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首次从国内鉴定到猪肠道杯状病毒及其分子流行病学调查 被引量：12
1
作者 黄泽彬 余兴龙 +8 位作者 李润成 谢小雨 尹德明 颜运秋 白霞 刘忠华 丁建 汪镇南 黎满香 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期623-626,共4页
目的了解国内猪札如病毒（猪肠道杯状病毒成员）的存在和流行情况。方法从多个腹泻猪场共采集腹泻猪粪便189份，采用RT-PCR方法进行分子流行病学调查。结果检出猪札如病毒阳性病料24份，阳性率为12.70%（24/189）。测序后与国外已发表... 目的了解国内猪札如病毒（猪肠道杯状病毒成员）的存在和流行情况。方法从多个腹泻猪场共采集腹泻猪粪便189份，采用RT-PCR方法进行分子流行病学调查。结果检出猪札如病毒阳性病料24份，阳性率为12.70%（24/189）。测序后与国外已发表的毒株比较，表明了所测定流行毒株的序列与猪札如病毒代表株Cowden相近（同源性介于75.6%-88.3%之间），证实了其均为猪札如病毒。结论首次发现我国猪群中存在猪札如病毒。 展开更多
关键词 猪肠道杯状病毒 猪札如病毒 腹泻 猪
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猪轮状病毒、猪札幌病毒和猪星状病毒三重PCR检测方法的建立及应用 被引量：4
2
作者 曲雅新 孙连静 +10 位作者 张胜斌 王若木 杨春杰 钟莲 周学光 黄克宏 罗期方 陈樱 韦祖樟 黄伟坚 欧阳康 《畜牧与兽医》 北大核心 2020年第11期78-83,共6页
为建立一种同时检测猪轮状病毒(PRoV)、猪札幌病毒(PoSaV)和猪星状病毒(PAstV)的三重PCR方法,本研究参考PRoV的VP6基因、PoSaV的RdRp基因以及PAstV的ORF1基因序列分别设计特异性引物,通过特异性、敏感性、重复性试验优化反应条件,建立... 为建立一种同时检测猪轮状病毒(PRoV)、猪札幌病毒(PoSaV)和猪星状病毒(PAstV)的三重PCR方法,本研究参考PRoV的VP6基因、PoSaV的RdRp基因以及PAstV的ORF1基因序列分别设计特异性引物,通过特异性、敏感性、重复性试验优化反应条件,建立了快速鉴别PRoV、PoSaV和PAstV的三重PCR方法。试验表明,该方法能特异性扩增PRoV、PoSaV、PAstV的目的片段,对猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)等常见猪病病毒的检测结果均为阴性,特异性良好;PRoV、PoSaV和PAstV的检测限量分别为1.38×10~2、8.33×10~2和4.40×10~3拷贝数/μL,具有较好的敏感性。利用三重PCR和单重PCR方法同时对80份规模化猪场的临床腹泻样品进行检测,结果表明,3种病毒的样品阳性率均为5.00%,2种方法的检测结果相一致。本研究成功建立了同时PRoV、PoSaV和PAstV的三重PCR检测方法,可用于三种病原感染的临床鉴别诊断。 展开更多
关键词 猪轮状病毒 猪札幌病毒 猪星状病毒 三重PCR
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猪札幌病毒荧光定量RT⁃PCR检测方法建立及遗传进化分析
3
作者 杜松 舒相华 +3 位作者 姚俊 袁红 张雪 宋春莲 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期811-822,共12页
猪札幌病毒(Porcine sapovirus,PoSaV)是一种引起猪急性胃肠炎的肠道病毒,对于生猪养殖业造成严重威胁。PoSaV感染猪只表现出的症状与其他腹泻病毒引起的症状相似,难以区分。为了检测该病毒并了解其在猪场中的流行情况,我们建立了一种Po... 猪札幌病毒(Porcine sapovirus,PoSaV)是一种引起猪急性胃肠炎的肠道病毒,对于生猪养殖业造成严重威胁。PoSaV感染猪只表现出的症状与其他腹泻病毒引起的症状相似,难以区分。为了检测该病毒并了解其在猪场中的流行情况,我们建立了一种PoSaV检测方法。本研究根据GenBank中GIII基因型,设计引物,优化反应条件,通过特异性评价,灵敏度和重复性检测,建立荧光定量RT‐PCR方法。本试验从贵州省获取20份腹泻母猪肛拭子样品,通过RT‐PCR进行检测,并进行VP1全基因扩增测序,使用MEGA7.0进行系统进化树构建和同源性分析。结果显示,建立的荧光定量RT‐PCR检测方法具有较强特异性和高灵敏度,在拷贝值为1×101·μL‐1时可以达到普通RT‐PCR方法100倍以上的检出限。此外,该方法具有良好的重复性和稳定性,批内变异系数与批间变异系数均小于1%;在检测猪腹泻临床样本中发现阳性率为85%(17/20)。将获得的17条VP1全基因序列与国内外14条参考毒株进行比对,结果显示:所有测序毒株与参考序列核苷酸同源性介于81.0%‐99.2%,氨基酸同源性介于80.8%‐97.6%,并且均与美国经典Cowden毒株亲缘性较远。所有测序毒株与YNAN、YNAN2020亲缘性较近,其中5株(GZ‐VP1‐3、GZ‐VP1‐5、GZ‐VP1‐6、GZ‐VP1‐9、GZ‐VP1‐11)与云南省分离株YNAN核苷酸及氨基酸同源性为99.2%、96.9%‐97.6%,亲缘性最为亲近,表明可能由一个原始毒株进化而来。测序毒株均在同一分支上亲缘性较近,但核苷酸及氨基酸同源性在91.8%‐100%,显示VPl基因存在一定程度变异。本研究成功建立一种PoSaV检测方法,深入分析了当前毒株的遗传变异情况,对PoSaV防控有着一定的启示作用。 展开更多
关键词 猪札幌病毒 荧光定量PCR VP1基因 遗传进化分析
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猪札幌病毒TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用 被引量：3
4
作者 陈琰 沈权 +2 位作者 杨世兴 康雁君 华修国 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期246-250,共5页
根据猪札幌病毒(Porcine Sapovirus,SaV)的VP1保守基因序列设计引物和探针,通过对荧光定量RT-PCR反应条件的优化,建立了TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法,并与常规RT-PCR检测方法进行了比较。结果表明,荧光定量RT-PCR方法的检测灵敏度可达1... 根据猪札幌病毒(Porcine Sapovirus,SaV)的VP1保守基因序列设计引物和探针,通过对荧光定量RT-PCR反应条件的优化,建立了TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法,并与常规RT-PCR检测方法进行了比较。结果表明,荧光定量RT-PCR方法的检测灵敏度可达16.1拷贝.μL-1,而常规RT-PCR方法的灵敏度为1.61×103拷贝.μL-1。对216份粪样的检测结果进一步表明该法(检出4份)比常规RT-PCR方法(检出3份)的灵敏度高。系统进化分析表明,该4株病毒均为GⅢ型,与SaV上海分离株(FJ387164)同源性为100%。该方法具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点,适合于猪SaV感染的流行病学调查和临床诊断。 展开更多
关键词 猪札幌病毒 TAQMAN探针 荧光定量RT-PCR
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猪札幌病毒的研究进展 被引量：3
5
作者 李晶娇 沈权 +1 位作者 李饴 华修国 《微生物与感染》 2016年第2期72-78,共7页
猪札幌病毒(porcine sapovirus,PoSaV)是一种经粪-口途径传播引起猪急性胃肠炎的肠道病毒,对环境友好生态型养殖业构成一定威胁。研究表明,某些PoSaV与人SaV核苷酸序列具有很高的同源性,且越来越多来源于人和猪的SaV重组新毒株被发现,提... 猪札幌病毒(porcine sapovirus,PoSaV)是一种经粪-口途径传播引起猪急性胃肠炎的肠道病毒,对环境友好生态型养殖业构成一定威胁。研究表明,某些PoSaV与人SaV核苷酸序列具有很高的同源性,且越来越多来源于人和猪的SaV重组新毒株被发现,提示PoSaV具有跨种间感染及传播给人的潜在风险。迄今,PoSaV的入侵与感染、变异与迁移、免疫与致病、暴发与流行、跨种间感染与传播等机制尚不清楚。本文主要对PoSaV形态与抵抗力、基因组结构与功能、基因重组、传播方式、流行病学、受体等方面的研究进展进行综述。 展开更多
关键词 猪札幌病毒 跨种间感染 基因重组 受体
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猪札幌病毒VP1基因的表达及ELISA抗体检测方法的建立 被引量：1
6
作者 李润成 刘国华 +4 位作者 黄泽彬 丁建 汪镇南 肖朝庭 余兴龙 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期495-500,共6页
为了在大肠杆菌中表达猪札幌病毒VP1基因,并以纯化的重组蛋白为抗原建立猪札幌病毒血清抗体ELISA检测方法。采用RT-PCR技术扩增VP1基因,并将其克隆到pMD18-T载体中,再将所克隆的衣壳蛋白的编码序列亚克隆到表达载体pET-28a(+)中,将成功... 为了在大肠杆菌中表达猪札幌病毒VP1基因,并以纯化的重组蛋白为抗原建立猪札幌病毒血清抗体ELISA检测方法。采用RT-PCR技术扩增VP1基因,并将其克隆到pMD18-T载体中,再将所克隆的衣壳蛋白的编码序列亚克隆到表达载体pET-28a(+)中,将成功构建的原核表达质粒pETSAVCAP转化大肠杆菌Rosetta(DE3)进行诱导表达。用纯化的VP1蛋白作为抗原建立了猪札幌病毒血清抗体间接ELISA检测方法并初步用于临床样品的检测。结果显示,猪札幌病毒VP1基因可在大肠杆菌中稳定、高效地表达,Western-blot分析表明该重组蛋白具有良好的反应原性。经对反应条件进行优化,确定间接ELISA的抗原最佳包被浓度为0.5μg/mL,且不与其他常见猪病的阳性血清发生交叉反应,建立的ELISA方法具有较好的敏感性、特异性和重复性。通过对从多个省份收集的490份猪血清样品进行检测,阳性率为65.31%。表明,以大肠杆菌表达的猪札幌病毒VP1重组蛋白为抗原建立的间接ELISA方法可以用于猪札幌病毒抗体的检测。 展开更多
关键词 猪札幌病毒 VP1基因 表达 酶联免疫吸附试验 抗体 检测
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猪札幌病毒VPg基因的原核表达及免疫原性研究 被引量：1
7
作者 单兴娜 杨彬 +3 位作者 柳纪省 张韵 杨勃 兰喜 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第4期816-822,共7页
为获得猪札幌病毒病毒基因组连接蛋白(viral protein genome-linked,VPg),本试验以中国西北地区猪札幌病毒CH430株RNA为模板,通过RT-PCR扩增VPg基因,将其克隆至pMD19-T Simple Vector,双酶切及基因测序鉴定后,再亚克隆至pET-30a中构建... 为获得猪札幌病毒病毒基因组连接蛋白(viral protein genome-linked,VPg),本试验以中国西北地区猪札幌病毒CH430株RNA为模板,通过RT-PCR扩增VPg基因,将其克隆至pMD19-T Simple Vector,双酶切及基因测序鉴定后,再亚克隆至pET-30a中构建重组质粒,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达。将纯化的目的蛋白免疫家兔得到超免疫血清。结果显示,获得的VPg基因全长为339bp,编码113个氨基酸。SDS-PAGE结果显示,重组菌在37℃、1.0mmol/L IPTG诱导表达6h时重组蛋白表达量最高,表达的目的蛋白主要以包涵体的形式存在,大小为22ku,与预期结果相符。Western blotting分析结果表明,该重组蛋白与超免疫血清具有良好的反应原性。超免疫血清ELISA效价可达1∶12 800,且具有良好的特异性。本试验获得的超免疫血清为研究猪札幌病毒非结构蛋白VPg的结构与功能奠定了基础。 展开更多
关键词 猪札幌病毒 病毒基因组连接蛋白(VPg) 原核表达 纯化
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云南省猪札幌病毒感染情况调查及VP1基因遗传进化分析 被引量：1
8
作者 刘应华 程美玲 +6 位作者 王馨娴 王云华 毕峻宇 姚海燕 张梦晨 王蓉 尹革芬 《动物医学进展》 北大核心 2022年第8期25-29,共5页
札幌病毒(Sapovirus, SaV)是引起人和多种动物急性腹泻和胃肠炎的病原之一,引发了一系列的公共卫生安全问题。研究建立了猪札幌病毒GⅢ基因型的RT-qPCR检测方法,对采集于云南省13个市规模化养殖场不同日龄与月龄的679份猪粪便样品进行检... 札幌病毒(Sapovirus, SaV)是引起人和多种动物急性腹泻和胃肠炎的病原之一,引发了一系列的公共卫生安全问题。研究建立了猪札幌病毒GⅢ基因型的RT-qPCR检测方法,对采集于云南省13个市规模化养殖场不同日龄与月龄的679份猪粪便样品进行检测,了解云南省各地区猪札幌病毒的感染状况及混合感染情况,并对其主要衣壳蛋白(VP1)基因进行遗传进化分析。结果显示,云南省猪札幌病毒感染率为28.9%,以哺乳仔猪感染率最高(39.4%);总混合感染率为85.7%,与猪星状病毒的混合感染率最高(69.9%),呈现多重感染的现象。同时扩增获得2条PoSaV毒株VP1基因序列YNXW2(GenBank登录号:OK485020)和YNTH2(登录号:OK485021),其遗传进化分析表明YNXW2和YNTH2属于GⅢ型毒株。2条VP1序列YNXW2和YNTH2与GⅢ型参考毒株LC215880和MK965898的核苷酸同源性最高,分别为89.3%和93.5%。 展开更多
关键词 猪 札幌病毒 VP1基因 混合感染 遗传进化
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猪沙波病毒CH430株p70基因克隆与生物信息学分析
9
作者 刘伟 王恩丽 +2 位作者 柳纪省 杨彬 兰喜 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2014年第3期46-51,共6页
利用RT-PCR方法从猪沙波病毒CH430株中克隆出非结构蛋白p70基因并测序,结果显示,p70基因全长1 995 nt,编码665个氨基酸,经同源性比对及遗传进化树分析表明,CH430株为基因Ⅲ型沙波病毒毒株。生物信息学分析显示该蛋白理论等电点(pI)为5.... 利用RT-PCR方法从猪沙波病毒CH430株中克隆出非结构蛋白p70基因并测序,结果显示,p70基因全长1 995 nt,编码665个氨基酸,经同源性比对及遗传进化树分析表明,CH430株为基因Ⅲ型沙波病毒毒株。生物信息学分析显示该蛋白理论等电点(pI)为5.96,理论分子质量为72 876.6 u;其序列上共发现25个磷酸化位点,分别为Ser(6)、Thr(13)、Tyr(6),而蛋白的磷酸化与信号传导有关,预测该蛋白为一重要的信号传导分子;无信号肽和跨膜区;该蛋白含有胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶和RdRp功能域;胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶功能域核心结构为1个由7个β折叠形成柱状结构和1个由1个α螺旋和7个β折叠扭曲平行形成1个不完全的桶状结构共同组成,RdRp功能域核心结构为1个具有3个子结构域空间结构,该结构与右手掌在形态上非常相似,而3个子结构域也被认为是手指、手掌和拇指。 展开更多
关键词 猪沙波病毒 非结构蛋白p70 克隆 生物信息学分析
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猪沙波病毒抗体间接ELISA检测方法的建立及初步应用
10
作者 蒋静 王艳 +2 位作者 华修国 陈琰 沈权 《畜牧与兽医》 北大核心 2012年第3期13-16,共4页
以原核表达重组蛋白作为抗原建立了猪沙波病毒(SaV)抗体的间接ELISA检测方法。使用矩阵滴定法确定抗原包被浓度为6.4μg/mL,血清稀释倍数为1∶50。试验选用1%BSA作为封闭液,血清和二抗的最佳作用时间分别为60 min和40 min。选择无致癌的... 以原核表达重组蛋白作为抗原建立了猪沙波病毒(SaV)抗体的间接ELISA检测方法。使用矩阵滴定法确定抗原包被浓度为6.4μg/mL,血清稀释倍数为1∶50。试验选用1%BSA作为封闭液,血清和二抗的最佳作用时间分别为60 min和40 min。选择无致癌的TMB为底物,确定TMB最佳反应时间为10 min。通过对20份猪阴性血清样品的检测,计算阳性判定值为0.203。通过交叉试验、批内和批间重复性试验证明,本研究建立的SaV间接ELISA检测方法具有特异性高,重复性好的特点,可用于猪沙波病毒抗体的检测。 展开更多
关键词 猪沙波病毒 间接ELISA 抗体
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