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山黧豆β-腈基丙氨酸合成酶基因LsCAS的原核表达及蛋白聚合状态分析
1
作者
贾海燕
李辰浩
+3 位作者
宋瑶瑶
刘凤娟
焦成瑾
徐全乐
《西北植物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第9期1605-1610,共6页
该研究从山黧豆种子萌发6 d后的幼苗根中扩增到β-腈基丙氨酸合成酶基因(LsCAS)的CDS序列,并构建pGEX2T-LsCAS表达载体;经诱导表达后,通过GST亲和层析进行LsCAS蛋白纯化,并利用GST标签抗体和大豆半胱氨酸合成酶(Cysteine synthase,CS)...
该研究从山黧豆种子萌发6 d后的幼苗根中扩增到β-腈基丙氨酸合成酶基因(LsCAS)的CDS序列,并构建pGEX2T-LsCAS表达载体;经诱导表达后,通过GST亲和层析进行LsCAS蛋白纯化,并利用GST标签抗体和大豆半胱氨酸合成酶(Cysteine synthase,CS)抗体对纯化蛋白进行Western-blot验证;纯化后的LsCAS蛋白经凝血酶切除GST标签抗体后,利用凝胶过滤预装柱Superdex 200 Increase 10/300 GL分析判断分子量。结果显示:(1)山黧豆LsCAS基因的CDS序列为1035 bp,编码344个氨基酸;其编码的蛋白质具有典型的CBS-like蛋白功能结构域胱硫醚β-合酶(CBS)和半胱氨酸合成酶(CS)。(2)成功构建LsCAS基因的原核表达载体pGEX2T-LsCAS并进行蛋白纯化;SDS-PAGE检测表明,所获融合蛋白条带单一,大小在64 kD左右;Western-blot分析发现,诱导后的菌体蛋白和纯化后的重组蛋白中均能检测到特征条带,说明所获融合蛋白为山黧豆LsCAS蛋白。(3)纯化的山黧豆LsCAS蛋白在412 nm的特征吸收峰显示,LsCAS隶属于磷酸吡哆醛(PLP)依赖的半胱氨酸合成酶家族;分子排阻试验证实山黧豆LsCAS为PLP依赖性蛋白酶,可能以四聚体方式发挥作用。研究结果为进一步探讨山黧豆LsCAS的调控及其功能奠定了基础。
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关键词
山黧豆
β-腈基丙氨酸合成酶
原核表达
蛋白纯化
磷酸吡哆醛
下载PDF
职称材料
丙氨酸消旋酶的研究进展
被引量：
3
2
作者
张彩凤
徐书景
+4 位作者
李艳红
薛张伟
马宁
赵宝华
鞠建松
《安徽农业科学》
CAS
北大核心
2011年第15期8836-8839,共4页
简要介绍了丙氨酸消旋酶的分类、结构特征和催化机制。
关键词
丙氨酸消旋酶
催化机制
D-丙氨酸
5'-磷酸吡哆醛
下载PDF
职称材料
题名
山黧豆β-腈基丙氨酸合成酶基因LsCAS的原核表达及蛋白聚合状态分析
1
作者
贾海燕
李辰浩
宋瑶瑶
刘凤娟
焦成瑾
徐全乐
机构
陇东学院生命科学与技术学院
西北农林科技大学生命科学学院
天水师范学院生物工程与技术学院
出处
《西北植物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第9期1605-1610,共6页
基金
陕西省自然科学基金(2020JM-167)
大学生创新创业训练计划(S202010712196)
中央高校基本科研业务费专项资金重点研究基地建设项目(lzujbky-2021-kb05)。
文摘
该研究从山黧豆种子萌发6 d后的幼苗根中扩增到β-腈基丙氨酸合成酶基因(LsCAS)的CDS序列,并构建pGEX2T-LsCAS表达载体;经诱导表达后,通过GST亲和层析进行LsCAS蛋白纯化,并利用GST标签抗体和大豆半胱氨酸合成酶(Cysteine synthase,CS)抗体对纯化蛋白进行Western-blot验证;纯化后的LsCAS蛋白经凝血酶切除GST标签抗体后,利用凝胶过滤预装柱Superdex 200 Increase 10/300 GL分析判断分子量。结果显示:(1)山黧豆LsCAS基因的CDS序列为1035 bp,编码344个氨基酸;其编码的蛋白质具有典型的CBS-like蛋白功能结构域胱硫醚β-合酶(CBS)和半胱氨酸合成酶(CS)。(2)成功构建LsCAS基因的原核表达载体pGEX2T-LsCAS并进行蛋白纯化;SDS-PAGE检测表明,所获融合蛋白条带单一,大小在64 kD左右;Western-blot分析发现,诱导后的菌体蛋白和纯化后的重组蛋白中均能检测到特征条带,说明所获融合蛋白为山黧豆LsCAS蛋白。(3)纯化的山黧豆LsCAS蛋白在412 nm的特征吸收峰显示,LsCAS隶属于磷酸吡哆醛(PLP)依赖的半胱氨酸合成酶家族;分子排阻试验证实山黧豆LsCAS为PLP依赖性蛋白酶,可能以四聚体方式发挥作用。研究结果为进一步探讨山黧豆LsCAS的调控及其功能奠定了基础。
关键词
山黧豆
β-腈基丙氨酸合成酶
原核表达
蛋白纯化
磷酸吡哆醛
Keywords
Lathyrus sativus
β-ODAP
prokaryotic expression
protein purification
phosphopyridoxal
分类号
Q785 [生物学—分子生物学]
Q814.1
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职称材料
题名
丙氨酸消旋酶的研究进展
被引量：
3
2
作者
张彩凤
徐书景
李艳红
薛张伟
马宁
赵宝华
鞠建松
机构
河北师范大学生命科学学院
河北师范大学旅游学院
河北华清环境科技有限公司
出处
《安徽农业科学》
CAS
北大核心
2011年第15期8836-8839,共4页
基金
自然科学基金(30970628)
河北省留学回国人员项目资助(20100705)
河北师范大学博士启动基金项目(L2009B13)
文摘
简要介绍了丙氨酸消旋酶的分类、结构特征和催化机制。
关键词
丙氨酸消旋酶
催化机制
D-丙氨酸
5'-磷酸吡哆醛
Keywords
Alanine racemase
Catalytic mechanism
D-alanine
5′-
phosphopyridoxal
分类号
R978.1 [医药卫生—药品]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
山黧豆β-腈基丙氨酸合成酶基因LsCAS的原核表达及蛋白聚合状态分析
贾海燕
李辰浩
宋瑶瑶
刘凤娟
焦成瑾
徐全乐
《西北植物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021
0
下载PDF
职称材料
2
丙氨酸消旋酶的研究进展
张彩凤
徐书景
李艳红
薛张伟
马宁
赵宝华
鞠建松
《安徽农业科学》
CAS
北大核心
2011
3
下载PDF
职称材料
已选择
0
条
导出题录
引用分析
参考文献
引证文献
统计分析
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