质粒DNA小量提取法的改进 被引量：7

1

作者 姚伟 周会 +3 位作者 徐景升 余爱丽 张木清 陈如凯 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期776-778,共3页

介绍了一种改进的小量提取质粒DNA的方法,该方法用NH4Ac和LiCl代替常规方法中苯酚和氯仿的抽提,有效去除了样品中RNA和蛋白质;用95%乙醇代替无水乙醇沉淀质粒DNA,降低了终产物中盐和多糖等杂质的含量,获得的质粒DNA质量好,产率高,能满... 介绍了一种改进的小量提取质粒DNA的方法,该方法用NH4Ac和LiCl代替常规方法中苯酚和氯仿的抽提,有效去除了样品中RNA和蛋白质;用95%乙醇代替无水乙醇沉淀质粒DNA,降低了终产物中盐和多糖等杂质的含量,获得的质粒DNA质量好,产率高,能满足常规分子生物学实验的要求,如PCR、酶切、转化大肠杆菌以及植物遗传转化. 展开更多

关键词 质粒DNA 碱裂解法 提取方法 小量提取法

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乳牛乳腺炎病原菌的质粒提取及其四环素耐药基因的扩增 被引量：6

2

作者 代敏 王雄清 +3 位作者 彭成 陈希文 杨丽红 王利 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期366-371,共6页

采用碱裂解法、改良碱裂解法、大质粒简易提取法、试剂盒法和SDS法共5种方法对分离于绵阳市奶牛场的乳腺炎病原菌共50株进行了质粒DNA的提取,并用琼脂糖凝胶电泳对提取质粒进行了电泳分析。结果表明,5种质粒提取方法中SDS法的提取率较高... 采用碱裂解法、改良碱裂解法、大质粒简易提取法、试剂盒法和SDS法共5种方法对分离于绵阳市奶牛场的乳腺炎病原菌共50株进行了质粒DNA的提取,并用琼脂糖凝胶电泳对提取质粒进行了电泳分析。结果表明,5种质粒提取方法中SDS法的提取率较高(88%),电泳检测时质粒条带清晰,绝大部分菌株含有大小约20 kb的一种质粒;其他4种方法的提取率都较低,且以弥散性质粒条带为主。以提取的质粒DNA为模板,对其四环素耐药基因tetM、tetK和tetC进行了PCR扩增。结果表明,仅4株扩增出了tetM基因的特异性产物,未能扩增出tetK基因和tetC基因。 展开更多

关键词 质粒提取 聚合酶链式反应 四环素耐药基因 乳腺炎病原菌 乳牛

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影响质粒提取的关键因素及提取方法的选择 被引量：3

3

作者 祁汝峰 黄瑞 《中国血液流变学杂志》 CAS 2006年第4期530-531,533,共3页

通过对质粒DNA提取过程的分析,探讨质粒DNA提取过程中的影响因素,分析影响质粒DNA纯度和量的关键因素,以利解决质粒提取过程中遇到的问题。

关键词 质粒提取 方法 影响因素

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洋葱伯克霍尔德菌T1828质粒消除方法及条件 被引量：4

4

作者 钟义军 吴晓玉 +3 位作者 刘好桔 武琳 饶志强 王园秀 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期847-852,共6页

采用十二烷基硫酸钠和提高生长温度结合法、紫外线涂布平板法、冻融法、吖啶橙法和黄芩甙提取液消除法等方法消除洋葱伯克霍尔德菌T1828菌株质粒,探讨适合洋葱伯克霍尔德菌质粒消除的方法,并研究最佳质粒消除条件。结果表明十二烷基硫... 采用十二烷基硫酸钠和提高生长温度结合法、紫外线涂布平板法、冻融法、吖啶橙法和黄芩甙提取液消除法等方法消除洋葱伯克霍尔德菌T1828菌株质粒,探讨适合洋葱伯克霍尔德菌质粒消除的方法,并研究最佳质粒消除条件。结果表明十二烷基硫酸钠和提高生长温度结合法最适合于洋葱伯克霍尔德菌T1828质粒消除,同时最佳消除条件为:在T1828培养16 h后加入SDS使其终浓度0.1%,36°C处理18 h,消除率达到49%。筛选到的无质粒突变株可以用于进一步的研究。 展开更多

关键词 洋葱伯克霍尔德菌T1828 质粒消除 质粒提取 消除条件

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一种快速高效提取酵母质粒的方法 被引量：2

5

作者 张怡 刘坤 +5 位作者 曹鹏 魏森 韦丹丹 杜建 李鹏坤 李成伟 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期1194-1198,共5页

质粒提取是遗传工程操作的重要步骤。酵母细胞壁坚韧,不易破壁,使酵母质粒提取变得非常困难。为了获得一种快速、简便、高效、稳定的提取酵母质粒的方法,利用琼脂糖凝胶电泳、核酸蛋白测定仪和PCR扩增等方法,对玻璃珠液氮法、蜗牛酶法... 质粒提取是遗传工程操作的重要步骤。酵母细胞壁坚韧,不易破壁,使酵母质粒提取变得非常困难。为了获得一种快速、简便、高效、稳定的提取酵母质粒的方法,利用琼脂糖凝胶电泳、核酸蛋白测定仪和PCR扩增等方法,对玻璃珠液氮法、蜗牛酶法和试剂盒法提取的酵母质粒,在产率、纯度和对后续实验的影响等方面进行了比较。结果表明,与另外两种方法比较,玻璃珠液氮法提取酵母质粒具有效率高、质量好、成本低、时间短、操作简单的优点,可作为实验室规模化提取酵母质粒的常用方法。 展开更多

关键词 酵母菌 质粒提取 玻璃珠液氮法

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一种提高质粒转染效率的质粒提取方法的优化 被引量：1

6

作者 胡小青 肖广原 +2 位作者 张鹏 陈厚早 刘德培 《基础医学与临床》 CSCD 2019年第5期738-744,共7页

目的优化和改进质粒提取方法,以提高质粒的提取效率,增加其在哺乳动物细胞中的表达效率。方法分别在室温条件和4℃条件提取质粒,并将细菌裂解、过柱和洗脱3个过程分解在两种温度下提取质粒;使用紫外分光光度计和琼脂糖凝胶电泳分别检测... 目的优化和改进质粒提取方法,以提高质粒的提取效率,增加其在哺乳动物细胞中的表达效率。方法分别在室温条件和4℃条件提取质粒,并将细菌裂解、过柱和洗脱3个过程分解在两种温度下提取质粒;使用紫外分光光度计和琼脂糖凝胶电泳分别检测质粒浓度和超螺旋形式;将质粒转染哺乳动物细胞,使用荧光显微镜和Western blot检测荧光蛋白的表达水平。结果低温进行质粒提取能够显著提高质粒提取效率(P<0.05),并显著提高其在哺乳动物细胞中的表达效率(P<0.01)。质粒提取的3个步骤:细菌裂解、过柱和洗脱均对温度敏感,从而影响质粒的得率和在哺乳动物细胞中的表达效率。结论成功获得一种简单易行的提高质粒得率和在哺乳动物细胞中表达效率的质粒提取方法。 展开更多

关键词 质粒提取 质粒构型 低温 转染效率

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表皮葡萄球菌污染对质粒转化和抽提影响的实验研究

7

作者 江汕 邵东华 +3 位作者 李玉华 彭韬 江千里 冯振卿 《江苏大学学报（医学版）》 CAS 2002年第5期462-464,共3页

目的 :探讨导致部分质粒转化和抽提失败的原因。方法 :使用同一批DH5 α细菌制备感受态 ,转化、碱裂解法抽提和鉴定两种质粒 ,经抗性LB琼脂平板筛选和菌落分析 ,对照成功抽提和鉴定的质粒 ,分析部分质粒反复转化和抽提失败的原因。结果 ... 目的 :探讨导致部分质粒转化和抽提失败的原因。方法 :使用同一批DH5 α细菌制备感受态 ,转化、碱裂解法抽提和鉴定两种质粒 ,经抗性LB琼脂平板筛选和菌落分析 ,对照成功抽提和鉴定的质粒 ,分析部分质粒反复转化和抽提失败的原因。结果 :发现在该抽提失败的质粒所转化的抗性LB琼脂平板上存在两种菌落 ,大量白色菌落为表皮葡萄球菌 ,其过夜振摇产物经碱裂解法抽提质粒失败 ;极少数淡黄色菌落为大肠杆菌 ,经鉴定 ,质粒抽提成功。结论 :隐蔽的表皮葡萄球菌污染可能是导致部分质粒反复抽提失败的重要原因。 展开更多

关键词 表皮葡萄球菌 实验研究 质粒抽提 质粒转化 污染 分子生物学

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鼠抗人转铁蛋白单链抗体基因序列测定及分析

8

作者 李兆隆 郭红玲 +4 位作者 常彩琴 肖卫民 涂政 王明鑫 王俭 《刑事技术》 北大核心 2000年第6期7-9,共3页

从携带人转铁蛋白单链抗体基因载体转化的大肠杆菌菌株中提取质粒,经电泳分析及筛选、纯化出线状质粒DNA,定量后以载体上人转铁蛋白单链抗体基因插入子两边的已知DNA序列经合成后作为引物进行测序扩增凝胶电泳,将得到的人转铁蛋白单链... 从携带人转铁蛋白单链抗体基因载体转化的大肠杆菌菌株中提取质粒,经电泳分析及筛选、纯化出线状质粒DNA,定量后以载体上人转铁蛋白单链抗体基因插入子两边的已知DNA序列经合成后作为引物进行测序扩增凝胶电泳,将得到的人转铁蛋白单链杭体基因序列重轻链可变区部分同基因库中鼠抗体重轻链进行同源比对,证明人转铁蛋白单链抗体基因确由鼠抗体重轻链可变区基因构成,在此基础上,进一步对基因核苷酸序列的可变区结构特征作推断分析,并推导出其对应的氨基酸序列. 展开更多

关键词 质粒提取 DNA测序 同源比较 基因结构分析

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一种优化的提高质粒产量的提取方法

9

作者 王宗宇 张晓瑛 +2 位作者 张小玲 杨永广 代相鹏 《畜牧与兽医》 北大核心 2021年第11期42-47,共6页

研究旨在优化质粒提取方法,提高质粒产量。对商品化质粒提取试剂盒的提取条件进行了优化,增加了提前小管摇菌和异丙醇-20℃过夜沉淀两个步骤。利用紫外分光光度计、琼脂糖凝胶电泳、双酶切和免疫印迹等方法,对获得质粒的生化特性和生物... 研究旨在优化质粒提取方法,提高质粒产量。对商品化质粒提取试剂盒的提取条件进行了优化,增加了提前小管摇菌和异丙醇-20℃过夜沉淀两个步骤。利用紫外分光光度计、琼脂糖凝胶电泳、双酶切和免疫印迹等方法,对获得质粒的生化特性和生物学功能进行了测定。结果表明,优化的质粒提取方法可提高30%的质粒产量,质粒的生化指标和生物学功能试验结果显示优化方法获得的质粒质量没有下降。 展开更多

关键词 质粒提取 方法优化 异丙醇

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苏云金芽胞杆菌内生质粒提取方法的改进 被引量：14

10

作者 刘晶晶 束长龙 +2 位作者 张杰 宋福平 黄大昉 《生物技术通报》 CAS CSCD 2008年第6期120-123,共4页

改进了苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)内生质粒提取技术,提取了Bt库斯塔克亚种、以色利亚种和一株对鳞翅目害虫有活性的野生菌株的质粒,利用琼脂糖凝胶电泳分析了质粒图谱,进一步检测了质粒的浓度与纯度。实验结果表明,该... 改进了苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)内生质粒提取技术,提取了Bt库斯塔克亚种、以色利亚种和一株对鳞翅目害虫有活性的野生菌株的质粒,利用琼脂糖凝胶电泳分析了质粒图谱,进一步检测了质粒的浓度与纯度。实验结果表明,该方法与传统技术相比,操作简单、耗时短,提取的质粒纯度高、条带清晰,染色体DNA污染较少。为Bt杀虫基因克隆、质粒特性分析等研究创造了有利条件。 展开更多

关键词 苏云金芽胞杆菌 内生质粒 提取 质粒图谱

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不同试剂盒提取质粒中内毒素水平的比较 被引量：1

11

作者 李卫玲 易初丽 《江汉大学学报（自然科学版）》 2019年第1期36-40,共5页

目的比较几种不同质粒提取试剂盒提取质粒中内毒素水平。方法选用6种市售商业化试剂盒:QIAGEN质粒小提试剂盒Plasmid Mini Kit(12123),QIAGNE无内毒素质粒大提试剂盒EndoFree PlasmidMaxi Kit(12362),康为世纪高纯质粒中提试剂盒(CW0502... 目的比较几种不同质粒提取试剂盒提取质粒中内毒素水平。方法选用6种市售商业化试剂盒:QIAGEN质粒小提试剂盒Plasmid Mini Kit(12123),QIAGNE无内毒素质粒大提试剂盒EndoFree PlasmidMaxi Kit(12362),康为世纪高纯质粒中提试剂盒(CW0502),A厂家无内毒素质粒中提试剂盒,B厂家无内毒素质粒小提试剂盒,C厂家无内毒素质粒小提试剂盒(BSC01S2D)。分别提取质粒DNA,应用鲎试剂显色基质法和凝胶法检测所提质粒中内毒素水平。结果6种试剂盒提取质粒得率、A260/A280及A260/A230值均较好,但内毒素水平各不相同,其中各厂家标明无内毒素试剂盒提取质粒中内毒素水平相对较低,QIAGEN无内毒素质料大提试剂盒提取的质粒中内毒素小于0. 125 EU/μg。结论6种质粒提取试剂盒使用时应根据实际情况进行选择。 展开更多

关键词 质粒 内毒素 鲎试剂 质粒提取试剂盒

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四种去内毒素试剂盒提取质粒中内毒素水平的比较

12

作者 杨振苹 张静静 +7 位作者 邢体坤 王斌 宋路萍 荆新蕊 宋彦君 黄帅 王亚萍 潘若文 《中国医药科学》 2020年第13期11-14,共4页

目的比较四种去内毒素质粒提取试剂盒所提质粒中内毒素的水平。方法本实验选用了四种商业化去内毒素试剂盒进行质粒提取,然后用鲎试剂凝胶法和动态浊度法对所提质粒DNA进行内毒素检测。结果四种试剂盒所提取的质粒得率、A260/A280、A260... 目的比较四种去内毒素质粒提取试剂盒所提质粒中内毒素的水平。方法本实验选用了四种商业化去内毒素试剂盒进行质粒提取,然后用鲎试剂凝胶法和动态浊度法对所提质粒DNA进行内毒素检测。结果四种试剂盒所提取的质粒得率、A260/A280、A260/A230均符合要求,内毒素水平均小于0.1EU/μg。其中,C试剂盒所提取的质粒中内毒素含量最低。结论四种去内毒素质粒提取试剂盒在质粒得率、内毒素含量、价格方面有一定的差异。其中C试剂盒所提质粒得的率最高,内毒素含量最低,但价格也最贵;B试剂盒性价比最高,使用时应根据实际情况综合考虑。 展开更多

关键词 质粒 内毒素 去内毒素质粒提取试剂盒 凝胶法 动态浊度法

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双磁珠法质粒DNA提取技术及应用 被引量：1

13

作者 喻春函 宋辉 +2 位作者 曹文刚 肖晓文 杜军 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期4708-4717,共10页

质粒是基因合成与测序领域中使用最为频繁的基因运载工具,然而传统的质粒DNA提取方法面临提取通量低、生产成本高等问题,无法满足日益增长的需求。本研究基于质粒提取原理,开发了双磁珠法(double-magnetic-bead method,DMBM)质粒提取技... 质粒是基因合成与测序领域中使用最为频繁的基因运载工具,然而传统的质粒DNA提取方法面临提取通量低、生产成本高等问题,无法满足日益增长的需求。本研究基于质粒提取原理,开发了双磁珠法(double-magnetic-bead method,DMBM)质粒提取技术,探究了磁珠投入量、质粒DNA片段大小、菌液投入量等因素对质粒提取的影响,并且对比了本技术与商业化质粒DNA提取试剂盒提取DNA质量、提取通量及提取成本。结果表明,双磁珠法质粒DNA提取技术可满足不同细胞密度、不同片段长度的质粒DNA提取。此外,该技术搭载96通道全自动核酸提取仪,提取的质粒DNA纯度更高、提取时间缩短80%、提取成本缩减57.1%,从而实现了质粒DNA提取的高通量、低成本,有效助力基因合成与测序。 展开更多

关键词 质粒提取 双磁珠法 高通量提取 低成本

原文传递

改进溶液Ⅱ配方可提高质粒DNA提取的质量及得率 被引量：5

14

作者 黄南 程熠 +2 位作者 连欢 张述 李卓娅 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期816-818,共3页

目的通过改进溶液Ⅱ配方,消除质粒DNA提取中的不可逆变性条带,提高质粒DNA提取的质量与得率。方法取氨苄LB液体培养液中培养好的DH5α(pCDNA3),以NaOH系列梯度浓度/甘氨酸-NaOH缓冲液体系配制溶液Ⅱ,依据文献提供的方法,小量提取制备质... 目的通过改进溶液Ⅱ配方,消除质粒DNA提取中的不可逆变性条带,提高质粒DNA提取的质量与得率。方法取氨苄LB液体培养液中培养好的DH5α(pCDNA3),以NaOH系列梯度浓度/甘氨酸-NaOH缓冲液体系配制溶液Ⅱ,依据文献提供的方法,小量提取制备质粒DNA,以凝胶电泳、紫外分光光度计及酶切验证提取效果。结果在NaOH浓度为0.10mol/L下,不可逆变性条带基本得到消除,超螺旋DNA的提取纯度和得率均得到明显提高。结论改变溶液Ⅱ的碱性条件,可以制备高质量的质粒DNA。 展开更多

关键词 质粒DNA提取 碱裂解法 溶液Ⅱ

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质粒DNA提取及电泳检测实验改革 被引量：2

15

作者 赵玉红 李欣 +4 位作者 崔建林 赵立青 李登文 张金红 周浩 《实验技术与管理》 CAS 北大核心 2017年第3期35-38,共4页

为进一步增强学科间的交叉与渗透,提高学生灵活运用多学科知识与方法的能力,对质粒DNA提取及电泳检测实验进行改革。在改进经典碱裂解法提取质粒DNA、琼脂糖凝胶电泳检测质粒DNA的基础上,新增试剂盒方法提取质粒DNA、超微量分光光度计... 为进一步增强学科间的交叉与渗透,提高学生灵活运用多学科知识与方法的能力,对质粒DNA提取及电泳检测实验进行改革。在改进经典碱裂解法提取质粒DNA、琼脂糖凝胶电泳检测质粒DNA的基础上,新增试剂盒方法提取质粒DNA、超微量分光光度计检测质粒DNA以及快速单酶切鉴定质粒DNA等实验内容。改革后的实验不仅促进经典与现代技术、方法的有机结合,而且增强学科间的相互融合,取得了良好的教学效果。 展开更多

关键词 质粒DNA提取 质粒DNA检测 电泳检测

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碱裂解法提取质粒DNA的研究 被引量：16

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作者 杨献光 齐志广 +1 位作者 赵宝存 马闻师 《生物技术通报》 CAS CSCD 2003年第6期24-26,共3页

对质粒DNA及其结构、形态和功能进行了综述 ,介绍了碱裂解法提取质粒DNA的基本步骤 ,并对其提取过程中的注意事项进行了剖析 。

关键词 质粒DNA 提取 碱裂解法 结构 形态 功能

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