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4株南极真菌的形态学和分子鉴定及其中3株的蛋白磷酸酶、脂肪酸成分分析 被引量:3
1
作者 黄金昌 田晓清 +6 位作者 樊成奇 乔玉宝 唐莹莹 马丽艳 陆亚男 杨桥 黄洪亮 《海洋渔业》 CSCD 北大核心 2017年第5期562-570,共9页
由于极地独特的地理、气候及环境特点,使得极地微生物及其代谢产物具有新颖性与多样性。采用3种选择性培养基的稀释平板涂布法,从南极普里兹湾海洋沉积物中分离得到4株真菌菌株,经过形态学、18s r DNA-ITS序列分析,分别鉴定为隐球酵母Cr... 由于极地独特的地理、气候及环境特点,使得极地微生物及其代谢产物具有新颖性与多样性。采用3种选择性培养基的稀释平板涂布法,从南极普里兹湾海洋沉积物中分离得到4株真菌菌株,经过形态学、18s r DNA-ITS序列分析,分别鉴定为隐球酵母Cryptococcus sp.NJF1、曲霉Aspergillus sp.NJF3、枝孢霉Cladosporium sp.NJF4和Cladosporium sp.NJF6;对其中的曲霉NJF3、枝孢霉NJF4和NJF6等3株真菌开展了蛋白磷酸酶含量和大田软海绵酸OA对该酶的抑制作用测试,并分析了菌株提取物中的脂肪酸成分。结果显示:NJF3、NJF4和NJF6有很好的蛋白磷酸酶活性,以蛋白磷酸酶-PP为外标,测定酶含量分别为0.732 2 U·g-1、0.678 U·g-1和1.229 2 U·g-1,且100 n M OA对NJF3和NJF4蛋白磷酸酶有一定抑制作用,而NJF6需要200 n M OA才可以轻微抑制其蛋白磷酸酶活性;3株真菌的脂肪酸成分以油酸为主,相对含量分别达到32.4%、37.2%、40.1%,而NJF4和NJF6还含有较高含量的亚油酸,相对含量分别达到27.3%、29.8%。本研究可为下一步开展菌株的酶、天然代谢产物研究奠定基础。 展开更多
关键词 极地微生物 ASPERGILLUS sp. CLADOSPORIUM sp. 蛋白磷酸酶 脂肪酸
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生长素极性运输中PIN蛋白磷酸化修饰研究进展 被引量:1
2
作者 闫佳 白玉娥 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2020年第24期8138-8146,共9页
生长素在植物生长发育过程中具有重要功能,调控其生长发育的诸多过程。生长素通过极性运输建立浓度梯度,维持植物组织器官形成、生长以及形态建成。而PIN蛋白作为生长素运输载体在细胞膜上不对称分布,决定生长素流向,形成浓度梯度,为植... 生长素在植物生长发育过程中具有重要功能,调控其生长发育的诸多过程。生长素通过极性运输建立浓度梯度,维持植物组织器官形成、生长以及形态建成。而PIN蛋白作为生长素运输载体在细胞膜上不对称分布,决定生长素流向,形成浓度梯度,为植物体内各部位细胞的生长发育提供特异的位置和方向信息。在此过程中PIN蛋白磷酸化/去磷酸化修饰以及网格蛋白所介导的胞吞作用等影响着PIN蛋白的极性分布,从而调控植株的形态建成。本研究主要讨论了PIN蛋白磷酸化修饰在生长素极性运输中作用机制,为深入剖析生长素极性运输中PIN蛋白磷酸化机制提供新的见解,也为进一步揭示生长素运输调控的作用机理提供理论参考。 展开更多
关键词 生长素 极性运输 PIN蛋白 蛋白磷酸化
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极性蛋白Pard3在乳腺癌组织中的表达及与临床病理特征的相关性 被引量:1
3
作者 姜秋霞 冯会敏 +1 位作者 栗艳松 张云虹 《现代肿瘤医学》 CAS 北大核心 2021年第22期3959-3962,共4页
目的:探讨极性蛋白Pard3在乳腺癌组织中的表达及与临床病理特征的相关性。方法:收集2017年6月至2019年12月我院外科行乳腺癌切除术的93例女性乳腺癌患者的乳腺癌组织、癌旁正常组织和临床资料。采用免疫组化技术检测Pard3在乳腺癌组织... 目的:探讨极性蛋白Pard3在乳腺癌组织中的表达及与临床病理特征的相关性。方法:收集2017年6月至2019年12月我院外科行乳腺癌切除术的93例女性乳腺癌患者的乳腺癌组织、癌旁正常组织和临床资料。采用免疫组化技术检测Pard3在乳腺癌组织和癌旁正常组织中的表达情况,并结合临床资料,分析Pard3在乳腺癌组织中的表达量与患者临床病理特征之间的关系。采用二分类的Logistic回归分析进行Pard3在乳腺癌组织中的表达与患者临床病理特征相关性分析。结果:免疫组化结果显示,在乳腺癌组织中Pard3的表达水平明显下降。乳腺癌组织中阳性率为31.2%(29/93),显著低于癌旁正常组织中的阳性率72.0%(67/93),差异有统计学意义(P=0.000)。临床病理特征相关性分析结果显示Pard3的表达与患者年龄、肿瘤大小、病理类型、淋巴结转移情况之间的关系差异无统计学意义(P>0.05);与TNM分期、组织分化程度、ER、PR、HER-2、Ki-67表达之间的关系差异有统计学意义(P<0.05)。经Logistic回归分析结果显示,Pard3的表达与分化程度、ER表达呈正相关,与TNM分期呈负相关,与PR、HER-2、Ki-67表达无相关性。结论:极性蛋白Pard3在乳腺癌组织中的表达显著低于癌旁正常组织,其在乳腺癌组织中的表达量与组织分化程度、ER表达呈正相关,与TNM分期呈负相关。 展开更多
关键词 Pard3 乳腺癌 极性蛋白 临床病理特征
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植物生长素极性运输调控机理的研究进展 被引量:29
4
作者 李俊华 种康 《植物学通报》 CSCD 北大核心 2006年第5期466-477,共12页
生长素极性运输特异地调控植物器官发生、发育和向性反应等生理过程。本文综述和分析了生长素极性运输的调控机制。分子遗传和生理学研究证明极性运输这一过程是由生长素输入载体和输出载体活性控制的。小G蛋白ARF附属蛋白GEF和GAP分别... 生长素极性运输特异地调控植物器官发生、发育和向性反应等生理过程。本文综述和分析了生长素极性运输的调控机制。分子遗传和生理学研究证明极性运输这一过程是由生长素输入载体和输出载体活性控制的。小G蛋白ARF附属蛋白GEF和GAP分别调控输出载体(PIN1)和输入载体(AUX1)的定位和活性,并影响高尔基体等介导的细胞囊泡运输系统,小G蛋白ROP也参与输出载体PIN2活性的调节。本文基于作者的研究工作提出小G蛋白在调控生长素极性运输中的可能作用模式。 展开更多
关键词 生长素极性运输 小G蛋白 鸟苷酸交换因子 GTPase激活蛋白
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植物生长素极性运输及调控机制的研究进展 被引量:12
5
作者 郑元 周安佩 +1 位作者 刘玉鲲 何承忠 《云南农业大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期878-884,共7页
植物生长素的生物合成、运输方式、信号转导一直是植物学研究的热点,生长素的极性运输导致其在植物体内呈不同浓度的梯度分布,从而特异性地调节植物几乎全部的重要发育进程。本文系统阐述了生长素极性运输与非极性运输的运输方式、运输... 植物生长素的生物合成、运输方式、信号转导一直是植物学研究的热点,生长素的极性运输导致其在植物体内呈不同浓度的梯度分布,从而特异性地调节植物几乎全部的重要发育进程。本文系统阐述了生长素极性运输与非极性运输的运输方式、运输特点、运输机理,介绍了生长素极性运输在植物胚胎发育、花分生组织形成、侧根形态建成、向性生长运动等方面的生理作用,并讨论了生长素输入载体(AUX1蛋白)与输出载体(PIN蛋白家族)对生长素极性运输的综合调控机制,为进一步揭示生长素运输调控的作用机理提供参考。 展开更多
关键词 植物生长素 极性运输 非极性运输 AUX1蛋白 PIN蛋白家族
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家蚕病原性微孢子虫极丝蛋白的研究 被引量:6
6
作者 高永珍 黄可威 常智杰 《蚕业科学》 CAS CSCD 2001年第2期128-130,共3页
从家蚕微孢子虫 (Nosemabombycis,简称N .b)和蓝萤叶甲微孢子虫 (MPa)中抽提了极丝蛋白 (PTP) ,进行SDS PAGE分析。并选择性分离、纯化了N .b孢子中主要极丝蛋白 ,经氨银染色法鉴定其纯度较纯。将N .b孢子中该主要极丝蛋白免疫家兔制备... 从家蚕微孢子虫 (Nosemabombycis,简称N .b)和蓝萤叶甲微孢子虫 (MPa)中抽提了极丝蛋白 (PTP) ,进行SDS PAGE分析。并选择性分离、纯化了N .b孢子中主要极丝蛋白 ,经氨银染色法鉴定其纯度较纯。将N .b孢子中该主要极丝蛋白免疫家兔制备多克隆抗体 ,用酶联免疫法 (ELISA)测定其效价 ,滴度为 1∶10 2 40 0。利用制得的抗体进行胶体金标记免疫电镜定位观察 ,发现所纯化蛋白确实存在于极丝上。 展开更多
关键词 微孢子虫 极丝蛋白 多克隆抗体 胶体金标记免疫电镜定位 家蚕 微粒子病
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PIN蛋白在生长素极性运输中的作用 被引量:9
7
作者 于胜楠 崔继哲 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期20-24,共5页
PIN蛋白是生长素流出载体,它在细胞中的不对称分布决定细胞间生长素流方向。PIN蛋白网络系统决定生长素的极性运输,为植物体各部位的细胞提供了特异的位置和方向信息。从细胞水平上介绍PIN蛋白在生长素极性运输中的作用及对PIN蛋白功能... PIN蛋白是生长素流出载体,它在细胞中的不对称分布决定细胞间生长素流方向。PIN蛋白网络系统决定生长素的极性运输,为植物体各部位的细胞提供了特异的位置和方向信息。从细胞水平上介绍PIN蛋白在生长素极性运输中的作用及对PIN蛋白功能调节的研究进展。 展开更多
关键词 生长素 生长素极性运输 PIN蛋白 植物生长调节剂
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微孢子虫(microsporidia)功能蛋白的研究进展 被引量:3
8
作者 张平 刘吉平 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期329-334,共6页
微孢子虫作为一类专性细胞内寄生的真核生物,由于具有许多原核细胞的特征而被广泛研究,且作为人类新发的病原也越来越受到重视。在综述了近10年来国内外学者对微孢子虫蛋白质研究进展的基础上,评述了对微孢子虫蛋白质研究在分类和防治... 微孢子虫作为一类专性细胞内寄生的真核生物,由于具有许多原核细胞的特征而被广泛研究,且作为人类新发的病原也越来越受到重视。在综述了近10年来国内外学者对微孢子虫蛋白质研究进展的基础上,评述了对微孢子虫蛋白质研究在分类和防治上的意义。 展开更多
关键词 微孢子虫 分类 微管蛋白 极丝蛋白 表面蛋白
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转抗虫基因杨树外源基因表达的研究进展 被引量:5
9
作者 刘冬艳 张斌 +1 位作者 曹杨宇 高宝嘉 《河北林果研究》 2015年第3期243-247,共5页
在转基因植物中,外源基因能否稳定高效表达对转基因植物的应用有重要作用。文章从转Bt基因杨树对鳞翅目、鞘翅目昆虫的抗虫效应,以及抗虫选择性、稳定性及毒蛋白表达等方面分析转抗虫基因杨树外源基因的表达特点,综述了近年来转Bt基因... 在转基因植物中,外源基因能否稳定高效表达对转基因植物的应用有重要作用。文章从转Bt基因杨树对鳞翅目、鞘翅目昆虫的抗虫效应,以及抗虫选择性、稳定性及毒蛋白表达等方面分析转抗虫基因杨树外源基因的表达特点,综述了近年来转Bt基因杨树外源基因表达的研究成果,以便为转基因杨树和外源基因的合理利用提供依据。 展开更多
关键词 转基因杨树 BT基因 毒蛋白表达 抗虫效应 转基因沉默
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Adenosine Diphosphate Ribosylation Factor-GTPase-Activating Protein Stimulates the Transport of AUX1 Endosome,Which Relies on Actin Cytoskeletal Organization in Rice Root Development 被引量:4
10
作者 Cheng Du Yunyuan Xu +1 位作者 Yingdian Wang Kang Chong 《Journal of Integrative Plant Biology》 SCIE CAS CSCD 2011年第9期698-709,共12页
Polar auxin transport,which depends on polarized subcellular distribution of AUXIN RESISTANT 1/LIKE AUX1(AUX1/LAX) influx carriers and PIN-FORMED(PIN) efflux carriers,mediates various processes of plant growth and... Polar auxin transport,which depends on polarized subcellular distribution of AUXIN RESISTANT 1/LIKE AUX1(AUX1/LAX) influx carriers and PIN-FORMED(PIN) efflux carriers,mediates various processes of plant growth and development.Endosomal recycling of PIN1 is mediated by an adenosine diphosphate(ADP)ribosylation factor(ARF)-GTPase exchange factor protein,GNOM.However,the mediation of auxin influx carrier recycling is poorly understood.Here,we report that overexpression of OsAGAP,an ARF-GTPase-activating protein in rice,stimulates vesicle transport from the plasma membrane to the Golgi apparatus in protoplasts and transgenic plants and induces the accumulation of early endosomes and AUX1.AUX1 endosomes could partially colocalize with FM4-64 labeled early endosome after actin disruption.Furthermore,OsAGAP is involved in actin cytoskeletal organization,and its overexpression tends to reduce the thickness and bundling of actin filaments.Fluorescence recovery after photobleaching analysis revealed exocytosis of the AUX1 recycling endosome was not affected in the OsAGAP overexpression cells,and was only slightly promoted when the actin filaments were completely disrupted by Lat B.Thus,we propose that AUX1 accumulation in the OsAGAP overexpression and actin disrupted cells may be due to the fact that endocytosis of the auxin influx carrier AUX1 early endosome was greatly promoted by actin cytoskeleton disruption. 展开更多
关键词 ACTIN adenosine diphosphate ribosylation factor-GTPase-activating protein AUX1 ENDOSOME polar auxin transport.
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家蚕微孢子虫极管蛋白1(NbPTP1)的基因克隆及原核表达 被引量:5
11
作者 吴玉娇 龙梦娴 +5 位作者 陈洁 李治 李致宏 潘国庆 李田 周泽扬 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期258-264,共7页
极管作为微孢子虫高度特异的结构,在微孢子虫侵染宿主细胞的过程中扮演重要角色。利用家蚕微孢子虫和兔脑炎微孢子虫基因组数据,通过共线性分析获得一个编码家蚕微孢子虫假定极管蛋白的基因NBO_7g0016。序列特征分析表明该基因编码富含... 极管作为微孢子虫高度特异的结构,在微孢子虫侵染宿主细胞的过程中扮演重要角色。利用家蚕微孢子虫和兔脑炎微孢子虫基因组数据,通过共线性分析获得一个编码家蚕微孢子虫假定极管蛋白的基因NBO_7g0016。序列特征分析表明该基因编码富含脯氨酸的409个氨基酸,预测蛋白质分子质量39.6 kD,蛋白质序列的N端具有信号肽,有40个潜在的O-糖基化位点和17个磷酸化位点。以家蚕微孢子虫基因组DNA为模板克隆NBO_7g0016基因,并构建插入该基因的重组质粒,转化E.coli BL21(DE3)进行原核表达,融合蛋白经亲和层析纯化后免疫昆明小鼠制备多克隆抗体。免疫印迹实验证明该基因编码的蛋白质在成熟孢子中有表达,间接免疫荧光实验将蛋白质定位于家蚕微孢子虫的极管,确证该蛋白质为家蚕微孢子虫极管蛋白1(NbPTP1,GenBank登录号:EOB15198.1)。初步推测家蚕微孢子虫极管蛋白1具有糖基化修饰特征。 展开更多
关键词 家蚕微孢子虫 极管蛋白1 基因克隆 原核表达 免疫印迹分析 间接免疫荧光分析
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微孢子虫侵染研究进展 被引量:4
12
作者 刘强波 万永继 《蚕学通讯》 2005年第1期19-24,共6页
微孢子虫种类繁多,侵染寄主过程十分复杂,pH值、离子种类及浓度、温度、射线等都能激活孢子发芽侵入寄主。近年来微孢子虫侵染机理研究已从激活因子推进到孢子生理生化的研究。研究表明:微孢子虫孢内糖类物质浓度的变化与孢子内压升高,... 微孢子虫种类繁多,侵染寄主过程十分复杂,pH值、离子种类及浓度、温度、射线等都能激活孢子发芽侵入寄主。近年来微孢子虫侵染机理研究已从激活因子推进到孢子生理生化的研究。研究表明:微孢子虫孢内糖类物质浓度的变化与孢子内压升高,诱发极丝的弹出密切相关;同时,微孢子虫孢子的表面蛋白、极膜和极管蛋白(PTP) 展开更多
关键词 侵染 研究进展 微孢子虫孢子 离子种类 生理生化 激活因子 机理研究 物质浓度 表面蛋白 寄主 pH值
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基于HP模型的蛋白质折叠问题的研究 被引量:3
13
作者 史小红 《生物信息学》 2016年第2期112-116,共5页
基于蛋白质二维HP模型提出改进的遗传算法对真实蛋白质进行计算机折叠模拟。结果显示疏水能量函数最小值的蛋白质构象对应含疏水核心的稳定结构,疏水作用在蛋白质折叠中起主要作用。研究表明二维HP模型在蛋白质折叠研究中是可行的和有... 基于蛋白质二维HP模型提出改进的遗传算法对真实蛋白质进行计算机折叠模拟。结果显示疏水能量函数最小值的蛋白质构象对应含疏水核心的稳定结构,疏水作用在蛋白质折叠中起主要作用。研究表明二维HP模型在蛋白质折叠研究中是可行的和有效的并为进一步揭示蛋白质折叠机理提供重要参考信息。 展开更多
关键词 蛋白质折叠模拟 HP模型 遗传算法 蛋白质构象
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微孢子虫蛋白质及其与宿主互作的研究进展 被引量:3
14
作者 吴正理 李艳红 宋元达 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期921-928,共8页
微孢子虫(protozoan:microsporidia)是一类细胞内专性寄生的单细胞真核生物,可广泛寄生于几乎所有的动物。早期对微孢子虫的研究主要集中在对其种类的分离鉴定方面,随着大规模基因组测序的不断深入,极大地推动了微孢子虫的研究,尤其是... 微孢子虫(protozoan:microsporidia)是一类细胞内专性寄生的单细胞真核生物,可广泛寄生于几乎所有的动物。早期对微孢子虫的研究主要集中在对其种类的分离鉴定方面,随着大规模基因组测序的不断深入,极大地推动了微孢子虫的研究,尤其是微孢子虫具有独特的进化地位以及基因组、细胞器和物质能量代谢途径等简化进化的特点,使其成为当前研究的热点。综述了该领域近10年来在微孢子虫总蛋白组成成分分析、极丝蛋白和孢壁蛋白的分离鉴定,以及孢壁蛋白与宿主的相互作用等方面的研究进展,并简要概述了该领域研究存在的问题及后续研究课题。 展开更多
关键词 微孢子虫 极丝蛋白 孢壁蛋白 宿主
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狐源兔脑炎微孢子虫极管蛋白2(PTP2)的原核表达及间接ELISA方法的建立
15
作者 高妍 贺飞 +1 位作者 王好 刘丽凡 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2024年第12期108-114,共7页
为了建立一种特异性好、敏感性高、重复性好的可检测蓝狐兔脑炎微孢子虫病的间接ELISA方法,试验首先从疑似感染兔脑炎微孢子虫(Encephalitozoon.cuniculi)的蓝狐脑组织DNA中扩增PTP2基因,并将其与原核表达载体pET-32a(+)连接,构建重组质... 为了建立一种特异性好、敏感性高、重复性好的可检测蓝狐兔脑炎微孢子虫病的间接ELISA方法,试验首先从疑似感染兔脑炎微孢子虫(Encephalitozoon.cuniculi)的蓝狐脑组织DNA中扩增PTP2基因,并将其与原核表达载体pET-32a(+)连接,构建重组质粒pET32a-PTP2,转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行诱导表达,将菌体超声后对表达的重组蛋白进行可溶性分析,并纯化目的蛋白;然后以重组蛋白作为包被抗原,通过优化反应条件和临界值的确定建立蓝狐兔脑炎微孢子虫的间接ELISA方法,并进行特异性、敏感性和重复性试验;最后采用建立的间接ELISA方法对28份经常规PCR方法验证已经感染兔脑炎微孢子虫病的蓝狐血清样品进行检测,并计算符合率。结果表明:表达的重组蛋白的分子质量为45.8 ku,且表达产物以可溶性蛋白和包涵体两种形式存在,经纯化杂带明显减少,纯化后的重组蛋白质量浓度为1.55 mg/mL。间接ELISA方法的最佳包被抗原质量浓度为8μg/ml,最佳一抗稀释度为1∶100,最佳封闭液为5%脱脂乳,最佳封闭条件为37℃、1 h,最佳一抗孵育时间为120 min,最佳二抗稀释度为1∶5 000,最佳二抗孵育时间为60 min,最佳显色时间为20 min。阴、阳性血清OD_(450)临界值分别为0.268和0.302。建立的间接ELISA方法检测蓝狐犬瘟热病毒、蓝狐伪狂犬病毒、蓝狐细小病毒阳性血清均为阴性,可检测到稀释度为1∶3 200的蓝狐兔脑炎微孢子虫阳性血清,批内重复与批间重复变异系数均小于10%。用建立的间接ELISA方法检测28份蓝狐血清样品的阳性样品数为23份,与常规PCR方法的符合率为82.14%。说明试验成功建立了一种可检测蓝狐兔脑炎微孢子虫病的间接ELISA方法,该方法特异性好、敏感性高、重复性好,适合在基层推广。 展开更多
关键词 兔脑炎微孢子虫病 微孢子虫极管蛋白2(PTP2) 原核表达 间接ELISA 检测方法的建立
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微孢子虫极管蛋白的研究进展 被引量:3
16
作者 龙梦娴 吴玉娇 +5 位作者 陈洁 潘国庆 李春峰 李田 陈果 周泽扬 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期917-923,共7页
微孢子虫是一类专性细胞内寄生的真核微生物,可以感染无脊椎动物、脊椎动物乃至人类,引发的微孢子虫病对人类健康或经济动物生产造成严重危害。所有微孢子虫都拥有一个特殊的侵染结构——极管。极管蛋白(polar tube protein,PTP)特异定... 微孢子虫是一类专性细胞内寄生的真核微生物,可以感染无脊椎动物、脊椎动物乃至人类,引发的微孢子虫病对人类健康或经济动物生产造成严重危害。所有微孢子虫都拥有一个特殊的侵染结构——极管。极管蛋白(polar tube protein,PTP)特异定位于微孢子虫极管上,是组装极管的重要成分。本文综述了国内外有关微孢子虫极管蛋白的发现、分类、特征以及功能等方面的研究成果,重点介绍了3种主要极管蛋白PTP1、PTP2、PTP3的氨基酸组成特征、溶解特性和翻译后修饰特征,概述了ptp1、ptp2基因保守座位,PTP1、PTP2、PTP3蛋白之间的互作关系,以及极管蛋白在微孢子虫增殖与侵染宿主过程中发挥的生物学功能。微孢子虫极管蛋白的研究成果对于揭示微孢子虫侵染机制,准确诊断与有效防治微孢子虫病具有重要的理论和实用价值。 展开更多
关键词 微孢子虫 极管蛋白 生物学特征 功能
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家蚕微孢子虫极管蛋白2(NbPTP2)的表达、纯化和定位特征 被引量:3
17
作者 易敏 吕青 +4 位作者 刘柯柯 王礼君 吴玉娇 周泽扬 龙梦娴 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期1830-1838,共9页
【目的】微孢子虫是一种细胞内专性寄生的真核生物,几乎能感染所有生物,包括人类。极管作为微孢子虫特有的侵染器官,主要由极管蛋白组成。极管蛋白在微孢子虫侵染宿主与稳定孢子结构中发挥重要作用。本研究通过克隆、表达家蚕微孢子虫(N... 【目的】微孢子虫是一种细胞内专性寄生的真核生物,几乎能感染所有生物,包括人类。极管作为微孢子虫特有的侵染器官,主要由极管蛋白组成。极管蛋白在微孢子虫侵染宿主与稳定孢子结构中发挥重要作用。本研究通过克隆、表达家蚕微孢子虫(Nosema bombycis)极管蛋白2(NbPTP2),分析其在成熟孢子极管上的定位特征,为深入研究极管蛋白的功能打下基础。【方法】克隆家蚕微孢子虫NbPTP2。利用Expasy、SignalP 4.1、TMHMM Server V.2.0和NetPhos 3.1 Server等在线软件对NbPTP2的序列特征进行分析,包括氨基酸组成、蛋白质理论分子量、等电点、信号肽、跨膜结构域和磷酸化位点。此外,利用MEGA 7.0软件构建不同种属微孢子虫极管蛋白2的系统进化树。通过克隆NbPTP2,将其与原核表达载体pET32a(+)连接,构建pET32a(+)-NbPTP2重组表达质粒。将测序正确的重组质粒转化到大肠杆菌Rosetta中,IPTG诱导异源表达,经镍柱亲和层析纯化融合蛋白后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。利用免疫印迹检测NbPTP2在成熟孢子中的表达情况,并通过间接免疫荧光试验(IFA)分析NbPTP2在家蚕微孢子虫成熟孢子中的定位特征。【结果】成功克隆并获得长为834 bp的NbPTP2基因序列,该蛋白编码278个氨基酸残基,理论分子质量为30.9 kD,等电点为9.39,无跨膜结构域,N端存在信号肽,具有潜在的磷酸化修饰位点。系统进化树分析结果显示,家蚕微孢子虫NbPTP2与西方蜜蜂微孢子虫NaPTP2、东方蜜蜂微孢子虫NcPTP2的亲缘关系最近。Western blot结果表明,NbPTP2编码的蛋白质在成熟孢子的孢子总蛋白中有表达,分子量大小约为39 kD。IFA定位特征分析结果显示,NbPTP2能定位于家蚕微孢子虫的整条极管上,证实其为一种极管蛋白。【结论】明确了NbPTP2与其他微孢子虫极管蛋白2的亲缘关系,NbPTP2在成熟家蚕微孢子虫中有表达,且能定位于微孢子虫� 展开更多
关键词 家蚕 家蚕微孢子虫 极管蛋白 2 原核表达 定位分析
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2种家蚕病原性微孢子虫的蛋白质组差异研究(英文) 被引量:2
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作者 唐旭东 侯建革 +2 位作者 付绪亮 徐莉 沈中元 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期1044-1054,共11页
微孢子虫是一类专性细胞内寄生的单细胞真核生物,几乎可以感染从无脊椎动物到脊椎动物的所有动物。对分别属于微粒子虫属(Nosema)和内网孢虫属(Endoreticulatus)的2种家蚕病原性微孢子虫的蛋白质组差异进行研究,探讨二者对家蚕侵染力差... 微孢子虫是一类专性细胞内寄生的单细胞真核生物,几乎可以感染从无脊椎动物到脊椎动物的所有动物。对分别属于微粒子虫属(Nosema)和内网孢虫属(Endoreticulatus)的2种家蚕病原性微孢子虫的蛋白质组差异进行研究,探讨二者对家蚕侵染力差异产生的原因。采用双向电泳技术对提取的2种微孢子虫的总蛋白质进行分离,经Image Master 2D软件分析总蛋白质的双向电泳图谱发现142个差异蛋白点,其中67个蛋白点在家蚕微孢子虫中高量表达,75个蛋白点在内网孢虫属微孢子虫镇江株中高量表达。对这些差异蛋白点进行MALDI-TOF/PRO质谱鉴定,并用MASCOT软件在NCBI公共数据库中寻找匹配蛋白,去掉重复数据后最终分别在家蚕微孢子虫和内网孢虫属微孢子虫镇江株中鉴定了43个、68个有功能注释的蛋白质,其功能涉及侵染、能量代谢、孢壁组成和遗传信息加工等方面。值得注意的是鉴定到的极管蛋白3(PTP3)仅在家蚕微孢子虫高量表达。 展开更多
关键词 家蚕微孢子虫 内网孢虫属微孢子虫镇江株 蛋白质组 双向电泳 质谱鉴定 极管蛋白
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Depletion of phosphatidyl-glycerol head-group induces changes in oxygen evolution and protein secondary structures of photosystem Ⅱ 被引量:1
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作者 YANG Zhenle, WANG Zeneng, JIANG Guizhen, XU Yinong, LI Liangbi & KUANG TingyunPhotosynthesis Research Center, Institute of Botany, Chinese Academy of Sciences, Beijing 100093, China 《Chinese Science Bulletin》 SCIE EI CAS 2002年第10期824-829,共6页
The techniques of oxygen electrode polarogra-phy and Fourier transform infrared (FT-IR) spectroscopy were employed to explore the roles of polar head-group of phosphatidylglycerol (PG) molecules in the functional and ... The techniques of oxygen electrode polarogra-phy and Fourier transform infrared (FT-IR) spectroscopy were employed to explore the roles of polar head-group of phosphatidylglycerol (PG) molecules in the functional and structural aspects of photosystem Ⅱ (PS Ⅱ) through enzymatic approach. It was shown that the depletion of PG by treatment of phospholipase C (PLC) on PS Ⅱ particles caused the inhibition of oxygen evolving activity in PS Ⅱ. This effect also gave rise to changes in the protein secondary structures of PS Ⅱ, that is, an increase in a-helical conformation which is compensated by the loss of p-strand structures. It revealed that the head-group of PG molecules plays an important structural role in the maintenance of normal structure of PS Ⅱ proteins, which is required to maintain the appropriate physiological activity of the PS Ⅱ complex such as the oxygen evolving activity. It is suggested that there most probably exist hydrogen-bonding interactions between PG molecules and PS Ⅱ proteins. 展开更多
关键词 PHOTOSYSTEM II polar head-group of phosphatidylglyc-erol PHOSPHOLIPASE C oxygen evolution protein secondary struc-ture.
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东方蜜蜂微孢子虫一新孢壁蛋白NcER_100148的鉴定与生物学功能研究
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作者 敖塘堰 王静琳 +1 位作者 马振刚 周泽扬 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期747-758,共12页
【目的】东方蜜蜂微孢子虫Nosema ceranae作为蜜蜂微孢子虫病的主要病原体,对其侵染机制的相关研究鲜有报道。本研究旨在对团队前期通过质谱鉴定获得的东方蜜蜂微孢子虫候选孢壁蛋白NcER_100148进行原核表达,明确其亚细胞定位,并初步探... 【目的】东方蜜蜂微孢子虫Nosema ceranae作为蜜蜂微孢子虫病的主要病原体,对其侵染机制的相关研究鲜有报道。本研究旨在对团队前期通过质谱鉴定获得的东方蜜蜂微孢子虫候选孢壁蛋白NcER_100148进行原核表达,明确其亚细胞定位,并初步探索其生物学功能。【方法】通过在线软件对前期鉴定的东方蜜蜂微孢子虫候选孢壁蛋白NcER_100148序列进行生物信息学分析;利用RT-PCR检测东方蜜蜂微孢子虫侵染后西方蜜蜂Apis mellifera成蜂中肠中NcER_100148的表达量;将NcER_100148基因片段克隆至原核表达载体pET30a中,IPTG诱导表达重组蛋白并用于制备多克隆抗体;利用Western blot检测NcER_100148在东方蜜蜂微孢子虫成熟孢子中的表达量;通过间接免疫荧光和免疫电镜技术分析NcER_100148在东方蜜蜂微孢子虫成熟孢子中的亚细胞定位;利用Western blot和免疫共沉淀法分别分析重组蛋白NcER_100148与东方蜜蜂微孢子虫几丁质孢子壳(chitin spore coats,CSCs)和极管蛋白NcPTP2和NcPTP3的相互作用关系。【结果】序列分析结果表明,东方蜜蜂微孢子虫NcER_100148预测分子量为12.169 kD,含1个O-糖基化位点、1个N-糖基化位点和1个糖基磷脂酰肌醇(glycosylphosphatidylinositol,GPI)锚定位点;RT-PCR检测结果表明,NcER_100148在东方蜜蜂微孢子虫感染后4 d时的西方蜜蜂成蜂中肠中开始表达;Western blot结果表明,NcER_100148蛋白能在成熟孢子表面表达,并且能够与东方蜜蜂微孢子虫的CSCs互作;亚细胞定位结果显示NcER_100148定位于东方蜜蜂微孢子虫的成熟孢子孢壁上;Western blot和免疫共沉淀结果显示重组蛋白NcER_100148能够与极管蛋白NcPTP2和NcPTP3相互作用。【结论】NcER_100148是定位在东方蜜蜂微孢子虫的成熟孢子孢壁上的一个新型孢壁蛋白,且其可能在孢子内壁的构建、极管的盘绕与固定和参与对宿主的侵染等过程中扮演重要的角色。 展开更多
关键词 东方蜜蜂微孢子虫 孢壁蛋白 亚细胞定位 几丁质孢子壳 极管蛋白 互作
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