hm^2和320 kg/hm^2水平时下降不明显,在640 kg/hm^2水平时下降明显,并且随着施氮量的增加,G3PDH和PK基因表达量均增强。本研究还分别分析了在种子和角果皮中G3PDH和PK基因的比值,以及开花30天后跟开花15天后的表达比,结果表明二者均在640 kg/hm^2水平下达到最高;PK基因在种子与角果皮中的比值在640 kg/hm^2水平时达到最高,在开花30天后跟15天后的表达比在0 kg/hm^2水平时达到最高。 展开更多

关键词 氮肥水平 甘蓝型油菜 含油量 丙酮酸激酶 甘油-3-磷酸脱氢酶 RNA提取 荧光定量PCR 油脂合成基因

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丙酮酸激酶基因调控异色瓢虫生殖力的作用分析

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作者 蔡文杰 史宇星 +6 位作者 晁蕾 葛欣竺 刘智慧 于园仪 王莎莎 王世贵 唐斌 《杭州师范大学学报（自然科学版）》 CAS 2022年第2期138-143,共6页

丙酮酸激酶(pyruvate kinase,PYK)是昆虫能量代谢过程中的一个关键酶.为探究该基因调控异色瓢虫(Harmonia axyridis)生殖力的功能,采用RNA干扰技术抑制PYK1-1基因的表达,测定产卵前期、30 d总产卵量、孵化率及关键基因的表达水平,并观... 丙酮酸激酶(pyruvate kinase,PYK)是昆虫能量代谢过程中的一个关键酶.为探究该基因调控异色瓢虫(Harmonia axyridis)生殖力的功能,采用RNA干扰技术抑制PYK1-1基因的表达,测定产卵前期、30 d总产卵量、孵化率及关键基因的表达水平,并观察卵巢发育情况.将dsPYK1-1导入异色瓢虫成虫体内后,雌虫的产卵前期延长、前20 d总产卵量低于未注射组和注射ds GFP组.相较于未注射组和注射ds GFP组,dsPYK1-1组卵巢发育较迟缓、体型稍小,而卵的孵化率无显著变化.雌虫卵黄原蛋白基因Vg1的表达水平在注射后第3天显著高于ds GFP组,Vg1与Vg2的表达水平在注射后第5天和第7天均显著低于ds GFP组;雌虫卵黄原蛋白受体基因VgR在注射后第5天显著低于ds GFP组.结果表明:PYK1-1能通过能量代谢影响雌虫卵巢发育和Vg与VgR表达,进而调控异色瓢虫生殖力. 展开更多

关键词 异色瓢虫 丙酮酸激酶基因 生殖力 RNA干扰

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