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重组CP多克隆抗体在马铃薯卷叶病毒DAS-ELISA检测中的应用 被引量:12
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作者 李楠楠 左玉玲 +4 位作者 隋炯明 盖树鹏 樊连梅 李广存 郭宝太 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2011年第6期85-88,共4页
先经过饱和硫酸铵沉淀分离,再用Protein G亲和层析柱纯化,从马铃薯卷叶病毒(PLRV)重组CP作抗原制备的抗血清中获得了高纯度多克隆抗体(IgG),并用戊二醛法一步法进行碱性磷酸酶的标记获得了酶标抗体(IgG-AP)。将纯化的抗体与酶标抗体用... 先经过饱和硫酸铵沉淀分离,再用Protein G亲和层析柱纯化,从马铃薯卷叶病毒(PLRV)重组CP作抗原制备的抗血清中获得了高纯度多克隆抗体(IgG),并用戊二醛法一步法进行碱性磷酸酶的标记获得了酶标抗体(IgG-AP)。将纯化的抗体与酶标抗体用于感染PLRV病叶的检测,DAS-ELISA反应呈阳性,结果表明,用重组CP制备的多克隆抗体可成功地用于PLRV的DAS-ELISA检测。本研究为PLRV重组CP多克隆抗体的大量制备及ELISA检测奠定了基础。 展开更多
关键词 马铃薯卷叶病毒 重组CP 多克隆抗体 酶标抗体 DAS-ELISA
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马γ-干扰素成熟蛋白基因在大肠埃希氏菌中表达及其多克隆抗体制备 被引量:7
2
作者 白宇 童铁钢 +5 位作者 刘光亮 肖一红 王群 徐树兰 张维军 吴东来 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期878-882,共5页
采用RT-PCR从ConA刺激的马外周血单核细胞(PBMC)中扩增获得含信号肽的马γ-干扰素(Equine interferon-γ,EIFN-γ)基因,将其克隆至载体pCR2.1-TOPO中。通过PCR方法从重组质粒(pCR-EIFN-γ)中扩增马干扰素成熟蛋白(Mature EIFN-γ,reEIFN... 采用RT-PCR从ConA刺激的马外周血单核细胞(PBMC)中扩增获得含信号肽的马γ-干扰素(Equine interferon-γ,EIFN-γ)基因,将其克隆至载体pCR2.1-TOPO中。通过PCR方法从重组质粒(pCR-EIFN-γ)中扩增马干扰素成熟蛋白(Mature EIFN-γ,reEIFN-γ)基因,并将其亚克隆至原核表达载体pET-28a(+)。重组子经测序鉴定正确后转化至大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,对其产物进行SDS-PAGE分析和Western blot鉴定,将纯化后的表达产物免疫新西兰白兔制备多克隆抗体。结果表明,mEIFN-γ基因全长为441bD,含一个开放阅读框,编码146个氨基酸的成熟蛋白;对其表达产物以可溶性和包涵体两种形式存在,重组蛋白相对分子量约为18Ku,且具有免疫反应活性。mEIFN-γ基因在大肠杆菌中高效表达并在非变性和变性条件下,采用Ni^+亲和层析纯化方法均可获得高纯度的重组马γ-干扰素制备的多克隆抗体,为建立马γ-干扰素检测方法、监测机体免疫状态和研究机体免疫机制奠定了基础。 展开更多
关键词 马γ-干扰素 表达 纯化 多克隆抗体
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鹅催乳素受体多克隆抗体制备及组织表达分析 被引量:2
3
作者 邢光东 杨廷桂 +3 位作者 段修军 宦海琳 闫俊书 王根林 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期105-108,共4页
为深入研究鹅催乳素受体(PRLR)的功能,构建了含鹅PRLR胞外域编码序列exPRLR的原核表达质粒exPRLR-pET-28a(+),通过转化E.coli Roster建立了稳定的原核表达系统,在IPTG诱导下获得了PRLR胞外域的重组exPRLR。以重组exPRLR为抗原免疫家兔,... 为深入研究鹅催乳素受体(PRLR)的功能,构建了含鹅PRLR胞外域编码序列exPRLR的原核表达质粒exPRLR-pET-28a(+),通过转化E.coli Roster建立了稳定的原核表达系统,在IPTG诱导下获得了PRLR胞外域的重组exPRLR。以重组exPRLR为抗原免疫家兔,获得了兔抗鹅exPRLR的抗血清。Western blot分析证明该抗血清可特异识别由原核生物表达的重组exPRLR。进一步分析成年母鹅的组织蛋白,发现成年鹅中可能至少存在3种相对分子质量不同的PRLR蛋白异形体。 展开更多
关键词 催乳素受体 胞外域 原核表达 多克隆抗体 组织表达
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人前蛋白转化酶枯草溶菌素9的cDNA克隆和表达及多克隆抗体的制备 被引量:1
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作者 李风梅 俞辉 +1 位作者 宋金龙 刘忠民 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期945-948,共4页
目的构建人前蛋白转化酶枯草溶菌素9(pcsk9)的原核表达载体并诱导其表达,制备其蛋白的多克隆抗体。方法聚合酶链式反应扩增人工合成的pcsk9 cDNA序列;扩增产物经TA克隆、双酶切、连接,构建pET-28b-pcsk9表达载体;将重组质粒转化入大肠... 目的构建人前蛋白转化酶枯草溶菌素9(pcsk9)的原核表达载体并诱导其表达,制备其蛋白的多克隆抗体。方法聚合酶链式反应扩增人工合成的pcsk9 cDNA序列;扩增产物经TA克隆、双酶切、连接,构建pET-28b-pcsk9表达载体;将重组质粒转化入大肠杆菌表达菌BL21(DE3)的感受态细胞中,诱导表达;用纯化检测过的目的蛋白免疫新西兰兔,最后采集全血收集血清,获得多克隆抗体,并对该抗体进行免疫印迹及效价测定。结果 PET-28b-pcsk9原核表达载体构建成功,用诱导表达的目的蛋白免疫动物,收集血清获得多克隆抗体。对多克隆抗体进行纯化,免疫印迹检测结果证明自制多克隆抗体特异性良好,效价测定为1:13 200。结论成功构建了pcsk9原核表达载体pET-28b-pcsk9,且获得了其蛋白的多克隆抗体。 展开更多
关键词 PCSK9 表达载体 诱导表达 多克隆抗体
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早孕因子多克隆抗体的制备及应用 被引量:1
5
作者 杨杰 张海涛 +2 位作者 翟频 潘孝青 邵乐 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2011年第6期1321-1324,共4页
通过含有家兔早孕因子的重组质粒EPF-pET-32a(+)转化表达宿主菌Escherichia coli Rosetta,IPTG诱导,融合表达硫氧还原蛋白-兔早孕因子Trx-EPF。亲和层析纯化Trx-EPF,并在柱上进行肠激酶酶切,得到EPF蛋白并进行复性。EPF免疫波尔山羊,制... 通过含有家兔早孕因子的重组质粒EPF-pET-32a(+)转化表达宿主菌Escherichia coli Rosetta,IPTG诱导,融合表达硫氧还原蛋白-兔早孕因子Trx-EPF。亲和层析纯化Trx-EPF,并在柱上进行肠激酶酶切,得到EPF蛋白并进行复性。EPF免疫波尔山羊,制备羊抗兔家兔早孕因子抗血清,硫酸铵沉淀纯化多克隆抗体,用于家兔早孕检测。Western-blot结果表明,羊抗兔家兔早孕因子多克隆抗体对家兔早孕的检出率达到100%。 展开更多
关键词 早孕因子 家兔 多克隆抗体
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桃拉综合征病毒VP1高变区蛋白抗体制备及初步特性分析 被引量:1
6
作者 黄新新 袁辰刚 +4 位作者 宁雪 顾鸣 蔡强 刘锐 陆承平 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期221-224,229,共5页
目的:制备高效价的桃拉综合征病毒主要结构蛋白VP1高变区蛋白抗体,分析其免疫特性,为研究免疫诊断试剂做参考。方法:将p ET-VP1重组载体转化入大肠杆菌BL21,在IPTG诱导下进行表达。重组VP1蛋白纯化后免疫新西兰家兔,用琼脂扩散试验及EL... 目的:制备高效价的桃拉综合征病毒主要结构蛋白VP1高变区蛋白抗体,分析其免疫特性,为研究免疫诊断试剂做参考。方法:将p ET-VP1重组载体转化入大肠杆菌BL21,在IPTG诱导下进行表达。重组VP1蛋白纯化后免疫新西兰家兔,用琼脂扩散试验及ELISA检测抗体效价,用与VP1纯化蛋白特异性结合的单克隆噬菌体做竞争抑制试验。结果:p ETVP1重组蛋白在大肠杆菌BL21中呈可溶性高效表达。抗血清经琼扩试验鉴定效价达1∶26,ELISA效价达1∶217。与VP1蛋白特异结合的单克隆噬菌体能阻断部分抗血清与VP1蛋白的结合活性,但不影响最终检测阳性的判断。结论:制备的VP1高变区蛋白抗体效价高,VP1蛋白少数区域的位点变异并不影响多克隆抗体的结合活性,可用作免疫检测诊断试剂。 展开更多
关键词 桃拉综合征病毒 VP1蛋白 多克隆抗体 竞争抑制反应
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小鼠RMND5A的原核表达、纯化及多克隆抗体制备
7
作者 朱泽安 范雄伟 +7 位作者 邓云 莫小阳 万永奇 李永青 袁婺洲 江志钢 吴秀山 王跃群 《激光生物学报》 CAS CSCD 2010年第2期273-277,共5页
RMND5A通过MAPK信号途径参与了对细胞生命活动的调控过程。通过PCR扩增RMND5A基因,并将其克隆至表达载体pGEX-4T-1上,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,再通过IPTG进行诱导表达GST-RMND5A融合蛋白。通过尿素洗涤包涵体并切胶回收纯化融合蛋白... RMND5A通过MAPK信号途径参与了对细胞生命活动的调控过程。通过PCR扩增RMND5A基因,并将其克隆至表达载体pGEX-4T-1上,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,再通过IPTG进行诱导表达GST-RMND5A融合蛋白。通过尿素洗涤包涵体并切胶回收纯化融合蛋白,免疫新兰大白兔制备多克隆抗体,Western blot检测抗体活性。结果说明,获得了RMND5A原核表达重组融合蛋白及高效价的特异性兔抗RMND5A多克隆抗体,为RMND5A进一步的功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 RMND5A 原核表达 多克隆抗体
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生物信息资源在耻垢分枝杆菌EmbB多克隆抗体制备中的应用
8
作者 张文利 马莉 +3 位作者 辛毅 徐跃飞 任风 马郁芳 《中国生化药物杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期732-735,共4页
目的建立通过生物信息学手段制备耻垢分枝杆菌(M.smegamatis)EmbB(Sm EmbB)多克隆抗体的方法。方法应用生物信息资源在Sm EmbB的N端寻找一段18个氨基酸的特异短肽,合成后将其与白喉类毒素分子相连,以所形成的复合物免疫动物制备抗Sm Emb... 目的建立通过生物信息学手段制备耻垢分枝杆菌(M.smegamatis)EmbB(Sm EmbB)多克隆抗体的方法。方法应用生物信息资源在Sm EmbB的N端寻找一段18个氨基酸的特异短肽,合成后将其与白喉类毒素分子相连,以所形成的复合物免疫动物制备抗Sm EmbB的多克隆抗体。结果 Western blot结果显示获得的抗体可特异地作用于Sm EmbB。结论通过生物信息学手段制备多克隆抗体方法的建立解决了对蛋白质功能研究中缺乏抗体的困扰,为特殊蛋白质的抗体制备提供了借鉴。 展开更多
关键词 耻垢分枝杆菌 EmbB 生物信息 多克隆抗体
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人类心脏和肌肉组织特异表达基因Smyd1的表达与抗体制备
9
作者 谢岁岁 王跃群 +5 位作者 万永奇 邓云 莫小阳 李发祥 李永青 吴秀山 《生命科学研究》 CAS CSCD 2009年第5期413-417,共5页
Smyd1基因是人类心脏和肌肉特异表达基因,制备该基因的多克隆抗体可以为进一步深入研究Smyd1在心脏发育过程中与其他因子相互作用提供检测工具.通过PCR方法扩增smyd1基因的编码区片段,并将其克隆至PGEX-4T-1上,转化到大肠杆菌BL21(DE3)... Smyd1基因是人类心脏和肌肉特异表达基因,制备该基因的多克隆抗体可以为进一步深入研究Smyd1在心脏发育过程中与其他因子相互作用提供检测工具.通过PCR方法扩增smyd1基因的编码区片段,并将其克隆至PGEX-4T-1上,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,再通过5052法和IPTG法分别诱导表达GST-Smyd1融合蛋白.经比较,5052法诱导的蛋白表达量明显高于IPTG法.采用5052法大量诱导表达,通过割胶回收纯化融合蛋白,免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,Western blot检测抗体活性.结果表明,实验获得了高质量的多克隆抗体. 展开更多
关键词 Smyd1基因 原核表达 多克隆抗体
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白纹伊蚊唾液源34ku-1基因的克隆表达及鉴定
10
作者 陈素素 吴家红 +4 位作者 程金芝 赵久刚 商正玲 聂映 牟荣 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2022年第3期308-313,共6页
目的克隆表达白纹伊蚊唾液腺34ku-1蛋白(Aalb_34 ku-1),并制备鼠抗34ku-1多克隆抗体,用于蚊唾液34ku-1蛋白的检测。方法根据白纹伊蚊罗马株(GenBank:AY826117.1)34ku去除信号肽后的基因序列设计特异性引物,采用RT-PCR技术从白纹伊蚊安... 目的克隆表达白纹伊蚊唾液腺34ku-1蛋白(Aalb_34 ku-1),并制备鼠抗34ku-1多克隆抗体,用于蚊唾液34ku-1蛋白的检测。方法根据白纹伊蚊罗马株(GenBank:AY826117.1)34ku去除信号肽后的基因序列设计特异性引物,采用RT-PCR技术从白纹伊蚊安顺株雌蚊体内扩增获得34ku-1基因。利用美国国家生物技术信息中心(NCBI)、瑞士生物信息学研究所的蛋白分析专家系统(ExPASy)等对该蛋白进行生物信息学分析。将该基因构建到原核表达质粒pET-32a(+)中,转染大肠埃希菌BL21(DE3)后经异丙硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导表达目的蛋白,SDS-PAGE电泳分析表达结果。镍柱纯化34ku-1重组蛋白,采用Western blot验证纯化蛋白的免疫反应性。用纯化的34ku-1重组蛋白免疫BALB/c小鼠,制备免疫血清,采用间接ELISA法检测血清抗体效价,采用Western blot方法对抗体的特异性进行鉴定。收集雌蚊唾液,采用Western blot方法用制备的多克隆抗体检测蚊唾液34ku-1蛋白。结果成功克隆获得34ku-1基因,生物信息学分析该基因全长888 bp,编码295个氨基酸。编码蛋白的理论分子质量单位为33.6 ku,等电点为5.54。重组质粒pET-32a(+)-34ku-1经PCR、双酶切及测序验证构建正确。经IPTG诱导的BL21重组菌表达产物主要以包涵体形式存在。经亲和层析法获得高纯度的34ku-1重组蛋白,浓度为0.71 mg/mL。Western blot显示重组蛋白可被抗6-His tag抗体识别,制备的鼠抗34ku-1血清抗体效价为1∶625000,且特异性良好,用34ku-1多克隆抗体Western blot可检测到蚊虫唾液中的34ku-1蛋白。结论成功克隆并表达了白纹伊蚊34ku-1原核蛋白,制备了高效价、高特异性的鼠抗34ku-1多克隆抗体,应用该抗体可检测到雌蚊唾液中的34ku-1蛋白。 展开更多
关键词 白纹伊蚊 唾液腺 34ku-1重组蛋白 原核表达 多克隆抗体
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斑马鱼ANF基因的克隆及多克隆抗体的制备
11
作者 李竞超 吴坚 +2 位作者 梁艳 莫小阳 吴秀山 《激光生物学报》 CAS CSCD 2011年第5期645-649,共5页
心房钠尿肽ANF是钠尿肽家族中的一员,是心肌细胞分泌的一种循环激素,主要在心房组织分泌。生物信息学分析表明,斑马鱼ANF基因开放阅读框全长321bp,编码106个氨基酸,PCR扩增获得斑马鱼ANF基因全长。将所得的PCR片段插入原核表达载体pGEX-... 心房钠尿肽ANF是钠尿肽家族中的一员,是心肌细胞分泌的一种循环激素,主要在心房组织分泌。生物信息学分析表明,斑马鱼ANF基因开放阅读框全长321bp,编码106个氨基酸,PCR扩增获得斑马鱼ANF基因全长。将所得的PCR片段插入原核表达载体pGEX-4T-1中,并将重组质粒(pGEX-4T-1-ANF)转化大肠杆菌BL21。通过IPTG诱导表达GST-ANF融合蛋白,经GST亲和层析法纯化后,免疫新西兰大白兔制备了多克隆抗体,Western blotting分析表明,制备的抗体具有良好的高效价性和特异性。 展开更多
关键词 ANF基因 融合蛋白 多克隆抗体
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T7噬菌体尾蛋白P11的表达、纯化及鉴定
12
作者 赵翠娇 宁保安 +2 位作者 范献军 李桂敏 高志贤 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2014年第4期505-508,共4页
目的:表达、纯化T7噬菌体尾蛋白P11并进行鉴定。方法:PCR扩增T7噬菌体尾蛋白P11基因片段,EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切后连接表达载体pTIG-TRX,重组表达载体转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达,纯化目的蛋白,SDS-PAGE分析P11蛋白的相对分子... 目的:表达、纯化T7噬菌体尾蛋白P11并进行鉴定。方法:PCR扩增T7噬菌体尾蛋白P11基因片段,EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切后连接表达载体pTIG-TRX,重组表达载体转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达,纯化目的蛋白,SDS-PAGE分析P11蛋白的相对分子质量大小,并多次免疫新西兰大白兔制备其多克隆抗体,Western blot鉴定蛋白活性。结果:PCR扩增P11基因后,成功诱导表达了含6×His标签的P11蛋白,SDS-PAGE显示所表达蛋白的相对分子质量约为25 000,通过多次免疫获得了抗P11的多克隆抗体并对其纯化;制备的多克隆抗体能够识别T7噬菌体和P11蛋白,具有较高特异性。结论:成功表达了P11蛋白并制备了其多克隆抗体,为T7噬菌体展示系统的应用奠定了基础。 展开更多
关键词 T7噬菌体 P11蛋白 多克隆抗体
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中慢生型天山根瘤菌中MrtR蛋白的融合表达研究及鉴定
13
作者 戴俊 郑会明 +2 位作者 杨梦华 钟增涛 朱军 《土壤》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期658-661,共4页
通过PCR扩增出中慢生型天山根瘤菌中群体感应调控蛋白MrtR的基因片段,克隆至表达载体pALEX中,从而构建了原核表达质粒pALEX-mrtR。将pALEX-mrtR转化至大肠杆菌BL2/DE3菌株感受态细胞中,经IPTG诱导,表达出58kD的GST-MrtR融合蛋白。用纯... 通过PCR扩增出中慢生型天山根瘤菌中群体感应调控蛋白MrtR的基因片段,克隆至表达载体pALEX中,从而构建了原核表达质粒pALEX-mrtR。将pALEX-mrtR转化至大肠杆菌BL2/DE3菌株感受态细胞中,经IPTG诱导,表达出58kD的GST-MrtR融合蛋白。用纯化好的GST-MrtR制备多克隆抗体,经Westernblot检测,该血清可与目的蛋白发生特异性反应,证明其具有良好的免疫原性。MrtR融合蛋白的成功表达及其多克隆抗体的制备为进一步研究MrtR蛋白的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 群体感应 中慢生型天山根瘤菌 MrtR 融合表达 多克隆抗体
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Cloning and Expression of BTB/POZ-Domain from Zebrafish gcl (Germ Cell-Less), and Appraisement of Its Polyclonal-Antibody
14
作者 DENG Fengjiao CHENG Pengxiang +2 位作者 LAN Qiang XU Yan ZHUANG Tiangang 《Wuhan University Journal of Natural Sciences》 CAS 2008年第1期123-128,共6页
In this study, a recombinant pET28c-gBTB/POZ was constructed by cloning the sequence of the BTB/POZ domain of the zebrafish gcl (germ cell-less) into the expression vector pET28c, and pET28c-gBTB/POZ was transformed... In this study, a recombinant pET28c-gBTB/POZ was constructed by cloning the sequence of the BTB/POZ domain of the zebrafish gcl (germ cell-less) into the expression vector pET28c, and pET28c-gBTB/POZ was transformed into BL21(DE3) pLysS strain to express the fusion protein for the preparation of antibody. Polyclonal-antibody against the GCL-BTB/POZ domain was prepared by immunizing rabbit with the fusion protein, and the Western Blot and immuno-histochemical analysis were performed to detect the quantity of the polyclonal-antibody. The result indicates that the polyclonal-antibodies were of good quantity and specification. Further studies will be performed to demonstrate the function and expression pattern of the GCL protein during the development process of zebrafish with the polyclonal-antibody. 展开更多
关键词 gel (germ cell-less) polycolonal-antibody BTB/ POZ domain zebrafish (Danio rerio)
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