当归多糖通过抑制星形胶质细胞凋亡缓解帕金森病小鼠的运动障碍

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作者 张晨宇 刘波 +2 位作者 袁志军 马小芬 曾芳 《中国老年学杂志》 CAS 北大核心 2024年第13期3188-3192,共5页

目的观察当归多糖(ASP)对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱导的帕金森病(PD)小鼠运动障碍的作用,并探讨其分子机制。方法将C57BL/6J小鼠分为空白组(腹腔注射生理盐水)、ASP组(200 mg/kg)、MPTP组(25 mg/kg)、ASP+MPTP组(20 mg/kg... 目的观察当归多糖(ASP)对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱导的帕金森病(PD)小鼠运动障碍的作用,并探讨其分子机制。方法将C57BL/6J小鼠分为空白组(腹腔注射生理盐水)、ASP组(200 mg/kg)、MPTP组(25 mg/kg)、ASP+MPTP组(20 mg/kg ASP和25 mg/kg MPTP)。完成药物处理后,采用抓力计和转棒仪检测四肢抓力和运动能力。用ASP处理正常原代星形胶质细胞及1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP^(+))染毒的星形胶质细胞,设置对照组(生理盐水)、观察组(100 mg/L ASP)、MPP^(+)组、ASP+MPP^(+)组(100 mg/L ASP和MPP^(+));采用CCK-8法检测ASP对星形胶质细胞活性的影响;采用TUNEL荧光染色法分析ASP对MPP^(+)染毒星形胶质细胞凋亡的影响;采用流式细胞术检测ASP对MPP^(+)染毒星形胶质细胞活性氧(ROS)产生的影响;采用Western印迹法分析ASP对MPP^(+)染毒星形胶质细胞B细胞淋巴瘤(Bcl)2相关X蛋白(Bax)/Bcl2/胱天蛋白酶(Caspase)-3凋亡信号通路的影响。结果ASP具有缓解由MPTP诱导的PD小鼠运动障碍的作用;与对照组相比,200和400 mg/L ASP处理可显著提高原代星形胶质细胞的活性(P<0.05,P<0.01);ASP处理可显著提高MPP^(+)染毒星形胶质细胞的细胞活力,显著减少MPP^(+)染毒星形胶质细胞的凋亡(P<0.05,P<0.01);流式细胞分析表明ASP处理可显著减少MPP^(+)染毒星形胶质细胞的ROS产生(P<0.01);Western印迹结果表明ASP处理可明显抑制MPP^(+)染毒星形胶质细胞Bax/Bcl2/Caspase-3凋亡信号通路的活化(P<0.05)。结论ASP处理可缓解PD小鼠运动障碍,其分子机制可能是ASP通过抑制Bax/Bcl2/Caspase-3凋亡信号通路减少PD小鼠中脑星形胶质细胞凋亡,从而发挥缓解PD小鼠运动障碍的作用。 展开更多

关键词 当归多糖 原代星形胶质细胞 凋亡 B细胞淋巴瘤(Bcl)-2相关X蛋白(Bax)/Bcl2/胱天蛋白酶(Caspase)-3

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银杏二萜内酯K对D-半乳糖诱导的小鼠原代星形胶质细胞抗衰老作用 被引量：1

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作者 操娇娇 杜雨芯 +5 位作者 张倩霞 吴伟 杨颖博 肖保国 肖伟 王振中 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期3578-3585,共8页

目的研究银杏二萜内酯K(ginkgolide K,GK)对D-半乳糖诱导的小鼠原代星形胶质细胞抗衰老作用及可能机制。方法以小鼠原代星形胶质细胞为研究对象,建立D-半乳糖诱导的衰老模型,设置对照组、模型组和GK组,GK(50μg/mL)预处理3 h后,以150 mm... 目的研究银杏二萜内酯K(ginkgolide K,GK)对D-半乳糖诱导的小鼠原代星形胶质细胞抗衰老作用及可能机制。方法以小鼠原代星形胶质细胞为研究对象,建立D-半乳糖诱导的衰老模型,设置对照组、模型组和GK组,GK(50μg/mL)预处理3 h后,以150 mmol/L D-半乳糖造模6 d,采用β-半乳糖苷酶染色法检测衰老星形胶质细胞;Western blotting法测定衰老标志蛋白(p21、p53和Lamin B1)、沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)、脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor),BDNF、自噬标志蛋白微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ/I(microtubule associated protein 1light chain 3-Ⅱ/I,LC3-Ⅱ/I)和自噬选择性底物p62表达;ELISA检测衰老相关分泌表型[白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)];免疫荧光检测增殖标志分子Ki67表达。结果与对照组比较,D-半乳糖显著诱导原代星形胶质细胞β-半乳糖苷酶阳性表达(P<0.001),促进衰老标志蛋白p21、p53的上调和Lamin B1的下调(P<0.05、0.01),减少增殖标志分子Ki67的表达(P<0.01),表明成功构建了公认的细胞衰老模型。与模型组比较,GK显著减少β-半乳糖苷酶阳性表达(P<0.001),下调p21、p53和上调Lamin B1蛋白的表达(P<0.05、0.01),增加Ki67的表达(P<0.01),表明GK具有抗衰老作用。此外,GK显著促进BDNF蛋白表达(P<0.05),减少TNF-α的分泌(P<0.05),上调SIRT1和自噬标志蛋白LC3-Ⅱ/I表达(P<0.05、0.01),减少p62蛋白表达(P<0.01)。结论GK可有效抑制原代星形胶质细胞的衰老,其作用机制可能与上调SIRT1、BDNF表达和促进细胞自噬有关,从而多维度协同达到抗细胞衰老的效应。 展开更多

关键词 银杏二萜内酯K 原代星形胶质细胞 D-半乳糖 衰老 自噬 沉默信息调节因子1 脑源性神经营养因子

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RNAi沉默原代星形胶质细胞IL-17基因表达方法的建立

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作者 沈笑然 朱瑞锋 +2 位作者 郭佳翔 李凌舟 郭洪亮 《中国实验诊断学》 2023年第10期1191-1195,共5页

目的通过基因沉默技术构建质粒成功转染原代星形胶质细胞(Ast)抑制IL-17表达,探讨IL-17的功能。方法在制备原代Ast基础上,应用IL-17基因沉默质粒pGenesil-1A和B,用Lipofectamine 2000转染Ast,通过荧光分析法、RT-PCR法、Western Blottin... 目的通过基因沉默技术构建质粒成功转染原代星形胶质细胞(Ast)抑制IL-17表达,探讨IL-17的功能。方法在制备原代Ast基础上,应用IL-17基因沉默质粒pGenesil-1A和B,用Lipofectamine 2000转染Ast,通过荧光分析法、RT-PCR法、Western Blotting法观察IL-17基因沉默后效果。结果携带pGenesil-1B和A的IL-17基因沉默质粒制备成功后,免疫荧光携带pGenesil-1B转染效果明显高于pGenesil-1A,其转染率可高达56.72%;基因沉默组在转染后72 h内任一时间点IL-17 mRNA表达均低于正常对照组和基因沉默对照组(P<0.05),且24 h IL-17表达最低(P<0.05)。蛋白表达上,在IL-17基因沉默后3、5、7 d,其蛋白表达仍持续减低(P<0.05)。结论应用Lipofectamine 2000可成功将IL-17 RNAi pGenesil-1质粒转染至原代星形胶质细胞。 展开更多

关键词 原代星形胶质细胞 IL-17 基因沉默技术 转染

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抑制PI3K/AKT/GSK-3β信号通路对冈田酸诱导原代星形胶质细胞衰老情况的影响

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作者 杨洁 邓于新 +2 位作者 彭亚倩 陈竹懿 齐晓岚 《中国老年学杂志》 CAS 北大核心 2023年第13期3187-3192,共6页

目的研究冈田酸(OA)诱导的原代星形胶质细胞中通过抑制磷酯酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/糖原合成激酶(GSK)-3β信号通路对p21、p53衰老蛋白表达水平和衰老阳性细胞表达的影响,探讨OA诱导星形胶质细胞衰老情况及相关机制。方法免... 目的研究冈田酸(OA)诱导的原代星形胶质细胞中通过抑制磷酯酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/糖原合成激酶(GSK)-3β信号通路对p21、p53衰老蛋白表达水平和衰老阳性细胞表达的影响,探讨OA诱导星形胶质细胞衰老情况及相关机制。方法免疫荧光鉴定原代星形胶质细胞,CCK8法筛选OA药物浓度,然后用LY294002、OA分别处理或联合处理细胞,Western印迹测定细胞中p-PI3K、p-AKT、p-GSK-3β、p21、p53蛋白表达水平的变化及β-半乳糖苷酶染色检测衰老阳性细胞。结果免疫荧光鉴定原代星形胶质细胞结果显示其纯度达到95%以上,CCK8法筛选出OA药物处理浓度为30 nmol/L,OA组中p-PI3K、p-AKT、p-GSK-3β、p21、p53蛋白表达较正常对照组显著升高(P<0.05),衰老阳性细胞数明显增加,但LY294002+OA组p-PI3K、p-AKT、p-GSK-3β、p21、p53蛋白表达水平较OA组明显降低,并且衰老阳性细胞数也明显减少(P<0.05)。结论通过OA处理能使星形胶质细胞发生衰老,LY294002处理能通过抑制PI3K/AKT/GSK-3β信号通路缓解细胞的衰老情况,提示高磷酸化Tau诱导星形胶质细胞衰老可能与PI3K/AKT/G3K-3β信号通路密切相关。 展开更多

关键词 原代星形胶质细胞 LY294002 冈田酸 磷酯酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/糖原合成激酶(GSK)-3β p21 p53

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探讨脂多糖诱导的中枢神经系统炎症反应对体外血脑屏障功能的影响 被引量：3

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作者 史宜正 刘毅 +1 位作者 徐志鹏 傅强 《解放军医学院学报》 CAS 2020年第4期359-363,368,共6页

目的利用bEND.3小鼠脑微血管内皮细胞及星形胶质细胞建立体外血脑屏障模型,并观察脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的中枢炎症对血脑屏障功能的影响。方法培养小鼠原代脑微血管星形胶质细胞,利用流式细胞术对原代星形胶质细胞标记物... 目的利用bEND.3小鼠脑微血管内皮细胞及星形胶质细胞建立体外血脑屏障模型,并观察脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的中枢炎症对血脑屏障功能的影响。方法培养小鼠原代脑微血管星形胶质细胞,利用流式细胞术对原代星形胶质细胞标记物胶质纤维酸性蛋白进行细胞纯度鉴定后,将其与bEND.3小鼠脑微血管内皮细胞进行共培养构建体外血脑屏障模型。将小鼠原代星形胶质细胞、bEND.3小鼠脑微血管内皮细胞、共培养的血脑屏障模型均分为对照组和LPS处理组。LPS处理浓度为20μg/ml,处理时间为24 h。通过跨内皮细胞电阻(trans-epithelium electrical resistant,TEER)检测血脑屏障功能,Western blot检测血脑屏障连接蛋白Occludin和ZO-1蛋白含量。结果原代培养的星形胶质细胞呈典型的多突起形态,流式细胞学鉴定细胞纯度为96%。三种细胞分别进行LPS处理后,TEER值均较各自对照组明显下降(P<0.05),Occludin和ZO-1蛋白相对表达量均较各自对照组明显下降(P<0.05)。结论bEND.3小鼠脑微血管内皮细胞和星形胶质细胞共培养可成功建立一种体外血脑屏障模型,LPS诱导的中枢神经系统炎症反应会使血脑屏障完整性受损,破坏其功能。 展开更多

关键词 体外血脑屏障模型 脑微血管内皮细胞 原代星形胶质细胞 脂多糖 跨内皮细胞电阻

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尼古丁通过PI3K/AKT信号通路上调星形胶质细胞HSF1的表达 被引量：1

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作者 董智慧 任真奎 +4 位作者 吕菊 谢鹏 官志忠 吴昌学 禹文峰 《贵州医科大学学报》 CAS 2019年第3期259-263,共5页

目的:研究尼古丁对星形胶质细胞热休克转录因子1(HSF1)的表达的影响,并探讨其机制。方法:分离新出生24 h内乳鼠大脑皮质,进行原代培养并鉴定为星形胶质细胞,待细胞成熟后分为正常对照组、尼古丁处理组,PI3K/AKT信号通路阻断剂LY294002... 目的:研究尼古丁对星形胶质细胞热休克转录因子1(HSF1)的表达的影响,并探讨其机制。方法:分离新出生24 h内乳鼠大脑皮质,进行原代培养并鉴定为星形胶质细胞,待细胞成熟后分为正常对照组、尼古丁处理组,PI3K/AKT信号通路阻断剂LY294002处理组和尼古丁+LY294002处理组,正常对照组不做任何处理;尼古丁处理组用5μmol/L尼古丁分别处理星形胶质细胞6、12、18、24 h; LY294002处理组只加10μmol/L LY294002处理;尼古丁+LY294002处理组是先加10μmol/L LY294002处理2 h后,再加入5μmol/L尼古丁共同处理18 h,免疫印迹法观察各组HSF1蛋白的表达。结果:与正常对照组相比,尼古丁处理组星形胶质细胞内HSF 1蛋白的表达上调(P <0. 05);与尼古丁处理组比较,LY294002+尼古丁处理组星形胶质细胞内HSF1表达明显受到抑制(P <0. 05)。结论:尼古丁通过PI3K/AKT信号通路上调星形胶质细胞HSF1蛋白表达。 展开更多

关键词 原代星形胶质细胞 热休克核转录因子1 尼古丁 PI3K/AKT信号通路 阿尔茨海默症

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莱菔硫烷对Nrf2原代星形胶质细胞Ⅱ相酶的诱导作用

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作者 温迪 于秀军 +2 位作者 郭艳苏 陈相 李春岩 《脑与神经疾病杂志》 CAS 2022年第6期361-365,共5页

目的 探索莱菔硫烷(SFN)对培养的Nrf2+/+、Nrf2-/-原代星形胶质细胞Ⅱ相酶的诱导作用。方法 取经基因鉴定的Nrf2+/+、Nrf2-/-新生乳鼠,取出大脑皮质分离培养原代星形胶质细胞,并进行纯化与鉴定。将细胞分为Nrf2+/+和Nrf2-/-组,每组又分... 目的 探索莱菔硫烷(SFN)对培养的Nrf2+/+、Nrf2-/-原代星形胶质细胞Ⅱ相酶的诱导作用。方法 取经基因鉴定的Nrf2+/+、Nrf2-/-新生乳鼠,取出大脑皮质分离培养原代星形胶质细胞,并进行纯化与鉴定。将细胞分为Nrf2+/+和Nrf2-/-组,每组又分为溶剂对照组和SFN药物干预组。通过给予不同浓度的SFN干预Nrf2+/+组细胞,测定Ⅱ相酶的表达来选择最佳给药浓度。然后分别给予Nrf2+/+、Nrf2-/-组DMSO和最适浓度的SFN,通过Western blot测定Ⅱ相酶的表达。结果 不同浓度SFN干预Nrf2+/+星形胶质细胞显示,10μmol·L^(-1)对Ⅱ相酶Gclm、Nqo1、Ho1蛋白表达的诱导作用最强,为最佳给药浓度。Nrf2+/+和Nrf2-/-细胞分别给予10μmol·L^(-1) SFN处理后,Ho1均能明显上调。Nqo1和Gc1m只在Nrf2+/+细胞中明显上调,在Nrf2-/-细胞中不上调。而对于Gss和Gclc,给药后Nrf2+/+和Nrf2-/-细胞两种酶表达均无明显变化。结论 SFN对原代培养的星形胶质细胞Ho1的诱导不完全依赖于核转录因子Nrf2;对Nqo1、Gclm的诱导很大程度上依赖于转录因子Nrf2;对Gss和Gclc的表达无明显诱导作用。 展开更多

关键词 原代星形胶质细胞 氧化应激 莱菔硫烷 Ⅱ相酶 NRF2

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氧糖剥夺损伤诱导星形胶质细胞分泌IL-10的机制初探

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作者 吕泽宇 何慕兰 +4 位作者 石霞 张赟 杨亭 李廷玉 陈洁 《重庆医科大学学报》 CSCD 北大核心 2017年第10期1227-1233,共7页

目的:探讨氧糖剥夺(oxygen glucose deprivation,OGD)损伤诱导星形胶质细胞分泌白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)的可能机制。方法:培养并鉴定原代星形胶质细胞,体外建立OGD损伤模型,分别利用si TLR2(Toll-like receptor-2,TLR2)腺... 目的:探讨氧糖剥夺(oxygen glucose deprivation,OGD)损伤诱导星形胶质细胞分泌白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)的可能机制。方法:培养并鉴定原代星形胶质细胞,体外建立OGD损伤模型,分别利用si TLR2(Toll-like receptor-2,TLR2)腺病毒、NF-κB(NF-kappa B)抑制剂PDTC干预,q RT-PCR和ELISA分别检测损伤细胞IL-10的表达水平,Western blot检测损伤细胞TLR2、磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)蛋白表达水平。免疫荧光检测OGD损伤细胞中NF-κB p65的亚细胞定位。结果:免疫荧光观察发现分离培养的原代星形胶质细胞纯度可达90%以上。经体外OGD损伤处理后,OGD损伤组TLR2、pNF-κB p65的蛋白表达水平[(1.16±0.10),(1.01±0.08)]与IL-10的m RNA及蛋白表达水平[(0.00±0.00),(513.01±34.47)]较正常对照组[(0.49±0.08),(0.23±0.09),(0.00±0.00),(381.89±22.26)]均明显升高(P=0.001,P=0.000,P=0.026,P=0.005),且p65蛋白在细胞核内表达增加。si TLR2腺病毒感染组OGD损伤的星形胶质细胞中TLR2、p-NF-κB p65的蛋白表达水平[(0.36±0.13),(0.38±0.10)]与IL-10的m RNA及蛋白表达水平[(0.00±0.00),(567.05±50.57)]较对照组[(1.33±0.42),(0.92±0.28),(0.00±0.00),(703.60±12.97)]明显降低(P=0.019,P=0.034,P=0.004,P=0.011)。与OGD处理组[(1.24±0.23),(0.00±0.00),(769.23±23.37)]相比,PDTC干预可有效降低p-NF-κB p65蛋白(0.26±0.07)与IL-10的m RNA及蛋白表达水平[(0.00±0.00),(598.92±42.73)](P=0.002,P=0.000,P=0.046),但并未影响TLR2的表达水平变化[(1.11±0.24),(1.09±0.94)](P=0.949)。结论:OGD损伤可激活TLR2/NF-κB信号通路诱导星形胶质细胞分泌IL-10。 展开更多

关键词 星形胶质细胞 白细胞介素-10 氧糖剥夺 TOLL样受体2 核因子-ΚB

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PNU通过PI3K/AKT信号通路上调星形胶质细胞HSP70的表达

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作者 董智慧 吕菊 +5 位作者 任真奎 谢鹏 胡玉梅 官志忠 吴昌学 禹文峰 《贵州医科大学学报》 CAS 2019年第3期254-258,263,共6页

目的:研究PNU对星形胶质细胞热休克蛋白70(HSF70)表达的影响,并探讨其机制。方法:分离新出生24 h内乳鼠大脑星形胶质细胞原代培养并鉴定,传1～3代待细胞成熟后分为正常对照组、PNU处理组,PI3K/AKT信号通路阻断剂(LY294002)处理组和PNU+L... 目的:研究PNU对星形胶质细胞热休克蛋白70(HSF70)表达的影响,并探讨其机制。方法:分离新出生24 h内乳鼠大脑星形胶质细胞原代培养并鉴定,传1～3代待细胞成熟后分为正常对照组、PNU处理组,PI3K/AKT信号通路阻断剂(LY294002)处理组和PNU+LY294002处理组,正常对照组不做任何处理,PNU处理组用5μmol/L PNU分别处理6、12、18、24 h,LY294002处理组只加10μmol/L LY294002处理,PNU+LY294002处理组是先加10μmol/L LY294002处理2 h后、再加入5μmol/L PNU共同处理18 h,免疫印迹法观察各组星形胶质细胞内HSF70蛋白的表达。结果:与正常对照组相比,PNU处理组星形胶质细胞内HSP70蛋白的表达上调(P <0. 05);与PNU处理组比较,LY294002+PNU处理组星形胶质细胞内HSP70表达明显受到抑制(P <0. 01)。结论:PNU通过PI3K/AKT信号通路调控星形胶质细胞HSP70蛋白表达。 展开更多

关键词 原代星形胶质细胞 热休克蛋白70 PNU PI3 K/AKT信号通路 阿尔茨海默症

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PAS-Na对锰致大鼠基底核原代星形胶质细胞损伤的拮抗模型探讨

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作者 区仕燕 彭东杰 +2 位作者 黄晓薇 李少军 姜岳明 《毒理学杂志》 CAS CSCD 2020年第1期15-20,共6页

目的探讨对氨基水杨酸钠(PAS-Na)对锰(Mn)致大鼠基底核原代星形胶质细胞损伤的拮抗作用,为深入Mn中毒机制及其防治研究提供科学技术平台。方法取SPF级新生24 h内SD大鼠基底核进行消化、传代培养,用荧光免疫法鉴定星形胶质细胞。给予不... 目的探讨对氨基水杨酸钠(PAS-Na)对锰(Mn)致大鼠基底核原代星形胶质细胞损伤的拮抗作用,为深入Mn中毒机制及其防治研究提供科学技术平台。方法取SPF级新生24 h内SD大鼠基底核进行消化、传代培养,用荧光免疫法鉴定星形胶质细胞。给予不同浓度Mn(125、250、500和1000μmol/L)和PAS-Na(5、50、500和5000μmol/L)对星形胶质细胞处理24 h,用MTT法测定细胞存活率,按细胞存活率75%为Mn细胞毒性的筛选标准,细胞存活率100%为PAS-Na无细胞毒性标准,选择染Mn和PAS-Na干预剂量。结果染不同浓度Mn 24 h后,星形胶质细胞出现不同程度的肿胀或皱缩,并随染锰浓度增加而加重。正常培养液(对照)、125、250、500和1000μmol/L Mn组细胞存活率依序为100.0%、91.5%、83.3%、78.2%和55.6%。与对照组比较,250、500和1000μmol/L Mn组细胞存活率均降低(P<0.05)。随着Mn浓度增高,细胞存活率呈剂量-反应性下降(r=0.979)。给予5、50、500和5000μmol/L PAS-Na处理24 h后,细胞形态和存活率无明显改变。故选择500μmol/L Mn作为染Mn剂量,50、150和450μmol/L PAS作为干预剂量。与500μmol/L染Mn组比较,150和450μmol/L PAS-Na干预后,细胞皱缩程度减轻,细胞突起增多。150和450μmol/L PAS-Na干预组细胞存活率(89.7%、93.2%)比染Mn组(75.6%)高(P<0.05)。结论染500μmol/L Mn24 h后,星形胶质细胞出现明显的毒性,PAS-Na对染Mn细胞毒性有明显的干预作用,提示PAS-Na对染Mn大鼠原代星形胶质细胞损伤的拮抗作用模型构建成功。 展开更多

关键词 对氨基水杨酸钠 锰 基底核 大鼠 原代星形胶质细胞

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脂多糖促进的小鼠原代星形神经胶质细胞中TGF-α的释放不依赖于ADAM17的剪切作用

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作者 刘丽萍 曹宋天祎 +2 位作者 王劲桁 刘彬 郑煜芳 《复旦学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期731-736,745,共7页

转化生长因子-α(TGF-α)是调控细胞生长的一种肽类生长因子.其前体pro-TGF-α是一类跨膜蛋白,在一些金属蛋白酶(如去整合素金属蛋白酶17,ADAM17)的切割作用下细胞外50个氨基酸左右的可溶性片段被释放,为成熟的TGF-α.TGF-α与其受体EGF... 转化生长因子-α(TGF-α)是调控细胞生长的一种肽类生长因子.其前体pro-TGF-α是一类跨膜蛋白,在一些金属蛋白酶(如去整合素金属蛋白酶17,ADAM17)的切割作用下细胞外50个氨基酸左右的可溶性片段被释放,为成熟的TGF-α.TGF-α与其受体EGFR结合,激活EGFR下游信号通路,该通路对星形胶质细胞的生长和增殖有重大的影响.一定剂量的脂多糖(LPS)能够促进星形胶质细胞的增殖和活化,但脂多糖激活星形胶质细胞的途径并不清楚.实验发现,在原代星形胶质细胞中,1μg/mL的LPS作用1h,就能显著提高TGF-α的释放.相反,1μg/mL的LPS不影响人胶质瘤细胞系U251和中国仓鼠肺细胞CHL中TGF-α的释放,表明原代细胞对LPS的刺激作用更为敏感.金属蛋白酶抑制剂GM6001对LPS诱导的原代星形胶质细胞TGF-α释放增加作用无显著抑制,表明这种促进释放作用是不依赖于ADAM17的.在原代星形胶质细胞中,1μg/mL的LPS作用48h对ADAM17的mRNA表达无影响;而在U251细胞中,1μg/mL的LPS作用48h能够显著提高ADAM17蛋白的表达.不同于胶质瘤细胞,LPS对于原代星形胶质细胞的活化可能是通过直接促进TGF-α的释放来完成,且此释放不依赖于ADAM17. 展开更多

关键词 LPS TGF-Α ADAM17 原代星形胶质细胞 U251

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HCMV感染对人原代星形胶质细胞IL-6和IL-8表达的影响

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作者 王二朴 于向民 +2 位作者 李玲 钱冬萌 王斌 《山东医药》 CAS 2012年第46期1-4,共4页

目的观察人巨细胞病毒(HCMV)感染时人原代星形胶质细胞分泌的IL-6和IL-8的表达变化。方法分离纯化人原代星形胶质细胞并用免疫荧光法鉴定纯度。用HCMV感染原代星形胶质细胞制作HCMV感染模型,采用RT-PCR及免疫荧光法检测感染后星形胶质... 目的观察人巨细胞病毒(HCMV)感染时人原代星形胶质细胞分泌的IL-6和IL-8的表达变化。方法分离纯化人原代星形胶质细胞并用免疫荧光法鉴定纯度。用HCMV感染原代星形胶质细胞制作HCMV感染模型,采用RT-PCR及免疫荧光法检测感染后星形胶质细胞中的即刻早期(IE)mRNA和蛋白的表达(进行模型鉴定)。RT-PCR及Western blot法检测正常培养和感染HCMV的人原代星形胶质细胞中IL-6和IL-8 mRNA和蛋白的表达。结果 HCMV能够感染人原代星形胶质细胞。正常培养的人原代星形胶质细胞能够表达IL-6 mRNA和蛋白,但不表达IL-8;HCMV感染初期的人原代星形胶质细胞中IL-6 mRNA和蛋白均表达增加,IL-8表达被激活(P均<0.05),而感染后期两种因子的表达明显下调。结论 HCMV感染能够诱导人原代星形胶质细胞IL-6和IL-8的表达异常。 展开更多

关键词 人巨细胞病毒 原代星形胶质细胞 白细胞介素6 白细胞介素8

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Foxp1基因编码区序列的克隆及其在星形胶质细胞中的表达 被引量：1

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作者 叶鑫 杨娜娜 +3 位作者 龚劲雯 李淑蓉 苏炳银 赵海霞 《成都医学院学报》 CAS 2022年第3期273-278,共6页

目的体外分离培养原代星形胶质细胞,在星形胶质细胞中克隆Foxp1基因编码区序列(CDS)区并过表达。方法利用机械分离法获取小鼠原代星形胶质细胞;异硫氰酸胍法(TRIzol法)提取原代星形胶质细胞内总RNA并逆转录为cDNA,克隆CDS区、测序;利用... 目的体外分离培养原代星形胶质细胞,在星形胶质细胞中克隆Foxp1基因编码区序列(CDS)区并过表达。方法利用机械分离法获取小鼠原代星形胶质细胞;异硫氰酸胍法(TRIzol法)提取原代星形胶质细胞内总RNA并逆转录为cDNA,克隆CDS区、测序;利用美国国家生物技术信息中心(NCBI)和SnapGene软件对测序结果与NCBI库内小鼠中4个Foxp1转录本的CDS区进行对比;将星形胶质细胞中Foxp1基因的CDS克隆到表达载体上,并转染到HEK293T细胞内验证其表达。结果体外成功分离培养原代星形胶质细胞,且纯度达95%及以上;克隆出星形胶质细胞内Foxp1的CDS,相较参考序列Foxp1转录本4的CDS,其在514/515处插入3个连续碱基AGC;将克隆有Foxp1基因CDS区的表达载体转入HEK293T细胞内后可见在约106 kD处有Foxp1蛋白表达。结论成功分离培养原代星形胶质细胞并获取Foxp1新的CDS。 展开更多

关键词 原代星形胶质细胞 Foxp1 编码区 克隆

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原代培养的小鼠星形胶质细胞CD46、CD55、CD59的表达及炎症刺激因子对其的影响 被引量：2

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作者 陈雪丹 白云 +1 位作者 熊加祥 宋敏 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期1029-1031,共3页

目的通过体外培养小鼠大脑皮层星形胶质细胞,明确补体调节蛋白CD46、CD55、CD59在原代小鼠大脑皮层星形胶质细胞上的表达情况,及炎症因子对CD46、CD55、CD59表达的影响,为研究补体系统在AD中的作用打下基础。方法原代纯化培养小鼠星形... 目的通过体外培养小鼠大脑皮层星形胶质细胞,明确补体调节蛋白CD46、CD55、CD59在原代小鼠大脑皮层星形胶质细胞上的表达情况,及炎症因子对CD46、CD55、CD59表达的影响,为研究补体系统在AD中的作用打下基础。方法原代纯化培养小鼠星形胶质细胞,用RT PCR,免疫荧光的方法,分别在mRNA水平、蛋白质水平,检测炎症因子刺激前以及LPS、IFNγ单独或协同刺激后,CD46、CD55、CD59的表达情况。结果RT PCR检测到CD59mRNA的表达,CD46、CD55的表达不明确,未刺激组和刺激组无明显差别;免疫荧光结果示CD59阳性,CD46、CD55弱阳性。结论保护素CD59在原代小鼠星形胶质细胞上显著表达,可能可以保护星形胶质细胞免受补体的溶破效应的杀伤。 展开更多

关键词 原代培养 小鼠 星形胶质细胞 CD46 CD55 CD59 炎症刺激因子

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P2X_7受体在原代培养星形胶质细胞生长中的作用 被引量：1

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作者 刘颖 梁华征 +1 位作者 孙景军 叶诸榕 《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期491-497,共7页

目的探讨ATP是否促进原代培养的星形胶质细胞(astrocytes,As)发生类似反应性星形胶质化的变化以及嘌呤类受体P2X7在该过程中的作用。方法原代As的分离和培养;实时照相观察As形态变化;用Br-dU掺入法及流式细胞观察As增殖变化;用荧光标记... 目的探讨ATP是否促进原代培养的星形胶质细胞(astrocytes,As)发生类似反应性星形胶质化的变化以及嘌呤类受体P2X7在该过程中的作用。方法原代As的分离和培养;实时照相观察As形态变化;用Br-dU掺入法及流式细胞观察As增殖变化;用荧光标记实时定量PCR(real-time RT-PCR)检测GFAP mRNA,P2X7mRNA,TGF-β1mRNA表达的变化;用Western blot检测GFAP表达;ELISA检测培养上清中TGF-β1的变化。结果成功分离并培养原代As,免疫荧光鉴定阳性率为99%。不同浓度ATP(50μmol/L,100μmol/L,500μmol/L)作用于As,均可使之表现出类似反应性胶质化的形态改变,表现为胞浆丰富,细胞突起增加且更为明显。ATP100μmol/L作用1d后,As的S期细胞数目明显增加,提示细胞增殖的活跃,5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-bromodeoxyuridine,5-BrdU)掺入法显示细胞核阳性率明显增加。500μmol/L浓度的ATP能促进As的GFAP mRNA,P2X7mRNA表达。用P2X7特异性的受体激动剂2′-3-′O-(4-benzoylbenzoyl)-adenosine-5′-triphosphate(BzATP)50μmol/L,75μmol/L,100μmol/L作用于原代培养的As,在培养基有Ca2+情况下可明显促进GFAP表达。在培养基有Ca2+的情况下BzATP作用2h及12h时As中TGF-β1mRNA升高。培养上清中TGF-β1蛋白的含量在8h及48h均有升高。TGF-β1中和抗体能部分抑制P2X7引起的As GFAP含量的增加。结论100μmol/L的ATP可以促进As增殖。各种浓度ATP均可促进As形态产生类似胶质化反应的变化。P2X7特异性受体激动剂BzATP可引发胶质化样反应,并且在有Ca2+的情况下促进TGF-β1的转录和释放。TGF-β1参与了P2X7受体诱导的类似反应性星形胶质化过程。 展开更多

关键词 ATP 原代培养星形胶质细胞 反应性星形胶质化 P2X7受体 TGF-Β1

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