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猪环状病毒2型的PCR检测方法的建立及应用 被引量:65
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作者 曹胜波 陈焕春 +3 位作者 肖少波 何启盖 徐引弟 刘军发 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期53-56,共4页
根据国外已发表的猪环状病毒 2型 (PCV 2 )的全基因组序列 ,设计一对 2型特异性引物 ,对可疑病料进行PCR扩增。将扩增产物连接到pMD 18 T载体上并克隆到大肠杆菌DH5α中 ,经提取质粒进行PCR、酶切、测序鉴定 ,证明扩增出了PCV 2的目的... 根据国外已发表的猪环状病毒 2型 (PCV 2 )的全基因组序列 ,设计一对 2型特异性引物 ,对可疑病料进行PCR扩增。将扩增产物连接到pMD 18 T载体上并克隆到大肠杆菌DH5α中 ,经提取质粒进行PCR、酶切、测序鉴定 ,证明扩增出了PCV 2的目的片段。将测序结果与GenBank收录的PCV 2序列进行比较 ,发现同源性均在90 %以上。用该PCR方法在 43份可疑病料中检测到了 12份PCV 2阳性病料 。 展开更多
关键词 猪环状病毒2 检测方法 聚合酶链反应
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猪圆环病毒2型及猪繁殖与呼吸综合症病毒的快速检测 被引量:53
2
作者 芦银华 许立华 +4 位作者 华修国 谈国蕾 黄伟坚 陈德胜 陈溥言 《中国病毒学》 CAS CSCD 2003年第2期184-186,共3页
According to the published genome sequences of Porcine circovirus type 2 (PCV2) and Porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV), primers were designed and PCR, RT-PCR were set up for the detection of P... According to the published genome sequences of Porcine circovirus type 2 (PCV2) and Porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV), primers were designed and PCR, RT-PCR were set up for the detection of PCV2 and PRRSV, respectively. With the established methods, 38 clinical samples from the respiratory disease pigs were detected for the presence of PCV2 and PRRSV. The results demonstrated that 22 samples were positive for PCV2, 27 samples were positive for PRRSV and among the above positive samples, 18 samples were positive for both viruses. The data obtained in the present study indicated that PCV2 and PRRSV maybe play an important role in the course of the development of respiratory diseases. 展开更多
关键词 猪圆环病毒2 猪繁殖呼吸综合症病毒 共感染 检测 呼吸道疾病 PCR RT-PCR
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猪圆环病毒2型免疫过氧化物酶单层细胞试验抗体检测试剂盒的研制及应用 被引量:43
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作者 刘长明 张超范 +2 位作者 危艳武 张朝霞 袁婧 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期621-624,633,共5页
本研究建立了一种免疫过氧化物酶单层细胞试验(Immunoperoxidase monolayer assay,IPMA),用于猪圆环病毒2型血清抗体检测,通过对IPMA反应条件的优化,组装了诊断试剂盒。研究结果表明,用IPMA检测猪圆环病毒2型人工感染猪血清,于感染后3... 本研究建立了一种免疫过氧化物酶单层细胞试验(Immunoperoxidase monolayer assay,IPMA),用于猪圆环病毒2型血清抗体检测,通过对IPMA反应条件的优化,组装了诊断试剂盒。研究结果表明,用IPMA检测猪圆环病毒2型人工感染猪血清,于感染后3周抗体阳转,第3周~10周抗体阳性检出率为92.8%(52/56),对照组猪血清抗体检测均为阴性(33/33)。试剂盒在-20℃稳定保存18个月与其他几种猪病毒参考血清无交叉反应,与用重组蛋白抗原建立的rcELISA符合率为89.2%。对来自黑龙江、吉林、河北、上海、内蒙古、云南、江西等地猪场健康成年猪血清480份和发病猪血清424份进行了检测,抗体检出率分别为91.7%和79.2%,表明我国猪群中猪圆环病毒2型污染相当严重。该试剂盒的研制为我国PCV2流行病学调查和疫苗免疫效果的评价提供了技术手段。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2 免疫过氧化物酶单层细胞试验 抗体检测试剂盒
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广西断奶仔猪猪圆环病毒2型的检测 被引量:30
4
作者 黄伟坚 芦银华 +6 位作者 覃广胜 蓝可耀 阮强 莫荣燕 温传新 张美 余克伦 《中国兽医科技》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期3-5,共3页
对广西 16个养猪场的 2 2份断奶仔猪病料用PCR技术检测猪圆环病毒 2型 (PCV 2 ) ,对阳性病料进一步检测猪瘟病毒、猪生殖和呼吸系统综合征病毒、伪狂犬病病毒及细菌性病原。结果 ,从南宁市郊某猪场表现衰弱症状的病猪病料中检测出PCV 2 ... 对广西 16个养猪场的 2 2份断奶仔猪病料用PCR技术检测猪圆环病毒 2型 (PCV 2 ) ,对阳性病料进一步检测猪瘟病毒、猪生殖和呼吸系统综合征病毒、伪狂犬病病毒及细菌性病原。结果 ,从南宁市郊某猪场表现衰弱症状的病猪病料中检测出PCV 2 ,而这些病料没有检出猪瘟病毒、猪生殖和呼吸系统综合征病毒、伪狂犬病病毒及可疑细菌 ,证实广西存在PCV 2引起的断奶仔猪多系统衰弱综合征 (PMWS)。 展开更多
关键词 广西 断奶仔猪 猪圆环病毒 多系统衰弱综合征
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猪圆环病毒2型疫苗的研究进展 被引量:41
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作者 王一平 郭龙军 +1 位作者 唐青海 刘长明 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期1337-1345,共9页
猪圆环病毒2型(PCV2)是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原,给全球养猪业造成了巨大经济损失。PCV2感染可以破坏动物机体的免疫系统,造成严重的免疫抑制,容易诱发多种细菌及病毒的混合感染与继发感染,给疾病的诊断和治疗带... 猪圆环病毒2型(PCV2)是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原,给全球养猪业造成了巨大经济损失。PCV2感染可以破坏动物机体的免疫系统,造成严重的免疫抑制,容易诱发多种细菌及病毒的混合感染与继发感染,给疾病的诊断和治疗带来巨大的困难。疫苗免疫接种是防控PCV2感染的有效手段,有关PCV2疫苗的研究已成为国内外学者的关注热点。迄今为止,欧美几家跨国公司已先后推出商品化的PCV2灭活疫苗、亚单位疫苗及嵌合病毒疫苗,国内也已研制出PCV2灭活疫苗,这些疫苗的推广应用为有效防控猪圆环病毒病发挥了重要作用。鉴于这些疫苗尚不能完全阻断PCV2传播,无法彻底清除体内感染的病毒,因此,开发高效、价廉的新型活载体疫苗、核酸疫苗及标记疫苗是今后研究的趋势。笔者在本文中概括地介绍了目前商品化的PCV2疫苗的特性和免疫效力,并对近年来有关PCV2活载体疫苗、核酸疫苗及标记疫苗等新型疫苗的研究进展进行综述,以期为猪圆环病毒病的防制提供参考。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2 疫苗 研究
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广西猪圆环病毒2型感染的流行病学调查 被引量:30
6
作者 陈义祥 刘翠权 +6 位作者 何丹 胡丽萍 蒙雪琼 陈芳芳 何贻坚 赵国明 刘棋 《中国兽医科技》 CAS CSCD 北大核心 2005年第10期827-831,共5页
结合流行病学、临床症状、病理变化,采用PCR技术,对2004年1月至2005年5月采自广西14个市97个疑似猪圆环病毒2型(PCV2)感染发病猪场的197份组织病料(脾、肺、淋巴结)进行了PCV2检测;同时,对鉴定为PCV2阳性的组织病料和猪场进行了猪生殖... 结合流行病学、临床症状、病理变化,采用PCR技术,对2004年1月至2005年5月采自广西14个市97个疑似猪圆环病毒2型(PCV2)感染发病猪场的197份组织病料(脾、肺、淋巴结)进行了PCV2检测;同时,对鉴定为PCV2阳性的组织病料和猪场进行了猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪流感病毒(SIV)和猪伪狂犬病病毒(PRV)的检测,另外,对6个地(市)11个生猪屠宰场采集的外观健康屠宰猪的295份组织样品(脾、肺、淋巴结)进行了PCV2检测。结果显示,在197份组织样品中检出PCV2阳性病料108份,平均阳性率为54.82%(108/197),阳性猪场62个,平均阳性率为63.92%(62/97)。PCV2与PRRSV、CSFV、SIV、PRV混合感染的组织病料总阳性率为42.13%(83/197),混合感染的猪场总阳性率为57.73%(56/97)。从21头外观健康屠宰猪的组织样品中检测到PCV2,阳性率为7.10%。由此可见,PCV2感染在广西猪群中已普遍存在,混合感染和健康带毒现象使病情更加复杂。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2 PCR 流行病学调查
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猪圆环病毒2型的分离与鉴定 被引量:30
7
作者 吕艳丽 杨汉春 +2 位作者 郭鑫 陈艳红 查振林 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2004年第2期14-18,共5页
利用 PCR方法 ,从疑似断奶猪多系统衰竭综合征 (PMWS)的自然病例的淋巴结和脾脏中扩增出了预期长度的猪圆环病毒 2型 (Porcine Circovirus type 2 ,PCV 2 )的 DNA片段 ,并用限制性内切酶对 PCR产物进行了酶切鉴定。将经 PCR扩增和酶切... 利用 PCR方法 ,从疑似断奶猪多系统衰竭综合征 (PMWS)的自然病例的淋巴结和脾脏中扩增出了预期长度的猪圆环病毒 2型 (Porcine Circovirus type 2 ,PCV 2 )的 DNA片段 ,并用限制性内切酶对 PCR产物进行了酶切鉴定。将经 PCR扩增和酶切鉴定为 PCV2阳性的组织样品匀浆液接种到无 PCV污染的 PK15细胞中传代 ,经间接免疫荧光检查 ,在接毒细胞内观察到了特异性免疫荧光 ;用接毒细胞制备超薄切片 ,在电镜下观察到了直径大约为 17nm的圆形病毒样粒子和大量不同形态的胞浆内包涵体。由此表明分离出的病毒为猪圆环病毒 2型。 展开更多
关键词 圆环病毒2 分离鉴定 多系统衰竭综合征 淋巴结 脾脏
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中国部分地区猪圆环病毒2型的基因型分析 被引量:31
8
作者 李文洁 李文涛 +2 位作者 严伟东 陈焕春 何启盖 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期1358-1362,共5页
对中国11个省(市)部分猪场收集的812份病料,应用ORF2-PCR进行检测,发现有235份为PCV2阳性病料。利用鉴别PCR方法从235份阳性病料中,检出10份PCV2a基因型和133份PCV2b基因型,检出率分别为4.2%、56.6%。进一步对ORF2-PCR检测阳性的部分模... 对中国11个省(市)部分猪场收集的812份病料,应用ORF2-PCR进行检测,发现有235份为PCV2阳性病料。利用鉴别PCR方法从235份阳性病料中,检出10份PCV2a基因型和133份PCV2b基因型,检出率分别为4.2%、56.6%。进一步对ORF2-PCR检测阳性的部分模板进行全基因组扩增,构建阳性重组质粒,对插入质粒的片段进行测序鉴定,利用DNAStar进行同源性分析,同GenBank参考毒株绘制系统发育树,从系统发育树中也可分出PCV2a、PCV2b 2种基因型。鉴别PCR和测序结果说明,我国部分地区流行的猪圆环病毒2型以PCV2b基因型为主,少数为PCV2a基因型,也有既非PCV2a又非PCV2b的基因型(PCV2c?)。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2 分子流行病学 PCV2a PCV2b
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猪圆环病毒2型重组Cap蛋白在昆虫杆状病毒中的表达 被引量:26
9
作者 刘长明 陆月华 +3 位作者 张超范 危艳武 刘焕章 童光志 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期479-482,共4页
猪圆环病毒2型(PCV2)基因组包含2个开放阅读框架(ORFs),其中ORF1编码病毒复制相关蛋白(Rep),ORF2编码病毒衣壳蛋白(Cap)。为了在昆虫细胞表达Cap蛋白,本研究采用PCR扩增PCV2-ORF2编码基因,将PCR产物插入到昆虫杆状病毒转移载体上,经酶... 猪圆环病毒2型(PCV2)基因组包含2个开放阅读框架(ORFs),其中ORF1编码病毒复制相关蛋白(Rep),ORF2编码病毒衣壳蛋白(Cap)。为了在昆虫细胞表达Cap蛋白,本研究采用PCR扩增PCV2-ORF2编码基因,将PCR产物插入到昆虫杆状病毒转移载体上,经酶切反应及DNA序列分析得到验证。重组质粒与昆虫杆状病毒线性基因组混合,转染到昆虫细胞(Sf-21)进行基因重组,经3次病毒蚀斑克隆,获得高效表达Cap蛋白的重组杆状病毒,毒价可达1.28×108pfu/mL。采用SDS-PAGE凝胶电泳分析表明,重组Cap融合蛋白分子量为32.8 ku,占总蛋白含量的17.2%。免疫印迹试验分析表明,重组Cap蛋白与PCV2阳性血清产生特异性反应,证明该重组蛋白具有良好的免疫活性反应。本研究为进一步进行该病毒分子诊断、亚单位疫苗以及分子生物学等研究奠定了基础。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2 重组衣壳蛋白 杆状病毒表达
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我国部分地区猪圆环病毒2型分离株的遗传变异分析 被引量:30
10
作者 郭龙军 陆月华 +2 位作者 危艳武 黄立平 刘长明 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期856-859,共4页
为了解我国猪圆环病毒2型(PCV2)流行毒株遗传变异情况,本研究对本实验室分离到的19株PCV2分离株通过病毒全基因组克隆和测序分析,将其分为2个大基因群和3个亚群,其基因组分别为1766nt、1767nt和1768nt,各占15.8%、73.7%和10.5%。以1767n... 为了解我国猪圆环病毒2型(PCV2)流行毒株遗传变异情况,本研究对本实验室分离到的19株PCV2分离株通过病毒全基因组克隆和测序分析,将其分为2个大基因群和3个亚群,其基因组分别为1766nt、1767nt和1768nt,各占15.8%、73.7%和10.5%。以1767nt毒株为基准,其基因组第39或1039位有1个碱基缺失后突变成1766nt毒株;第1040位有1个碱基插入后突变成1768nt毒株。对19株病毒ORF2编码的Cap蛋白分析发现,有4株病毒编码基因发生了突变,出现了705nt和708nt两种突变型,使ORF2编码的Cap蛋白C末端分别有1和2个氨基酸增加。同时,本实验选用AccⅠ和FbaⅠ内切酶对19株病毒基因组PCR产物进行了限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析,其结果可作为流行毒株分型鉴别依据。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2 流行毒株 遗传变异 限制性片段长度多态性
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江苏省猪高热病病例主要继发感染病毒的多重PCR检测 被引量:24
11
作者 叶俊平 盛瑜 +2 位作者 朱丽娜 高崧 刘秀梵 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期1029-1034,共6页
应用建立的2个多重PCR方法,对2005~2006年收集于江苏省的211份猪高热病疑似病料进行了检测。结果,PRRSV阳性率为51.2%,PCV2阳性率为44.1%,CSFV阳性率为10.4%,PPV阳性率为3.9%,PRV阳性率为2.4%。2005年病料中PCV2阳性率... 应用建立的2个多重PCR方法,对2005~2006年收集于江苏省的211份猪高热病疑似病料进行了检测。结果,PRRSV阳性率为51.2%,PCV2阳性率为44.1%,CSFV阳性率为10.4%,PPV阳性率为3.9%,PRV阳性率为2.4%。2005年病料中PCV2阳性率为21.2%,2006年为73.2%;2005年PRRSV阳性率为38.1%,2006年为67.7%。2006年猪高热病疫情比2005年严重,PCV2和PRRSV可能在其中发挥了协同致病作用。对10个PRRSV分离株ORF5基因和Nsp2基因进行的测序表明,2006年分离株Nsp2基因中有连续87个碱基的缺失。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪圆环病毒2 猪细小病毒 猪瘟病毒 猪伪狂犬病病毒 猪高热病 多重PCR ORF5基因 NSP2基因
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PRRS-CSF-PCV2诊断DNA芯片构建研究 被引量:22
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作者 肖驰 曹三杰 +3 位作者 文心田 张焕容 肖国生 黄小波 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期799-803,共5页
本研究旨在研制CSF-PRRS-PCV2诊断DNA芯片。根据各病毒序列选取靶标,制备相应探针,并构建DNA芯片。结果表明:该芯片能同时检测PRRS、CSF和PCV2感染,并能区分PRRSV欧洲型和美洲型毒株,芯片检测阳性判读标准为SNR≥1.5(信号总强度模式量化... 本研究旨在研制CSF-PRRS-PCV2诊断DNA芯片。根据各病毒序列选取靶标,制备相应探针,并构建DNA芯片。结果表明:该芯片能同时检测PRRS、CSF和PCV2感染,并能区分PRRSV欧洲型和美洲型毒株,芯片检测阳性判读标准为SNR≥1.5(信号总强度模式量化)或信号强度≥1 000(信号中位值模式量化)。该芯片具有特异性高、灵敏度高和可重复利用的优点。应用PRRS-CSF-PCV2诊断DNA芯片检测20份临床病料发现PRRSV、CSFV和PCV2单独感染分别为0、15%和5%,PRRSV与CSFV、PRRSV与PCV2、PRRSV、PCV2和CS-FV混合感染分别为15%、35%和15%。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪瘟病毒 猪圆环病毒2 DNA芯片 诊断
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猪圆环病毒病的流行趋势与防控对策 被引量:28
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作者 刘建波 张辉 刘长明 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第1期111-115,共5页
自猪圆环病毒病(PCVAD)暴发以来,该病已成为全球养猪业危害较为严重的疾病之一,主要以断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)和猪呼吸道疾病综合征(PRDC)为主。2005年前从PMWS病例分离到的猪圆环病毒2型(PCV-2)流行毒株以PCV-2a基因亚型为主,... 自猪圆环病毒病(PCVAD)暴发以来,该病已成为全球养猪业危害较为严重的疾病之一,主要以断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)和猪呼吸道疾病综合征(PRDC)为主。2005年前从PMWS病例分离到的猪圆环病毒2型(PCV-2)流行毒株以PCV-2a基因亚型为主,此后以PCV-2b基因亚型为优势,且流行毒株毒力有明显增强趋势。近年来,PCVAD的流行形式发生了一定变化,PMWS发生率降低,而PRDC发生率明显上升。PMWS症状与感染沙门菌、猪细小病毒、猪肺炎支原体等病原体有关。与PCV-2相关的PRDC主要由PCV-2与PRRSV、猪肺炎支原体混合感染造成。尽管当前通过疫苗免疫接种对本病得到了有效遏制,但PCVAD流行新特点应引起研究者关注。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2 猪圆环病毒病 流行趋势 防控对策
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猪圆环病毒2型细胞培养适应毒株的培育和鉴定 被引量:26
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作者 刘长明 张超范 +3 位作者 危艳武 谭斌 陆月华 谷守林 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期248-252,共5页
从临床表现为仔猪断奶后多系统衰竭综合征(PMWS)淋巴组织病料,经聚合酶链式反应(PCR)证实为猪圆环病毒2型(PCV2)感染,采用无污染的猪肾细胞系(PK15)分离培养,并连续传代培育成一株细胞培养适应毒,命名为PCV2/LG株。分离毒株经细胞培养,... 从临床表现为仔猪断奶后多系统衰竭综合征(PMWS)淋巴组织病料,经聚合酶链式反应(PCR)证实为猪圆环病毒2型(PCV2)感染,采用无污染的猪肾细胞系(PK15)分离培养,并连续传代培育成一株细胞培养适应毒,命名为PCV2/LG株。分离毒株经细胞培养,于第25代后毒价显著升高,于第35代毒价可达105.6TCID50/mL。采用免疫过氧化物酶单层细胞染色法(IPMA)、免疫电镜技术、分子克隆及核酸序列分析等鉴定表明,分离株感染细胞后病毒抗原主要分布在细胞核及细胞质中;病毒感染的阳性细胞呈散在分布,阳性细胞数可达50%以上;免疫电镜观察到与PCV2特异抗体结合形成的病毒免疫复合物呈实心小颗粒样粒子团,病毒粒子直径约为17nm;病毒抗原基因组由1768个核苷酸组成,与GenBank登录的8个PCV2基因组序列同源性达96.2%以上。用2mL的病毒细胞培养物(105.6TCID50/mL)接种30日龄PCV2抗体阴性仔猪3头,可引起典型PMWS临床症状。本研究为进一步开展该病毒的致病性、疫苗免疫、诊断及分子生物学等研究奠定了基础。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2 病毒分离鉴定 毒株培育 细胞质
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杭州地区猪Ⅱ型圆环病毒抗体的血清学调查 被引量:22
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作者 陈庆新 商绍彬 +4 位作者 叶菊秀 母安雄 王毅峰 陆国林 周继勇 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2003年第7期26-28,共3页
从浙江省杭州地区 2 8个猪场采集猪血清 1 6 77份 ,用间接荧光免疫试验进行了猪Ⅱ型圆环病毒 (PCV 2 )抗体检测。共检出抗体阳性血清 96 0份 ,总阳性率为 5 7.2 5 % ,其中经产母猪的阳性率为 6 2 .32 % ,后备母猪的阳性率为 5 5 .5 5 % ... 从浙江省杭州地区 2 8个猪场采集猪血清 1 6 77份 ,用间接荧光免疫试验进行了猪Ⅱ型圆环病毒 (PCV 2 )抗体检测。共检出抗体阳性血清 96 0份 ,总阳性率为 5 7.2 5 % ,其中经产母猪的阳性率为 6 2 .32 % ,后备母猪的阳性率为 5 5 .5 5 % ,断奶后仔猪的阳性率为 5 5 .4 8% ,断奶前仔猪的阳性率为 5 2 .98%。血清学调查结果显示 ,PCV 展开更多
关键词 杭州地区 猪Ⅱ型圆环病毒 抗体检测 血清学调查 间接荧光免疫试验 断奶仔猪 多系统衰竭综合征
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猪圆环病毒2型疫苗研究进展 被引量:27
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作者 欧阳海平 潘永飞 宋延华 《动物医学进展》 北大核心 2020年第1期98-103,共6页
猪圆环病毒2型(PCV2)感染后会导致断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)等"猪圆环病毒相关疾病"(PCVADs),给全球养猪业造成了巨大的经济损失。疫苗免疫是防控该病的有效手段,近年来市场上推出了PCV2灭活疫苗、嵌合疫苗和亚单位疫苗... 猪圆环病毒2型(PCV2)感染后会导致断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)等"猪圆环病毒相关疾病"(PCVADs),给全球养猪业造成了巨大的经济损失。疫苗免疫是防控该病的有效手段,近年来市场上推出了PCV2灭活疫苗、嵌合疫苗和亚单位疫苗。PCV2变异较快,主要临床流行毒株从PCV2b逐渐演变为PCV2d,现有商业化疫苗免疫效果需进一步研究证实。论文就近年来国内外PCV2传统疫苗、新型基因工程疫苗、PCV2疫苗与其他疫苗联合免疫的研究进展进行综述,旨在为猪圆环病毒相关疾病的防控及疫苗的开发与利用提供参考。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2 疫苗 研究
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猪圆环病毒2型感染的检测与流行病学调查 被引量:24
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作者 张治涛 李玉峰 +2 位作者 姜平 王先炜 邓雨修 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期227-231,共5页
根据GenBank上发表的PCV2 ORF2和PRRSV ORF7序列设计合成引物,建立分别用于检测PCV2和PRRSV的PCR和RT-PCR方法,并对2003年9月至2005年5月采自189个可疑发病猪场的389份病料进行了PCV2和PRRSV的检测。结果显示,来自33个猪场的35份样品为P... 根据GenBank上发表的PCV2 ORF2和PRRSV ORF7序列设计合成引物,建立分别用于检测PCV2和PRRSV的PCR和RT-PCR方法,并对2003年9月至2005年5月采自189个可疑发病猪场的389份病料进行了PCV2和PRRSV的检测。结果显示,来自33个猪场的35份样品为PCV2阳性,猪场PCV2阳性率为17.1%;PCV2与PRRSV混合感染率为5.1%,PCV2阳性猪场中PRRSV感染率为57.6%。流行病学统计结果表明,安徽省猪场PCV2阳性率最高;安徽省和广西省猪场PCV2和PRRSV的混合感染最严重;春夏季节PCV2阳性率明显高于秋冬;消瘦、被毛粗乱是PCV2感染的主要特征;淋巴结水肿或出血,肾脏肿大、出血或呈灰白色以及脾脏病变是PCV2感染的主要病理变化;仔猪7~8周龄发病率最高。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2 流行病学 混合感染 猪繁殖与呼吸综合征病毒
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PRRSV和PCV-2以及PRV多重SYBR Green-Ⅰ实时荧光PCR检测方法的建立 被引量:21
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作者 王小武 符芳 +5 位作者 柴政 孔令达 蔡雪辉 宋淑萍 许红喜 李曦 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期494-499,共6页
根据GenBank中登录的猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)N蛋白基因、猪圆环病毒2型(PCV-2)rep蛋白基因和猪伪狂犬病病毒(PRV)gE基因的核苷酸序列分别设计了3对特异性引物,成功建立了同时检测PRRSV、PCV-2、PRV的多重SYBR Green-Ⅰ实时荧光PC... 根据GenBank中登录的猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)N蛋白基因、猪圆环病毒2型(PCV-2)rep蛋白基因和猪伪狂犬病病毒(PRV)gE基因的核苷酸序列分别设计了3对特异性引物,成功建立了同时检测PRRSV、PCV-2、PRV的多重SYBR Green-Ⅰ实时荧光PCR方法。敏感性试验结果显示,PRRSV、PCV-2的敏感性可达250拷贝/μL,PRV的敏感性可达500拷贝/μL。表明,该方法具有较好的特异性、重复性和敏感性,可以用于PRRSV、PCV-2和PRV的快速检测。 展开更多
关键词 猪生殖与呼吸综合征病毒 猪圆环病毒2 猪伪狂犬病病毒 多重SYBR Green-Ⅰ实时荧光 PCR
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类猪圆环病毒2型因子P1与P2株全长基因组DNA分子克隆的构建 被引量:22
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作者 温立斌 何孔旺 杨汉春 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2007年第6期579-582,共4页
依据类猪圆环病毒2型(PCV2)因子P1与P2株全基因组序列,设计1对引物,应用PCR技术扩增全基因组DNA片段,分别克隆到pMD18-T载体后,再克隆到pBluescript SK载体,获得两因子全长基因组单拷贝DNA分子克隆和双拷贝串联分子克隆。为进一步研究类... 依据类猪圆环病毒2型(PCV2)因子P1与P2株全基因组序列,设计1对引物,应用PCR技术扩增全基因组DNA片段,分别克隆到pMD18-T载体后,再克隆到pBluescript SK载体,获得两因子全长基因组单拷贝DNA分子克隆和双拷贝串联分子克隆。为进一步研究类PCV2因子P1与P2的感染性分子克隆和生物学特性奠定了基础。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2 类猪圆环病毒2型因子 分子克隆
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利用E.coli表达猪圆环病毒2型Cap蛋白生产病毒样颗粒疫苗 被引量:23
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作者 赵晓云 乔绪稳 +5 位作者 陈瑾 李鹏成 于晓明 朱国强 郑其升 侯继波 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期976-986,共11页
【目的】研究利用大肠杆菌可溶性表达PCV2b亚型ORF2基因,利用重组Cap蛋白制备PCV2 VLP疫苗的可行性。【方法】根据大肠杆菌密码子使用频率表优化合成PCV2 NJ株ORF2基因,将其插入原核表达载体p QZ1,鉴定阳性后转入表达宿主菌BL21,利用原... 【目的】研究利用大肠杆菌可溶性表达PCV2b亚型ORF2基因,利用重组Cap蛋白制备PCV2 VLP疫苗的可行性。【方法】根据大肠杆菌密码子使用频率表优化合成PCV2 NJ株ORF2基因,将其插入原核表达载体p QZ1,鉴定阳性后转入表达宿主菌BL21,利用原核表达平台CVC1102对重组菌进行诱导表达。利用SDS-PAGE与Western blotting对目的基因的表达及产物的可溶性进行分析;利用电镜分析技术鉴定重组Cap蛋白VLP组装;利用BCA试剂盒测定重组大肠杆菌破碎后上清中总蛋白量,利用薄层扫描分析确定目的蛋白百分比,得出目的蛋白量,将重组Cap蛋白的浓度调整为1 mg·m L-1。使用不同剂量的重组蛋白与206佐剂乳化,免疫2—3周龄抗原抗体双阴性的仔猪,同时设含免疫增强剂CVC1301、CVC1302的试验组、同类制品免疫对照组与空白对照组,免疫后14 d与21 d所有试验猪采血,分离血清,利用武汉科前生物科技有限公司的猪圆环病毒2型抗体ELISA检测试剂盒检测试验猪血清中PCV2抗体水平;免疫后28 d试验猪按照兽用生物制品质量标准汇编中公布的PCV2攻毒程序,利用PCV2 NJ株F6代进行强毒攻击试验,肌肉注射与口服PCV2 NJ株各105.0TCID50,同时利用乳化的钥匙孔血蓝蛋白及硫酸巯基乙醇培养基进行免疫刺激,攻毒后25 d,对所有试验猪进行解剖检测,通过攻毒过程中试验猪体温变化、试验猪平均相对日增重、解剖时试验猪肺部与相关淋巴结的大体变化及攻毒后PCV2核酸检测等4个方面评价大肠杆菌表达制备的PCV2 VLP的免疫效力。【结果】SDS-PAGE结果表明PCV2 NJ株优化的ORF2基因在大肠杆菌中得到了高效表达,表达产物以完全可溶性形式存在于菌体超声波破碎后的上清中;Western blotting分析结果显示表达的重组Cap蛋白能够与PCV2阳性血清发生反应;电镜下观察可见大量直径在17 nm左右的PCV2病毒样颗粒存在于超声破碎后的上清中;500μg/头 展开更多
关键词 猪圆环病毒2 ORF2基因 可溶性表达 病毒样颗粒 免疫原性
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