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仔猪小肠上皮细胞的体外培养及猪流行性腹泻病毒对其感染性研究 被引量：4
1
作者 沈学怀 翟银建 +7 位作者 尹磊 潘孝成 张丹俊 赵瑞宏 戴银 胡晓苗 周学利 侯宏艳 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第12期4051-4058,共8页
本研究旨在建立一种操作简单的仔猪小肠上皮细胞体外培养体系,为猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)的相关研究提供材料。研究以未吃初乳的新生仔猪作为肠道供体,采用肠腔面刮取肠黏膜和机械分离分散的方式进行原... 本研究旨在建立一种操作简单的仔猪小肠上皮细胞体外培养体系,为猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)的相关研究提供材料。研究以未吃初乳的新生仔猪作为肠道供体,采用肠腔面刮取肠黏膜和机械分离分散的方式进行原代细胞的体外分离。采用0.1%胰蛋白酶差速消化法进行仔猪小肠上皮细胞的纯化;比较新生弱仔猪和正常仔猪作为供体对原代小肠上皮细胞活性的影响;MTT法比较不同代次原代细胞的增殖活性;免疫荧光和实时荧光定量RT-PCR方法检测PEDV毒株CV777在原代小肠上皮细胞感染和增殖情况。结果显示,本研究建立的体外分离培养方法能获得增殖活性良好的原代小肠上皮细胞,具有明显的“S”型细胞增殖曲线。通过胰酶差速消化可得到纯度高、形态单一的小肠上皮细胞,同时细胞连续传代5次仍保持良好的增殖活性。弱仔猪和正常仔猪分离培养的小肠上皮细胞的增殖活性比较显示,两者并没有明显区别,这为降低原代细胞培养的成本提供新的思路。免疫荧光和实时荧光定量RT-PCR结果显示,PEDV可感染本方法分离培养的仔猪原代小肠上皮细胞,并在其中进行复制增殖。本研究建立了一种操作简单、实用性强、成本较低的仔猪原代小肠上皮细胞体外培养方法,该方法培养的原代细胞可作为PEDV分离培养和相关研究的基础材料。 展开更多
关键词 仔猪小肠上皮细胞 体外培养 猪流行性腹泻病毒(PEDV) 增殖活性 细胞传代
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刺五加苷E对脂多糖介导的仔猪小肠上皮细胞屏障功能基因表达的影响
2
作者 胡枭偲 赵宝 +1 位作者 范越蠡 车东升 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期213-220,共8页
通过脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导仔猪小肠组织上皮细胞(IPEC-J2)建立损伤模型,探讨刺五加苷E(Eleutheroside E,EE)对IPEC-J2屏障功能的保护作用。采用单因素试验方法,分为对照组C组(等量的完全培养基),E组(完全培养基+0.1 g/L E... 通过脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导仔猪小肠组织上皮细胞(IPEC-J2)建立损伤模型,探讨刺五加苷E(Eleutheroside E,EE)对IPEC-J2屏障功能的保护作用。采用单因素试验方法,分为对照组C组(等量的完全培养基),E组(完全培养基+0.1 g/L EE),L组(完全培养基+10 mg/L LPS),EL组(完全培养基添加0.1 g/L EE预处理6 h后再添加10 mg/L的LPS进行培养),采用RTCA及q-PCR方法对IPEC-J2细胞的增殖活性、炎症因子以及紧密连接蛋白mRNA表达量变化进行检测。EE对LPS介导的IPEC-J2的增殖活性试验结果显示:与C组相比,EE对IPEC-J2细胞增殖活性显著提高,LPS对IPEC-J2细胞有显著的抑制作用(P<0.05),且EL组IPEC-J2增殖活性与L组相比明显提高(P<0.05)。EE对LPS介导的IPEC-J2的免疫细胞因子影响的结果显示:与对照组相比,EE显著降低了炎性细胞因子IL-6、TNF-α、INF-γ的mRNA相对表达量(P<0.01),抗炎性细胞因子IL-10、TGF-β显著升高(P<0.01);L组的炎性细胞因子mRNA相对表达量显著升高(P<0.01),抗炎性细胞因子mRNA相对表达量显著降低(P<0.01)。EE预处理组相比于LPS损伤组,IL-6、TNF-α、INF-γmRNA相对表达量显著降低(P<0.01),IL-10 mRNA相对表达量显著升高(P<0.01),TGF-β的mRNA相对表达量上调,但差异不显著(P>0.05)。EE对LPS介导的IPEC-J2细胞紧密连接蛋白mRNA相对表达量的影响试验结果显示:与C组比,E组Occludin(P<0.05)、ZO-1和Claudin-3(P<0.01)的mRNA相对表达量显著升高,LPS显著下调Occludin、Claudin-3和ZO-1的mRNA相对表达量(P<0.01)。与LPS损伤组相比,EE预处理组显著上调了Occludin(P<0.05)、Claudin-3和ZO-1(P<0.01)的mRNA相对表达量。结果表明:添加EE能够缓解LPS诱导的IPEC-J2细胞增殖活性的降低,改变细胞因子和紧密连接蛋白的基因表达,进而起到保护肠道机械屏障和免疫屏障功能的作用。 展开更多
关键词 刺五加苷E 脂多糖 仔猪小肠上皮细胞 紧密连接蛋白 细胞因子
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维生素A对大豆7S球蛋白致仔猪肠上皮细胞屏障功能损伤的影响 被引量：4
3
作者 杨菊 邓俊良 +3 位作者 夏江英 宋天浩 庞莲凤 任志华 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2021年第11期2026-2033,共8页
以仔猪肠上皮细胞(IPEC-J2)为研究对象,用大豆7S球蛋白作为诱导因素,通过检测细胞活力、细胞跨膜电阻(TEER)、荧光素钠渗透率、细胞膜完整性相关指标与紧密连接蛋白的mRNA表达情况,探究维生素A(V_(A))对大豆7S球蛋白致IPEC-J2细胞屏障... 以仔猪肠上皮细胞(IPEC-J2)为研究对象,用大豆7S球蛋白作为诱导因素,通过检测细胞活力、细胞跨膜电阻(TEER)、荧光素钠渗透率、细胞膜完整性相关指标与紧密连接蛋白的mRNA表达情况,探究维生素A(V_(A))对大豆7S球蛋白致IPEC-J2细胞屏障功能损伤的影响。结果显示:5.0 mg·mL^(-1)大豆7S球蛋白导致IPEC-J2活力、TEER与ZO-1、Claudin-1、Occludin的mRNA表达量极显著(P<0.01)降低,而荧光素钠渗透率和细胞培养液中碱性磷酸酶(ALP)、乳酸脱氢酶(LDH)、二胺氧化酶(DAO)、肠型脂肪酸结合蛋白1(IFABP1)的含量极显著(P<0.01)升高;添加0.1和1μmol·L^(-1)V_(A)极显著提高了细胞活力(P<0.01),0.1~10μmol·L^(-1)V_(A)显著(P<0.05)缓解了大豆7S球蛋白导致的TEER、荧光素钠渗透率、细胞膜完整性相关指标与紧密连接蛋白mRNA表达的变化;10000μmol·L^(-1)V_(A)反而加剧了这些影响。总体上,0.1~10μmol·L^(-1)V_(A)能通过保护细胞活力和细胞完整性、影响紧密连接蛋白的mRNA表达对大豆7S球蛋白导致的IPEC-J2细胞屏障功能损伤发挥保护作用,而10000μmol·L^(-1)V_(A)反而加重了这种损伤。 展开更多
关键词 大豆7S球蛋白 维生素A 仔猪空肠上皮细胞 通透性 紧密连接蛋白
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胰高血糖素样肽-2对脂多糖应激的IPEC-J2细胞形态和紧密连接相关基因表达的影响 被引量：9
4
作者 余长松 贾刚 +4 位作者 邓秋红 陈小玲 赵华 刘光芒 王康宁 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期592-599,共8页
本研究旨在考察胰高血糖素样肽-2(Glucagons-like peptide-2,GLP-2)和脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)对仔猪空肠上皮细胞及其紧密连接(Tight Junctions,TJ)相关蛋白基因表达的影响,并探讨GLP-2调控仔猪肠道TJ蛋白基因表达可能的作用机... 本研究旨在考察胰高血糖素样肽-2(Glucagons-like peptide-2,GLP-2)和脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)对仔猪空肠上皮细胞及其紧密连接(Tight Junctions,TJ)相关蛋白基因表达的影响,并探讨GLP-2调控仔猪肠道TJ蛋白基因表达可能的作用机理。试验一设对照、GLP-2、LPS、LPS+GLP-2共4个组,考查各处理对IPEC-J2细胞形态和紧密连接关键蛋白Occludin、Claudin-1和ZO-1基因表达的影响。结果:添加100nmol·L-1 GLP-2能显著改善IPEC-J2细胞形态,显著提高Occludin、Claudin-1和ZO-1mRNA表达(P<0.01);100μg·mL-1 LPS处理能显著破坏细胞形态、降低IPEC-J2细胞紧密连接蛋白mRNA的表达(P<0.01);在添加LPS基础上添加100nmol·L-1 GLP-2能有效维护细胞形态,显著增加IPEC-J2细胞TJ相关蛋白Occludin、Claudin-1和ZO-1mRNA的表达(P<0.01),增加量分别为46.3%、65.1%和30.3%。试验二考察了添加PI3K特异性抑制剂Wortmannin(Wort)和LY294002(LY)阻断PI3K-Akt-mTOR信号转导途径后Occludin、Claudin-1和ZO-1mRNA表达量的变化,试验共设对照、GLP-2、GLP-2+Wort、GLP-2+LY等4个组。结果:添加抑制剂Wort后可显著降低IPEC-J2细胞Akt、mTOR、Occludin、Claudin-1和ZO-1mRNA的表达(P<0.01),降低量分别为46.9%、50.5%,38.1%、49.6%和18.9%;添加LY后上述mRNA的表达量分别显著降低了67.2%、70.8%,49.6%、60.9%和25.8%(P<0.01)。以上结果表明:添加GLP-2能够有效抑制LPS应激对IPEC-J2细胞形态和TJ相关基因表达的损伤,PI3K-Akt-mTOR信号转导途径可能是GLP-2调控肠道紧密连接蛋白基因表达的重要信号通路之一。 展开更多
关键词 胰高血糖素样肽-2 脂多糖 仔猪空肠上细胞IPEC-J2 紧密连接 PI3K-Akt-mTOR
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