mRNA差异显示阳性cDNA克隆的快速筛选与鉴定 被引量：21

1

作者 李子银 陈受宜 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 1999年第8期44-48,共5页

建立了一种快速筛选差异显示阳性ｃＤＮＡ 克隆的方法， 该方法利用两轮Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｎｏｒｔｈｅｒｎ 杂交，结合质粒酶切图谱分析，从３０个ＤＤＲＴ差异ｃＤＮＡ片段中筛选鉴定出两个阳性ｃＤＮＡ克隆， 对其中一个克隆进行的Ｎ... 建立了一种快速筛选差异显示阳性ｃＤＮＡ 克隆的方法， 该方法利用两轮Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｎｏｒｔｈｅｒｎ 杂交，结合质粒酶切图谱分析，从３０个ＤＤＲＴ差异ｃＤＮＡ片段中筛选鉴定出两个阳性ｃＤＮＡ克隆， 对其中一个克隆进行的Ｎｏｒｔｈｅｒｎ 分析证实了筛选方法的可靠性。 展开更多

关键词 差异显示 阳性克隆 MRNA CDNA

下载PDF 职称材料

双孢蘑菇部分cDNA文库的构建及筛选 被引量：4

2

作者 王泽生 陈美元 +4 位作者 廖剑华 卢政辉 郭仲杰 李洪荣 M.P.Wach 《菌物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期63-65,共3页

构建了双孢蘑菇Agaricus bisporus菌株AA和A41的部分cDNA文库,其滴度分别为1.0?05 pfu/ml和6.0×104pfu/ml。用地高辛标记的丛生差异片段探针对文库进行筛选,分别获得5个和3个阳性克隆。

关键词 双孢蘑菇 丛生变异 阳性克隆 二氢硫辛酰胺脱氢酶 CDNA文库

下载PDF 职称材料

猪β_2-AR基因重组质粒的快速筛选 被引量：2

3

作者 陈勇 周光宏 刘红林 《生物技术》 CAS CSCD 2002年第5期5-6,共2页

为建立一种高效快速鉴定重组质粒的实验方法。将猪β2 -肾上腺素能受体 (β2 -AR)基因与pET - 32C重组 ,构建 β2 -AR基因表达载体pET32CAR。以T7启动子引物和猪 β2 -肾上腺素能受体基因特异性引物为PCR引物 ,挑取重组质粒转化单菌落... 为建立一种高效快速鉴定重组质粒的实验方法。将猪β2 -肾上腺素能受体 (β2 -AR)基因与pET - 32C重组 ,构建 β2 -AR基因表达载体pET32CAR。以T7启动子引物和猪 β2 -肾上腺素能受体基因特异性引物为PCR引物 ,挑取重组质粒转化单菌落直接进行PCR。产物经电泳发现 ,5个候选克隆中有 3个克隆扩增出了一条约 2kb的特异性条带 ,并且插入方向正确。随机选取其中 1个克隆用限制性酶切鉴定以及DNA测序验证PCR筛选的正确性。研究结果表明 :在采用PCR方法对重组克隆进行鉴定时 ,可以直接使用细菌菌落参与反应 ,而无须提取克隆的DNA。与传统的实验方法相比 ,筛选的时间缩短至 3～ 4h ,大大提高了重组DNA的筛选效率。 展开更多

关键词 Β2-肾上腺素能受体基因 阳性克隆 猪 β2-AR基因重组质粒 快速筛选

下载PDF 职称材料

一种基于生物免疫机制的基因免疫检测算法 被引量：2

4

作者 张雅静 侯朝桢 《计算机工程与应用》 CSCD 北大核心 2005年第4期38-40,45,共4页

该文基于生物免疫原理中检测机制的研究提出了一种基因免疫检测算法。该算法综合了生物免疫系统的先天性免疫和适应性免疫机制,在负选择和克隆选择的基础上又加入了阳性选择和疫苗机制,并利用基因检测实现了检测的DNA优先级策略。仿真... 该文基于生物免疫原理中检测机制的研究提出了一种基因免疫检测算法。该算法综合了生物免疫系统的先天性免疫和适应性免疫机制,在负选择和克隆选择的基础上又加入了阳性选择和疫苗机制,并利用基因检测实现了检测的DNA优先级策略。仿真实验表明,该算法大幅度提高了检测效率,并有效缩短了计算时间。 展开更多

关键词 负选择 阳性选择 克隆选择 疫苗 基因

下载PDF 职称材料

人Ⅰ型胶原基因脂质体转染牛耳细胞克隆筛选方法 被引量：2

5

作者 刘婷婷 王亮 +2 位作者 吕自力 彭涛 王安江 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期10-16,共7页

构建连接有人Ⅰ型胶原基因的质粒（PGC1-collagen）,利用脂质体介导的方法转染荷斯坦奶牛耳成纤维细胞,优化一系列转染条件以提高转染效率,再利用G418和GFP荧光的表达来筛选稳定转染的细胞,最后以未转染的成纤维细胞作为阴性对照组,PGC1... 构建连接有人Ⅰ型胶原基因的质粒（PGC1-collagen）,利用脂质体介导的方法转染荷斯坦奶牛耳成纤维细胞,优化一系列转染条件以提高转染效率,再利用G418和GFP荧光的表达来筛选稳定转染的细胞,最后以未转染的成纤维细胞作为阴性对照组,PGC1-collagen作为阳性对照组对转染的细胞进行PCR验证。结果显示：在6孔培养板中细胞融合度达到50%~60%左右介导1~3μg重组质粒转染24 h,转染效率可达25%~30%,筛选单克隆细胞在荧光显微镜观察检测到绿色荧光蛋白的表达。在使用800 U的G418筛选效果最好,维持浓度300~600 U,获得25个稳定表达的阳性细胞系,从中选取6个克隆进行PCR验证。成功利用脂质体转染方法将人Ⅰ型胶原基因成功转染到荷斯坦奶牛耳成纤维细胞,PCR验证结果正确。 展开更多

关键词 胶原基因 转染 成纤维细胞 阳性克隆

下载PDF 职称材料

优化菌落原位杂交体系筛选野生稻基因组文库 被引量：3

6

作者 陶小平 李磊 +7 位作者 李强 韩小霞 邢俊杰 崔玲玲 李玲珑 张朝良 张秋平 曹孟良 《生命科学研究》 CAS CSCD 2008年第4期328-332,共5页

菌落原位杂交仍是当今筛选基因组文库的重要方法之一,但难以保持背景清晰和阳性杂交点明显的稳定的杂交体系.通过对杂交膜不同处理方法的对比,表明利用溶菌酶处理杂交体系进行菌落原位杂交筛选,其杂交结果背景较干净,且能根据杂交信号... 菌落原位杂交仍是当今筛选基因组文库的重要方法之一,但难以保持背景清晰和阳性杂交点明显的稳定的杂交体系.通过对杂交膜不同处理方法的对比,表明利用溶菌酶处理杂交体系进行菌落原位杂交筛选,其杂交结果背景较干净,且能根据杂交信号的强弱很清晰地显色阳性黑点.采用该法筛选野生稻基因组文库,已筛选出22个阳性克隆,并测序分析均为阳性克隆. 展开更多

关键词 菌落原位杂交 基因组文库 溶菌酶 阳性克隆

下载PDF 职称材料

高温胁迫下草坪草高羊茅差异表达基因的分子研究 被引量：3

7

作者 李卉 王艳 +2 位作者 王海宏 梁珂珂 李建龙 《天津农业科学》 CAS 2015年第1期1-5,共5页

通过构建高羊茅高温胁迫下的消减文库,并使用斑点印迹技术从中筛选出差异表达基因,以期深入研究高羊茅适应高温的分子机制。以冷季型草坪草高羊茅为研究对象,在两年生理指标测定的基础上通过构建高羊茅在高温胁迫下的SSH文库,分别以正... 通过构建高羊茅高温胁迫下的消减文库,并使用斑点印迹技术从中筛选出差异表达基因,以期深入研究高羊茅适应高温的分子机制。以冷季型草坪草高羊茅为研究对象,在两年生理指标测定的基础上通过构建高羊茅在高温胁迫下的SSH文库,分别以正、反向SSH探针与尼龙膜上的消减c DNA质粒进行杂交,并经相应的显色反应得到杂交信号,比较了38/30°C(昼/夜)的培养箱中高温胁迫6 h的高羊茅叶片和对照组高羊茅叶片的RNA差异。结果表明:试验得到的差减文库中大量组成型表达基因已经被有效去除,使某些特有的差异基因得到了富集;利用斑点杂交共得到252个差异片段,库中阳性克隆约占50%以上;阳性克隆中91个为上调基因,161个为下调基因,这些与高羊茅的耐热性密切相关的基因即为试验所寻的差异表达基因。本试验为找出高羊茅耐热相关基因奠定了基础,为草坪草的转基因育种工作提供了相关依据,结合恰当的水肥调控措施可有效提高草坪草的抗逆性。 展开更多

关键词 高温胁迫 逆境生理 差异表达基因 抑制差减杂交 斑点印迹技术 阳性克隆

下载PDF 职称材料

结合PCR扩增快速筛选鉴定重组质粒 被引量：2

8

作者 林俊堂 李玉昌 +2 位作者 张会勇 邢智峰 徐存拴 《河南师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 2002年第3期68-70,共3页

针对如何方便快捷筛选鉴定阳性克隆 (重组质粒 ) ,本文在实验室研究的基础上 ,创建了一种结合聚合酶链式反应简便快筛选鉴定阳性克隆的方法 .用 Triton裂解液裂解菌落 ,离心后上清作为模板 ,再用特异引物进行PCR扩增 ,2 h就可以得出结... 针对如何方便快捷筛选鉴定阳性克隆 (重组质粒 ) ,本文在实验室研究的基础上 ,创建了一种结合聚合酶链式反应简便快筛选鉴定阳性克隆的方法 .用 Triton裂解液裂解菌落 ,离心后上清作为模板 ,再用特异引物进行PCR扩增 ,2 h就可以得出结果 .本方法具有节约省时 ,重复性好 ,结果直观 ,准确等优点 . 展开更多

关键词 PCR扩增 筛选鉴定 阳性克隆 重组质粒 聚分酶链式反应 TRITONX-100 分子生物学 基因重组

下载PDF 职称材料

黄地老虎颗粒体病毒cDNA文库的构建

9

作者 张伟 王玮 +2 位作者 艾秀莲 谢玉清 冯怀蓉 《中国病毒学》 CSCD 2003年第1期27-30,共4页

以感染黄地老虎颗粒体病毒(Agrotis segetum ganulosis virus,AsGV)的黄地老虎幼虫为材料提取总RNA、分离mRNA,并反转录合成cDNA,构建了包括黄地老虎(Agrotis segetum,As)幼虫和黄地老虎颗粒体病毒的cDNA文库。用EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ限制... 以感染黄地老虎颗粒体病毒(Agrotis segetum ganulosis virus,AsGV)的黄地老虎幼虫为材料提取总RNA、分离mRNA,并反转录合成cDNA,构建了包括黄地老虎(Agrotis segetum,As)幼虫和黄地老虎颗粒体病毒的cDNA文库。用EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ限制性内切酶酶切AsGV基因组DNA,制备地高辛探针,与上述总RNA、mR-NA、cDNA杂交,从文库中筛选出AsGV的阳性克隆1081个,经cDNA测序,cDNA编码序列与基因组编码序列相符。并根据基因组阅读框序列合成引物,PCR扩增出59个阅读框的编码基因,也完全与基因组序列相符。 展开更多

关键词 黄地老虎颗粒体病毒 基因组序列 CDNA 文库 阳性克隆

下载PDF 职称材料

酵母质粒PCR扩增及酶切在酵母双杂交中的运用 被引量：1

10

作者 孙玉宁 李春荣 靳更林 《承德医学院学报》 2005年第3期190-192,共3页

目的:减少对初步筛选获得的阳性克隆进一步鉴定的工作量,防止阳性克隆的丢失。方法:提取酵母双杂交筛选cDNA表达文库获得的阳性克隆酵母细胞质粒,以文库载体插入片段两端特异序列为引物,PCR扩增插入片段,限制性核酸内切酶酶切扩增产物,... 目的:减少对初步筛选获得的阳性克隆进一步鉴定的工作量,防止阳性克隆的丢失。方法:提取酵母双杂交筛选cDNA表达文库获得的阳性克隆酵母细胞质粒,以文库载体插入片段两端特异序列为引物,PCR扩增插入片段,限制性核酸内切酶酶切扩增产物,琼脂糖凝胶电泳,根据带型对阳性克隆进行分类。结果:将初步获得的107株阳性克隆,分为24类,在PCR扩增过程中发现个别克隆含有两种以上的文库质粒。结论:酵母质粒PCR扩增,酶切分类的方法,不仅可以大大减轻阳性克隆进一步鉴定的工作量,避免不必要的浪费,而且还可以避免阳性克隆的丢失。 展开更多

关键词 酵母双杂交 阳性克隆 PCR 限制性核酸内切酶

下载PDF 职称材料

利用增强型绿色荧光蛋白基因作筛选标记克隆载体的构建及鉴定 被引量：1

11

作者 唐金宝 陈永 +2 位作者 梁淑娟 王焕芹 李青春 《中国海洋药物》 CAS CSCD 2009年第2期28-31,共4页

目的构建以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为筛选标记的新型pUC18筛选载体。方法将EGFP基因克隆至pUC18载体的PstI/HindⅢ位点,构建筛选载体pUC18-EGFP,并验证pUC18-EGFP能否利用EG-FP的荧光特性筛选出含基因重组体的阳性克隆。结果经酶切和... 目的构建以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为筛选标记的新型pUC18筛选载体。方法将EGFP基因克隆至pUC18载体的PstI/HindⅢ位点,构建筛选载体pUC18-EGFP,并验证pUC18-EGFP能否利用EG-FP的荧光特性筛选出含基因重组体的阳性克隆。结果经酶切和基因测序鉴定pUC18-EGFP载体构建正确;在外源基因插入该载体后,对LB氨苄平板上的绿色菌落进行酶切和基因测序鉴定,结果证明LB平板上的绿色菌落即为含有重组质粒的克隆。结论成功构建pUC18-EGFP筛选载体,利用EGFP的绿色荧光可筛选出阳性克隆。 展开更多

关键词 增强型绿色荧光蛋白 大肠杆菌 阳性克隆 筛选载体

原文传递

基于T细胞免疫耐受的检测器生成算法设计

12

作者 王彤 乔佩利 《哈尔滨理工大学学报》 CAS 2007年第1期5-8,共4页

通过模拟T细胞的培育机制,包括阴性选择和阳性选择,提出基于T细胞免疫耐受的检测器生成算法.该算法采用基于规则的基因表达方式同匹配规则相结合的方法,能够灵活表示分类规则间的或关系,并且引入阴性选择算子,使算法能够更有效地生成检... 通过模拟T细胞的培育机制,包括阴性选择和阳性选择,提出基于T细胞免疫耐受的检测器生成算法.该算法采用基于规则的基因表达方式同匹配规则相结合的方法,能够灵活表示分类规则间的或关系,并且引入阴性选择算子,使算法能够更有效地生成检测器. 展开更多

关键词 人工免疫系统 入侵检测系统 阴性选择 阳性选择 克隆

下载PDF 职称材料

抗体库技术

13

作者 惠光艳 贾文敏 +3 位作者 石桦 周国清 颜晗 单守勤 《中国疗养医学》 2014年第11期969-971,共3页

由于抗体在诊断和治疗等多方面有极其重要的应用,针对各界对抗体的不同需求,目前已发展并完善起一种新的生物学技术——抗体库技术。该技术可同时有效的处理大量抗体分子,不经动物的阴性选择,从任一种属中获得少有的亲和力高、专一性强... 由于抗体在诊断和治疗等多方面有极其重要的应用,针对各界对抗体的不同需求,目前已发展并完善起一种新的生物学技术——抗体库技术。该技术可同时有效的处理大量抗体分子,不经动物的阴性选择,从任一种属中获得少有的亲和力高、专一性强的抗体。本文将此技术作一介绍。 展开更多

关键词 抗体库 体外成熟 阳性克隆

下载PDF 职称材料

间接ELISA法筛选阳性克隆在莱克多巴胺检测中的的应用

14

作者 张怀珠 温科 《肉类工业》 2011年第12期21-22,共2页

通过实验,证明用Rag-OVA作包被抗原是可行的单抗筛选方法。

关键词 莱克多巴胺 ELISA法 阳性克隆

下载PDF 职称材料

反向遗传学技术及在RNA病毒研究中的应用 被引量：6

15

作者 张英 李莉 +2 位作者 李旭 韩松 鲁会军 《动物医学进展》 CSCD 2008年第3期60-63,共4页

RNA病毒的反向遗传学技术是指由病毒的cDNA克隆获取RNA病毒的一项技术,该技术通过人为加入DNA基因片段,实现了在DNA水平上对RNA病毒基因组的人工操作。反向遗传系统可以对RNA病毒直接进行遗传操作,为RNA病毒的分子生物学研究提供了一种... RNA病毒的反向遗传学技术是指由病毒的cDNA克隆获取RNA病毒的一项技术,该技术通过人为加入DNA基因片段,实现了在DNA水平上对RNA病毒基因组的人工操作。反向遗传系统可以对RNA病毒直接进行遗传操作,为RNA病毒的分子生物学研究提供了一种强大的工具。自20世纪70年代后期第一例RNA病毒感染性克隆构建成功以来,RNA病毒的分子生物学研究取得了长足的进展,这在很大程度上归功于各种RNA病毒反向遗传系统的建立。文章介绍了反向遗传学技术的基本特点、技术方法及其在正、负链RNA病毒的基因功能、致病机制及新型病毒载体等方面的研究及应用情况。 展开更多

关键词 反向遗传学技术 正链RNA病毒 负链RNA病毒 感染性克隆

下载PDF 职称材料

一个具有诊断价值的弓形虫基因的发现 被引量：5

16

作者 王家传 蒋作君 +1 位作者 沈继龙 汪学龙 《临床输血与检验》 CAS 2005年第3期184-186,共3页

目的用弓形虫成囊株感染的小鼠血清筛选弓形虫RH株速殖子cDNA文库,以寻找诊断弓形虫病的抗原基因。方法收集成囊株(Prugniaud株)慢性感染的小鼠血清,经滤膜吸附法去除大肠杆菌抗体,筛选弓形虫RH株速殖子cDNA文库。对3次复筛得到的阳性... 目的用弓形虫成囊株感染的小鼠血清筛选弓形虫RH株速殖子cDNA文库,以寻找诊断弓形虫病的抗原基因。方法收集成囊株(Prugniaud株)慢性感染的小鼠血清,经滤膜吸附法去除大肠杆菌抗体,筛选弓形虫RH株速殖子cDNA文库。对3次复筛得到的阳性克隆进行插入片段的核苷酸序列测定,结果送GenBank进行同源性分析。根据序列测定结果,选取其中1个具有完整开放阅读框架的基因进行分析。结果获得4个持续阳性反应克隆。测序和同源性分析显示,WT1为弓形虫P30基因;WT4为弓形虫N-乙酰磷酸丙糖转移酶基因;WT9与已知的基因无同源性。WT12克隆基因与一未知的弓形虫基因有很高的同源性,且具有1个513bp大小的完整开放阅读框架,其蛋白质结构和功能预测可能是个跨膜信号蛋白。结论筛选得到的1个阳性克隆有望成为早期诊断抗原基因,值得进一步研究。 展开更多

关键词 弓形虫 CDNA文库 免疫学筛选 阳性克隆分析

下载PDF 职称材料

反应性关节炎患者关节液T细胞克隆研究 被引量：4

17

作者 古洁若 黄烽 +1 位作者 赵丽珂 余得恩 《中华风湿病学杂志》 CAS CSCD 2005年第3期129-132,共4页

目的比较来自反应性关节炎(ReA)患者的关节液的CD8+T细胞克隆、CD4+T细胞克隆和γδ+T细胞克隆的细胞因子表达谱,探讨ReA的免疫机制。方法用含56种细胞因子基因的cDNA微阵列筛选来自3个ReA患者的关节液的3个CD8+T细胞克隆、3个CD4+T细... 目的比较来自反应性关节炎(ReA)患者的关节液的CD8+T细胞克隆、CD4+T细胞克隆和γδ+T细胞克隆的细胞因子表达谱,探讨ReA的免疫机制。方法用含56种细胞因子基因的cDNA微阵列筛选来自3个ReA患者的关节液的3个CD8+T细胞克隆、3个CD4+T细胞克隆和3个γδ+T细胞克隆的差异表达基因。结果微阵列研究显示,CD8+和CD4+T细胞克隆中有编码干扰素(IFN)-γ和肿瘤坏死因子(TNF)-α转录物的表达。15个微阵列试验中有14个可以用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术证实有这些细胞因子的表达。CD4+细胞持续表达淋巴毒素-α(LT-α)和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)。但是γδ+T细胞主要表达转化生长因子(TGF)-β2和GM-CSF。结论CD8+和CD4+T细胞克隆的细胞因子表达谱主要为Th1,而γδ+T细胞较少表达促炎症细胞因子,似为Th3模式。ReA患者关节液的T淋巴细胞克隆显示了不同的细胞因子表达谱,它反映了不同的T细胞在发病机制中有不同的作用。 展开更多

关键词 反应性关节炎 关节液 T细胞克隆 细胞因子表达谱 免疫机制

原文传递

基于生物免疫原理的过滤器算法研究 被引量：3

18

作者 黄光球 张干涛 《河北工程大学学报（自然科学版）》 CAS 2008年第2期52-54,共3页

从实际应用的角度,分析了负检测方法的局限性,针对网络入侵检测的效率问题,构建了一个具有动态自适应性的过滤器系统,对过滤器检测元的生成算法进行了深入的研究。根据正选择算法识别自我的独特性,借鉴动态科隆选择算法的思想,以正选择... 从实际应用的角度,分析了负检测方法的局限性,针对网络入侵检测的效率问题,构建了一个具有动态自适应性的过滤器系统,对过滤器检测元的生成算法进行了深入的研究。根据正选择算法识别自我的独特性,借鉴动态科隆选择算法的思想,以正选择算法为核心并结合数据挖掘技术来确保检测器的生成效率及检测效率。 展开更多

关键词 免疫原理 过滤器 正选择 动态克隆选择 检测元

下载PDF 职称材料

克隆粒子群算法的镜像层叠滤波器的优化设计 被引量：3

19

作者 赵春晖 肖晓俊 《智能系统学报》 2008年第2期129-134,共6页

层叠滤波器是一种具有层叠性和阈值分解性的滑动窗非线性数字滤波器.层叠滤波器的优化设计过程关键就是对正布尔函数优化.本文利用了克隆粒子群优化算法的全局寻优能力和免疫系统的免疫信息处理机制,改善了粒子群优化算法摆脱局部极值... 层叠滤波器是一种具有层叠性和阈值分解性的滑动窗非线性数字滤波器.层叠滤波器的优化设计过程关键就是对正布尔函数优化.本文利用了克隆粒子群优化算法的全局寻优能力和免疫系统的免疫信息处理机制,改善了粒子群优化算法摆脱局部极值点的能力,提高了算法进化过程中的收敛速度和精度.仿真实验的结果也表明,该算法在正布尔函数的优化效果得到了显著改善,收敛加快,试验结果表明该算法设计的层叠滤波器具有良好的细节保持能力和去噪声能力,有效地改善了滤波性能. 展开更多

关键词 镜像阈值分解 正布尔函数(PBF) 层叠滤波器 克隆选择 粒子群

下载PDF 职称材料

三种无缝克隆试剂盒连接效率的比较 被引量：2

20

作者 邢体坤 王斌 +5 位作者 郭冰峰 宋路萍 杨振苹 荆新蕊 郝一楠 张静静 《中国医药科学》 2020年第17期74-77,共4页

目的比较生工生物工程(上海)股份有限公司、厂家A和厂家B三种无缝克隆试剂盒连接效率,为文库构建选择试剂盒提供参考。方法本研究采用Nco I和Xho I酶切pET26b获得线性化载体,PCR扩增制备线性化片段。无缝隙克隆反应体系转化感受态大肠杆... 目的比较生工生物工程(上海)股份有限公司、厂家A和厂家B三种无缝克隆试剂盒连接效率,为文库构建选择试剂盒提供参考。方法本研究采用Nco I和Xho I酶切pET26b获得线性化载体,PCR扩增制备线性化片段。无缝隙克隆反应体系转化感受态大肠杆菌,菌落PCR鉴定三种重组试剂盒连接阳性率。结果生工生物工程(上海)股份有限公司、厂家A和厂家B三种无缝克隆试剂盒分别长出107、86和16个克隆,阳性率分别为90.91%、72.73%和43.75%。结论从试剂盒性价比,转化总克隆数量和阳性克隆率等方面考虑,生工生物工程(上海)股份有限公司的无缝克隆试剂盒为文库构建的最佳选择。 展开更多

关键词 无缝克隆 阳性克隆率 限制性内切酶 PCR扩增

下载PDF 职称材料