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S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因的原核可溶性表达及其转化应用 被引量：2
1
作者 周晶辉 赵士敏 许岗 《中国医药工业杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第7期849-855,共7页
为提高来源于拟南芥的S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因(SAM1)在大肠埃希菌中的可溶性表达水平,采用无缝克隆的方法分别将谷胱甘肽巯基转移酶、TrxA蛋白、小分子泛素样修饰物(SUMO)蛋白、MsyB蛋白、泛素类蛋白这5种不同的融合标签与SAM1进行了... 为提高来源于拟南芥的S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因(SAM1)在大肠埃希菌中的可溶性表达水平,采用无缝克隆的方法分别将谷胱甘肽巯基转移酶、TrxA蛋白、小分子泛素样修饰物(SUMO)蛋白、MsyB蛋白、泛素类蛋白这5种不同的融合标签与SAM1进行了N端融合表达。结果表明,SUMO蛋白作为融合标签时,SAM1表达菌株的可溶性蛋白表达量显著高于无融合标签的SAM1表达菌株,其细胞内可溶性蛋白总量达到401.19 mg/L。此外,对融合了SUMO蛋白标签的SAM1菌株和原始菌株进行菌体转化研究。结果表明,在菌体量相同的条件下,SUMO蛋白作为融合标签的SAM1表达菌株对底物的转化率为69.80%,相比原始菌株提高了40.51%。因此,选择SUMO蛋白作为融合标签能显著提高SAM1在大肠埃希菌中的可溶表达水平,为下一步对S-腺苷甲硫氨酸合成酶进行工业化应用提供参考。 展开更多
关键词 拟南芥 S-腺苷甲硫氨酸 融合标签 蛋白可溶性表达
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重组人肝再生因子可溶性表达及活性鉴定
2
作者 李春男 毛羚羽 +5 位作者 黄瑞麟 高慧英 岳鹏升 丁可盺 贾东明 崔春萍 《军事医学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期339-343,共5页
目的探索重组人肝细胞生成素Cn(HPPCn)蛋白可溶性表达方法和纯化工艺,提高其比活性和蛋白产量,为发展新的急性肝病治疗药物奠定基础。方法利用分子生物学方法构建4个HPPCn原核表达载体,分别与不同的分子伴侣融合表达,助其表达后正确折... 目的探索重组人肝细胞生成素Cn(HPPCn)蛋白可溶性表达方法和纯化工艺,提高其比活性和蛋白产量,为发展新的急性肝病治疗药物奠定基础。方法利用分子生物学方法构建4个HPPCn原核表达载体,分别与不同的分子伴侣融合表达,助其表达后正确折叠。利用亲和层析方法纯化获得的融合蛋白,MTS法检测所得重组蛋白促进细胞增殖活性。结果成功构建了4个HPPCn表达载体,其中p MBP-P-HPPCn实现了rh HPPCn的可溶性表达。结论首次建立了重组HPPCn蛋白的可溶性生产方法,并对其蛋白活性进行分析和鉴定。 展开更多
关键词 肝细胞生长因子 肝细胞生成素Cn 重组蛋白质类 可溶性表达 MBP融合蛋白 蛋白纯化 肝细胞增殖
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黄曲霉毒素解毒酶在大肠杆菌中的可溶性表达、纯化及其圆二色谱分析 被引量：5
3
作者 胡熔 刘大岭 +1 位作者 谢春芳 姚冬生 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期71-76,共6页
目的:应用原核表达系统对黄曲霉毒素解毒酶(aflatoxin-detoxifizyme,ADTZ)进行高效可溶表达和纯化,并对其进行生物学活性与二级结构分析。方法与结果:亚克隆ADTZ的成熟肽,并构建与pMAL-c2x的重组质粒,转化大肠杆菌Rosetta(DE3),IPTG诱... 目的:应用原核表达系统对黄曲霉毒素解毒酶(aflatoxin-detoxifizyme,ADTZ)进行高效可溶表达和纯化,并对其进行生物学活性与二级结构分析。方法与结果:亚克隆ADTZ的成熟肽,并构建与pMAL-c2x的重组质粒,转化大肠杆菌Rosetta(DE3),IPTG诱导实现了MBP_ADTZ融合蛋白的高效可溶表达,其表达量约占总蛋白的50%。经Amylose亲和层析、Factor Xa酶切和疏水层析后得到高纯度的rADTZ蛋白。生物学活性分析表明rADTZ蛋白具有降解AFB1的酶活性,酶比活为136U/mg。圆二色光谱对rADTZ蛋白二级结构的分析结果为:α-螺旋为43.3%、β-折叠为31.1%、β-转角为10.5%和无规则卷曲为15.1%。结论:用大肠杆菌成功表达并得到高纯度有活性的rADTZ蛋白,为进一步对rADTZ结构与功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 黄曲霉毒素解毒酶 MBP_ADTZ融合蛋白 可溶性表达 圆二色谱
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GST-Exendin-4在大肠杆菌中的可溶性表达和纯化 被引量：2
4
作者 张怡 周庆峰 +2 位作者 贾孟 张红绪 李成伟 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期155-159,共5页
为了制备GST-Exendin-4融合蛋白,以本实验室构建好的pET22b-Exendin-4为模板,通过PCR扩增出Exendin-4基因,酶切克隆入pGEX-4T-1,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-Exendin-4。经DNA测序证实插入序列与设计完全一致后,将重组质粒转化大肠杆菌BL... 为了制备GST-Exendin-4融合蛋白,以本实验室构建好的pET22b-Exendin-4为模板,通过PCR扩增出Exendin-4基因,酶切克隆入pGEX-4T-1,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-Exendin-4。经DNA测序证实插入序列与设计完全一致后,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),在不同浓度的IPTG和不同温度诱导下,经SDS-PAGE分析鉴定,表达出Mr约为30 kD的目的蛋白,灰度扫描显示目的蛋白占菌体总蛋白的29.9%,超声裂解后的上清通过Sepharose 4B亲和层析纯化、透析、除盐及冷冻干燥得到高纯度的目的蛋白。本研究成功制备了高纯度的GST-Exendin-4融合蛋白,为下一步进行目的蛋白大规模的生产打下了良好的基础。 展开更多
关键词 EXENDIN-4 融合蛋白 可溶表达 亲和纯化
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Zif268的锌指DNA结合区在大肠杆菌中的功能性表达
5
作者 赵志虎 胥全彬 马清钧 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期352-355,共4页
锌指蛋白是最大的蛋白家族 ,是识别核酸最常见的、最有效的结构元件。通过选择合适的表达载体及诱导表达条件 ,实现了小鼠转录因子Zif2 6 8的锌指DNA结合区在大肠杆菌中的部分可溶性表达。凝胶迁移率移动试验证实纯化的可溶部分锌指DNA... 锌指蛋白是最大的蛋白家族 ,是识别核酸最常见的、最有效的结构元件。通过选择合适的表达载体及诱导表达条件 ,实现了小鼠转录因子Zif2 6 8的锌指DNA结合区在大肠杆菌中的部分可溶性表达。凝胶迁移率移动试验证实纯化的可溶部分锌指DNA结合区可以特异性识别、结合其天然靶序列 ,提示锌指DNA结合区在大肠杆菌中得到了功能性表达。锌指DNA结合区在大肠杆菌中的功能性表达成功为锌指蛋白 DNA相互作用的胞内遗传筛选模型的建立奠定了基础。 展开更多
关键词 锌指蛋白 可溶性表达 凝胶迁移率移动试验
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辛德毕斯病毒E2包膜蛋白可溶性表达条件的优化
6
作者 李江姣 朱武洋 +1 位作者 何英 梁国栋 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期62-68,共7页
目的:通过优化表达条件,提高辛德毕斯病毒E2包膜蛋白胞外区的可溶性表达量。方法:构建含E2基因胞外区的重组表达质粒pGEX-6p-1-E2,筛选合适宿主菌和诱导温度,并构建5种分子伴侣共表达系统(即pG-KJE8、pGro7、pKJE7、pG-Tf2和pTf16 5种... 目的:通过优化表达条件,提高辛德毕斯病毒E2包膜蛋白胞外区的可溶性表达量。方法:构建含E2基因胞外区的重组表达质粒pGEX-6p-1-E2,筛选合适宿主菌和诱导温度,并构建5种分子伴侣共表达系统(即pG-KJE8、pGro7、pKJE7、pG-Tf2和pTf16 5种分子伴侣质粒分别与重组表达质粒pGEX-6p-1-E2共表达),筛选最适分子伴侣质粒。结果:(1)E2蛋白的表达量在E.coli BL21、BL21(DE3)pLysS、Rosetta(DE3)及Origami B(DE3)4种表达菌中没有明显差别;(2)16℃诱导时E2蛋白在上清中可溶性表达量最高;(3)分子伴侣质粒pG-Tf2使目的蛋白的可溶性表达量提高了15.7%,作用最为显著。结论:通过优化表达条件及使用分子伴侣共表达系统提高了E2蛋白的可溶性表达,为进一步E2蛋白的相关研究奠定了基础。 展开更多
关键词 辛德毕斯病毒 E2包膜蛋白 分子伴侣 可溶性表达
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