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CRISPR/Cas9技术编辑淀粉合成基因PUL 被引量:2
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作者 奉宝兵 魏祥进 +6 位作者 焦桂爱 胡时开 邬亚文 谢黎虹 圣忠华 邵高能 唐绍清 《中国稻米》 2019年第5期99-104,107,共7页
利用CRISPR/Cas9技术对调控稻米脱支酶基因PUL定点编辑,获得了具有重要育种价值的PUL等位变异。首先设计2个guide RNA(gRNA)靶位点,构建OsPUL,基因定点编辑载体pC1300-Cas9。然后利用农杆菌介导侵染水稻材料中花11,提取T0代转基因植株... 利用CRISPR/Cas9技术对调控稻米脱支酶基因PUL定点编辑,获得了具有重要育种价值的PUL等位变异。首先设计2个guide RNA(gRNA)靶位点,构建OsPUL,基因定点编辑载体pC1300-Cas9。然后利用农杆菌介导侵染水稻材料中花11,提取T0代转基因植株的基因组DNA,并对编辑位点附近的DNA片段进行PCR检测及测序分析。结果表明,T0代材料中PUL的突变频率高达90%,其中纯合缺失突变率约占51%。对T1代纯合缺失突变体的千粒重性状的调查分析结果表明,部分pul的缺失突变能显著提高千粒重(大于5%)。通过RT-PCR分析T0代突变体中相关基因表达表明,目的基因PUL、支链淀粉相关基因和粒重负调控相关基因(GS3和GW8)表达降低,而粒重正调控相关基因(GL7)表达增加。不同类型pul突变体的成功创建丰富了PUL的变异类型,为水稻遗传改良提供了重要的遗传材料。 展开更多
关键词 水稻 基因编辑 CRISPR/Cas9 PUL 千粒重
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