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猪伪狂犬病病毒新流行株的分离鉴定及抗原差异性分析 被引量:193
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作者 彭金美 安同庆 +7 位作者 赵鸿远 刘益民 陈家锃 冷超粮 孙艳 常丹 田志军 童光志 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期1-4,共4页
2011年以来我国多个省份的规模化猪场发生了新生仔猪出现神经症状和死亡的现象,为确定其是否为猪伪狂犬病病毒(PRV)感染所引发,我们利用PCR方法从死亡的新生仔猪脑组织中扩增PRV的gE基因,发现被检猪场均存在PRV野毒感染。gE基因序列分... 2011年以来我国多个省份的规模化猪场发生了新生仔猪出现神经症状和死亡的现象,为确定其是否为猪伪狂犬病病毒(PRV)感染所引发,我们利用PCR方法从死亡的新生仔猪脑组织中扩增PRV的gE基因,发现被检猪场均存在PRV野毒感染。gE基因序列分析表明,从5个省14个猪场的病料中扩增的gE基因高度同源,与以往发表的相关序列比对显示,这些分离株均属于一个相对独立的分支。病料接种Vero细胞能够产生典型的细胞病变,将命名为PRV HeN1分离株接种小鼠能够引起瘙痒、死亡等伪狂犬病症状,并且对小鼠的LD50(102.37TCID50)显著低于经典强毒PRV双城株(103.83TCID50)。此外,中和试验结果显示,PRV Bartha k61活疫苗免疫猪仅能诱导对HeN1分离株低水平的中和抗体,而HeN1分离株能够诱导较高水平的中和抗体,并具有更强的交叉中和能力。根据本实验结果推测,近期各猪场流行的PRV可能存在一定的抗原变异。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 鉴定 抗原差异
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猪伪狂犬病病毒鄂A株的分离鉴定 被引量:90
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作者 陈焕春 方六荣 +3 位作者 何启盖 金梅林 索绪峰 吴美洲 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第2期156-161,共6页
从湖北省某些猪场大批死亡的新生仔猪的脑及内脏中分离到多株病毒,并用其中一代表毒株进行了全面鉴定。该病毒株在仓鼠肾传代细胞上连传15代均出现典型细胞病变,用适应BHK-21细胞的病毒接种鸡胚成纤维细胞、Hela细胞、V... 从湖北省某些猪场大批死亡的新生仔猪的脑及内脏中分离到多株病毒,并用其中一代表毒株进行了全面鉴定。该病毒株在仓鼠肾传代细胞上连传15代均出现典型细胞病变,用适应BHK-21细胞的病毒接种鸡胚成纤维细胞、Hela细胞、Vero细胞、犊牛睾丸原代细胞、猪肾传代细胞IBRS-2均出现典型细胞病变。在电镜下可见到典型的伪狂犬病病毒粒子。病毒对5-碘脱氧尿核苷、氯仿、胰蛋白酶、乙醚敏感,在pH5.0~9.0下稳定,56℃30min灭活,病毒能被伪狂犬病病毒标准阳性血清中和。病毒接种家兔和小白鼠均出现典型伪狂犬病症状。进而用所分离病毒的DNA作为模板,应用特异性引物,通过聚合酶链式反应扩增出伪狂犬病病毒gp50基因中433-651之间217bp长的特异性片段,用地高辛标记的伪狂犬病病毒DNABamHI-7片段作探针与所分离病毒的DNA进行斑点杂交,出现特异性杂交斑点。结果表明所分离病毒为伪狂犬病病毒,并将该毒株命名为猪伪狂犬病病毒鄂A株。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 分离鉴定
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免疫后发病仔猪中伪狂犬病毒的分离和鉴定 被引量:100
3
作者 童武 张青占 +5 位作者 郑浩 刘飞 姜一峰 单同领 周艳君 童光志 《中国动物传染病学报》 CAS 2013年第3期1-7,共7页
从2011年开始,全国多个省份发生了新生仔猪疑似伪狂犬病的典型症状。2012年下半年,我们从江苏省某伪狂犬病疫苗免疫猪场中发病仔猪的脑组织中分离到一株伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV),并进行了部分生物学特性分析。从发病死亡仔... 从2011年开始,全国多个省份发生了新生仔猪疑似伪狂犬病的典型症状。2012年下半年,我们从江苏省某伪狂犬病疫苗免疫猪场中发病仔猪的脑组织中分离到一株伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV),并进行了部分生物学特性分析。从发病死亡仔猪脑组织中,利用PCR技术针对PRV的gB基因和gE基因分别扩增出了两条特异性片段,经序列分析初步确定为伪狂犬病毒感染。随后,将病料上清接种Vero细胞,24 h后细胞发生变圆、空泡、合胞体等典型的细胞病变,将分离的病毒经过6轮蚀斑纯化后,用PRV抗体IFA检测显示,感染细胞产生阳性荧光反应。分离的病毒在Vero细胞上的生长滴度可以达到107.43TCID50/mL。将病毒接种小鼠很快出现了奇痒并最终死亡等伪狂犬症状,且比经典的PRV(S株)对小鼠的LD50低。对gE毒力基因序列的比对分析表明,该毒株与经典PRV强毒和疫苗株有明显差异。 展开更多
关键词 伪狂犬病毒 分离 鉴定
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猪伪狂犬病病毒变异株的分离鉴定及其gE基因的分子特征 被引量:88
4
作者 赵鸿远 彭金美 +9 位作者 安同庆 李琳 冷超粮 陈家锃 王倩 常丹 张秋月 蔡雪辉 童光志 田志军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期506-509,共4页
2014年猪伪狂犬病(PR)在我国规模化猪场大范围发生,本实验室在吉林和黑龙江省发病猪场分离到2株PRV,命名为PRV-JL1和PRV-HLJ1。病毒在Vero细胞中能够产生典型的PRV细胞病变,将PRV-JL1以103LD50的剂量感染3只6月龄绵羊,接种羊在5 d^8 d... 2014年猪伪狂犬病(PR)在我国规模化猪场大范围发生,本实验室在吉林和黑龙江省发病猪场分离到2株PRV,命名为PRV-JL1和PRV-HLJ1。病毒在Vero细胞中能够产生典型的PRV细胞病变,将PRV-JL1以103LD50的剂量感染3只6月龄绵羊,接种羊在5 d^8 d内全部死亡,均出现典型的PR症状及组织病理学变化。将PRV-JL1及PRV-HLJ1与近3年来本实验室分离鉴定的及GenBank中登录的来源于国内10多个省份的32个PRV株和17个经典PRV株的gE核苷酸序列进行比对分析,结果表明:近3年分离的PRVs与本实验室之前分离的变异株PRV-HeN1的同源性在97.1%~99.5%,而与经典株PRV双城株(PRV-S)的同源性在96.6%~99.1%。以gE氨基酸序列建立的进化树分析结果显示,近3年分离的PRVs形成一个相对独立于经典株的新分支。以上结果表明变异株已成为我国主要流行的病毒株,而且变异株均在gE蛋白的第48位和第492位各存在1个天冬氨酸的插入。该插入突变可以作为鉴定PRV变异株的分子特征,其生物学意义有待于进一步研究。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 变异 鉴定 gE 分子特征
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PCR技术检测猪伪狂犬病毒及其潜伏感染部位的研究 被引量:40
5
作者 周复春 陈焕春 +3 位作者 李学伍 方六荣 吴斌怀 济森 《动物医学进展》 CSCD 1997年第2期22-25,共4页
本研究合成了伪狂犬病毒糖蛋白gp50基因引物,该引物能够扩增糖蛋白gp50基因中434~651之间的217bpDNA片段,该片段含SalⅠ酶切位点,应用引物对几种不同的伪狂犬病毒株多聚酶链式反应(PCR)扩增结果全为... 本研究合成了伪狂犬病毒糖蛋白gp50基因引物,该引物能够扩增糖蛋白gp50基因中434~651之间的217bpDNA片段,该片段含SalⅠ酶切位点,应用引物对几种不同的伪狂犬病毒株多聚酶链式反应(PCR)扩增结果全为阳性。对自然发病猪、潜伏感染猪、伪狂犬病毒引起的死胎等46头猪161个样品进行了PCR扩增,其中46头猪71个样品PCR扩增结果为阳性。羊口疮病毒(ORFV)、牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)。 展开更多
关键词 PCR 检测 伪狂犬病毒 病毒
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应用^(32)P 标记DNA探针检测伪狂犬病病毒的研究 被引量:36
6
作者 郭万柱 冯炳芳 +1 位作者 曹军 徐重 《四川农业大学学报》 CSCD 1991年第1期52-56,共5页
本文报道建立了一种以^(32)P 标记的 PRV 全基因组 DNA 和重组质粒PSAG1-19DNA 作为探针,检测感染培养细胞中 PRV-DNA 的斑点杂交法。两种探针均能检测10Pg 的 PRVNDA,而与正常细胞抽提物无同源关系,具有较高的灵敏度和特异性。应用了... 本文报道建立了一种以^(32)P 标记的 PRV 全基因组 DNA 和重组质粒PSAG1-19DNA 作为探针,检测感染培养细胞中 PRV-DNA 的斑点杂交法。两种探针均能检测10Pg 的 PRVNDA,而与正常细胞抽提物无同源关系,具有较高的灵敏度和特异性。应用了一种快速、简便的 PRV DNA 抽提法,简化了样品制备的程序,提高了检测的可靠性。比较研究了杂交法中的一些重要条件,包括探针的选用,样品 DNA 的处埋,滤膜的选用等,为检测 PRV 提供了一种灵敏、可靠的方法。 展开更多
关键词 伪狂犬病 病毒 重组 核酸 检测
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伪狂犬病病毒鄂A株TK^-/gG^-/LacZ^+突变株的构建 被引量:34
7
作者 陈焕春 周复春 +3 位作者 方六荣 何启盖 吴斌 洪文洲 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期69-74,共6页
为了以国内地方分离株鄂A株为亲本构建伪狂犬病病毒双基因缺失株 ,采用外切酶Ⅲ和绿豆核酸酶酶切 ,构建了缺失主要毒力基因TK基因部分编码区的重组质粒 pSTK1-4 ,进一步改造成为转移质粒 pUCPB4。用HindⅢ将质粒pUCPB4线性化 ,然后与用E... 为了以国内地方分离株鄂A株为亲本构建伪狂犬病病毒双基因缺失株 ,采用外切酶Ⅲ和绿豆核酸酶酶切 ,构建了缺失主要毒力基因TK基因部分编码区的重组质粒 pSTK1-4 ,进一步改造成为转移质粒 pUCPB4。用HindⅢ将质粒pUCPB4线性化 ,然后与用EcoRI消化的伪狂犬病病毒鄂A株TK-/LacZ+ 突变株基因组DNA共转染PK- 15细胞 ,待完全病变后 ,收毒作空斑试验 ,PCR筛选TK缺失的重组病毒。重组病毒空斑纯化 3次 ,随机挑取空斑进行PCR扩增 ,证实所获得的病毒为均一的无TK-/LacZ+ 突变株污染的TK缺失的重组病毒。分别以TK缺失株病毒与鄂A野毒株为模板对TK基因进行PCR扩增 ,扩增产物经酶切分析和测序后发现 :TK缺失重组病毒的TK基因缺失了 2 0 5个碱基 ,XhoI和SalI位点消失 ,SmaI酶切片段发生变化。两种病毒在PK - 15细胞上形成空斑的大小和增殖的滴度无明显的差别。进一步提取TK缺失突变株基因组DNA ,与含gG -LacZ的转移质粒pUSKZ通过磷酸钙法共转染PK - 15细胞 ,待完全病变后 ,在X - gal存在下筛选蓝斑 ,将挑取的蓝斑纯化 3次后 ,对纯化的重组病毒进行TK、LacZ扩增 ,结果既能扩增出较以鄂A野毒株为模板扩增的要小的TK基因片段 ,同时又能扩增出LacZ基因 ,证实所得到的重组病毒为TK-/ gG-/LacZ+ 突变株。此双缺失突变株的构? 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 鄂A野毒株 TK^-/LacZ^+突变株 TK缺失突变株 TK^-/gG^-/LacZ^+突变株
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猪伪狂犬病病毒新流行变异毒株的研究进展 被引量:41
8
作者 华利忠 刘剑锋 +2 位作者 冯志新 杨若松 邵国青 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2017年第2期-,共5页
近30年内,猪伪狂犬活疫苗的应用对中国猪伪狂犬病的防控贡献巨大。2011年以来,中国许多免疫猪场相继暴发猪伪狂犬疫情,给养猪业造成了巨大的损失。研究显示最新流行的PRV毒株为变异株,部分商品化活疫苗不能对其提供完全的保护。本文详... 近30年内,猪伪狂犬活疫苗的应用对中国猪伪狂犬病的防控贡献巨大。2011年以来,中国许多免疫猪场相继暴发猪伪狂犬疫情,给养猪业造成了巨大的损失。研究显示最新流行的PRV毒株为变异株,部分商品化活疫苗不能对其提供完全的保护。本文详细介绍了2011年以来中国猪伪狂犬病的发病情况及其分子流行病学调查结果,分析了猪伪狂犬新变异株的分子生物学特性及其变异株来源,同时论述了针对PRV突变株新型疫苗的研究进展,最后对深入开展中国猪伪狂犬病控制与净化研究进行了展望。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病毒 变异株 分子生物学 疫苗
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Current Status and Challenge of Pseudorabies Virus Infection in China 被引量:41
9
作者 Lei Tan Jun Yao +4 位作者 Yadi Yang Wei Luo Xiaomin Yuan Lingchen Yang Aibing Wang 《Virologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2021年第4期588-607,共20页
Pseudorabies(PR),also called Aujeszky's disease,is a highly infectious disease caused by pseudorabies virus(PRV).Without specific host tropism,PRV can infect a wide variety of mammals,including pig,sheep,cattle,et... Pseudorabies(PR),also called Aujeszky's disease,is a highly infectious disease caused by pseudorabies virus(PRV).Without specific host tropism,PRV can infect a wide variety of mammals,including pig,sheep,cattle,etc.,thereby causing severe clinical symptoms and acute death.PRV was firstly reported in China in 1950s,while outbreaks of emerging PRV variants have been documented in partial regions since 2011,leading to significant economic losses in swine industry.Although scientists have been devoting to the design of diagnostic approaches and the development of vaccines during the past years,PR remains a vital infectious disease widely prevalent in Chinese pig industry.Especially,its potential threat to human health has also attracted the worldwide attention.In this review,we will provide a summary of current understanding of PRV in China,mainly focusing on PRV history,the existing diagnosis methods,PRV prevalence in pig population and other susceptible mammals,molecular characteristics,and the available vaccines against its infection.Additionally,promising agents including traditional Chinese herbal medicines and novel inhibitors that may be employed to treat this viral infection,are also discussed. 展开更多
关键词 pseudorabies virus(PRV) Diagnosis methods PREVALENCE Multiple-species infection Prevention and control measures
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用多重PCR鉴别猪伪狂犬病野毒与疫苗毒的研究 被引量:38
10
作者 刘丽娜 何启盖 +3 位作者 陈焕春 刘正飞 张松林 汪招雄 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2005年第2期95-98,共4页
根据基因库中的猪伪狂犬病病毒(PRV)各基因的序列,设计了与PRV的 gB、gD、gE基因序列互补的3对引物。对样品中的PRV DNA模板进行了多重PCR扩增及反应条件的优化,结果同时得到与设计相符合的3条特异性条带,分别为549 bp(gB)、429 bp(gD)... 根据基因库中的猪伪狂犬病病毒(PRV)各基因的序列,设计了与PRV的 gB、gD、gE基因序列互补的3对引物。对样品中的PRV DNA模板进行了多重PCR扩增及反应条件的优化,结果同时得到与设计相符合的3条特异性条带,分别为549 bp(gB)、429 bp(gD)、366 bp(gE)。用这3对引物对三基因缺失疫苗毒的样品DNA模板进行多次多重 PCR扩增,均能稳定得到与设计相符合的2条特异性条带。敏感性试验结果表明,多重 PCR可以检测到 106 pg三基因缺失疫苗毒或756 pg PRV野毒的核酸模板量。特异性试验结果表明,以正常对照细胞及猪圆环病毒和猪细小病毒DNA为模板进行多重PCR扩增,均无任何条带。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病 基因缺失疫苗 多重PCR PRV 引物 GE基因 酸模 扩增 鉴别 特异性
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2013年河南省猪伪狂犬野毒感染血清学调查 被引量:40
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作者 解伟涛 乔松林 +5 位作者 王寅彪 郝慧芳 梁跃 张桂悦 郭成留 张改平 《中国动物传染病学报》 CAS 2014年第6期66-70,共5页
伪狂犬病是一种严重威胁养猪业的重要传染病,2012年以来该病在河南省大面积流行,对养猪业造成了巨大影响。本研究利用g E-ELISA方法,对2013年来自河南省不同区域不同规模347个猪场的13 275份血清样本进行检测分析。结果显示血清样本阳性... 伪狂犬病是一种严重威胁养猪业的重要传染病,2012年以来该病在河南省大面积流行,对养猪业造成了巨大影响。本研究利用g E-ELISA方法,对2013年来自河南省不同区域不同规模347个猪场的13 275份血清样本进行检测分析。结果显示血清样本阳性率31.3%,猪场阳性率83.6%。种猪群带毒率高,育肥阶段伪狂犬病毒感染情况尤其严重。但一些生产管理较好的规模化猪场通过采取强化免疫,不断补入阴性后备种猪,加强生物安全等综合措施,成功防控了伪狂犬疫情。本研究对于了解当前河南省伪狂犬疫情,制订正确的防控策略提供了依据。 展开更多
关键词 伪狂犬病毒 感染 血清学调查
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伪狂犬病毒变异株(JS-2012)对仔猪的致病性研究 被引量:37
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作者 童武 郑浩 +8 位作者 单同领 刘飞 梁超 李国新 姜一峰 于海 高飞 周艳君 童光志 《中国动物传染病学报》 CAS 2014年第5期10-14,共5页
本实验室2012年从江苏省太仓市某发病猪场分离到1株变异的伪狂犬病毒,命名为JS-2012。为了研究该分离株对仔猪的致病性,将12头15日龄的伪狂犬病毒阴性仔猪随机分为3组,其中2组(每组5头猪)分别通过肌肉注射和滴鼻接种JS-2012毒,第3组2头... 本实验室2012年从江苏省太仓市某发病猪场分离到1株变异的伪狂犬病毒,命名为JS-2012。为了研究该分离株对仔猪的致病性,将12头15日龄的伪狂犬病毒阴性仔猪随机分为3组,其中2组(每组5头猪)分别通过肌肉注射和滴鼻接种JS-2012毒,第3组2头猪做空白对照。接种病毒的仔猪在攻毒后24 h体温均开始升高,4 d后开始死亡,死亡率为100%。临床观察发现,滴鼻组仔猪发病死亡明显快于肌肉注射组。对病死猪进行剖解,均可见大脑血管扩张并出血等典型的伪狂犬病病理变化。病理切片显示猪的脑蛛网膜下腔严重出血,其他各脏器也均有严重病理变化。结果表明该变异株JS-2012为伪狂犬强毒毒株。 展开更多
关键词 伪狂犬病毒 JS-2012 仔猪 致病性
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新型伪狂犬病病毒基因缺失株的构建及生物学特性研究(初报) 被引量:33
13
作者 郭万柱 徐志文 +3 位作者 王小玉 程陆 王印 汪铭书 《四川农业大学学报》 CSCD 2000年第1期1-3,10,共4页
以伪狂犬病病毒Fa株为起始材料 ,构建的 pp6 3LacZ转移载体质粒与PRVFaDNA经磷酸钙转染 ,在MDBK细胞内同源重组获得PRVFagE-/gI-/LacZ基因缺失株。以PDTK3 - 6 ,5 - 6TK缺失质粒与上述基因缺失株在TK-143细胞内同源重组 ,获得PRV -SA2 1... 以伪狂犬病病毒Fa株为起始材料 ,构建的 pp6 3LacZ转移载体质粒与PRVFaDNA经磷酸钙转染 ,在MDBK细胞内同源重组获得PRVFagE-/gI-/LacZ基因缺失株。以PDTK3 - 6 ,5 - 6TK缺失质粒与上述基因缺失株在TK-143细胞内同源重组 ,获得PRV -SA2 15等三基因缺失株。经核酸杂交证实构建是成功的。生物学特性观察显示 ,该基因缺失株对多种动物安全 ,具有良好的免疫原性 ,有望成为一株优秀的PRV疫苗候选株。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 基因缺失 疫苗 生物学特性
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Pathogenicity of a currently circulating Chinese variant pseudorabies virus in pigs 被引量:32
14
作者 Qing-Yuan Yang Zhe Sun +8 位作者 Fei-Fei Tan Ling-Hua Guo Yu-Zhou Wang Juan Wang Zhi-Yan Wang Li-Lin Wang Xiang-Dong Li Yan Xiao Ke-Gong Tian 《World Journal of Virology》 2016年第1期23-30,共8页
AIM:To test the pathogenicity of pseudorabies virus(PRV)variant HN1201 and compare its pathogenicity with a classical PRV Fa strain.METHODS:The pathogenicity of the newly-emerging PRV variant HN1201 was evaluated by d... AIM:To test the pathogenicity of pseudorabies virus(PRV)variant HN1201 and compare its pathogenicity with a classical PRV Fa strain.METHODS:The pathogenicity of the newly-emerging PRV variant HN1201 was evaluated by different inoculating routes,virus loads,and ages of pigs.The classical PRV Fa strain was then used to compare with HN1201 to determine pathogenicity.Clinical symptoms after virus infection were recorded daily and average daily body weight was used to measure the growth performance of pigs.At necropsy,gross pathology and histopathology were used to evaluate the severity of tissue damage caused by virus infection.RESULTS:The results showed that the efficient infection method of RPV HN1201 was via intranasal inoculation at 107 TCID50,and that the virus has high pathogenicity to 35-to 127-d old pigs.Compared with Fa strain,pigs infected with HN1201 showed more severe clinical symptoms and pathological lesions.Immunochemistry results revealed HN1201 had more abundant antigen distribution in extensive organs.CONCLUSION:All of the above results suggest that PRV variant HN1201 was more pathogenic to pigs than the classical Fa strain. 展开更多
关键词 pseudorabies virus PATHOGENICITY virus VARIANT GROSS pathology HISTOPATHOLOGY
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2012年-2013年我国集约化猪场猪伪狂犬病病毒感染情况的调查 被引量:35
15
作者 张显浩 陈瑞爱 +4 位作者 李冰 蔡佳跃 裴仉福 刘好朋 贺东生 《动物医学进展》 北大核心 2015年第3期133-136,共4页
为研究全国范围内中大型猪场猪伪狂犬病病毒(PRV)感染情况,在2012年—2013年,应用PCR方法及gE-ELISA试剂盒对采集自17个省126个集团或猪场的164份病料、2 212份血清进行猪伪狂犬病(PR)病原及血清野毒gE抗体的检测。结果表明,病料样品中,... 为研究全国范围内中大型猪场猪伪狂犬病病毒(PRV)感染情况,在2012年—2013年,应用PCR方法及gE-ELISA试剂盒对采集自17个省126个集团或猪场的164份病料、2 212份血清进行猪伪狂犬病(PR)病原及血清野毒gE抗体的检测。结果表明,病料样品中,PRV野毒阳性率为34.1%,PRV野毒阳性猪场占检测猪场总数的38.6%;血清样品中,PRV野毒抗体阳性猪场48个,猪场阳性率为38.1%,总样品阳性率为14.96%;2013年的感染率比2012年的高,且冬、夏两季PRV野毒阳性率较高;保育猪的PRV野毒阳性率最高,为22.34%,种母猪群PRV野毒阳性率为14.32%;华东地区PRV阳性比例最高,南方地区的PRV野毒阳性率高于北方地区。通过本次调查,说明PRV在我国的猪场依然普遍存在,对猪场进行PR的控制和净化是非常必要的。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病病毒 抗体 聚合酶链反应 酶联免疫吸附试验 调查
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伪狂犬病毒脑炎临床观察与脑脊液二代测序鉴定 被引量:33
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作者 赵伟丽 乌依罕 +15 位作者 李红芳 李世英 范思远 吴红龙 李永军 吕艳丽 韩军 张武超 赵焱 李国丽 乔小东 任海涛 朱以诚 彭斌 崔丽英 关鸿志 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第15期1152-1157,共6页
目的通过对病因未明的脑炎患者的临床评估与脑脊液二代测序(NGS)病原体筛查,诊断伪狂犬病毒(PRV)脑炎,描述其临床特征。方法选择2016年12月至2017年12月基于北京协和医院神经科牵头的脑炎多中心临床登记研究,并根据北京脑炎协助... 目的通过对病因未明的脑炎患者的临床评估与脑脊液二代测序(NGS)病原体筛查,诊断伪狂犬病毒(PRV)脑炎,描述其临床特征。方法选择2016年12月至2017年12月基于北京协和医院神经科牵头的脑炎多中心临床登记研究,并根据北京脑炎协助组脑炎诊断标准入组病因未明的脑炎病例,进一步进行病因筛查,对疑似感染性脑炎而病因未明者行脑脊液二代测序。结果共收集到4例疑似PRV脑炎病例,均为从事生猪与生猪肉产销的人员。急性起病,表现为迅速进展的重症脑炎,癫痫大发作、意识障碍、呼吸障碍,需要ICU救治,3例呼吸机支持。2例合并双侧视网膜炎,神经影像学提示灰质受累为主的坏死性脑炎,受累部位包括边缘系统、基底节区与中脑,无明显出血改变。脑脊液压力升高,脑脊液白细胞升高(6~64)×10^6/L,脑脊液细胞学为淋巴细胞性炎症。对2例患者进行脑脊液NGS,检测到伪狂犬病毒,未检测到其他病原体,其他临床病原学检测结果阴性。阿昔洛韦、静脉免疫球蛋白与激素治疗部分有效,末次随访4例患者的改良Rankin评分分别为3、5、5和6分。结论伪狂犬病毒可感染人而导致脑炎、视网膜炎。对于病因不明的脑炎病例,如果流行病学、临床表现、脑脊液与影像学符合该病,应尽快进行脑脊液PRV核酸检测,及时诊断和治疗。 展开更多
关键词 伪狂犬病毒 脑炎 脑脊液 二代测序 感染 视网膜炎
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伪狂犬病病毒四川株的分离鉴定及增殖特性 被引量:26
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作者 吴云飞 朱玲 +4 位作者 徐志文 周远成 魏浩澈 杨雪 郭万柱 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期557-564,共8页
利用PK-15细胞从四川某猪场分离到1株病毒,经PCR检测、蚀斑纯化、病毒理化试验、血清学试验和动物回归试验证实,该分离株为伪狂犬病病毒(PRV),遂将其命名为PRV-SL;用其分别感染PK-15、Vero、Marc-145、Hela、BHK-21和MDBK细胞,观察病变... 利用PK-15细胞从四川某猪场分离到1株病毒,经PCR检测、蚀斑纯化、病毒理化试验、血清学试验和动物回归试验证实,该分离株为伪狂犬病病毒(PRV),遂将其命名为PRV-SL;用其分别感染PK-15、Vero、Marc-145、Hela、BHK-21和MDBK细胞,观察病变情况及绘制PRV-SL株在不同动物细胞的一步生长曲线;用TCID50法检测PRV-SL株不同细胞毒的病毒效价。结果显示,PRV-SL株在细胞中均能增殖,但不同细胞之间CPE及病毒效价有所差异:PRV-SL株感染PK-15细胞的病毒效价最高;病毒一步生长曲线显示,PRV-SL株感染BHK-21细胞的隐蔽期最短,在猴源细胞(Vero、Marc-145)上增殖周期最长,增殖周期由短至长依次为BHK-21、MDBK、Hela、PK-15、Vero和Marc-145细胞。结果表明,PRV-SL株具有泛嗜性,在不同动物细胞上的增殖效价和增殖曲线具有明显差异,病毒在不同细胞上的增殖周期长短与病毒效价高低无相关性。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 四川 一步生长曲线
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检测伪狂犬病的PCR方法的建立及其在临床诊断中的应用 被引量:24
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作者 娄高明 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期171-176,共6页
根据文献 ,通过计算机分析设计并合成了 1对用于扩增伪狂犬病病毒 (pseudorabiesvirus ,PRV)gB 基因2 81bp片段的引物 ,上游引物 (P1)位于gB 基因的 182 7~ 185 1位 ,下游引物 (P2 )位于 gB 基因的 2 0 83~ 2 10 7位。以PRV闽A株细胞... 根据文献 ,通过计算机分析设计并合成了 1对用于扩增伪狂犬病病毒 (pseudorabiesvirus ,PRV)gB 基因2 81bp片段的引物 ,上游引物 (P1)位于gB 基因的 182 7~ 185 1位 ,下游引物 (P2 )位于 gB 基因的 2 0 83~ 2 10 7位。以PRV闽A株细胞培养毒为模板 ,筛选最佳反应条件和试剂工作浓度 ,建立了检测PRV的PCR方法。应用该方法对保存的 16株伪狂犬病强弱毒株的细胞培养液进行基因扩增 ,均获得了 2 81bp的特异性目的DNA片段。可是 ,对正常细胞与其它 6种引起猪病毒性疫病相关病毒进行检测 ,结果均为阴性 ,没有出现交叉反应。对扩增产物测序 ,结果序列与文献报道一致 ,证明PCR扩增产物和方法的特异性。对PRV闽A株细胞毒提取物DNA进行检测 ,其最低检出量为 15 8pg。用病毒分离、双抗体夹心ELISA和PCR等 3种方法检测 1994~ 2 0 0 0年期间送检的临床样品和保存的PRV毒种 ,对所获得的结果进行 χ2 分析 ,证明PCR检出率明显高于前 2种方法。对 1999~2 0 0 1年期间广东、福建、海南等省的 76个大中型猪场送检的 348份病料进行检测 ,检出阳性病料 6 8份 ,病料阳性率为 19 5 4 % ;检出阳性猪场 2 7个 ,猪场阳性率为 35 5 3%。对 2 7个阳性猪场分析发现 ,种猪场阳性率为 7 4 1%(2 / 2 7) ,商品猪场阳性率为 92 5 9% 展开更多
关键词 检测 伪狂犬病 PCR方法 临床诊断 应用
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表达猪细小病毒VP_2基因的重组伪狂犬病毒的构建及其生物学特征研究 被引量:21
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作者 吕建强 陈焕春 +3 位作者 赵俊龙 方六荣 何启盖 熊符 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期133-137,共5页
根据Bergeron等报道的猪细小病毒(PPV)基因组,设计一对包含VP2全基因的PCR引物,上下游均引入一个BamHⅠ位点,扩增得到VP2基因后,将其插入到pUSK载体中,构建了转移载体pUSK VP2。采用脂质体介导的转染方法,将伪狂犬病毒TK-/gG-/LacZ+株... 根据Bergeron等报道的猪细小病毒(PPV)基因组,设计一对包含VP2全基因的PCR引物,上下游均引入一个BamHⅠ位点,扩增得到VP2基因后,将其插入到pUSK载体中,构建了转移载体pUSK VP2。采用脂质体介导的转染方法,将伪狂犬病毒TK-/gG-/LacZ+株的基因组DNA与pUSK VP2共转染PK 15细胞,待细胞病变后收集病毒液,在空斑纯化的同时,利用检测PPVVP2基因和LacZ基因的PCR方法筛选重组病毒TK-/gG-/VP+2株,Southernblotting、SDS PAGE、Westernblotting和电镜观察鉴定重组病毒,并在不同细胞上测定重组病毒的增殖滴度,接种小鼠进行安全性试验。结果发现,外源基因VP2已成功地插入到TK-/gG-/LacZ+亲本株的基因组中,并获得了表达。表达的VP2蛋白可以与猪细小病毒阳性血清反应,而且可以自行装配成病毒样颗粒。同时发现,VP2基因的插入不影响重组病毒的增殖特性,其毒力与亲本株相当。 展开更多
关键词 伪狂犬病毒 猪细小病毒 VP2基因 猪繁殖障碍 表达
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伪狂犬病病毒Fa株胸苷激酶基因缺失株的构建 被引量:15
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作者 王琴 郭万柱 +3 位作者 娄高明 颜其贵 汪铭书 余广海 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第4期348-354,共7页
采用外切除缺失法对已克隆于pBR322中包含伪狂犬病病毒(PRV)胸苷激酶(TK)基因的BamHI-11片段(pPB11)进行改建,经筛选获得4株TK基因缺失重组质粒(pDTK3-1、pDTK3-6、pDTK3-8和... 采用外切除缺失法对已克隆于pBR322中包含伪狂犬病病毒(PRV)胸苷激酶(TK)基因的BamHI-11片段(pPB11)进行改建,经筛选获得4株TK基因缺失重组质粒(pDTK3-1、pDTK3-6、pDTK3-8和pDTK5-6),对其进行酶切鉴定和Southern转印杂交,结果其11片段迁移率均发生改变,缺失的碱基数分别约1250、1100、1250和200bp。用PRVFa-DNA或PRVFa细胞毒与重组质粒pDTK3-6DNA和pDTK5-6DNA通过磷酸钙法和脂质体法转染TK-143细胞,增殖后经5'-溴脱氧尿嘧啶(5'-BUDR)筛选得到PRVFaTK缺失株PFDTKP3-6、PFDTKP5-6、PFDTKL3-6和PFDTKL5-6。以斑点杂交技术和胸腺嘧啶核苷蚀斑放射自显影法检测证明这些缺失株均无TK活性。免疫小鼠以ELISA检测其免疫血清,抗体滴度可高达1:64。对PRVFa强毒攻击有一定保护率。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 胸苷激酶 基因缺失疫苗 家畜病毒
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