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单条线虫DNA提取方法 被引量:90
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作者 王江岭 张建成 顾建锋 《植物检疫》 北大核心 2011年第2期32-35,共4页
大量线虫DNA的提取可能因线虫不纯而受到污染,溶液多次转移造成DNA损失,并且在提取过程中加入过多的溶质离子也可能对PCR扩增有干扰,从而影响下一步的研究。本研究用液氮快速冷冻单条线虫,继以85℃快速变温,用温度的剧烈变化使线虫裂解... 大量线虫DNA的提取可能因线虫不纯而受到污染,溶液多次转移造成DNA损失,并且在提取过程中加入过多的溶质离子也可能对PCR扩增有干扰,从而影响下一步的研究。本研究用液氮快速冷冻单条线虫,继以85℃快速变温,用温度的剧烈变化使线虫裂解,再以蛋白酶K降解蛋白质,提高了获得的DNA的纯度和数量。通过多种线虫的验证试验表明,该方法高效、快速、稳定。该试验方法有如下优点:(1)使用Taq酶附带的PCR Buffer代替WLB裂解液和SDS裂解液,减少了配置的不确定性和外来离子的影响。(2)整个提取过程在一个PCR管中完成,并可直接用于PCR扩增,没有溶液的转移和过多的溶质添加,减少污染和对后续PCR的影响。(3)使用变温处理代替其他手工破碎方法,减少了外界污染物的掺入,不需要手工操作技巧。与另外2种提取线虫DNA的蛋白酶K方法相比,本研究提取单条线虫DNA的时间短,效率高,PCR扩增结果稳定可靠,符合快速检测的需求;此外,本研究所使用的方法降解单条线虫蛋白质彻底,提取DNA数量多,稀释32倍仍能扩增出明显的条带,可进行多次分子试验研究。 展开更多
关键词 线虫 DNA提取 方法优化 蛋白酶k 温度
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4种硅藻检验方法的比较研究 被引量:19
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作者 王恩银 孟祥志 《中国法医学杂志》 CSCD 2005年第5期274-277,I0004,共5页
目的比较硝酸乙醇法、酶消化法、“破机罐”法和Soluene-350法在检验硅藻中各自的优缺点,为法医实际办案提供理论依据。方法取家兔肝、肾和骨髓3种组织各2g,分别用上述4种方法消化,比较4种不同方法分别将组织这些完全消化所需要的时间... 目的比较硝酸乙醇法、酶消化法、“破机罐”法和Soluene-350法在检验硅藻中各自的优缺点,为法医实际办案提供理论依据。方法取家兔肝、肾和骨髓3种组织各2g,分别用上述4种方法消化,比较4种不同方法分别将组织这些完全消化所需要的时间、消化能力、对硅藻的检出率以及对硅藻的破坏程度。结果消化时间以Solu-ene-350法耗时最长,其次是酶消化法,硝酸乙醇法和破机罐法耗时最短。4种方法消化能力的强弱依次是“破机罐”法、硝酸乙醇法、酶消化法、Soluene-350法。对梅尼小环藻(淡水)和桥弯藻(淡水),酶消化法的检出率最高,硝酸乙醇法其次,“破机罐”法和Soluene-350法最低。对舟形藻(海水),酶消化法的检出率高,其余3种方法几乎没检测到。扫描电镜观察:酶消化法对硅藻结构几乎没有破坏。其余3种方法对硅藻均有不同程度的破坏。结论从降低成本、提高检测效率角度,应选择“破机罐”法和硝酸乙醇法;从安全性和环保角度,或可疑水样为海水及硅藻密度较小时,应选择酶消化法;Soluene-350法因耗时长、成本高且硅藻检出率低,不适于在基层法医中推广。 展开更多
关键词 法医病理学 溺死 硅藻 蛋白酶k 扫描电镜 检验方法 硅藻 酶消化法 扫描电镜观察 消化能力 消化时间 降低成本 乙醇法 检出率
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RAPD技术在龙须菜遗传多样性研究中的应用 Ⅰ总DNA的提取及RAPD反应条件的优化 被引量:9
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作者 李向峰 隋正红 张学成 《青岛海洋大学学报(自然科学版)》 CSCD 1998年第2期293-298,共6页
比较两种从龙须菜中提取总DNA的方法,这两种方法得到的染色体DNA具有较好的完整性,从DNA的产量、蛋白质含量等指标可以看出,CTAB法优于蛋白酶K法。实验对龙须菜RAPD反应条件进行了优化:在25μL反应体系中,含... 比较两种从龙须菜中提取总DNA的方法,这两种方法得到的染色体DNA具有较好的完整性,从DNA的产量、蛋白质含量等指标可以看出,CTAB法优于蛋白酶K法。实验对龙须菜RAPD反应条件进行了优化:在25μL反应体系中,含有Mg2+2.5mmol/L,dNTP100μmol/L,总DNA25ng,引物0.2μmol/L和Taq酶1U,经94℃变性1min,35℃退火1min,72℃延伸2min,35个循环,得到稳定的RAPD扩增图谱。 展开更多
关键词 龙须菜 蛋白酶k 脱氧核糖核酸 遗传多样性
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单条线虫DNA提取方法研究 被引量:14
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作者 容万韬 王金成 +4 位作者 刘鹏 林宇 郭京泽 黄国明 孙建华 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2014年第2期127-132,共6页
为探寻一种高效、稳定、廉价的单条线虫DNA提取方法,以6种植物寄生线虫作为试验材料,比较了4种方法,即直接裂解法、冻融裂解法、切割裂解法、切割冻融裂解法对单条线虫DNA的提取效果。结果表明,对线虫进行管内切割的切割冻融裂解法与切... 为探寻一种高效、稳定、廉价的单条线虫DNA提取方法,以6种植物寄生线虫作为试验材料,比较了4种方法,即直接裂解法、冻融裂解法、切割裂解法、切割冻融裂解法对单条线虫DNA的提取效果。结果表明,对线虫进行管内切割的切割冻融裂解法与切割裂解法高效、稳定,冻融裂解法效果较差,直接裂解法效果最差。对线虫进行管内切割的切割冻融裂解法和切割裂解法可高效、稳定地获得高质量的单条线虫总DNA,满足下一步的PCR扩增需求。 展开更多
关键词 蛋白酶k 裂解 冻融 管内切虫 DNA提取
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蛋白酶K的研究进展 被引量:11
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作者 吴彤 王瑞明 +1 位作者 黄磊 徐志南 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2013年第14期380-384,共5页
蛋白酶K是一种在生物科学研究和生物加工过程中具有多种应用的重要丝氨酸蛋白酶,并且在食品和饲料工业中有潜在的重要应用。本文对蛋白酶K的分子结构、催化特性、定向进化、重组表达和应用研究的最新进展进行了研究总结,并对蛋白酶K在... 蛋白酶K是一种在生物科学研究和生物加工过程中具有多种应用的重要丝氨酸蛋白酶,并且在食品和饲料工业中有潜在的重要应用。本文对蛋白酶K的分子结构、催化特性、定向进化、重组表达和应用研究的最新进展进行了研究总结,并对蛋白酶K在未来的研究方向进行了展望。 展开更多
关键词 蛋白酶k 分子结构 性质 应用
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PLA在受控堆肥条件下的生物降解行为研究 被引量:9
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作者 扈蓉 陈丽琼 +1 位作者 黄开胜 李思源 《塑料科技》 CAS 北大核心 2012年第8期68-71,共4页
依据ISO 14855的检测方法,研究了聚乳酸(PLA)在受控堆肥条件下的生物降解性能,结果表明:PLA具有良好的生物降解性。在培养土提取液中,以蛋白酶K对PLA膜进行降解,显微镜观察发现,PLA膜表面逐渐被蛋白酶侵蚀;红外光谱研究表明,PLA膜在降... 依据ISO 14855的检测方法,研究了聚乳酸(PLA)在受控堆肥条件下的生物降解性能,结果表明:PLA具有良好的生物降解性。在培养土提取液中,以蛋白酶K对PLA膜进行降解,显微镜观察发现,PLA膜表面逐渐被蛋白酶侵蚀;红外光谱研究表明,PLA膜在降解前后的分子结构没有发生很大变化。 展开更多
关键词 聚乳酸 堆肥 生物降解 蛋白酶k
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阿胶DNA提取方法优化 被引量:8
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作者 陈志宣 龚国利 钱云开 《中国实验方剂学杂志》 CAS 北大核心 2014年第21期13-16,共4页
目的:优选阿胶DNA的提取方法和效率,为其他高蛋白含量产品中DNA的提取提供参考。方法:采用十二烷基苯磺酸钠(SDS)法和十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法提取阿胶DNA,针对阿胶产品的自身特性,优选SDS法中蛋白酶K作用时间和蛋白洗脱步骤。结果... 目的:优选阿胶DNA的提取方法和效率,为其他高蛋白含量产品中DNA的提取提供参考。方法:采用十二烷基苯磺酸钠(SDS)法和十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法提取阿胶DNA,针对阿胶产品的自身特性,优选SDS法中蛋白酶K作用时间和蛋白洗脱步骤。结果:在同等条件下,SDS法较CTAB法对阿胶DNA的平均提取量高0.022 g·L-1。优化的SDS法为蛋白酶K作用时间1.5 h,使用酚-三氯甲烷-异戊醇洗脱阿胶中蛋白质,重复3次;阿胶DNA的纯度较原工艺提高了48.3%。结论:采用SDS法对阿胶中蛋白的清除作用较CTAB法效率高,优化的SDS法对阿胶DNA的提取适用性较强,为阿胶中动物来源分子生物学检测提供条件。 展开更多
关键词 阿胶 DNA提取 蛋白酶k 酚-三氯甲烷-异戊醇
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聚α-羟基辛酸对W/O乳液电纺聚乳酸纤维毡中阿霉素释放的影响 被引量:8
8
作者 王浩 宋宏锐 +1 位作者 邓英杰 陈学思 《合成化学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期273-279,共7页
采用内酯开环聚合法合成了聚乙二醇-b-聚(L-乳酸)(1)和聚乙二醇-b-聚(α-羟基辛酸)(2),将1和2一起溶解在二氯甲烷中为油相,以盐酸阿霉素(3)水溶液为内水相,用超声分散法形成油包水(W/O)乳液后静电纺丝,形成外壳为[1+2],内芯包裹有3的纤... 采用内酯开环聚合法合成了聚乙二醇-b-聚(L-乳酸)(1)和聚乙二醇-b-聚(α-羟基辛酸)(2),将1和2一起溶解在二氯甲烷中为油相,以盐酸阿霉素(3)水溶液为内水相,用超声分散法形成油包水(W/O)乳液后静电纺丝,形成外壳为[1+2],内芯包裹有3的纤维毡。扫描电子显微镜和广角X-射线扫描分析未发现纤维表面析出3结晶。纤维毡的酶降解药物释放研究结果表明,2的添加不仅未明显改变3的释放行为,而且可改善纤维对酶降解的耐受性。3的释放行为经Weibull模型和Highchi模型拟合,回归系数较高。 展开更多
关键词 聚乳酸 聚α-羟基辛酸 W/O乳液 静电纺丝 药物释放
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蛋白酶K对厌氧消化系统EPS产生特性及消泡潜能的影响
9
作者 邹苗苗 李蕾 +3 位作者 叶文杰 杨美茹 袁荣焕 彭绪亚 《环境科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期293-304,共12页
起泡是厨余垃圾厌氧消化过程中常见的操作难题,高效消泡方法的开发备受关注.先前研究表明胞外聚合物(EPS)是起泡的诱因,其中的疏水性蛋白组分更与泡沫形成直接相关.在此背景下,本研究向厌氧消化系统中添加不同剂量的蛋白酶K,以期探索其... 起泡是厨余垃圾厌氧消化过程中常见的操作难题,高效消泡方法的开发备受关注.先前研究表明胞外聚合物(EPS)是起泡的诱因,其中的疏水性蛋白组分更与泡沫形成直接相关.在此背景下,本研究向厌氧消化系统中添加不同剂量的蛋白酶K,以期探索其对厨余垃圾厌氧消化系统EPS产生特性及消泡潜能的影响.结果表明,蛋白酶K对厌氧消化微生物没有生物毒性,添加0.2 mg·g^(-1) TS蛋白酶K后系统甲烷产率反而比对照组高12.35%±3.36%.此外,蛋白酶K可以有效降低厨余垃圾厌氧消化系统的起泡趋势和泡沫稳定性,具有作为消泡剂的潜质.蛋白酶K的添加改变了EPS的产生特性,促进了溶解型EPS(S-EPS)、松散结合型EPS(LB-EPS)、疏水性S-EPS、疏水性LB-EPS的产生,降低了疏水性紧密结合型EPS(TB-EPS)的含量;从组成成分看,蛋白酶K促进了各类EPS腐殖质的生成,降低了疏水性蛋白的含量,S-EPS中β-折叠的相对含量减少是疏水性蛋白含量减少的主要原因.蛋白酶K的加入影响了微生物群落结构,相关性分析表明,起泡趋势和泡沫稳定性与疏水性TBEPS、疏水性多糖(PS)、疏水性蛋白质(PN)呈正相关,与LB-EPS呈负相关.Firmicutes门是与起泡特性参数最相关的门.蛋白酶K通过降低Firmicutes门中Syntrophomonas属、Fastidiosipila属的相对丰度,降低疏水性PS和疏水性PN的含量,增加LB-EPS的含量来达成其消泡能力. 展开更多
关键词 厌氧消化 厨余垃圾 起泡 蛋白酶k 胞外聚合物
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基于Chelex-100和蛋白酶K的蚊虫足样本DNA提取技术 被引量:6
10
作者 闫振天 司风玲 +2 位作者 鲜鹏杰 何正波 陈斌 《重庆师范大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期26-31,共6页
【目的】探索出一种蚊虫附肢(如单只足)微量DNA的提取方法,用于蚊虫分子鉴定和基因型研究。【方法】采用Chelex-100溶液和蛋白酶K结合的方法用于单只蚊虫足的微量DNA的提取。基于该方法,将不同方法保存的不同蚊种的足作为实验材料,从中... 【目的】探索出一种蚊虫附肢(如单只足)微量DNA的提取方法,用于蚊虫分子鉴定和基因型研究。【方法】采用Chelex-100溶液和蛋白酶K结合的方法用于单只蚊虫足的微量DNA的提取。基于该方法,将不同方法保存的不同蚊种的足作为实验材料,从中提取蚊虫基因组DNA;以之为模板,扩增核糖体DNA的D2,D3,ITS2区以及线粒体COI和COII基因,并对PCR扩增产物进行测序。【结果】提取到了高质量的基因组DNA,PCR扩增获得了高质量的DNA扩增片段,进一步测序获得了高质量的序列。【结论】该方法价格便宜,操作简单方便,减少了对蚊虫样本的依赖。单只足用于DNA提取不影响对剩下的部分开展形态学等研究,可以作为蚊虫分子生物学研究中微量DNA样本提取的重要方法,也为其他昆虫微量DNA的提取提供理论依据。 展开更多
关键词 Chelex-100 蛋白酶k 蚊虫 DNA提取 PCR扩增
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分子伴侣增强蛋白酶K在毕赤酵母中的表达及对羊毛鳞片层的作用分析
11
作者 蔡逸安 张轶群 +4 位作者 杨子璇 刘业学 刘文龙 路福平 李玉 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期307-313,共7页
【目的】通过分子伴侣共表达增强毕赤酵母中异源蛋白酶K的分泌水平,并对其的羊毛无氯剥鳞作用机制进行解析,旨在提高蛋白酶K的表达量并为高效酶法剥鳞技术的应用奠定基础。【方法】利用毕赤酵母表达系统对tprK基因进行异源表达,首次分... 【目的】通过分子伴侣共表达增强毕赤酵母中异源蛋白酶K的分泌水平,并对其的羊毛无氯剥鳞作用机制进行解析,旨在提高蛋白酶K的表达量并为高效酶法剥鳞技术的应用奠定基础。【方法】利用毕赤酵母表达系统对tprK基因进行异源表达,首次分析了影响蛋白质折叠和质量控制的分子伴侣Ssa1、Erj5、Sil1、Hac1、Kar2、Lhs1和Ydj1分别过表达对TPRK的表达量和酶活力的作用,并对TPRK处理的羊毛纤维效果进行分析。【结果】TPRK在毕赤酵母GS115中表达,其最适反应条件为65℃、pH 9.0,且具有良好的热稳定性和pH稳定性。过表达ssa1、hac1、erj5和sil1基因的重组菌株酶活分别提升了36.8%、20.0%、17.7%和14.8%。5 L发酵罐进行高密度发酵,诱导72 h后,TPRK的酶活达到77471.99 U/mL。在羊毛水解应用中TPRK可水解羊毛鳞片内层使鳞片逐渐剥落,起到剥鳞效果,并且最适水解条件为:TPRK添加量为300 U/mL、反应温度55℃、pH 9.0和反应时间2 h。【结论】过表达分子伴侣Ssa1能够有效提升TPRK的表达量,利用该TPRK处理羊毛纤维,可有效去除羊毛鳞片层,而对羊毛核心皮质层造成的损伤较小。 展开更多
关键词 蛋白酶k 分子伴侣 毕赤酵母 生物酶处理 防毡缩
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酶消化法结合人工智能技术在法医学溺死硅藻检验中的应用 被引量:1
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作者 于慧潇 朱永正 +5 位作者 赵天琦 程奇 李周儒 殷文江 陈敏 蔡红星 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期430-438,共9页
【目的】人工智能(AI)全涂片自动化硅藻检验技术能比人类专家更快速、高效进行法医病理学溺死硅藻检验。然而,该技术仅与硅藻提取率较低的硝酸消化法联用过,本研究拟采用更加高效的蛋白酶K组织消解法(以下简称酶消化法)作为硅藻提取方法... 【目的】人工智能(AI)全涂片自动化硅藻检验技术能比人类专家更快速、高效进行法医病理学溺死硅藻检验。然而,该技术仅与硅藻提取率较低的硝酸消化法联用过,本研究拟采用更加高效的蛋白酶K组织消解法(以下简称酶消化法)作为硅藻提取方法,探究该技术在其他硅藻提取方法中的泛化能力及可行性。【方法】收集6例溺死尸体的肺组织进行蛋白酶K消解并制成涂片,利用数字化图像矩阵切割方法将涂片进行数字化处理并据此建立硅藻-背景数据库,将数据集按照3:1:1的比例分为训练集、验证集和测试集,在ImageNet预训练基础上对卷积神经网络(CNN)模型进行训练和内部验证及外部测试。【结果】结果显示最佳模型外部测试的准确率达97.65%,且模型特征提取区域即为硅藻所在区域。实际应用中最佳的CNN模型对溺水尸体的硅藻检测精准率高达80%以上。【结论】研究表明,基于CNN模型的AI自动化硅藻检验技术和酶消化法联用能高效识别硅藻,可以作为溺水鉴定中硅藻检测的辅助方法。 展开更多
关键词 法医病理学 硅藻 溺死 蛋白酶k 人工智能 卷积神经网络
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水合和pH对蛋白酶K热诱发转变影响的量热法研究 被引量:5
13
作者 王邦宁 谈夫 《物理化学学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1991年第1期43-48,共6页
用差示扫描量热法,在310~450K温度范围、0.048~4.39克水/克干酶以及pH3~9范围内研究了蛋白酶K(EC 3.4.21.14)的热变性。分别提出表征热变性过程的三个主要热力学参数:热变性温度T_d、比变性焓△H_d及超额表观比热C_(ex)^(max)和总水... 用差示扫描量热法,在310~450K温度范围、0.048~4.39克水/克干酶以及pH3~9范围内研究了蛋白酶K(EC 3.4.21.14)的热变性。分别提出表征热变性过程的三个主要热力学参数:热变性温度T_d、比变性焓△H_d及超额表观比热C_(ex)^(max)和总水量h以及pH的关系。除Td和h的关系属于Flory-Garrett类型外,蛋白酶K的热变性热力学特征和已报道的球蛋白、双螺旋蛋白及三螺旋蛋白不相同。一级水合水对蛋白酶K热变性热力学特征有最大的影响,pH也是影响该酶热稳定性的重要因素。 展开更多
关键词 水合 PH 蛋白酶k 热变性 量热法
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麝香百合花蕾组织原位杂交体系的建立 被引量:5
14
作者 席梦利 潘梅 施季森 《分子植物育种》 CAS CSCD 2011年第4期514-518,共5页
本研究以麝香百合未开放的花蕾为实验材料,以百合花发育相关的B功能基因LLGLO1的特异片段为探针,研究了花蕾切离时间对RNA结构完整性的影响,探讨了蛋白酶K消化浓度及时间对材料内蛋白质消化及材料结构完整性的影响。研究结果表明:花蕾离... 本研究以麝香百合未开放的花蕾为实验材料,以百合花发育相关的B功能基因LLGLO1的特异片段为探针,研究了花蕾切离时间对RNA结构完整性的影响,探讨了蛋白酶K消化浓度及时间对材料内蛋白质消化及材料结构完整性的影响。研究结果表明:花蕾离体1.5 h内RNA仍然保存完整,花蕾离体2 h RNA开始降解,因此,花蕾取材后应在1.5 h之内完成固定。10μg/mL的蛋白酶K在37℃孵育30 min可消化百合花蕾切片中的大部分蛋白质且材料结构完整。原位杂交结果显示LLGLO1基因在四轮花器官中均有表达。 展开更多
关键词 麝香百合 花蕾 原位杂交 蛋白酶k LLGLO1基因
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蛋白酶K的性质及其在核酸提取中的应用 被引量:5
15
作者 刘杨柳 武小芳 +2 位作者 胡树样 孙纪录 马爱进 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2017年第10期196-199,共4页
蛋白酶K是一种高活性的丝氨酸蛋白酶,不但广泛用于分子生物学和细胞生物学等领域的相关实验,而且在食品、农业、医药等领域的应用也与日俱增。从本质上说,蛋白酶K降解影响核酸提取的组蛋白、核酸酶等蛋白质,是其用于各个领域的主要基础... 蛋白酶K是一种高活性的丝氨酸蛋白酶,不但广泛用于分子生物学和细胞生物学等领域的相关实验,而且在食品、农业、医药等领域的应用也与日俱增。从本质上说,蛋白酶K降解影响核酸提取的组蛋白、核酸酶等蛋白质,是其用于各个领域的主要基础。目前,我国尚无针对核酸提取用蛋白酶K产品的统一标准,从而给蛋白酶K产品的流通、使用和监管造成诸多不便和困难。对蛋白酶K的性质和酶活力测定方法进行分析,并对其在从各种生物材料提取核酸中的应用条件进行总结,以期为核酸提取用蛋白酶K制定相关的方法标准和产品标准提供参考。 展开更多
关键词 蛋白酶k 性质 酶活力 核酸 提取
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鸡蛋壳壳膜及表面角质层去除方法的优化与比较 被引量:4
16
作者 王佩伦 卢凤珠 +3 位作者 张学余 王克华 李炳熠 刘长国 《中国家禽》 北大核心 2010年第19期18-21,26,共5页
本文拟对EDTA法、蛋白酶K法和NaOH法去除鸡蛋壳壳膜及表面角质层的条件进行优化并比较,以期获得分离蛋壳有机层和矿化晶体层的有效方法。通过SS-550扫描式电子显微镜观察发现,EDTA法中以5%EDTA处理鸡蛋壳30min的效果相对较好,能去除蛋... 本文拟对EDTA法、蛋白酶K法和NaOH法去除鸡蛋壳壳膜及表面角质层的条件进行优化并比较,以期获得分离蛋壳有机层和矿化晶体层的有效方法。通过SS-550扫描式电子显微镜观察发现,EDTA法中以5%EDTA处理鸡蛋壳30min的效果相对较好,能去除蛋壳内膜及尽可能多的外膜,但是表面角质层的去除效果较弱;蛋白酶K法中以50μg/mL蛋白酶K孵育鸡蛋壳48h的效果相对较好,能完全去除表面角质层和蛋壳内膜,但蛋壳外膜尚不能彻底去除干净;而NaOH法中则以2%NaOH于99℃中煮鸡蛋壳17min的效果最理想,既能彻底去除壳膜又能完全去除表面角质层。3种方法相比,去除鸡蛋壳壳膜及角质层的理想方法是于99℃的2%NaOH中煮17min。 展开更多
关键词 蛋壳膜 角质层 EDTA 蛋白酶k NAOH
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蛋白酶K水解蜂王浆蛋白的研究 被引量:4
17
作者 程尚 殷素会 +6 位作者 刘佳霖 高丽娇 曹兰 解华东 戴荣国 罗文华 谢华 《云南农业大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2016年第2期288-293,共6页
为评价不同蛋白酶水解蜂王浆蛋白的效果,本研究以蛋白酶K为试验用酶,对蜂王浆蛋白的最佳水解条件及水解产物稳定性进行了研究。结果显示,蛋白酶K水解蜂王浆的最佳条件为温度55℃,p H 7.5,酶添加量60μg/m L,氯化钙添加量0.01 mol/L,反... 为评价不同蛋白酶水解蜂王浆蛋白的效果,本研究以蛋白酶K为试验用酶,对蜂王浆蛋白的最佳水解条件及水解产物稳定性进行了研究。结果显示,蛋白酶K水解蜂王浆的最佳条件为温度55℃,p H 7.5,酶添加量60μg/m L,氯化钙添加量0.01 mol/L,反应时间4 h,水溶性蛋白质提取率为31.03%;蛋白酶K水解蜂王浆蛋白的产物在酸、碱、热条件下能够保持较高的稳定性。蛋白酶K水解蜂王浆的效果介于植物性蛋白酶及动物性蛋白酶之间,可用于生产富钙型的水溶性蜂王浆。 展开更多
关键词 蜂王浆 蛋白酶k 水溶性蛋白质提取率 正交试验
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牡蛎中GⅡ型诺如病毒快速检测方法研究 被引量:4
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作者 董晓根 陈倩 +4 位作者 陆翌禹 王兆娥 秦萌 尉秀霞 李洁 《实用预防医学》 CAS 2015年第6期662-664,F0003,共4页
目的建立牡蛎中GⅡ型诺如病毒快速有效的检测方法,为食源性疾患疫情暴发的溯源提供可靠的实验室依据。方法梯度稀释含有GⅡ型诺如病毒的便悬液分别加入牡蛎消化道组织匀浆中,用蛋白酶K消化-PEG6000沉淀方法富集后,实时荧光RT-PCR进行终... 目的建立牡蛎中GⅡ型诺如病毒快速有效的检测方法,为食源性疾患疫情暴发的溯源提供可靠的实验室依据。方法梯度稀释含有GⅡ型诺如病毒的便悬液分别加入牡蛎消化道组织匀浆中,用蛋白酶K消化-PEG6000沉淀方法富集后,实时荧光RT-PCR进行终端检测,评估灵敏度及回收率。结果该方法的灵敏度为3.91×103copies/g,病毒平均回收率为6.64%。结论蛋白酶K消化-PEG沉淀法操作简单、快速,有望进一步优化后应用于不同贝类中病毒的检测。 展开更多
关键词 GⅡ型诺如病毒 牡蛎 蛋白酶k PEG6000沉淀 荧光定量RT-PCR
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蛋白酶K在黄牛皮酶脱毛中的应用 被引量:4
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作者 陈梅 陈立炜 +2 位作者 李鹤 陈敏 程海明 《皮革科学与工程》 CAS 北大核心 2020年第5期44-48,共5页
制革加工中,脱毛是一个重要且必需的工序,而酶法脱毛技术是一项重要的制革清洁生产技术。本文考察了蛋白酶K在黄牛皮酶脱毛过程中的应用。实验从酶用量,温度和pH等脱毛条件对蛋白酶K的酶脱毛工艺进行了探究。并从脱毛液中总蛋白含量分... 制革加工中,脱毛是一个重要且必需的工序,而酶法脱毛技术是一项重要的制革清洁生产技术。本文考察了蛋白酶K在黄牛皮酶脱毛过程中的应用。实验从酶用量,温度和pH等脱毛条件对蛋白酶K的酶脱毛工艺进行了探究。并从脱毛液中总蛋白含量分析、羟脯氨酸含量分析和粒面及纤维形貌观察对不同工艺条件的酶脱毛进行了比较。研究发现蛋白酶K具有水解酪素和胶原纤维的能力,将其用于黄牛皮酶脱毛,其较理想的脱毛工艺条件为:酶用量为150 U/g皮,温度为35℃,pH为8.0,脱毛时长5 h。脱毛效果较好,且对皮胶原的损伤较轻。 展开更多
关键词 蛋白酶k 酶脱毛 制革 黄牛皮
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高通量自动化磁珠提取血凝块DNA的方法研究 被引量:4
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作者 潘亭亭 汪伟伟 吉栩 《中国卫生标准管理》 2020年第12期132-136,共5页
目的探索和研究基于磁珠法适合高通量自动化提取血凝块DNA的方法。方法血凝块分割成小块,使用蛋白酶K在不同条件下进行消化,用DNA裂解液处理后比较血凝块的消化裂解率。使用磁珠法提取DNA,电泳分析DNA完整性。选择优化条件对48例样本各... 目的探索和研究基于磁珠法适合高通量自动化提取血凝块DNA的方法。方法血凝块分割成小块,使用蛋白酶K在不同条件下进行消化,用DNA裂解液处理后比较血凝块的消化裂解率。使用磁珠法提取DNA,电泳分析DNA完整性。选择优化条件对48例样本各取两份进行自动化提取,分析提取效果。结果4℃条件下使用蛋白酶K消化制备得到的条带完整,DNA产量较高。室温和37℃消化4小时所得DNA都出现一定降解,37℃下降解最严重。48例血凝块样本自动化提取两份,两份的单位质量DNA产量和总产量相关,表明提取方法稳定性好。结论4℃条件下蛋白酶K消化处理血凝块可保证DNA的质量,结合自动化可简化人工操作,实现高通量提取。 展开更多
关键词 血凝块 DNA提取 蛋白酶k 4℃消化 高通量自动化方法
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