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一种改良的原代神经元牵张损伤模型的构建与评估
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作者 雷晋 张复驰 +5 位作者 李宇 万学焱 赵恺 牛洪泉 舒凯 雷霆 《中国临床神经外科杂志》 2023年第9期581-584,共4页
目的探讨原代神经元牵张损伤模型的改良方法及其可行性。方法提取出生24 h内SD乳鼠皮层组织进行原代神经元培养,利用智能真空负压机和弹力膜培养板对经典的神经元牵张损伤模型(CICⅡ模型)进行改良,根据弹力膜形变距离将细胞分为对照组(... 目的探讨原代神经元牵张损伤模型的改良方法及其可行性。方法提取出生24 h内SD乳鼠皮层组织进行原代神经元培养,利用智能真空负压机和弹力膜培养板对经典的神经元牵张损伤模型(CICⅡ模型)进行改良,根据弹力膜形变距离将细胞分为对照组(只种植细胞,不做牵张损伤)、轻度损伤组(形变距离7 mm)、中度损伤组(形变距离10 mm)和重度损伤组(形变距离13 mm)。显微镜观察细胞形态变化,NeuN免疫荧光染色鉴定细胞纯度;免疫印迹法检测凋亡相关蛋白(cleaved Caspase-3、Bcl-2)表达,比色法测定培养液乳酸脱氢酶(LDH)活性。结果原代神经元培养5 d,显微镜下观察发现细胞生长良好,NeuN染色显示神经元纯度在95%以上。中度损伤后即刻,显微镜下发现神经元轴索断裂,部分细胞呈空泡样变。与对照组相比,损伤组cleaved Caspase-3表达水平、细胞培养液LDH水平均明显上升(P<0.05),而Bcl-2表达水平明显下降(P<0.05)。损伤组cleaved Caspase-3表达水平、细胞培养液LDH水平与伤程度呈明显正相关(P<0.05),而Bcl-2表达水平与伤程度呈明显负相关(P<0.05)。结论新生大鼠皮层体外培养所获原代神经元纯化率较高。本研究改良模型可模拟神经元损伤,使用方便、可重复性好,适合颅脑损伤和细胞力学研究。 展开更多
关键词 颅脑损伤 原代神经元 牵张损伤模型 方法改良 可行性 SD乳鼠
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孕期边缘型维生素A缺乏对NMDA诱导的新生大鼠神经元Ca^(2+)内流的抑制作用 被引量:1
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作者 张小娟 毕杨 +4 位作者 何剑 刘友学 陈洁 瞿平 李廷玉 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第15期1613-1616,共4页
目的了解孕期边缘型维生素A(vitamin A,VitA)缺乏对氮-甲基-D-天冬氨酸(N-Methyl-D-Aspartate,NMDA)诱导的新生大鼠海马神经元Ca2+内流的影响。方法将16只健康雌性Wistar大鼠采用随机数字表法分为边缘型VitA缺乏(MVAD)和VitA正常(VAN)组... 目的了解孕期边缘型维生素A(vitamin A,VitA)缺乏对氮-甲基-D-天冬氨酸(N-Methyl-D-Aspartate,NMDA)诱导的新生大鼠海马神经元Ca2+内流的影响。方法将16只健康雌性Wistar大鼠采用随机数字表法分为边缘型VitA缺乏(MVAD)和VitA正常(VAN)组,每组8只。从交配前3周开始分别饲以VitA缺乏饲料(含VitA400 IU/kg)和VitA充足饲料(含VitA6 500 IU/kg)。高效液相技术检测血清VitA浓度。取MVAD组及VAN组新生大鼠海马神经元进行原代培养,并运用钙影像测定仪检测原代培养的海马神经元在NMDA刺激后细胞内钙离子变化。Western blot半定量分析海马组织NMDA受体-1(NR1)的表达。结果 MVAD组母鼠血清VitA水平[(0.768±0.069)μmol/L]低于VAN组[(1.284±0.217)μmol/L],MVAD组仔鼠血清VitA水平[(0.806±0.092)μmol/L]低于VAN组[(1.270±0.098)μmol/L](P<0.01);神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolage,NSE)免疫荧光鉴定神经元纯度显示两组无显著差异(P>0.05);MVAD组与VAN组海马神经元在NMDA刺激后,MVAD组Ratio340/380增加值(0.136±0.012)低于VAN组(0.168±0.022)(P<0.01);Western blot半定量分析结果显示NR1在MVAD组海马组织中的表达显著低于VAN组。结论孕期开始的MVAD会抑制NMDA诱导的新生大鼠海马神经元钙离子内流,而降低NR1在神经元的表达可能是其损伤的机制之一。 展开更多
关键词 原代神经元培养 Western BLOT 钙影像 边缘型维生素A缺乏
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PKAc促进成年大鼠背根神经节神经元突起生长及其机制的研究
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作者 杨萍 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期331-337,共7页
观察慢病毒载体介导PKA催化亚单位PKAc转染促进成年大鼠原代培养的背根神经节(DRG)神经元突起生长及其机制的研究。我们运用三质粒系统共转染293T细胞合成慢病毒载体LV/PKAc-IRES-GFP和对照病毒LV/GFP,原代分离培养成年大鼠DRG神经元,... 观察慢病毒载体介导PKA催化亚单位PKAc转染促进成年大鼠原代培养的背根神经节(DRG)神经元突起生长及其机制的研究。我们运用三质粒系统共转染293T细胞合成慢病毒载体LV/PKAc-IRES-GFP和对照病毒LV/GFP,原代分离培养成年大鼠DRG神经元,应用免疫组织化学染色和Western blot等方法检测cAMP/PKA信号通路下游关键转录因子cAMP反应元件连接蛋白(CREB)磷酸化水平,图像分析经组织化学染色后的神经元突起长度和有突起神经元的百分比。结果观察到,慢病毒能介导外源基因在哺乳动物原代培养的神经元中表达,转染LV/PKAc-IRES-GFP的PC12细胞和DRG神经元均能表达外源基因并激活CREB,克服CNS髓鞘蛋白的抑制,促进突起生长。以上实验结果表明拯救成年大鼠神经元cAMP/PKA水平可有效改变神经元内在生长能力,从而改变它们对抑制环境的敏感性,进而促进突起生长。 展开更多
关键词 PKA催化亚单位 突起生长 慢病毒载体 髓鞘 原代培养神经元
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Transcriptome Sequencing Reveals Astrocytes as a Therapeutic Target in Heat-Stroke 被引量:8
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作者 Bing Niu Tao Zhang +1 位作者 Huaiqiang Hu Bingzhen Cao 《Neuroscience Bulletin》 SCIE CAS CSCD 2017年第6期627-640,共14页
Heat-stroke is a serious form of hyperthermia with high mortality, and can induce severe central nervous system disorders. The neurovascular unit(NVU), which consists of vascular cells, glial cells, and neurons, con... Heat-stroke is a serious form of hyperthermia with high mortality, and can induce severe central nervous system disorders. The neurovascular unit(NVU), which consists of vascular cells, glial cells, and neurons, controls blood-brain barrier(BBB) permeability and cerebral blood flow, and maintains the proper functioning of neuronal circuits. However, the detailed function of each BBB component in heat-stroke remains unknown. In order to interpret alterations caused by heat stress, we performed transcriptome comparison of neuron and astrocyte primary cultures after heat treatment. Differentially-expressed genes were then selected and underwent Gene Ontology annotation and Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes pathway analysis. Gene-act networks were also constructed, and the expression of pivotal genes was validated by quantitative PCR, as well as single-cell q PCR in heatstroke rats. Our work provides valuable information on the transcriptional changes in NVU cells after heat stress,reveals the diverse regulatory mechanisms of two of these cellular components, and shows that a cell-type-specificapproach may be a promising therapeutic strategy for heatstroke treatments. 展开更多
关键词 Heat stroke RNA-seq neuron Astrocyte primary culture Single-cell qPCR
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