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美洲商陆抗病毒蛋白基因遗传转化甘蔗的研究 被引量:13
1
作者 罗遵喜 杨志才 +6 位作者 吕苏珊 吴转娣 冯翠莲 蔡文伟 喻时周 杨本鹏 张树珍 《热带作物学报》 CSCD 2009年第11期1646-1650,共5页
构建叶片特异表达启动子rbcs驱动的美洲商陆抗病毒蛋白基因PAP-c的植物表达载体PNRPL,冻融法转化农杆菌EHA105后,通过农杆菌介导法侵染甘蔗优良品种ROC22的胚性愈伤组织,经PPT抗性筛选以及PCR鉴定,共获得了24株转化植株,对其中的5株进行... 构建叶片特异表达启动子rbcs驱动的美洲商陆抗病毒蛋白基因PAP-c的植物表达载体PNRPL,冻融法转化农杆菌EHA105后,通过农杆菌介导法侵染甘蔗优良品种ROC22的胚性愈伤组织,经PPT抗性筛选以及PCR鉴定,共获得了24株转化植株,对其中的5株进行Southern杂交检测,有2株呈阳性,初步证明外源基因已整合到甘蔗基因组中;对其接种甘蔗花叶病毒,初步结果表明获得的转化植株对甘蔗花叶病毒具有一定的抗性。 展开更多
关键词 美洲商陆抗病毒蛋白 基因 植物表达载体 转化 甘蔗
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商陆抗病毒蛋白体外抑制HBV的实验研究 被引量:5
2
作者 潘延凤 贺永文 +1 位作者 王萍 郭劲松 《临床肝胆病杂志》 CAS 北大核心 2004年第2期80-82,共3页
探讨商陆抗病毒蛋白 (pokeweedativiralproteinPAP)体外抗乙型肝炎病毒 (HBV)的作用。不同浓度的PAP-S(pokeweedantiviralproteinfromseeds)作用于HepG2 2 15 ,应用ELISA、荧光定量PCR ,分别检测药物作用后细胞上清液的HBsAg、HBeAg、... 探讨商陆抗病毒蛋白 (pokeweedativiralproteinPAP)体外抗乙型肝炎病毒 (HBV)的作用。不同浓度的PAP-S(pokeweedantiviralproteinfromseeds)作用于HepG2 2 15 ,应用ELISA、荧光定量PCR ,分别检测药物作用后细胞上清液的HBsAg、HBeAg、HBVDNA水平的变化。PAP -S处理HepG2 2 15后 72h发现 ,PAP -S在 >1μg/ml时有明显的抗HBV效应 ,在所试验浓度范围 (1- 10 ) μg/ml内 ,倒置显微镜下未发现明显的细胞毒性 ,PAP -S为 5 0 μg/ml时 ,发现部分细胞脱壁。PAP -S对HBsAg、HBeAg、HBVDNA呈剂量时间依赖性。PAP 展开更多
关键词 商陆抗病毒蛋白 体外抑制 HBV 实验 乙型肝炎病毒 核糖体失活蛋白
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毕赤酵母Mut^+和Mut^s重组子表达美洲商陆抗病毒蛋白基因的比较 被引量:4
3
作者 周倩 王锡锋 +2 位作者 李莉 周广和 高必达 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期425-428,共4页
将N末端信号肽和C末端毒性区域缺失突变的美洲商陆抗病毒蛋白 (pokeweedantiviralprotein ,PAP)基因表达载体pPIC9K P酶切线性化后 ,通过电击转化整合到巴氏毕赤酵母 (Pichiapastoris)GS115菌株细胞中 ,PCR筛选出表型为利用甲醇快速型(M... 将N末端信号肽和C末端毒性区域缺失突变的美洲商陆抗病毒蛋白 (pokeweedantiviralprotein ,PAP)基因表达载体pPIC9K P酶切线性化后 ,通过电击转化整合到巴氏毕赤酵母 (Pichiapastoris)GS115菌株细胞中 ,PCR筛选出表型为利用甲醇快速型(Mut+ )的重组子。在相同培养条件下比较Mut+ 重组子和利用甲醇缓慢型 (Muts)重组子在表达缺失突变型PAP方面的异同。结果表明 ,诱导培养 4 8h后 ,Mut+ 重组子表达产物在SDS PAGE胶上可见清晰目的带 ,而Muts 重组子培养 72h才能见到微弱的目的带。抗病毒活性实验表明Mut+ 重组子和Muts 重组子的表达产物均对TMV病毒侵染有明显的抑制作用 。 展开更多
关键词 毕赤酵母 Mut^+重组子 Mut^s重组子 表达 甲醇 PCR 筛选 美洲商陆抗病毒蛋白 PAP 基因 TMV病毒
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信号肽序列修饰的PAP cDNA克隆及高频率转基因烟草的获得 被引量:3
4
作者 万多荣 殷娴 +4 位作者 陈晓博 姜洋 张海燕 陈正华 肖尊安 《激光生物学报》 CAS CSCD 2007年第5期626-631,共6页
通过RT-PCR从美洲商陆叶片中获得PAPN端氨基酸修饰的cDNA克隆PAP-sp1。构建携带PAP-sp1的植物转化载体pBPAP,利用农杆菌介导将PAP-sp1导入烟草品种K326叶片细胞,通过抗性筛选、组织化学和PCR鉴定获得了转基因烟草植株,按形成转基因不定... 通过RT-PCR从美洲商陆叶片中获得PAPN端氨基酸修饰的cDNA克隆PAP-sp1。构建携带PAP-sp1的植物转化载体pBPAP,利用农杆菌介导将PAP-sp1导入烟草品种K326叶片细胞,通过抗性筛选、组织化学和PCR鉴定获得了转基因烟草植株,按形成转基因不定芽的外植体数统计,烟草K326的转化率高达8.1%。攻毒实验表明,与对照植株相比,转基因烟草株系发病推迟,感病程度较低,开花结果提早。 展开更多
关键词 美洲商陆 美洲商陆抗病毒蛋白 烟草 转基因植株 病毒抗性
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Crystal structure of pokeweed antiviral protein from seeds of Phytolacca americana at 0.25 nm
5
作者 曾宗浩 金雷 +2 位作者 李宏民 胡忠 王大成 《Science China(Life Sciences)》 SCIE CAS 1998年第4期413-418,共6页
Crystals of pokeweed antiviral protein (PAP) from seeds of Phytolacca americana with high diffraction ability were grown from high protein concentration (100 mg/mL) solution at high temperature (33℃). The crystal str... Crystals of pokeweed antiviral protein (PAP) from seeds of Phytolacca americana with high diffraction ability were grown from high protein concentration (100 mg/mL) solution at high temperature (33℃). The crystal structure was solved by use of molecular replacement method and refined by use of molecular dynamic method at 0 25 nm to an R factor of 18.15% with standard deviations from standard geometry of 0.001 6 nm and 2.04° for bond lengths and bond angles, respectively. Comparison with two other PAPs revealed, near the active center, a sequence and structure variable region, consisting of the loop connecting the fifth β strand with the second α helix and including a proposed active residue, suggesting this loop probably to be related to difference in activity. 展开更多
关键词 pokeweed antiviral protein RIBOSOME inactivating protein CRYSTAL structure.
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转基因烟草的pap基因表达及其抗病毒生理的初步研究 被引量:1
6
作者 万多荣 殷娴 +3 位作者 江一希 陈晓博 张海燕 肖尊安 《北京师范大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期411-416,共6页
农杆菌介导将美洲商陆抗病毒蛋白基因(pap)导入烟草云烟87品种的叶肉细胞,经过抗性筛选和鉴定,获得转基因植株.利用RT-半定量法分析了Y1、Y2和Y3转基因株系的pap表达,以及攻毒前后叶片多酚氧化酶(PPO)、超氧物歧化酶(SOD)活性和可溶性... 农杆菌介导将美洲商陆抗病毒蛋白基因(pap)导入烟草云烟87品种的叶肉细胞,经过抗性筛选和鉴定,获得转基因植株.利用RT-半定量法分析了Y1、Y2和Y3转基因株系的pap表达,以及攻毒前后叶片多酚氧化酶(PPO)、超氧物歧化酶(SOD)活性和可溶性蛋白质含量.结果表明:pap在Y1和Y2植株中表达,Y3植株中未检测到pap表达;攻毒后,Y1和Y2叶片中可溶性蛋白质含量、PPO和SOD活性较高,而Y3叶片中可溶性蛋白质含量、PPO和SOD活性在三者中最低,与对照相似.讨论了转基因植株中pap表达与其生理变化和病毒抗性的关系. 展开更多
关键词 商陆抗病毒蛋白 烟草 多酚氧化酶 超氧物歧化酶 可溶性蛋白质
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绿色荧光蛋白/PAP-a融合表达载体的构建及其在SMMC-7721细胞中的表达 被引量:2
7
作者 贺永文 潘延凤 +2 位作者 王华 刘薇 郭劲松 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2005年第4期363-365,共3页
目的构建绿色荧光蛋白/PAPa融合表达载体,并检则其在肝癌细胞SMMC7721细胞中的表达。方法采用PCR方法获得PAPa基因;将该基因片段克隆入带有绿色荧光蛋白(greenfluorescentprotein,CFP)报告基因的真核表达载体pEGPN1中,构建融合表达载体p... 目的构建绿色荧光蛋白/PAPa融合表达载体,并检则其在肝癌细胞SMMC7721细胞中的表达。方法采用PCR方法获得PAPa基因;将该基因片段克隆入带有绿色荧光蛋白(greenfluorescentprotein,CFP)报告基因的真核表达载体pEGPN1中,构建融合表达载体pEGFPPAPa;通过脂质体介导的方法将该载体转染到SMMC7721中,Westernblot检测PAPa的瞬时表达,荧光显微镜检测绿色荧光蛋白表达。结果pEGFPPAPa转染SMMC7721细胞后,在细胞中检测到PAPa基因片段,Westernblot可以检测到PAPa在SMMC7721细胞表达,用荧光显微镜观察到转染细胞中有绿色荧光蛋白表达。结论pEGFPPAPa在SMMC7721细胞中获得了表达,表达的融合蛋白具有PAPa和绿色光蛋白的双重活性,该载体的成功表达是研究PAPa抗肿瘤或抗病毒活民生的基础。 展开更多
关键词 绿色荧光蛋白 PAP-a 核糖体失活蛋白
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商陆抗病毒蛋白对感染细胞模型中HCV复制的影响 被引量:2
8
作者 陈瑞烈 林少锐 +5 位作者 李忆璇 郑晓丹 贺永文 高勇 杨小铭 罗端德 《中西医结合肝病杂志》 CAS 2006年第4期226-228,共3页
目的:探讨商陆抗病毒蛋白(PAP)对丙型肝炎病毒(HCV)感染细胞模型中HCV复制的影响。方法:用不同浓度PAP处理HCV感染细胞模型(HCV-HepG2),以荧光定量PCR法检测培养上清液中及细胞内HCV RNA,以不同浓度的α-2b干扰素(IFNα-2b)处理同样的... 目的:探讨商陆抗病毒蛋白(PAP)对丙型肝炎病毒(HCV)感染细胞模型中HCV复制的影响。方法:用不同浓度PAP处理HCV感染细胞模型(HCV-HepG2),以荧光定量PCR法检测培养上清液中及细胞内HCV RNA,以不同浓度的α-2b干扰素(IFNα-2b)处理同样的细胞模型作为对照。结果:经PAP处理后各模型组细胞内HCVRNA含量于48小时、96小时和144小时进行比较,差异有非常显著性意义(P<0·01);培养上清液中HCV RNA含量在48小时时,各组间比较,差异无显著性意义(P>0·05),但在96小时和144小时时,各组间比较差异有非常显著性意义(P<0·01)。PAP对HCV的抑制作用随PAP浓度的增加而增强,以100μg/ml浓度的抑制作用最强。用IFN-α2b处理HCV-HepG2模型亦得出类似的结果。两者均以第48小时的抑制率最高。但在96小时、144小时时PAP对细胞内HCV的抑制作用明显强于IFN(P<0·05,P<0·01)。结论:PAP对HCV感染细胞模型中的HCV复制有明显地抑制作用,且作用强于IFN-α2b。PAP对细胞无明显毒性。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 商陆抗病毒蛋白 干扰素
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美洲商陆抗病毒蛋白在毕赤酵母中的表达及其诱发人神经胶质瘤细胞U251凋亡的研究 被引量:1
9
作者 向莉 胡亚梅 张杰文 《中国中西医结合杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期1104-1107,共4页
目的研究美洲商陆抗病毒蛋白(pokeweed antiviral protein,PAP)基因的克隆表达,进而研究其诱发人神经胶质瘤细胞U251凋亡。方法利用RT-PCR技术克隆PAP基因,构建PAP毕赤酵母表达质粒pPICZaA-PAP并导入毕赤酵母Pichia pastorisGS115。SDS-... 目的研究美洲商陆抗病毒蛋白(pokeweed antiviral protein,PAP)基因的克隆表达,进而研究其诱发人神经胶质瘤细胞U251凋亡。方法利用RT-PCR技术克隆PAP基因,构建PAP毕赤酵母表达质粒pPICZaA-PAP并导入毕赤酵母Pichia pastorisGS115。SDS-PAGE检测PAP的分泌表达。采用镍离子亲合层析纯化PAP,并通过单细胞凝胶电泳和MTT检测其抑制人神经胶质瘤细胞U251的生长。结果分泌表达的PAP融合蛋白分子量约为35/kD,纯化的PAP在体外能诱发人神经胶质瘤细胞U251凋亡,PAP对U251半数抑制浓度(IC50)为81.0μg/mL,通过单细胞凝胶电泳,能看到明显的慧星尾,表明PAP引起了神经胶质瘤细胞基因组的降解。结论 PAP蛋白能抑制神经胶质瘤细胞的生长及诱发人神经胶质瘤细胞U251凋亡。 展开更多
关键词 美洲商陆抗病毒蛋白 毕赤酵母 单细胞凝胶电泳
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pap和ipt共表达与提高转基因烟草抗病性的初步研究 被引量:1
10
作者 殷娴 李朝霞 +3 位作者 张海燕 吴国智 程伟 肖尊安 《北京师范大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期714-718,共5页
通过构建pap与ipt共表达的双元载体,利用农杆菌介导,将pap与ipt共表达基因导入烟草K326品种的叶肉细胞,经过抗性筛选和鉴定,获得高表达的转基因植株,并对其进行了攻毒实验.结果表明:pap与ipt共表达基因转化烟草的转化率明显提高(25%),... 通过构建pap与ipt共表达的双元载体,利用农杆菌介导,将pap与ipt共表达基因导入烟草K326品种的叶肉细胞,经过抗性筛选和鉴定,获得高表达的转基因植株,并对其进行了攻毒实验.结果表明:pap与ipt共表达基因转化烟草的转化率明显提高(25%),证实转基因细胞中ipt基因表达可降低PAP细胞毒性;接种烟草花叶病毒(TMV)后,pap高表达的转基因植株出现病症的时间延迟20 d,叶片失绿程度较轻,表明该转基因植株对病毒的抗性有一定程度的提高. 展开更多
关键词 美洲商陆抗病毒蛋白(PAP) 异戊烯基转移酶 烟草 烟草花叶病毒
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商陆抗病毒蛋白不同结构域的抗乙型肝炎病毒活性
11
作者 郭春霞 贺永文 +2 位作者 彭程 雷延昌 李文庭 《中华肝脏病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期105-108,共4页
目的比较全长和不同片段缺失型商陆抗病毒蛋白(PAP)基因真核表达质粒体外抗HBV作用及其细胞毒性作用。方法将全长和不同片段缺失型PAP基因真核表达质粒用脂质体转染HepG2.2.15细胞,收获生长良好的HepG2.2.15细胞,转染前1d,接种... 目的比较全长和不同片段缺失型商陆抗病毒蛋白(PAP)基因真核表达质粒体外抗HBV作用及其细胞毒性作用。方法将全长和不同片段缺失型PAP基因真核表达质粒用脂质体转染HepG2.2.15细胞,收获生长良好的HepG2.2.15细胞,转染前1d,接种于24孔培养细胞板,培养20h后,待细胞密度达到40%~50%时进行转染。细胞随机分为4组:pXF3H组,转染空质粒pXF3H作为对照;pXF3H—PAP12组,转染全长PAP的真核表达质粒pXF3H-PAP12;pXF3H-PAP14组,转染C端缺失25个氨基酸的PAP的真核表达质粒pXF3H-PAP141;pXF3HPAP34组,转染既缺失N端69个氨基酸又缺失C端25个氨基酸的PAP的真核表达质粒pXF3H—PAP34。转染的质粒剂量为每孔1.0μg,终浓度为2.0μg/ml,质粒DNA(μg)和脂质体(μl)的比例为1:2.5,转染72h后收集细胞及培养上清液。酶联免疫吸附法检测培养上清液HBsAg和HBeAg,荧光定量PCR检测HBV DNA水平,四甲基偶氮唑盐比色法检测各质粒对转染细胞的毒性作用。应用SPSS12.0软件包处理数据,两样本均数的比较采用t检验,率的比较采用Х^2检验。结果对HBsAg、HBeAg、HBV DNA的抑制率,pXF3H—PAP14组分别为56.3%、75.8%和61.7%,pXF3H—PAP12组分别为61.4%、84.2%和63.2%,两组间差异无统计学意义。但pXF3H-PAP14组细胞毒性(抑制率为10.2%)明显低于pXF3H—PAP12组(抑制率为27.1%),Х^2=7.7,P〈0.01。pXF3H-PAP34组无细胞毒性,但其抗HBV作用也丧失,对HBsAg、HBeAg、HBV DNA的抑制率分别为7.8%、11.0%、20.5%。结论PAP的C端25个氨基酸与细胞毒性相关,与抗HBV活性无关;PAP的N端69个氨基酸与抗HBV活性相关。 展开更多
关键词 肝炎病毒 乙型 抗病毒药 商陆抗病毒蛋白
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ipt与PAPⅡ基因在烟草中共表达减轻PAPⅡ细胞毒性的初步研究
12
作者 殷娴 李朝霞 +5 位作者 吴国智 程伟 王晴 陈正华 张海燕 肖尊安 《激光生物学报》 CAS CSCD 2011年第2期254-260,共7页
利用农杆菌介导方法,分别将PAPⅡ单基因、PAPⅡ基因和异戊烯基转移酶基因(ipt)共表达的双基因(PAPⅡ-ipt)导入烟草品种K326叶细胞中,半定量RT-PCR分析了转基因植株中PAPⅡ、ipt和核糖体蛋白大亚基基因(RPL3A)的表达,并进行了TMV攻毒实... 利用农杆菌介导方法,分别将PAPⅡ单基因、PAPⅡ基因和异戊烯基转移酶基因(ipt)共表达的双基因(PAPⅡ-ipt)导入烟草品种K326叶细胞中,半定量RT-PCR分析了转基因植株中PAPⅡ、ipt和核糖体蛋白大亚基基因(RPL3A)的表达,并进行了TMV攻毒实验。结果表明:双基因PAPⅡ-ipt对烟草的转化频率高达45.55%,为单基因PAPⅡ的转化频率(13.3%)的3.4倍;50%的转基因植株没有检测到转基因的表达,PAPⅡ-ipt表达的转基因植株中RPL3A基因的表达水平为PAPⅡ表达植株中的1.25倍,且生长发育正常,对TMV病毒的抗性有较大程度的提高。因此,ipt与PAPs基因共表达可作为克服PAPs细胞毒性的有效途径。 展开更多
关键词 美洲商陆抗病毒蛋白 异戊烯基转移酶 细胞毒性 核糖体蛋白L3
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美洲商陆抗病毒蛋白缺失型基因PAP-C_(23)在大肠杆菌中的表达
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作者 夏启玉 肖苏生 +2 位作者 邓柳红 易小平 张春发 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第S1期61-64,共4页
目的:在大肠杆菌中高效表达缺失型美洲商陆抗病毒蛋白PAP-C_(23),并制备其抗血清。方法:从成熟PAP中克隆了C端缺失23个氨基酸的基因PAP-C_(23),以PET101为表达载体构建了重组质粒,转化入大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。切胶回收表达... 目的:在大肠杆菌中高效表达缺失型美洲商陆抗病毒蛋白PAP-C_(23),并制备其抗血清。方法:从成熟PAP中克隆了C端缺失23个氨基酸的基因PAP-C_(23),以PET101为表达载体构建了重组质粒,转化入大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。切胶回收表达的重组蛋白,冰浴研磨后用PBS溶解,再加入等体积福氏不完全佐剂,免疫家兔,制备抗PAP蛋白的多克隆抗体。结果:SDSPAGE分析表明,目的蛋白在BL21(DE3)中获得表达,表达产物以不溶的包涵体形式存在。通过对表达条件的优化,重组蛋白的表达量可占总包涵体蛋白的29.6%。间接ELISA法测定所制备抗血清效价为1:1000,Western blot分析结果显示,该抗血清与表达的重组蛋白和天然的PAP蛋白均发生特异性的免疫反应,结论:PAP-C_(23)基因在大肠杆菌中得到了正确表达,且重组蛋白的免疫原性较好,所制备的抗血清与天然PAP发生特异性免疫反应。 展开更多
关键词 PAP蛋白 PAP-C23 原核表达 包涵体 抗血清
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商陆抗病毒蛋白cDNA的植物表达载体构建及转化烟草的研究
14
作者 李洪艳 李建国 李艳 《辽宁师范大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2005年第3期333-335,共3页
以商陆抗病毒蛋白的cDNA序列为依据,设计特异性引物,应用PCR技术扩增出5′端含有BamHI,3′端含有KpnI限制性内切酶酶切位点的目的片段,且在序列的开始和结尾分别加入起始密码子ATG和终止密码子TAA.将该目的片段定向克隆于载体pROKII中与... 以商陆抗病毒蛋白的cDNA序列为依据,设计特异性引物,应用PCR技术扩增出5′端含有BamHI,3′端含有KpnI限制性内切酶酶切位点的目的片段,且在序列的开始和结尾分别加入起始密码子ATG和终止密码子TAA.将该目的片段定向克隆于载体pROKII中与CaMV35S启动子和Nos末端构成植物表达载体pRPAP,通过菌落直接PCR法和酶切分析鉴定出阳性重组子,用直接导入法将其导入农杆菌EHA105,以此作为工程菌进行烟草转化.对筛选到的阳性植株随机取样进行Southern印迹分析.结果表明,PAP基因已经整合到烟草基因组中,证明载体构建成功. 展开更多
关键词 商陆抗病毒蛋白 植物表达戢体 转化烟草
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商陆抗病毒蛋白重组子筛选及发酵条件初探
15
作者 周倩 高必达 王锡锋 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期62-64,共3页
目的:筛选体外高表达商陆抗病毒蛋白的毕赤酵母重组菌株,并摸索其适合的发酵条件。方法:通过电击转化将含有商陆抗病毒蛋白(pokeweed antiviral proteins,PAP)基因的分泌型表达载体PIC9K-P导入到毕赤酵母(Pachia pastoris)GS115菌株中... 目的:筛选体外高表达商陆抗病毒蛋白的毕赤酵母重组菌株,并摸索其适合的发酵条件。方法:通过电击转化将含有商陆抗病毒蛋白(pokeweed antiviral proteins,PAP)基因的分泌型表达载体PIC9K-P导入到毕赤酵母(Pachia pastoris)GS115菌株中。利用免疫印迹法筛选表达量较高的转化子。在摇瓶发酵水平对重组菌株产PAP条件进行初步研究。结果:高表达PAP的重组菌株在发酵时间为96h,10g/L的甲醇浓度,培养基pH值为6.0~6.4时PAP的表达量较高。结论:免疫印迹法适合用于毕赤酵母高表达重组菌株的筛选,重组毕赤酵母的PAP表达量可高达30mg/L。 展开更多
关键词 商陆抗病毒蛋白 毕赤酵母 高表达重组菌株 发酵条件
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商陆抗病毒蛋白抗HCV作用的初步研究
16
作者 贺永文 陈瑞烈 +1 位作者 高勇 郭劲松 《肝脏》 2002年第4期233-236,共4页
目的 探讨商陆抗病毒蛋白 (PAP)对HCV的抑制作用。方法 用不同浓度PAP处理HCV感染细胞模型 ,用荧光定量PCR检测HCVRNA。结果 HepG2 细胞内HCV持续表达达 3 0d以上。PAP处理HCV HepG2 细胞后 ,各组细胞内HCVRNA含量在 48h、96h和 14 4... 目的 探讨商陆抗病毒蛋白 (PAP)对HCV的抑制作用。方法 用不同浓度PAP处理HCV感染细胞模型 ,用荧光定量PCR检测HCVRNA。结果 HepG2 细胞内HCV持续表达达 3 0d以上。PAP处理HCV HepG2 细胞后 ,各组细胞内HCVRNA含量在 48h、96h和 14 4h差异非常显著 (P <0 .0 1)。培养上清液HCVRNA含量在 48h时 ,各组间无明显差异 (P >0 .0 5 ) ,但在 96h和 14 4h时 ,各组间差异非常显著 (P <0 .0 1)。此种抑制作用随PAP浓度的增加而增强。结论 PAP具有抑制HCV复制和表达的作用。 展开更多
关键词 商陆抗病毒蛋白 抗HCV作用 HCV感染细胞模型 丙型肝炎 商陆属植物
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抗CD4单抗-PAP免疫毒素对T淋巴母细胞样CEM细胞的体外效应
17
作者 张玲 冯炼强 林学颜 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期441-444,共4页
【目的】构建抗CD4单克隆抗体-商陆抗病毒蛋白(PAP)免疫毒素(抗CD4-PAP),分别在体外测定其对T淋巴母细胞样细胞CEM和对照Raji细胞的细胞毒杀伤效应。【方法】以SPDP为交联剂,将纯化的抗CD4单抗与商陆抗病毒蛋白交联成抗CD4-PAP免疫毒素... 【目的】构建抗CD4单克隆抗体-商陆抗病毒蛋白(PAP)免疫毒素(抗CD4-PAP),分别在体外测定其对T淋巴母细胞样细胞CEM和对照Raji细胞的细胞毒杀伤效应。【方法】以SPDP为交联剂,将纯化的抗CD4单抗与商陆抗病毒蛋白交联成抗CD4-PAP免疫毒素,在体外分别与CEM和Raji细胞进行杀伤试验。【结果】10-9mol/L抗CD4-PAP对CEM细胞产生的细胞毒效应约为60%,而对Raji细胞的细胞毒效应低于10%。抗CD4-PAP免疫毒素在体外对骨髓单个核细胞的CFU无抑制效应,【结论】抗CD4-PAP免疫毒素对T淋巴母细胞样CEM有明显的抑制效应,可能替代抗CD3单抗作为器官移植抗排斥反应及导向免疫治疗T淋巴细胞白血病的临床治疗研究。 展开更多
关键词 抗C CD4 免疫毒素 PAP 淋巴母细胞 单抗 RAJI细胞 交联剂 替代 杀伤
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光对商陆发状根生长和PAP基因表达的影响
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作者 张华 冀浩 +3 位作者 翁梦苓 梁志敏 万瑞晨 崔红 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期1588-1592,共5页
利用发根农杆菌菌株Ar1334与美洲商陆(Phytolacca americana)叶片外植体共培养转化体系,共获得58个发状根无性系(SL-1-58).以发根农杆菌Ri质粒TL-DNA上的rol C基因设计特异引物,对发状根进行PCR检测,得到了预期的560 bp目的片段,表... 利用发根农杆菌菌株Ar1334与美洲商陆(Phytolacca americana)叶片外植体共培养转化体系,共获得58个发状根无性系(SL-1-58).以发根农杆菌Ri质粒TL-DNA上的rol C基因设计特异引物,对发状根进行PCR检测,得到了预期的560 bp目的片段,表明Ri质粒T-DNA整合到发状根基因组中.将筛选出的株系SL-7接种在MS培养基上分别置于光、暗条件下进行培养.结果发现:SL-7在暗培养条件下呈乳白色,具有多分枝、多根毛、无向地性等典型的发状根特性;在光培养条件下,发根呈粉红色,少分支且生长缓慢;以商陆抗病毒蛋白(pokeweed antiviral protein,PAP)cDNA片段为探针,分别对光、暗条件下的发状根进行Northern blot检测,发现光对PAP基因的转录具有一定抑制作用;将发状根粗蛋白提取液与TMV病毒液混合后,摩擦接种于心叶烟(Nicotiana glutinosa)离体叶片,发现暗培养的发状根粗蛋白提取液对TMV抗性明显提高.表明商陆发状根的生长及PAP基因的表达都受到光的负向调控.该结果为商陆发状根的规模化培养和PAP蛋白的离体合成优化体系的建立奠定了基础. 展开更多
关键词 美洲商陆 发状根 商陆抗病毒蛋白 离体培养
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PAP—a/CD81—LEL融合蛋白表达载体的构建
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作者 潘延凤 贺永文 +2 位作者 刘薇 郭劲松 王华 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第19期2909-2911,共3页
目的探讨将商陆抗病毒蛋白-a(PAP-a)与CD81的胞外大环(CD81-LEL)融合,并在大肠杆菌内表达。方法采用重叠延伸PCR方法,将PAP-a和CD81-LEL的基因拼接成PAP-a/CD81-LEL融合基因,并在两基因的连接处引入柔性肽段linker(GSGGSG)的核苷酸片断... 目的探讨将商陆抗病毒蛋白-a(PAP-a)与CD81的胞外大环(CD81-LEL)融合,并在大肠杆菌内表达。方法采用重叠延伸PCR方法,将PAP-a和CD81-LEL的基因拼接成PAP-a/CD81-LEL融合基因,并在两基因的连接处引入柔性肽段linker(GSGGSG)的核苷酸片断,然后将此融合基因克隆到原核表达载体PET-28a上,并在大肠杆菌BL21中进行表达。结果所获得的PAP-a/CD81-LEL融合基因经测序正确,并可以在大肠杆菌BL21中表达,经SDS-PAGE分析,重组蛋白的相对分子量为50KD。结论PAP-a/CD81-LEL融合基因表达载体的成功构建与表达为进一步研究生物活性打下基础。 展开更多
关键词 商陆抗病毒蛋白 CD81 融合蛋白
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用激光微束穿刺法将PAP cDNA导入油菜获得抗病毒转基因植株 被引量:20
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作者 张海燕 党本元 +4 位作者 周奕华 王兰岚 刘桂珍 张丽华 陈正华 《中国激光》 EI CAS CSCD 北大核心 1999年第11期1053-1056,共4页
采用激光微束穿刺法将损伤诱导型启动子控制之下的商陆抗病毒蛋白(PAP)CDNA导入了甘蓝型油菜(BrassicanapusL.)双低品种H165,经庆大霉素筛选,获得了抗性再生植株。PCR扩增检测及Southern杂交分析表明,PAPcDNA连同损伤诱导型启... 采用激光微束穿刺法将损伤诱导型启动子控制之下的商陆抗病毒蛋白(PAP)CDNA导入了甘蓝型油菜(BrassicanapusL.)双低品种H165,经庆大霉素筛选,获得了抗性再生植株。PCR扩增检测及Southern杂交分析表明,PAPcDNA连同损伤诱导型启动子已稳定整合至受体基因组,转化效率为1.7%。攻毒实验表明,转基因油菜植株对供试病毒芜菁花叶叶(TuMV)具有较高抵抗能力。 展开更多
关键词 油菜 抗病毒转基因 PAPcDNA 激光微束穿刺法
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