重组人胸腺素α原体外对IFN-γ,IFN-α及TNF-α的影响 被引量：5

1

作者 邱磊 郭葆玉 +4 位作者 苗红 道书艳 张冉 袁鹏群 杨旭 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期326-328,共3页

目的　体外观察重组人胸腺素α原 (prothymosinα ,ProTα)对几种重要细胞因子分泌的影响。方法　用脾淋巴细胞、脾巨噬细胞及腹腔巨噬细胞 ,以ELISA法检测ProTα对IFN γ ,IFN α和TNF α分泌的影响。结果　 1× 10 - 7mol·L-... 目的　体外观察重组人胸腺素α原 (prothymosinα ,ProTα)对几种重要细胞因子分泌的影响。方法　用脾淋巴细胞、脾巨噬细胞及腹腔巨噬细胞 ,以ELISA法检测ProTα对IFN γ ,IFN α和TNF α分泌的影响。结果　 1× 10 - 7mol·L- 1 ProTα明显促进脾细胞分泌IFN γ(P <0 0 5 ) ,该浓度的ProTα也明显刺激小鼠脾巨噬细胞分泌IFN α(P <0 0 1) ;在小鼠腹腔巨噬细胞中 ,ProTα能明显刺激IFN α和TNF α的分泌 (P <0 0 1)。结论　ProTα对细胞因子IFN γ ,IFN α和TNF α的分泌均有促进作用。 展开更多

关键词 胸腺素α原 免疫调节 细胞因子 IFN-Γ IFN-α TNF-α

下载PDF 职称材料

人胸腺素原α的克隆、表达和活性初步研究 被引量：5

2

作者 王栋 郭满盈 +2 位作者 邱磊 吕岩 郭葆玉 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期415-417,共3页

目的:克隆人胸腺素原αcDNA并在大肠杆菌系统内表达。方法:利用RT- PCR技术从健康男性外周血PBMC中扩增胸腺素原αcDNA,纯化后用EcoRⅠ和SalⅠ双酶切PCR 产物,然后将该基因插入经同样双酶切的原核表达载体PBV220中,在PLPR 启动子控制下... 目的:克隆人胸腺素原αcDNA并在大肠杆菌系统内表达。方法:利用RT- PCR技术从健康男性外周血PBMC中扩增胸腺素原αcDNA,纯化后用EcoRⅠ和SalⅠ双酶切PCR 产物,然后将该基因插入经同样双酶切的原核表达载体PBV220中,在PLPR 启动子控制下,热诱导天然表达胸腺素原α,表达产物部分纯化后利用淋巴细胞玫瑰花结实验进行了初步的活性测定。结果:凝胶电泳显示PCR扩增产物的长度为300 bp左右,重组质粒测序结果表明,插入片段与人胸腺素原α的序列完全一致,DE3重组菌在热诱导下高效表达相对分子质量为12 000 的蛋白,该蛋白能提高淋巴细胞玫瑰花结形成率,表明具有一定活性。结论:成功克隆人胸腺素原α基因并在大肠杆菌中得到表达。 展开更多

关键词 胸腺素原α 原核表达 基因克隆

下载PDF 职称材料

乙型肝炎DNA疫苗诱导小鼠免疫反应的实验研究 被引量：3

3

作者 王斌 周霞秋 +4 位作者 诸江 谢青 臧国庆 俞红 郭清 《中华肝脏病杂志》 CAS CSCD 2001年第2期108-110,共3页

目的　探讨ＤＮＡ疫苗ｐＣＩ－Ｓ－ＩＲＥＳ－ＰｒｏＴ α接种小鼠后的免疫反应变化。方法用基因重组技术构建ＤＮＡ疫苗，脂质体介导转染ＮＩＨ－３Ｔ３细胞，并给小鼠进行ＤＮＡ疫苗接种。ＥＬＩＳＡ检测ＨＢｓＡｇ、抗－ＨＢｓ，Ｒ... 目的　探讨ＤＮＡ疫苗ｐＣＩ－Ｓ－ＩＲＥＳ－ＰｒｏＴ α接种小鼠后的免疫反应变化。方法用基因重组技术构建ＤＮＡ疫苗，脂质体介导转染ＮＩＨ－３Ｔ３细胞，并给小鼠进行ＤＮＡ疫苗接种。ＥＬＩＳＡ检测ＨＢｓＡｇ、抗－ＨＢｓ，ＲＴ－ＰＣＲ检测ｐＣＩ－Ｓ－ＩＲＥＳ－ＰｒｏＴ α的表达。结果 ｐＣＩ－Ｓ－ＩＲＥＳ－ ＰｒｏＴ α、ｐＣＩ－Ｓ在细胞中高效表达， ｐＣＩ－Ｓ－ＩＲＥＳ－ＰｒｏＴ α接种小鼠产生的体液反应和特异Ｔ淋巴细胞增值反应强于ｐＣＩ－Ｓ组。结论 ＰｒｏＴ α可增强接种小鼠的免疫反应。 展开更多

关键词 DNA疫苗 乙型肝炎 表面抗原 胸腺肽α原

原文传递

胸腺素α原的研究进展 被引量：3

4

作者 杨晓征 吴军 熊凌霜 《生物技术通讯》 CAS 2006年第3期443-446,共4页

胸腺素α原(ProTα)是一种在哺乳动物细胞中广泛分布、结构保守的酸性小分子蛋白,是胸腺素α1(Tα1)的前体蛋白。目前在细胞内和细胞外均已发现了ProTα。在胞内,ProTα作为一种核蛋白,参与对细胞周期的调节,促进细胞增殖;在胞外,ProT... 胸腺素α原(ProTα)是一种在哺乳动物细胞中广泛分布、结构保守的酸性小分子蛋白,是胸腺素α1(Tα1)的前体蛋白。目前在细胞内和细胞外均已发现了ProTα。在胞内,ProTα作为一种核蛋白,参与对细胞周期的调节,促进细胞增殖;在胞外,ProTα通过潜在的膜受体调节免疫应答,促进IFN-γ、TNF-α、IL-2等细胞因子的产生,进而增强细胞和体液免疫应答。但该蛋白的分泌机制、受体以及信号通路还有待研究。 展开更多

关键词 胸腺素α原 胸腺素 免疫调节

下载PDF 职称材料

胸腺素а原的生物学活性及基因表达谱芯片分析 被引量：3

5

作者 邱磊 郭葆玉 +4 位作者 苗红 道书艳 张冉 袁鹏群 杨旭 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期639-642,共4页

目的 :对一个新的胸腺素α原 (human prothymosinα,Pro Tα)进行生物学活性研究及基因表达谱分析。 方法 :用体外刺激小鼠脾细胞增殖进行实验及 EL ISA法检测 Pro Tα对 IL - 2和 TNF-α的诱导分泌作用 ,并用基因芯片技术对其表达谱进... 目的 :对一个新的胸腺素α原 (human prothymosinα,Pro Tα)进行生物学活性研究及基因表达谱分析。 方法 :用体外刺激小鼠脾细胞增殖进行实验及 EL ISA法检测 Pro Tα对 IL - 2和 TNF-α的诱导分泌作用 ,并用基因芯片技术对其表达谱进行分析。结果 :Pro Tα对小鼠脾细胞有明显的促进增殖作用 ,对 IL - 2和 TNF-α有明显的诱导分泌作用 (P<0 .0 1)。基因芯片研究发现 Pro Tα对蛋白酪氨酸磷酸酶基因、淋巴细胞抗原 6复合体、增殖相关基因 A等的表达有上调作用。 结论 :该新型Pro Tα在体外实验中有免疫调节活性 ,并诱导一些基因的表达。 展开更多

关键词 胸腺素α原 生物学活性 基因表达谱 芯片分析

下载PDF 职称材料

胸腺素α原基因的克隆及在大肠杆菌中的融合表达 被引量：3

6

作者 李俊燕 周克夫 《厦门大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期722-725,共4页

胸腺素α原(ProTα)作为一种免疫增强剂,对各种免疫缺陷疾病、病毒感染以及肿瘤都具有一定的作用.此外ProTα可以作为核蛋白参与细胞增殖,在肿瘤的预测、诊断及治疗中有一定应用.根据人胸腺素α原已发表的核苷酸序列,设计了一对特异性引... 胸腺素α原(ProTα)作为一种免疫增强剂,对各种免疫缺陷疾病、病毒感染以及肿瘤都具有一定的作用.此外ProTα可以作为核蛋白参与细胞增殖,在肿瘤的预测、诊断及治疗中有一定应用.根据人胸腺素α原已发表的核苷酸序列,设计了一对特异性引物(P1/P2),应用RT-PCR法从中国人外周血中克隆到ProTα基因,将扩增产物连接到pMD18-T载体中并转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性重组质粒进行序列测定;同时用EcoRI和BamHI双酶切PCR产物,将该基因片断插入经同样双酶切的质粒pGEX 6P-1中,转化大肠杆菌BL21中进行表达.结果表明,克隆到的ProTα基因与参考的氨基酸同源性为99.70%;原核表达产物经过SDS-PAGE电泳分析,融合蛋白分子量为37 ku,主要以可溶形式存在. 展开更多

关键词 胸腺素α原 克隆 融合表达

下载PDF 职称材料

胸腺素α原作为乙型肝炎表面抗原佐剂的研究 被引量：3

7

作者 靳彦文 陈婷 +2 位作者 李平 马清钧 曹诚 《生物技术通讯》 CAS 2008年第4期497-499,共3页

目的:研究胸腺素α原(ProTα)作为佐剂对重组乙型肝炎表面抗原(HBsAg)诱导小鼠产生乙型肝炎表面抗体(抗-HBs)的影响。方法:以纯系BALB/c小鼠为免疫对象,分组情况为:①HBsAg组(1μgHBsAg);②0.1μgProTα+1μgHBsAg组;③0.5μgProTα+1μ... 目的:研究胸腺素α原(ProTα)作为佐剂对重组乙型肝炎表面抗原(HBsAg)诱导小鼠产生乙型肝炎表面抗体(抗-HBs)的影响。方法:以纯系BALB/c小鼠为免疫对象,分组情况为:①HBsAg组(1μgHBsAg);②0.1μgProTα+1μgHBsAg组;③0.5μgProTα+1μgHBsAg组;④1μgProTα+1μgHBsAg组;⑤铝佐剂组(1μgVacon疫苗);⑥1μgPro-Tα+1μgVacon疫苗组;每组10只小鼠,分别于0、2周各肌肉注射免疫1次。采用ELISA法检测血清抗-HBs滴度(即IgG亚类IgG1和IgG2a)。结果:与单独注射HBsAg组相比,1μgProTα+1μgHBsAg组抗-HBs总抗体滴度明显增高(P<0.05),抗体持续时间更长,且ProTα可以平衡Th1和Th2免疫反应;2组间IgG1/IgG2a差异显著(P<0.05)。与铝佐剂相比,ProTα增强了小鼠对HBsAg的反应性,提高抗-HBs阳转率。结论:ProTα在增强小鼠抗-HBs产生的同时,提高细胞免疫反应,提示ProTα是一种很有潜力的HBsAg佐剂。 展开更多

关键词 胸腺素α原 乙型肝炎表面抗原 佐剂

下载PDF 职称材料

前胸腺素α在人卵巢癌中的表达、分布及其与肿瘤分级的相关性 被引量：3

8

作者 张卓梅 何飞 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2012年第7期888-891,共4页

目的检测人卵巢癌组织中前胸腺素α(Prothymosinα,PTMA)的表达、分布,并分析其与肿瘤分级的相关性。方法利用卵巢癌组织微阵列,从2块巢癌组织标本和1块癌旁正常组织标本中共获取172份卵巢癌组织和8份癌旁正常组织,对每份肿瘤组织进行... 目的检测人卵巢癌组织中前胸腺素α(Prothymosinα,PTMA)的表达、分布,并分析其与肿瘤分级的相关性。方法利用卵巢癌组织微阵列,从2块巢癌组织标本和1块癌旁正常组织标本中共获取172份卵巢癌组织和8份癌旁正常组织,对每份肿瘤组织进行病理分级和确定组织类型。采用Western blot法检测卵巢癌和癌旁正常组织中PTMA蛋白的表达水平;免疫组化法检测卵巢癌组织中PTMA蛋白表达的分布。结果 172份卵巢癌组织标本中,病理分级Ⅰ级22份,Ⅱ级67份,Ⅲ级83份,除4份为子宫内膜腺癌外(均为Ⅱ级),其余均为乳头状腺癌。癌旁正常组织中PTMA的表达量明显低于卵巢癌组织,且差异有统计学意义(P<0.01)。8份癌旁正常组织标本中,5份(62.5%)细胞核染色阳性,多出现在卵巢上皮细胞中,3份染色阴性;172份卵巢癌组织标本中,164份(95.3%)为阳性表达,其中细胞核表达44份,细胞质表达40份,混合表达80份;肿瘤分级与PTMA的分布明显相关(P<0.01),卵巢癌Ⅲ级多为混合型分布;卵巢癌Ⅰ级PTMA蛋白的表达水平明显高于卵巢癌Ⅱ、Ⅲ级,且差异有统计学意义(P<0.01)。结论与癌旁正常组织相比,卵巢癌组织中PTMA蛋白的表达增强,在不同分级的肿瘤组织中,PTMA蛋白的表达分布有变化,为进一步研究其在卵巢癌组织中异常表达的临床意义奠定了基础。 展开更多

关键词 前胸腺素α 卵巢癌 组织微阵列

原文传递

胸腺素α原融合蛋白基因表达、纯化与生物学活性 被引量：2

9

作者 王先远 刘佃辛 +3 位作者 金宏 马清钧 顾景范 高兰兴 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期495-498,共4页

胸腺素α原及胸腺九肽在体内免疫方面有重要作用 .根据大肠杆菌遗传密码的偏爱性 ,设计并人工合成了胸腺素α原及胸腺九肽融合蛋白的特异引物 .以胸腺素α原cDNA为模板 ,应用PCR及分子克隆技术构建了该融合蛋白的编码基因 ,将其插入pBV2... 胸腺素α原及胸腺九肽在体内免疫方面有重要作用 .根据大肠杆菌遗传密码的偏爱性 ,设计并人工合成了胸腺素α原及胸腺九肽融合蛋白的特异引物 .以胸腺素α原cDNA为模板 ,应用PCR及分子克隆技术构建了该融合蛋白的编码基因 ,将其插入pBV2 2 0质粒 ,转化大肠杆菌 ,通过温度诱导使该融合蛋白高效表达 ,并对表达产物进行了高效特异性纯化 .运用MTT法初步测定了该融合蛋白的活性 .结果表明 ,该融合蛋白对氢化可的松诱导的胸腺细胞损伤有一定的保护作用 。 展开更多

关键词 胸腺素α原 融合蛋白 基因表达 纯化 生物学活性

下载PDF 职称材料

膀胱移行细胞癌组织中前胸腺素α的表达及其临床意义 被引量：1

10

作者 林哲 邓玮明 +1 位作者 何娅娣 李辽源 《临床泌尿外科杂志》 2012年第8期598-600,共3页

研究前胸腺素α(PTMA)在膀胱移行细胞癌组织中的表达情况,并分析其与膀胱癌临床病理特征的关系。方法:选择96例膀胱移行细胞癌标本,10例癌旁正常膀胱组织标本。采用免疫组化检测膀胱癌和癌旁正常组织中PTMA蛋白的表达。癌标本中非肌层... 研究前胸腺素α(PTMA)在膀胱移行细胞癌组织中的表达情况,并分析其与膀胱癌临床病理特征的关系。方法:选择96例膀胱移行细胞癌标本,10例癌旁正常膀胱组织标本。采用免疫组化检测膀胱癌和癌旁正常组织中PTMA蛋白的表达。癌标本中非肌层浸润性癌51例,肌层浸润性癌45例;单发肿瘤57例,多发肿瘤39例;G122例、G231例、G343例;非肌层浸润性癌中未复发29例,复发22例。结果:随病理分级和临床分期增加,PTMA相对表达量逐渐增高。G1、G2、G3膀胱癌PTMA蛋白表达阳性率分别为13.6%、32.3%,62.8%,均差异有统计学意义(P<0.05)。正常膀胱组织中无PTMA蛋白表达。非肌层浸润性肿瘤和肌层浸润性肿瘤中PTMA蛋白表达阳性率为37.3%和77.8%,差异有统计学意义(P=0.0002)。随访12～60个月,非肌层浸润性膀胱癌中,复发组与未复发组中PTMA蛋白高表达阳性率为68.2%和31.0%,差异有统计学意义(P<0.001))。结论:检测膀胱移行细胞癌组织中PTMA有助于膀胱癌的诊断及评估判断,PTMA蛋白高表达与膀胱尿路上皮癌的恶性程度及预后相关。 展开更多

关键词 膀胱移行细胞癌 前胸腺素α 复发

原文传递

胸腺素α原作为约氏疟原虫疫苗免疫佐剂的初步研究 被引量：1

11

作者 高吉青 刘升发 +7 位作者 韩伟 张亭 吴汉洲 王世媛 杨彩霞 洪凌仙 章军 周克夫 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期552-555,共4页

目的:研究胸腺素α原(Prothymosinα,ProTα)作为约氏疟原虫疫苗免疫佐剂的作用。方法:提取P.yoelii-17XNL全蛋白作为抗原,用胸腺素α原作为免疫佐剂,免疫小鼠。具体方案为:昆明小鼠分为4组,每组6只,A组免疫P.yoelii-17XNL全蛋白+ProT... 目的:研究胸腺素α原(Prothymosinα,ProTα)作为约氏疟原虫疫苗免疫佐剂的作用。方法:提取P.yoelii-17XNL全蛋白作为抗原,用胸腺素α原作为免疫佐剂,免疫小鼠。具体方案为:昆明小鼠分为4组,每组6只,A组免疫P.yoelii-17XNL全蛋白+ProTα;B组免疫P.yoelii-17XNL全蛋白;C组只注射ProTα;D组为空白对照,以相同体积的生理盐水代替。免疫结束后感染致死的P.yoelii-17XL,1×107个虫/只小鼠。结果:感染后的前10天A组小鼠疟原虫血症平均值要低于其他三组,且最终有3只小鼠存活下来,存活率50%,C组有一只小鼠存活,B、D组小鼠全部死亡。结论:用P.yoelii-17XNL全蛋白做抗原,用ProTα作为佐剂,比单独用P.yoelii-17XNL全蛋白对小鼠有更好的免疫保护作用,提示了ProTα可以成为一种有潜力的蛋白疫苗。 展开更多

关键词 约氏疟原虫 疫苗 胸腺素α原 免疫佐剂

下载PDF 职称材料

人胸腺素α原cDNA序列多态性分析 被引量：1

12

作者 弓雪莲 郭葆玉 +1 位作者 郭满盈 吕岩 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期92-94,共3页

目的：通过对人胸腺素α原（prothymosin-α，ProTa）cDNA测序来分析人胸腺素a原的序列多态性。方法：应用RT—PCR技术从健康人外周血及健康新生儿脐带血中扩增胸腺素α原cDNA，纯化后与克隆载体pMDl8-T连接，进行克隆测序，并与标准序... 目的：通过对人胸腺素α原（prothymosin-α，ProTa）cDNA测序来分析人胸腺素a原的序列多态性。方法：应用RT—PCR技术从健康人外周血及健康新生儿脐带血中扩增胸腺素α原cDNA，纯化后与克隆载体pMDl8-T连接，进行克隆测序，并与标准序列比对，分析其多态性。结果：序列分析结果表明，克隆的ProTa基因的核苷酸序列并不一致。与已报道的胸腺素Q原基因（NM-002823）进行比较，发现存在2种变异：I类变异包括107位单核苷酸突变（A→G）、110～121位和191～205位的核苷酸片段缺失；Ⅱ类变异为306位单核苷酸（G）缺失，多见于年龄60-80岁者。结论：本研究中Pro Tα cDNA序列存在2种变异，但并未影响其N-端前28个氨基酸。 展开更多

关键词 胸腺素α原 CDNA 序列分析

下载PDF 职称材料

质粒pCI-S-IRES-ProT_α的构建及其体外表达 被引量：1

13

作者 周霞秋 王斌 +4 位作者 谢青 俞红 臧国庆 廖丹 郭清 《上海第二医科大学学报》 CSCD 2001年第3期193-195,共3页

目的　探讨ＤＮＡ疫苗ｐＣＩ－Ｓ－ＩＲＥＳ－ＰｒｏＴα的构建及体外表达。方法　选择编码乙肝表面抗原Ｓ基因片段、内核糖体进入位点（ｉｎｔｅｒｎａｌ ｒｉｂｏｓｏｍｅ ｅｎｔｒｙ ｓｉｔｅ，ＩＲＥＳ）片段和胸腺素ａ原（ｐｒｏ... 目的　探讨ＤＮＡ疫苗ｐＣＩ－Ｓ－ＩＲＥＳ－ＰｒｏＴα的构建及体外表达。方法　选择编码乙肝表面抗原Ｓ基因片段、内核糖体进入位点（ｉｎｔｅｒｎａｌ ｒｉｂｏｓｏｍｅ ｅｎｔｒｙ ｓｉｔｅ，ＩＲＥＳ）片段和胸腺素ａ原（ｐｒｏｔｈｙｍｏｓｉｎ α，ＰｒｏＴα）基因片段，利用基因重组技术构建成ＤＮＡ质粒ｐＣＩ－Ｓ－ＩＲＥＳ－ＰｒｏＴα，并将该ＤＮＡ质粒转染成纤维细胞ＮＩＨ３Ｔ３。结果　不仅可通过ＲＴ－ＰＣＲ检测到其ＲＮＡ的表达，而且ＥＬＩＳＡ也检测到其抗原表达。结论　构建的质粒可作为ＤＮＡ疫苗，进一步用于免疫动物。 展开更多

关键词 DNA疫苗 乙肝表面抗原 胸腺素α原 质粒构建

下载PDF 职称材料

人源胸腺素α原和白介素2融合蛋白的基因克隆与原核表达

14

作者 黄明 韦剑 周飞燕 《广东药学院学报》 CAS 2008年第3期287-290,共4页

目的克隆人胸腺素α原/白介素2融合基因,构建其原核表达载体并在大肠杆菌系统中有效表达。方法采用RT-PCR方法,从人白血病细胞和人T淋巴细胞中分别扩增得到胸腺素α原/白介素2基因,利用基因重组技术将融合基因片段重组于pET42a原核表达... 目的克隆人胸腺素α原/白介素2融合基因,构建其原核表达载体并在大肠杆菌系统中有效表达。方法采用RT-PCR方法,从人白血病细胞和人T淋巴细胞中分别扩增得到胸腺素α原/白介素2基因,利用基因重组技术将融合基因片段重组于pET42a原核表达载体上,构建成pET42a-PI。经酶切、测序鉴定后,将重组质粒转化大肠杆菌Rosseta,IPTG诱导蛋白表达。表达产物经离子交换和分子筛纯化后进行Western blot分析,通过人外周血单核细胞玫瑰花结实验对融合蛋白进行了初步的活性测定。结果凝胶电泳显示PCR产物的长度约750 bp,测序结果表明,扩增片段与预期序列一致。重组菌在IPTG诱导下表达相对分子质量为28 kDa的蛋白,纯化后的融合蛋白能提高人外周血单核细胞玫瑰花结形成率,表明具有一定活性。结论成功克隆和构建了人胸腺素α原/白介素2融合基因的原核表达载体,并在原核表达系统中得到有效表达。 展开更多

关键词 胸腺素α原 白介素2 融合蛋白 表达

下载PDF 职称材料

HproTα／hIL-2融合蛋白真核载体的构建及鉴定

15

作者 周飞燕 黄明 +3 位作者 韦剑 丘力功 卢柳燕 孙希海 《广西师范大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2008年第2期76-80,共5页

利用基因重组技术构建了含信号肽的人源胸腺素α原和白介素2(proTα/IL-2)融合基因的真核表达载体pVAX-PI。用脂质体转染试剂转染COS-7细胞,转染后24、48、72、96 h采用ELISA法检测细胞培养上清中IL-2的表达情况,分别用CTLL-2依赖细胞株... 利用基因重组技术构建了含信号肽的人源胸腺素α原和白介素2(proTα/IL-2)融合基因的真核表达载体pVAX-PI。用脂质体转染试剂转染COS-7细胞,转染后24、48、72、96 h采用ELISA法检测细胞培养上清中IL-2的表达情况,分别用CTLL-2依赖细胞株/MTT法和脾细胞增殖实验测定融合蛋白IL-2和proTα活性,采用ECL western blotting分析和鉴定目的蛋白的相对分子质量大小。结果表明,转染上清在31 kDa处有特异性阳性反应条带,质粒在转染COS-7细胞后不同时间均可进行分泌表达,且于转染后48 h目的蛋白的表达量达峰值。细胞转染上清中的IL-2活性可达58 IU/mL,proTα具有促进小鼠脾脏细胞增殖的作用,可作为基因治疗药物的开发之用。 展开更多

关键词 胸腺素α原 白介素如融合蛋白 转染

下载PDF 职称材料

胸腺素α原在正常组织与肿瘤组织中的定位研究

16

作者 崔若辰 蔡报伟 +4 位作者 苏劲红 胡鑫炎 孙雨涵 郭权 周克夫 《厦门大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期474-477,共4页

检测并分析胸腺素α原(prothymosinα,ProTα)在小鼠正常肝组织与肝肿瘤组织中表达、分布的情况.取20只昆明雄性小鼠随机分为对照组和移植性肝癌模型组,每组10只,模型组接种H22肝癌组织,建立移植性肝癌模型.7d后将模型组肝癌组织和对照... 检测并分析胸腺素α原(prothymosinα,ProTα)在小鼠正常肝组织与肝肿瘤组织中表达、分布的情况.取20只昆明雄性小鼠随机分为对照组和移植性肝癌模型组,每组10只,模型组接种H22肝癌组织,建立移植性肝癌模型.7d后将模型组肝癌组织和对照组正常肝的组织取出,部分组织按常规石蜡包埋方法制片,免疫组织化学法分别检测肝癌组织与正常肝组织中ProTα的表达分布情况;部分组织按提取胞质蛋白的方法获得蛋白用于Western-blot分析.在Westernblot中,ProTα在肝癌组织细胞质的表达量明显低于正常肝组织;在免疫组织化学法中,正常肝组织的细胞核呈阴性,胞质呈强阳性;而在肝癌组织中胞核呈强阳性,胞质呈弱阳性.ProTα在正常组织与肿瘤组织中的表达分布有明显差异.由于在Western-blot中所提的蛋白主要为胞质蛋白,在癌变的组织中,ProTα主要集中在细胞核中,因此推测,当胞质中的ProTα大量表达时对于肝细胞稳定、抑制细胞发生癌变有重要功能,此结果为进一步研究ProTα在肿瘤发生和诊断中的作用提供了重要的理论依据. 展开更多

关键词 胸腺素α原 H22细胞株 肝癌 定位

下载PDF 职称材料

胸腺素α原对老龄鼠血清中甲状腺激素、糖皮质激素及雌二醇水平的影响

17

作者 郑金来 刘佃辛 +5 位作者 李君文 高兰兴 张符光 王新为 宋农 辛忠涛 《微生物学免疫学进展》 2000年第4期47-49,共3页

采用放射免疫分析检测胸腺素α原对老龄鼠甲状腺激素、糖皮质激素和雌二醇血清水平的影响。结果表明 ,与对照组相比 ,胸腺素α原可明显提高老龄鼠T3 、T4 、E2 、ACTH的血清水平 ,降低TSH和GC的水平。总之 ,胸腺素α原可以通过某一未明... 采用放射免疫分析检测胸腺素α原对老龄鼠甲状腺激素、糖皮质激素和雌二醇血清水平的影响。结果表明 ,与对照组相比 ,胸腺素α原可明显提高老龄鼠T3 、T4 、E2 、ACTH的血清水平 ,降低TSH和GC的水平。总之 ,胸腺素α原可以通过某一未明的机制调节某些激素的血清水平。 展开更多

关键词 胸腺素α原 老龄 甲状腺激素 糖皮质激素 雌二醇

下载PDF 职称材料

重组人胸腺素原α在大肠杆菌中的表达优化 被引量：13

18

作者 杨旭 郭葆玉 +2 位作者 叶正良 道书艳 张冉 《药物生物技术》 CAS CSCD 2001年第3期135-138,共4页

在 1 5L的生物反应器内 ,对重组人胸腺素原α(huPTMAα)在大肠杆菌TG 1中经IPTG诱导后的表达条件进行优化 ;应用NBS MICROS 1 5L T DR型生物反应器 (1 5L) ,用工程菌E colipGEX IN/PTMA ,研究了诱导时不同的pH、温度、搅拌速率和IPTG浓... 在 1 5L的生物反应器内 ,对重组人胸腺素原α(huPTMAα)在大肠杆菌TG 1中经IPTG诱导后的表达条件进行优化 ;应用NBS MICROS 1 5L T DR型生物反应器 (1 5L) ,用工程菌E colipGEX IN/PTMA ,研究了诱导时不同的pH、温度、搅拌速率和IPTG浓度 ,利用正交试验对发酵条件进行了优化。经 1次预试验和 9次正式试验结果表明 ,huPTMAα的表达受溶氧条件的影响较显著 ,其中搅拌速率和通气量为最大的影响因子 ,当其为 2 5 0r/min时 ,表达水平最高。经SDS PAGE和凝胶扫描发现表达蛋白占菌体蛋白的 60 %以上。该实验为工程菌的中试提供了最佳的表达诱导条件 ,对其稳定性 。 展开更多

关键词 重组人胸腺素原α 大肠杆菌 正交设计 试验 高效表达

下载PDF 职称材料

人胸腺素α原cDNA的克隆及在大肠杆菌中的表达 被引量：8

19

作者 张符光 刘佃辛 +3 位作者 宋农 王新为 张兆山 马清钧 《生物化学杂志》 CSCD 1996年第4期386-390,共5页

采用基因工程方法制取人胸腺素α原获得成功。用２０ｕｇ／ｍｌ植物血球凝集素（ＰＨＡ）和５００Ｕ／ｍｌ重组人白细胞介素２（ＩＬ－２）联合刺激人胎儿胸腺细胞，从中提取总ＲＮＡ，经反转录ＰＣＲ获得了人胸腺素α原ｃＤＮＡ；将之... 采用基因工程方法制取人胸腺素α原获得成功。用２０ｕｇ／ｍｌ植物血球凝集素（ＰＨＡ）和５００Ｕ／ｍｌ重组人白细胞介素２（ＩＬ－２）联合刺激人胎儿胸腺细胞，从中提取总ＲＮＡ，经反转录ＰＣＲ获得了人胸腺素α原ｃＤＮＡ；将之克隆入ｐＵＣ１９中，序列测定表明与已报道序列一致，进一步将之亚克隆入原核表达载体ｐＢＶ２２０，转化大肠杆菌ＤＨ５ａ．观察到在不改变氨基酸编码的前提下，增加胸腺素ａ原上游引物中Ａ、Ｔ含量，可以明显提高胸腺素α原的表达量，同时，不同培养基对它的表达也有影响。胸腺素α原在大肠杆菌中以可溶形式表达，不需复性。初步活性测定显示，它可明显刺激人外周血淋巴细胞Ｅ－玫瑰花结形成率。重组人胸腺素α原在大肠杆菌中表达，为其临床应用及基础研究奠定了基础。 展开更多

关键词 人胸腺素α原 原核表达 CDNA 制备

下载PDF 职称材料

克隆人胸腺素α原cDNA及RNA二级结构分析和带Xa因子的融合表达 被引量：7

20

作者 郭葆玉 余建国 +3 位作者 张淑英 道书艳 苗红 邱磊 《第二军医大学学报》 CSCD 北大核心 2000年第1期34-37,共4页

目的：克隆表达具有重要生物功能的胸腺素α原ｃＤＮＡ（ｈｕｍ ａｎ ｐｒｏｔｈｙｍ ｏｓｉｎα， ｈｕＰＴＭＡα）。方法：从健康中国人ＰＢＭＣｐｏｌｙ（Ａ）＋ ＲＮＡ中采用ＲＴ－ＰＣＲ法克隆ｈｕＰＴＭＡαｃＤＮＡ，并作ＲＮ... 目的：克隆表达具有重要生物功能的胸腺素α原ｃＤＮＡ（ｈｕｍ ａｎ ｐｒｏｔｈｙｍ ｏｓｉｎα， ｈｕＰＴＭＡα）。方法：从健康中国人ＰＢＭＣｐｏｌｙ（Ａ）＋ ＲＮＡ中采用ＲＴ－ＰＣＲ法克隆ｈｕＰＴＭＡαｃＤＮＡ，并作ＲＮＡ二级结构分析。结果：克隆出长度为３００ ｂｐ，编码１００ 个氨基酸的ｈｕＰＴＭＡαｃＤＮＡ，经氨基酸序列分析发现在３７～４１ 位缺失Ａｓｎ３７ －Ｇｌｙ３８ －Ａｓｎ３９ －Ａｌａ４０－Ｇｌｕ４１ 和６５～６８ 位缺失Ｇｌｕ６５－Ｇｌｕ６６ －Ｇｌｕ６７ －Ｇｌｕ６８ ，与国际基因库连接检索证明是与ｈｕＰＴＭＡα有８６．４％ 同源性的一个新亚型，融合表达蛋白的相对分子质量为３．７×１０４，有促进ＩＦＮ和ＴＮＦ产生的生物学活性。结论：本研究克隆的ｈｕＰＴＭＡαｃＤＮＡ是中国人中新发现的一个多态型基因序列，它的克隆并表达成功为今后该基因的免疫功能研究及中国人基因型研究分析提供了有用的材料。 展开更多

关键词 胸腺素α原 RNA 融合表达 克隆 CDNA

下载PDF 职称材料