白虎加人参汤对MKR糖尿病鼠肝脏PI3K/Akt信号通路的影响 被引量：5

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作者 陈昱彤 喻嵘 +3 位作者 吴玉芩 向琴 谭艳 周聪 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期114-121,共8页

目的:探究白虎加人参汤对MKR糖尿病模型小鼠肝脏磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路相关分子的作用。方法:选取30只6周龄MKR小鼠,经高脂饲料喂养4周后予以腹腔注射链脲佐菌素(STZ)进行糖尿病造模,检测空腹血糖值≥11.1 mmol&... 目的:探究白虎加人参汤对MKR糖尿病模型小鼠肝脏磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路相关分子的作用。方法:选取30只6周龄MKR小鼠,经高脂饲料喂养4周后予以腹腔注射链脲佐菌素(STZ)进行糖尿病造模,检测空腹血糖值≥11.1 mmol·L^(-1)即造模成功,造模成功后随机分成模型组、白虎加人参汤组、二甲双胍组,每组各10只,同时设10只FVB鼠为空白组,各药物干预组分别持续给药28d,药物剂量分别为白虎加人参汤组12.09g·kg^(-1)·d^(-1)、二甲双胍组0.065 g·kg^(-1)·d^(-1)。给药结束后处死小鼠检测口服葡萄糖耐量实验(OGTT)及空腹血糖(FBG),半定量酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定血清极低密度脂蛋白(VLDL)含量,血生化仪测定血脂4项;肝脏组织进行苏木素-伊红(HE)病理学检测;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠肝脏组织PI3K、Akt、磷酸化PI3K(p-PI3K)、磷酸化Akt(p-Akt)、叉头框蛋白O1(FoxO1)、胰岛素受体(InsR)、胰岛素受体底物-2(IRS-2)蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测小鼠肝脏组织PI3K、Akt、FoxO1、InsR、IRS-2 mRNA表达。结果:与空白组比较,模型组小鼠一般情况较差,糖耐量异常(P<0.05),空腹血糖显著升高(P<0.01),血脂代谢异常,血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、VLDL水平明显升高(P<0.05),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平明显降低(P<0.05),肝脏细胞脂肪样变性,发生明显病理改变,肝脏组织PI3K、Akt、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、IRS-2、InsR蛋白含量明显降低(P<0.05);FoxO1蛋白含量明显增加(P<0.05),肝脏组织PI3K、Akt、IRS-2、InsR mRNA表达量减少(P<0.05),FoxO1 mRNA表达量增加(P<0.05)。与模型组比较,白虎加人参汤组小鼠一般情况出现好转,糖脂代谢得到改善(P<0.05),肝脏细胞病理状态好转,肝脏组织PI3K、Akt、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、IRS-2、InsR蛋白含量明显升高(P<0.05);FoxO1蛋白含量� 展开更多

关键词 白虎加人参汤 磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶b(pi3k/akt)信号通路 2型糖尿病 糖脂代谢

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罗哌卡因调控PI3K/Akt信号通路对肝癌细胞功能的作用研究

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作者 罗倩 杨颖 +2 位作者 付庆江 曹立瀛 李振华 《四川医学》 CAS 2023年第5期471-477,共7页

目的 探究罗哌卡因对人肝癌细胞黏附、迁移、侵袭和上皮间质转化(EMT)的影响及对磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路的调控作用。方法 体外培养人肝癌MHCC97H细胞,分为对照组(不做干预),实验组(200、400、600和800μmol/L... 目的 探究罗哌卡因对人肝癌细胞黏附、迁移、侵袭和上皮间质转化(EMT)的影响及对磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路的调控作用。方法 体外培养人肝癌MHCC97H细胞,分为对照组(不做干预),实验组(200、400、600和800μmol/L罗哌卡因)和抑制剂组(200μmol/L罗哌卡因+30μmol/L PI3K/Akt通路抑制剂LY294002),干预24 h。用细胞计数试剂盒(CCK-8)法测定细胞活力,采用细胞黏附实验测定黏附细胞数,用Transwell小室测定细胞的迁移和侵袭能力,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)及蛋白免疫印迹(WB)法对细胞EMT和PI3K/Akt通路相关因子表达水平进行分析。结果 与对照组比较,800μmol/L罗哌卡因的细胞活力降低(P<0.05);200、400和600μmol/L罗哌卡因的细胞黏附数、迁移数、侵袭数以及p-PI3K、p-Akt、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和纤连蛋白(FN)表达量减少(P<0.05),E-钙黏蛋白(E-cadherin)mRNA和蛋白表达量增加(P<0.05);与200μmol/L罗哌卡因组相比,抑制剂组上述指标变化更为显著(P<0.05)。结论 罗哌卡因可能是通过抑制PI3K/Akt信号通路来抑制人肝癌MHCC97H细胞的黏附、迁移、侵袭和EMT进程。 展开更多

关键词 罗哌卡因 肝癌 磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶b信号通路 黏附 迁移 侵袭 上皮间质转化

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基于网络药理学探讨哮喘宁颗粒治疗支气管哮喘的作用机制及PI3K/Akt信号通路验证 被引量：22

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作者 黄帅阳 候丹 +5 位作者 黄贵锐 吕明圣 弓雪峰 张诗瑜 张志杰 崔红生 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第9期150-157,共8页

目的:基于网络药理学预测哮喘宁颗粒治疗支气管哮喘的潜在分子机制,并采用卵蛋白(OVA)致敏诱发的支气管哮喘大鼠模型对关键信号通路之一磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)进行实验验证。方法:利用传统中药系统药理学数据库和分析平... 目的:基于网络药理学预测哮喘宁颗粒治疗支气管哮喘的潜在分子机制,并采用卵蛋白(OVA)致敏诱发的支气管哮喘大鼠模型对关键信号通路之一磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)进行实验验证。方法:利用传统中药系统药理学数据库和分析平台(TCMSP)和中药分子机制生物信息学分析网络(BATMAN-TCM)筛选哮喘宁颗粒的主要有效成分和作用靶点。通过人类基因数据库(GeneCards)、人类孟德尔遗传靶点数据库(OMIM)等5个疾病数据库获取支气管哮喘相关的疾病靶点。筛选并通过韦恩图获得两者的共同靶标,使用蛋白相互作用数据库(STRING)构建化合物-疾病的蛋白质-蛋白质相互作用网络(PPI),并用Cytoscape 3.8.0建立“哮喘宁关键活性成分-核心靶基因”网络。通过基因本体(GO)富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。制备OVA刺激诱导的支气管哮喘大鼠模型,通过苏木素-伊红(HE)染色观察支气管与肺组织炎症情况,蛋白免疫印迹法(Western blot)实验验证网络药理学富集分析结果。结果:该实验分别获取哮喘宁活性成分232个,相关靶点4687个,收集哮喘宁与支气管哮喘的共同靶点233个,包括嗜酸性粒细胞衍生神经毒素1(EDN1)、环磷腺苷效应元件结合蛋白1(CREB1)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(CDKN1A)、表皮生长因子受体(EGFR)、丝裂原活化蛋白激酶14(MAPK14)、Akt1等。KEGG通路分析筛选了186条相关信号通路,显示PI3K/Akt信号通路可能在哮喘宁治疗支气管哮喘的过程中起关键作用。动物实验表明,与哮喘模型组比较,哮喘宁组可明显减轻大鼠气道炎症反应和平滑肌增生,并明显下调PI3K、Akt蛋白表达(P<0.05)。结论:哮喘宁治疗哮喘具有多成分、多靶点、多通路协同作用的特点,其中哮喘宁可能通过调控PI3K/Akt信号通路相关基因的表达,进一步发挥抗炎症的药理效应,为后续深入研究� 展开更多

关键词 哮喘宁颗粒 支气管哮喘 网络药理学 动物验证 磷脂酰肌醇3-激酶(pi3k)/蛋白激酶b(akt)信号通路

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益肾养卵方对早发性卵巢功能不全患者卵巢储备功能、卵巢颗粒细胞Bcl-2/Bax的表达及PI3K/AKT信号通路的影响 被引量：19

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作者 张慧 李雯雯 张建涛 《中医药导报》 2021年第9期108-111,116,共5页

目的:观察益肾养卵方治疗早发性卵巢功能不全(POI)的疗效,分析其对患者卵巢储备功能、卵巢颗粒细胞凋亡相关因子(Bcl-2/Bax)表达及磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路的影响。方法:纳入POI患者120例,采用随机数字表法将患者... 目的:观察益肾养卵方治疗早发性卵巢功能不全(POI)的疗效,分析其对患者卵巢储备功能、卵巢颗粒细胞凋亡相关因子(Bcl-2/Bax)表达及磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路的影响。方法:纳入POI患者120例,采用随机数字表法将患者分为治疗组与对照组,每组60例。对照组患者于月经周期第5天起服用雌二醇地屈孕酮片进行治疗,治疗组患者在此基础上联用益肾养卵方治疗,3个月经周期为1个疗程。结果:治疗1个疗程后,治疗组疗效显著优于对照组(P<0.05);治疗后治疗组患者中医证候积分、促卵泡生成素(FSH)、FSH/LH(黄体生成素)、Bax蛋白表达水平均显著低于对照组(P<0.05),血清抗苗勒管激素(AMH)、Bcl-2、磷酸化磷脂酰肌醇-3激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、Bcl-2/Bax均显著高于对照组(P<0.05);治疗后两组患者窦卵泡数(AFC)、雌二醇(E_(2))、卵巢总体积(TOV)、LH比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:益肾养卵方可以有效缓解POI患者临床症状,提高患者卵巢储备功能,其作用机制可能与调节PI3K/AKT信号通路,上调Bcl-2表达,抑制Bax蛋白表达,从而减少卵巢颗粒细胞凋亡有关。 展开更多

关键词 早发性卵巢功能不全 益肾养卵方 卵巢储备功能 凋亡相关因子 卵巢颗粒细胞 磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶b信号通路

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苓桂术甘汤含药血清通过PI3K/Akt信号通路保护H_(2)O_(2)诱导的H9c2细胞损伤 被引量：15

5

作者 汤同娟 王翔 +5 位作者 左梦雨 姚娟 李向阳 周鹏 王靓 黄金玲 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第13期1-9,共9页

目的:研究苓桂术甘汤含药血清对H_(2)O_(2)诱导的H9c2细胞损伤的保护作用及与磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路的关系。方法:采用血清药理学方法,制备空白血清及苓桂术甘汤含药血清。体外培养H9c2细胞,分为空白组、H_(2)O_... 目的:研究苓桂术甘汤含药血清对H_(2)O_(2)诱导的H9c2细胞损伤的保护作用及与磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路的关系。方法:采用血清药理学方法,制备空白血清及苓桂术甘汤含药血清。体外培养H9c2细胞,分为空白组、H_(2)O_(2)组、20%空白血清组、20%苓桂术甘汤含药血清组,给予相应药物处理12 h,再加入100μmol·L^(-1) H_(2)O_(2)继续培养6 h后进行检测。采用细胞增殖与活性检测-8(CCK-8)法检测20%苓桂术甘汤含药血清对H_(2)O_(2)诱导的H9c2细胞增殖活性的影响,荧光探针法检测线粒体活性氧(ROS)水平,比色法检测氧化应激标志物丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)的蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测PI3K、Akt mRNA水平,流式细胞术检测细胞凋亡率。加入PI3K抑制剂LY294002后对线粒体ROS、LDH、GSH-Px水平,PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt蛋白表达及细胞凋亡率进行检测。结果:与空白组比较,H_(2)O_(2)诱导后细胞活力显著降低(P<0.01),线粒体ROS、MDA及LDH水平显著增加(P<0.01),CAT、GSH-Px水平则显著下降(P<0.01),PI3K、Akt蛋白的磷酸化及mRNA水平明显降低(P<0.05,P<0.01),细胞凋亡率显著升高(P<0.01)。与H_(2)O_(2)组比较,苓桂术甘汤含药血清能够提高H9c2细胞活力,显著降低线粒体ROS、MDA及LDH水平(P<0.01),并显著提高CAT、GSH-Px水平(P<0.01),促进PI3K、Akt的磷酸化及mRNA的表达(P<0.05,P<0.01),显著减少细胞凋亡率(P<0.01)。苓桂术甘汤含药血清与抑制剂LY294002联用后,逆转了苓桂术甘汤含药血清对H9c2细胞的上述作用(P<0.05,P<0.01)。结论:苓桂术甘汤含药血清保护H_(2)O_(2)诱导的H9c2细胞损伤可能与调控PI3K/Akt信号通路减轻氧化应� 展开更多

关键词 苓桂术甘汤 氧化应激 凋亡 磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶b(pi3k/akt)信号通路

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灵芝多糖调控PI3K/Akt信号通路抑制肝癌细胞恶性表型 被引量：9

6

作者 沈瑞 徐静 +2 位作者 王雷 蔡标 宋航 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期88-94,共7页

目的:观察灵芝多糖对肝癌细胞SK-HEP-1和Huh-7增殖、迁移、细胞周期及凋亡的影响,同时探讨其可能的作用机制。方法:将肝癌细胞SK-HEP-1和Huh-7作为主要研究对象,设立空白组和灵芝多糖低、中、高组(3.5、7、14 g·L^(-1))。细胞增殖... 目的:观察灵芝多糖对肝癌细胞SK-HEP-1和Huh-7增殖、迁移、细胞周期及凋亡的影响,同时探讨其可能的作用机制。方法:将肝癌细胞SK-HEP-1和Huh-7作为主要研究对象,设立空白组和灵芝多糖低、中、高组(3.5、7、14 g·L^(-1))。细胞增殖与活性检测-8(CCK-8)法检测灵芝多糖对肝癌细胞增殖能力的影响;划痕实验检测灵芝多糖对肝癌细胞迁移能力的影响;流式细胞术测定灵芝多糖对肝癌细胞周期的影响;Hoechst33258染色法测定灵芝多糖对肝癌细胞凋亡的影响,通过蛋白免疫印迹法检测灵芝多糖对肝癌细胞磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化PI3K(p-PI3K)、磷酸化Akt(p-Akt)蛋白表达水平的影响。结果:与空白组比较,灵芝多糖低、中、高组SK-HEP-1和Huh-7细胞增殖和迁移能力降低(P<0.05);灵芝多糖低、中、高组G1期细胞比例升高(P<0.05),S期和G2期细胞比例降低(P<0.05);灵芝多糖低、中、高组可以诱导2种肝癌细胞凋亡,并且药物浓度越高作用越明显。与空白组比较,灵芝多糖低、中、高组PI3K和Akt的磷酸化水平降低(P<0.05)。结论:灵芝多糖对肝癌细胞SK-HEP-1和Huh-7的恶性表型有显著抑制作用,其作用机制与PI3K/Akt信号通路有关。 展开更多

关键词 灵芝多糖 肝癌 细胞实验 恶性表型 磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶b(pi3k/akt)信号通路

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基于PI3K/Akt信号通路探讨华良姜素抗肝癌细胞HepG2凋亡的作用机制 被引量：11

7

作者 姚红 侯宇芯 +3 位作者 任晋宏 王禹璇 薛慧清 李青山 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第9期80-87,共8页

目的:观察华良姜素的体外抗肝癌细胞HepG2凋亡的作用机制。方法:噻唑蓝(MTT)比色法检测华良姜素(0、5、10、25、50、100、150、300μmol·L^(-1))对HepG2细胞不同时间(24、48、72 h)的增殖抑制作用;异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(Annexin... 目的:观察华良姜素的体外抗肝癌细胞HepG2凋亡的作用机制。方法:噻唑蓝(MTT)比色法检测华良姜素(0、5、10、25、50、100、150、300μmol·L^(-1))对HepG2细胞不同时间(24、48、72 h)的增殖抑制作用;异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)凋亡试剂盒检测华良姜素(0、3、15、75μmol·L^(-1))对HepG2细胞的凋亡作用;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测华良姜素对HepG2细胞中B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达的影响;转录组学分析华良姜素(15μmol·L^(-1))对HepG2细胞处理后基因差异表达与信号通路改变情况;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)验证差异基因[TEK、血小板源性生长因子α受体(PDGFRA)、脾酪氨酸激酶(SYK)、磷酸肌醇-3-激酶催化亚基G肽(PIK3CG)、Janus激酶3(JAK3)、膜相关鸟苷酸激酶转化蛋白2(MAGI2)]mRNA相对表达。结果:与空白组比较,华良姜素组HepG2细胞的增殖降低(P<0.05,P<0.01);凋亡率升高(P<0.01);Bax蛋白表达水平升高(P<0.05,P<0.01),Bcl-2的蛋白表达水平降低(P<0.01);转录测序得到59000个受调控的表达基因,受调控显著差异表达基因125个,其中表达上调差异基因47个,表达下调差异基因74个,京都基因和基因组数据库(KEGG)分析显示,加华良姜素后磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路中与凋亡相关的差异基因变化较大。与空白组比较,华良姜素组(15μmol·L^(-1))TEK、PDGFRA、SYK、PIK3CG、JAK3、MAGI2的mRNA表达水平降低(P<0.01)。结论:采用体外细胞学实验研究华良姜素能抑制HepG2细胞增殖,初步验证其凋亡,可能是影响了PI3K/Akt信号通路中部分差异基因的表达。为后续华良姜素抗肿瘤提供实验基础,同时有助于促进黄酮类化合物的开发利用及潜在的应用价值。 展开更多

关键词 华良姜素 HEPG2 凋亡 转录组学 磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶b(pi3k/akt)信号通路

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对叶百部总生物碱对人肺癌A549细胞凋亡、PI3K/Akt和JNK/p38 MAPK信号通路的影响 被引量：7

8

作者 林思 秦慧真 +7 位作者 李泽宇 许立拔 邓玲玉 罗静 谢凤凤 张淼 朱华 王孝勋 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期69-76,共8页

目的:探讨对叶百部总生物碱对人肺癌A549细胞凋亡及磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)和c-Jun氨基末端激酶/p38丝裂原活化蛋白激酶(JNK/p38 MAPK)信号通路的影响。方法:以人肺癌A549细胞为研究对象,设置空白组和不同质量浓度(100、... 目的:探讨对叶百部总生物碱对人肺癌A549细胞凋亡及磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)和c-Jun氨基末端激酶/p38丝裂原活化蛋白激酶(JNK/p38 MAPK)信号通路的影响。方法:以人肺癌A549细胞为研究对象,设置空白组和不同质量浓度(100、150、200、250、300 mg·L^(-1))对叶百部总生物碱组。利用噻唑蓝(MTT)比色法、平板克隆实验观察对叶百部总生物碱对A549细胞增殖的影响;采用Hoechst 33258染色法和流式细胞术膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(AnnexinV-FITC)/碘化丙锭(PI)双染法观察细胞凋亡;蛋白免疫印迹法检测凋亡相关蛋白胱天蛋白酶-3(Caspase-3)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)和Bcl-2表达及PI3K、磷酸化(p)-PI3K、Akt、p-Akt、JNK、p-JNK、p38 MAPK、p-p38 MAPK蛋白的表达。结果:与空白组比较,对叶百部总生物碱组(150、200、250、300 mg·L^(-1))细胞增殖抑制率显著增高(P<0.01);对叶百部总生物碱组(150、200、250、300 mg·L^(-1))细胞克隆抑制率显著升高,细胞克隆形成率显著降低(P<0.01)。与空白组比较,对叶百部总生物碱组细胞出现染色质凝聚,荧光反应加强等典型的细胞凋亡特征。与空白组比较,对叶百部总生物碱组细胞凋亡率显著升高(P<0.01);对叶百部总生物碱(150、200、250、300 mg·L^(-1))能够明显上调Caspase-3、Bax蛋白表达(P<0.05,P<0.01),显著下调Bcl-2蛋白表达(P<0.01);对叶百部总生物碱对PI3K、Akt、JNK、p38 MAPK总蛋白表达无明显影响,对叶百部总生物碱(150、200、250、300 mg·L^(-1))能够明显下调PI3K、Akt磷酸化水平(P<0.05,P<0.01);明显上调p38 MAPK磷酸化水平(P<0.05,P<0.01);对叶百部总生物碱(200、250、300 mg·L^(-1))能够明显上调JNK磷酸化水平(P<0.05,P<0.01)。结论:对叶百部总生物碱可抑制人肺癌A549细胞的增殖,并能诱导A549细胞凋亡,其机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路和激活JNK/p38 MAPK信号通路有关。 展开更多

关键词 对叶百部总生物碱 肺癌 A549细胞 凋亡 磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶b(pi3k/akt)信号通路 c-Jun氨基末端激酶/p38丝裂原活化蛋白激酶(JNk/p38 MAPk)信号通路

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黄芩素介导FAK蛋白调控PI3K/Akt信号通路抑制胃癌HGC-27细胞增殖和迁移 被引量：10

9

作者 乔丹 张晟郡 +4 位作者 王时玉 姚光媛 蔡英兰 陈丽艳 朴英实 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第7期73-80,共8页

目的:研究黄芩素介导黏着斑激酶(FAK)调控磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路影响胃癌HGC-27细胞增殖和迁移的作用和可能的分子机制。方法:使用黄芩素(0、5、15、25、50μmol·L^(-1))处理胃黏膜上皮GES-1细胞、胃癌HGC... 目的:研究黄芩素介导黏着斑激酶(FAK)调控磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路影响胃癌HGC-27细胞增殖和迁移的作用和可能的分子机制。方法:使用黄芩素(0、5、15、25、50μmol·L^(-1))处理胃黏膜上皮GES-1细胞、胃癌HGC-27细胞48 h,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖活力;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测不同浓度黄芩素干预对FAK、上皮细胞-间质转化(EMT)及PI3K信号通路相关蛋白表达情况。利用慢病毒转染技术,构建稳定过表达FAK的胃癌HGC-27细胞,Western blot及绿色荧光蛋白(GFP)荧光检测FAK转染情况。细胞分为空载体组、黄芩素组、FAK过表达组和黄芩素处理FAK过表达组;MTT比色法检测细胞增殖活力;平板克隆形成实验观察克隆形成能力;Transwell迁移实验检测细胞迁移能力;Western blot检测EMT及PI3K信号通路相关蛋白表达情况。结果:与空白组比较,黄芩素(15、25、50μmol·L^(-1))组可明显抑制胃癌HGC-27细胞的增殖(P<0.05,P<0.01),并呈剂量依赖性,而对胃黏膜上皮GES-1细胞则未见明显抑制作用,黄芩素(5,15,25μmol·L^(-1))还可下调磷酸化(p)-FAK蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01)。慢病毒转染HGC-27细胞后,与空载体组比较,FAK过表达组中FAK蛋白的相对表达量明显升高,GFP荧光拍照显示空载体组和FAK过表达组中HGC-27细胞均带有绿色荧光。MTT比色法、平板克隆形成实验及Transwell迁移实验检测结果显示,与空载体组比较,黄芩素组对HGC-27细胞的增殖、克隆形成和迁移具有抑制作用,FAK过表达组促进胃癌细胞的增殖、克隆形成和迁移能力。与FAK过表达组比较,使用黄芩素处理FAK过表达组则会抑制FAK增强的细胞增殖和迁移能力(P<0.05)。与空白组比较,黄芩素(15、25μmol·L^(-1))可明显上调胃癌HGC-27细胞E-钙黏蛋白(E-cadherin)蛋白表达,下调波形蛋白(Vimentin)、Snail、p-PI3K和p-Akt蛋白表达(P<0.05,P<0.01);与空载体组比较,FAK� 展开更多

关键词 黄芩素 胃癌 黏着斑激酶(FAk) 细胞增殖 磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶b(pi3k/akt)信号通路

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基于UPLC-Q-TOF-MS和网络药理学的柴胡醋制前后抗抑郁质量标志物分析 被引量：4

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作者 高兴笑 郝敏 +1 位作者 李富艳 孙鹏 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期124-132,共9页

目的:基于超高效液相色谱-四极杆-飞行时间串联质谱法(UPLC-Q-TOF-MS)、多元统计分析和网络药理学方法确定生柴胡、醋柴胡抗抑郁作用的质量标志物(Q-Marker)及其作用机制。方法:通过UPLC-Q-TOF-MS获得生柴胡、醋柴胡饮片的化学物质基础... 目的:基于超高效液相色谱-四极杆-飞行时间串联质谱法(UPLC-Q-TOF-MS)、多元统计分析和网络药理学方法确定生柴胡、醋柴胡抗抑郁作用的质量标志物(Q-Marker)及其作用机制。方法:通过UPLC-Q-TOF-MS获得生柴胡、醋柴胡饮片的化学物质基础,采用主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)筛选柴胡醋制前后发生显著变化的成分作为候选Q-Marker,运用网络药理学方法构建柴胡抗抑郁的“疾病-药物-成分-靶点”网络,确定生柴胡、醋柴胡抗抑郁Q-Marker。将大鼠随机分为空白组、模型组、氟西汀组(2.67 mg·kg^(-1))和柴胡总皂苷组(0.72 mg·kg^(-1)),除空白组外,其余各组大鼠均采用慢性温和不可预知性应激法(CUMS)造模,造模开始3周后灌胃给药,各给药组给予相应剂量药物,1次/d,连续4周,空白组及模型组给予10 m L·kg^(-1)生理盐水,于造模前1天、造模21 d和给药28 d对各组大鼠进行体质量称量、糖水偏好实验和旷场实验;于给药28 d后,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测各组大鼠海马组织磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)、叉头框转录因子O3a(Fox O3a)、β-连环蛋白(β-catenin)m RNA表达水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组大鼠海马组织PI3K、Akt、m TOR、Fox O3a蛋白表达水平。结果:共19种成分在柴胡醋制前后发生明显变化,通过S-plot差异标志物筛选确定柴胡皂苷A、柴胡皂苷B1、柴胡皂苷B2、柴胡皂苷C、柴胡皂苷D等9种成分为柴胡饮片的潜在Q-Marker,结合“疾病-药物-成分-靶点”网络,确定柴胡皂苷A、柴胡皂苷B1、柴胡皂苷B2、柴胡皂苷D作为生柴胡、醋柴胡抗抑郁的Q-Marker。药效结果显示,给药28 d后,与空白组比较,模型组、氟西汀组和柴胡总皂苷组大鼠的体质量、糖水偏好指数及旷场实验总分均显著降� 展开更多

关键词 柴胡 抗抑郁 质量标志物(Q-Marker) 超高效液相色谱-四极杆-飞行时间串联质谱法(UPLC-Q-TOF-MS) 网络药理学 中药饮片 磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶b(pi3k/akt)信号通路

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芹菜素通过PI3K/Akt和MAPK信号通路诱导人大肠癌CL187细胞凋亡 被引量：8

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作者 林思 秦慧真 +4 位作者 邓玲玉 李泽宇 谢凤凤 张淼 朱华 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第19期97-104,共8页

目的:观察芹菜素对人大肠癌CL187细胞增殖和凋亡的作用及相关机制。方法:选择人大肠癌CL187细胞,利用芹菜素(0、30、45、60 mg·L^(-1))进行干预后,采用噻唑蓝(MTT)比色法和克隆形成实验检测芹菜素对CL187细胞的增殖作用;Hoechst 33... 目的:观察芹菜素对人大肠癌CL187细胞增殖和凋亡的作用及相关机制。方法:选择人大肠癌CL187细胞,利用芹菜素(0、30、45、60 mg·L^(-1))进行干预后,采用噻唑蓝(MTT)比色法和克隆形成实验检测芹菜素对CL187细胞的增殖作用;Hoechst 33258染色法观察细胞凋亡;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测芹菜素对CL187细胞胱天蛋白酶-3(Caspase-3)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)观察芹菜素对细胞凋亡相关蛋白Caspase-3、Bcl-2、Bax和磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路中Akt、磷酸化(p)-Akt及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路中细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)、p-ERK1/2、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、p-JNK、p38 MAPK、p-p38 MAPK蛋白表达的影响。结果:与空白组比较,芹菜素组细胞存活率显著降低,细胞增殖抑制率显著升高(P<0.01);与空白组比较,芹菜素组细胞克隆数和克隆形成率显著降低,克隆形成抑制率显著升高(P<0.01);不同浓度芹菜素干预CL187细胞48 h,与空白组比较,在荧光显微镜下可观察到细胞核固缩,染色质凝聚,细胞荧光反应增强等典型的细胞凋亡特征;与空白组比较,芹菜素组(45、60 mg·L^(-1))抑凋亡基因Bcl-2 mRNA表达水平显著降低(P<0.01),芹菜素组促凋亡基因Bax和Caspase-3 mRNA表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。与空白组比较,芹菜素组促凋亡蛋白Caspase-3蛋白表达水平明显上调(P<0.05,P<0.01),芹菜素组(45、60 mg·L^(-1))促凋亡蛋白Bax蛋白表达显著上调(P<0.01),芹菜素组抑凋亡蛋白Bcl-2表达水平明显下调(P<0.05,P<0.01)。与空白组比较,芹菜素组(60 mg·L^(-1))Akt蛋白表达显著下调(P<0.01),芹菜素组(45、60 mg·L^(-1))p-Akt、ERK1/2、p-ERK1/2蛋白表达显著下调(P<0.01),芹菜素组JNK、p-JNK蛋白表达明显上调(P<0.05,P<0.01),芹菜素组(60 mg·L^(-1))p38 MAPK蛋白表达明显上调(P<0.05),芹菜素� 展开更多

关键词 芹菜素 大肠癌 CL187细胞 增殖 凋亡 磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶b(pi3k/akt)信号通路 丝裂原活化蛋白激酶(MAPk)信号通路

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柚皮素对Aβ25-35损伤PC12细胞氧化应激及Tau蛋白磷酸化的影响 被引量：9

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作者 邱琦 胡中花 +4 位作者 徐红丹 邢怀玉 孙慧峰 张宁 雷霞 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第21期92-99,共8页

目的:探讨柚皮素对β淀粉样蛋白(Aβ)25-35损伤大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞氧化应激及Tau蛋白磷酸化的影响及其与雌激素受体(ER)及磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路的关系。方法:采用Aβ25-35干预PC12细胞制备损伤模... 目的:探讨柚皮素对β淀粉样蛋白(Aβ)25-35损伤大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞氧化应激及Tau蛋白磷酸化的影响及其与雌激素受体(ER)及磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路的关系。方法:采用Aβ25-35干预PC12细胞制备损伤模型。实验分为空白组、模型组、柚皮素(400,40,4,0.4,0.04,4×10-3,4×10-4,4×10-5μmol·L-1)组、阳性药雌二醇(E2)(1 nmol·L-1)+Aβ25-35组、柚皮素(0.4,0.04,4×10-3,4×10-4,4×10-5μmol·L-1)+Aβ25-35组,E2+Aβ25-35+ER拮抗剂(ICI182780)(1μmol·L-1)组,柚皮素+Aβ25-35+ICI182780组,E2+Aβ25-35+PI3K阻断剂(LY294002)(50μmol·L-1)组、柚皮素+Aβ25-35+LY294002组。噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖率,2’,7’-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)作为荧光探针检测细胞中总活性氧(ROS)含量,硫代巴比妥酸(TBA)法和氧化酶法分别检测细胞中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞中磷酸化Tau蛋白/总Tau蛋白(p-Tau/t-Tau)的表达。结果:根据MTT实验结果,筛选0.4μmol·L-1为柚皮素最佳有效浓度;与空白组比较,模型组细胞增殖率显著降低(P<0.01),与模型组比较,柚皮素+Aβ25-35组细胞增殖率显著升高(P<0.01)。此外,与空白组比较,模型组细胞中ROS,MDA的含量及p-Tau/t-Tau表达显著升高(P<0.01),SOD活性显著降低(P<0.01),与模型组比较,柚皮素+Aβ25-35组细胞中ROS,MDA的含量及p-Tau/t-Tau表达显著降低(P<0.01),SOD活性显著升高(P<0.01),与柚皮素+Aβ25-35组比较,ICI182780,LY294002的加入显著逆转了柚皮素在上述指标中的作用(P<0.01)。柚皮素的作用效果与E2相似。结论:柚皮素可提高细胞增殖率,对Aβ25-35损伤PC12细胞有保护作用,其作用可能是通过激活ER及PI3K/Akt信号通路降低Aβ25-35损伤PC12细胞中ROS,MDA含量及p-Tau/t-Tau表达、促进SOD活性来实现的。 展开更多

关键词 柚皮素 阿尔茨海默病(AD) β淀粉样蛋白(Aβ)25-35 神经保护作用 雌激素受体(ER) 磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶b(pi3k/akt)信号通路

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糖肾平胶囊通过PI3K/Akt信号通路干预高糖+LPS诱导足细胞凋亡的机制 被引量：9

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作者 王颖超 赵敬 +3 位作者 赵宗江 杜磊 田晨 李玲 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期105-111,共7页

目的:观察糖肾平对高糖环境下脂多糖(LPS)对足细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:利用雄性Wistar大鼠,分别用糖肾平小、中、大剂量(0. 525,1. 05,2. 1 g·kg-1),厄贝沙坦(17. 5 mg·kg-1)灌胃给药,制备相应药物血清。采用... 目的:观察糖肾平对高糖环境下脂多糖(LPS)对足细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:利用雄性Wistar大鼠,分别用糖肾平小、中、大剂量(0. 525,1. 05,2. 1 g·kg-1),厄贝沙坦(17. 5 mg·kg-1)灌胃给药,制备相应药物血清。采用高糖,LPS体外刺激大鼠足细胞建立模型。并分为正常组(5%正常大鼠血清),高糖组(5%模型大鼠血清+4. 5‰葡萄糖),高糖+LPS组(5%模型大鼠血清+4. 5‰葡萄糖+LPS 1 mg·L-1),厄贝沙坦组(5%厄贝沙坦组大鼠血清+4. 5‰葡萄糖+LPS1 mg·L-1),糖肾平小剂量组(5%糖肾平小剂量大鼠血清+4. 5‰葡萄糖+LPS 1 mg·L-1),中剂量组(5%糖肾平中剂量大鼠血清+4. 5‰葡萄糖+LPS 1 mg·L-1),大剂量组(5%糖肾平大剂量大鼠血清+4. 5‰葡萄糖+LPS 1 mg·L-1)。采用蛋白免疫印迹法(Western blot)及逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测足细胞中CD2相关蛋白(CD2AP),nephrin和磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号转导通路中关键因子的蛋白和mRNA的表达水平。结果:与正常组比较,高糖组和高糖+LPS组足细胞nephrin,CD2AP,PI3K,Akt蛋白及mRNA表达明显减少(P <0. 05,P <0. 01); B淋巴细胞瘤-2相关凋亡蛋白(Bad蛋白)及mRNA表达明显增加(P <0. 05,P <0. 01)。与高糖+LPS组比较,厄贝沙坦组足细胞CD2AP,PI3K,Akt蛋白及mRNA表达明显增加(P <0. 05,P <0. 01); nephrin mRNA表达增加; Bad蛋白及mRNA蛋白表达减少。糖肾平各组足细胞CD2AP,PI3K,Akt蛋白及mRNA表达明显增加(P <0. 05,P <0. 01); Bad蛋白及mRNA蛋白表达减少(P <0. 05,P <0. 01)。结论:糖肾平维持足细胞裂孔隔膜蛋白稳定表达,保护肾小球滤过屏障,同时进一步激活PI3K/Akt信号通路,抑制足细胞凋亡;是其多靶点防治糖尿病肾病的作用机制之一。 展开更多

关键词 糖尿病肾病 足细胞 糖肾平胶囊 磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶b(pi3k/akt)信号通路

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铁皮石斛多糖对糖尿病大鼠脂代谢异常的改善作用及机制 被引量：9

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作者 寇战利 陈社论 +3 位作者 刘冰林 张效科 李聪 郭杰 《广州中医药大学学报》 CAS 2021年第11期2462-2468,共7页

【目的】观察铁皮石斛多糖对糖尿病大鼠脂代谢异常的改善作用及机制。【方法】将90只大鼠随机选取75只建立糖尿病模型,其余15只设为正常组。将造模成功的68只大鼠随机分为模型组,铁皮石斛多糖低、高剂量组和二甲双胍组,每组17只。铁皮... 【目的】观察铁皮石斛多糖对糖尿病大鼠脂代谢异常的改善作用及机制。【方法】将90只大鼠随机选取75只建立糖尿病模型,其余15只设为正常组。将造模成功的68只大鼠随机分为模型组,铁皮石斛多糖低、高剂量组和二甲双胍组,每组17只。铁皮石斛多糖低、高剂量组分别灌胃铁皮石斛多糖100、200 mg/kg,二甲双胍组灌胃盐酸二甲双胍150 mg/kg,正常组和模型组灌胃等体积生理盐水,每日1次,干预30 d。干预结束后,测定空腹血糖(FBG)、胰岛素(FINS)水平,血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平以及超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平,采用苏木素-伊红(HE)染色法观察肝脏组织病理学表现,采用蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测肝脏组织胰岛素受体底物2(IRS2)、磷酸化IRS2(p-IRS2)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化PI3K(p-PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、磷酸化AKT(p-AKT)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)蛋白相对表达水平。【结果】与正常组比较,模型组,铁皮石斛多糖低、高剂量组和二甲双胍组干预0、15、30 d FBG水平和FINS水平均升高(P <0.05);与模型组比较,各治疗组干预15、30 d FBG水平和FINS水平均降低,且铁皮石斛多糖高剂量组与二甲双胍组比较,差异无统计学意义(P> 0.05);随着干预时间增加,模型组FBG水平持续上升,各治疗组FBG水平持续下降(P <0.05)。与正常组比较,模型组,铁皮石斛多糖低、高剂量组和二甲双胍组血清TG、TC、LDL-C、MDA水平升高,HDL-C、SOD水平降低(P <0.05);与模型组比较,各治疗组血清TG、TC、LDL-C、MDA水平降低,HDL-C、SOD水平升高(P <0.05),且铁皮石斛多糖高剂量组与二甲双胍组比较,差异无统计学意义(P> 0.05)。模型组出现大量肝细胞水肿坏死现象,组织结构紊乱,排列不均,而铁皮石斛多糖高剂量组和二甲双胍组肝组织病理变化得到明 展开更多

关键词 铁皮石斛多糖 糖尿病 脂代谢 磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶b信号通路 大鼠

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基于PI3K/Akt通路探讨仙茅改善去势大鼠肾阳虚的作用机制

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作者 杨濛 王璐 +2 位作者 张紫佳 王峥涛 徐颖 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第20期46-53,共8页

目的:探讨仙茅改善雄性去势大鼠肾阳虚的药效作用及相关的作用机制。方法:通过网络药理学在药物和疾病相关数据库中筛选出仙茅的药物作用靶点及肾阳虚导致的男性生殖疾病的相关靶点,根据拓扑特征值筛选出关键靶标后,再进行基因本体(GO)... 目的:探讨仙茅改善雄性去势大鼠肾阳虚的药效作用及相关的作用机制。方法:通过网络药理学在药物和疾病相关数据库中筛选出仙茅的药物作用靶点及肾阳虚导致的男性生殖疾病的相关靶点,根据拓扑特征值筛选出关键靶标后,再进行基因本体(GO)功能及京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析得出仙茅可能造成肾阳虚的相关通路,其次采用去势手术建立雄性大鼠肾阳虚模型,分为模型组、丙酸睾酮组(2 mg·kg^(-1))和仙茅低、中、高剂量组(0.14、0.28、0.56 g·kg^(-1)),另取8只健康雄性大鼠进行切口后立即缝合,用作假手术组,每天灌胃给药1次,连续6周。实验过程中,观察各组大鼠的一般情况,记录其体质量,实验结束后,计算附性器官脏器指数,苏木素-伊红(HE)染色观察精囊腺和前列腺病理变化;采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠血清激素促黄体生成素(LH)、促卵泡激素(FSH)和睾酮(T)与血清细胞因子白细胞介素-6(IL-6)的水平,并根据网络药理学预测的结果在动物体内进行实验验证,采用实时荧光定量聚合酶链式反应和蛋白免疫印迹法进行相关mRNA与蛋白测定。结果:生物学功能富集在调节细胞对各种刺激反应、细胞内信号传导、代谢反应及生殖调控4个过表达模块,其中磷脂酰基醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)途径核心靶标富集较为显著,也是在调节细胞对各种刺激反应生物学过程富集程度最高的通路。体内实验结果显示,与模型组比较,仙茅给药剂量组大鼠体质量有增长趋势,仙茅低剂量组肾阳虚大鼠体质量增长量明显升高(P<0.05);仙茅各给药组大鼠精囊腺指数和附睾指数随着给药剂量的增加呈上升趋势,精囊腺指数没有显著性变化,仙茅高剂量组大鼠的附睾指数明显增加(P<0.05),仙茅各给药剂量组大鼠精囊腺上皮细胞增生有明显减轻,但空泡变性并没有明显改善;前列� 展开更多

关键词 仙茅 肾阳虚 网络药理学 磷脂酰肌醇-3-激酶(pi3k)/蛋白激酶b(akt)信号通路

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磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路在黄芪甲苷防治疾病中的作用 被引量：4

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作者 许润时 杨夕鸣 +4 位作者 许玉锋 罗云海 周凤 蔺婷 何迎春 《中国临床药理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期855-858,873,共5页

磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路在细胞增殖、凋亡抑制、细胞迁移、囊泡转运和细胞癌转化中起重要作用。黄芪甲苷(AstragalosideⅣ,ASI)是黄芪的主要成分之一,具有抗病毒、抗肿瘤、免疫调节、促进血管内皮增生等多方面药... 磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路在细胞增殖、凋亡抑制、细胞迁移、囊泡转运和细胞癌转化中起重要作用。黄芪甲苷(AstragalosideⅣ,ASI)是黄芪的主要成分之一,具有抗病毒、抗肿瘤、免疫调节、促进血管内皮增生等多方面药理作用。黄芪甲苷通过多层次、多靶点作用于PI3K/Akt信号通路调节细胞的表型和功能,在治疗和预防多种疾病中至关重要。本文总结了黄芪甲苷在多种疾病中的具体作用机制,以期揭示黄芪甲苷在疾病预防和治疗中的可能性,为其后续研究提供一定的理论依据。 展开更多

关键词 黄芪甲苷 磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶b(pi3k/akt)信号通路 疾病防治

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基于网络药理学和体内实验的抗衰老片抗衰老作用及机制探讨

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作者 杨茹 金强 +1 位作者 徐颖 叶冠 《药物评价研究》 CAS 2023年第10期2104-2115,共12页

目的基于网络药理学和体内实验探讨抗衰老片抗衰老的作用机制。方法利用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)筛选抗衰老片中组方药材的主要化学成分及其靶点,并通过文献检索、Pubchem对抗衰老片中药材的主要成分进行补充,经SwissTarg... 目的基于网络药理学和体内实验探讨抗衰老片抗衰老的作用机制。方法利用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)筛选抗衰老片中组方药材的主要化学成分及其靶点,并通过文献检索、Pubchem对抗衰老片中药材的主要成分进行补充,经SwissTargetPrediction数据库预测靶点;通过GeneCards、OMIM数据库获取衰老相关靶点;通过Venny2.1.0平台获得抗衰老片成分与衰老的共同靶点;基于STRING数据库和Cytoscape 3.8.0软件构建药物与疾病共同靶点的蛋白质相互作用网络(PPI);基于R语言进行基因本体(GO)生物功能分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。以秀丽隐杆线虫为实验对象,观察抗衰老片对N2野生型秀丽隐杆线虫寿命及百草枯诱导的N2野生型线虫及突变体CB1370、CF1038、MQ1333、MQ887、TJ1052寿命的影响,探究抗衰老片抗衰老的作用及潜在的作用机制。结果筛选出抗衰老片221个活性成分和1232个预测靶点,衰老相关靶点12081个,抗衰老片成分和疾病的共同靶点1020个。KEGG富集分析结果主要涉及磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路、晚期糖基化终末产物/晚期糖基化终末产物受体(AGE/RAGE)信号通路、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路等。线虫实验结果表明,抗衰老片可延长正常情况下及百草枯诱导下的N2野生型秀丽隐杆线虫的寿命,提高秀丽隐杆线虫对百草枯的耐性;与相应各对照组相比,抗衰老片无法延长突变体TJ1052和CF1038在氧化应激下的寿命,但突变体CB1370、MQ1333和MQ887在氧化应激下的寿命可被延长。结论抗衰老片对秀丽隐杆线虫具有延长寿命的作用,其潜在的机制可能依赖于PI3K信号通路和叉头转录因子(FOXO)信号通路,而不依赖于胰岛素受体信号通路和线粒体相关信号通路。 展开更多

关键词 抗衰老片 衰老 氧化应激 网络药理学 磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶b(pi3k/akt)信号通路 叉头转录因子(FOXO)信号通路

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基于PI3K/Akt信号通路探讨莲甲散结方对肺癌H1975细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响

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作者 季娟娟 王谦 朱佳 《中医药信息》 2023年第6期15-22,共8页

目的:基于PI3K/Akt信号通路探究莲甲散结方对肺腺癌H1975细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响,并探索其作用机制。方法:采用CCK-8法检测不同浓度的莲甲散结方对H1975细胞活力的影响。在CCK-8结果基础上将H1975细胞分为空白组和莲甲散结方... 目的:基于PI3K/Akt信号通路探究莲甲散结方对肺腺癌H1975细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响,并探索其作用机制。方法:采用CCK-8法检测不同浓度的莲甲散结方对H1975细胞活力的影响。在CCK-8结果基础上将H1975细胞分为空白组和莲甲散结方低、中、高剂量组(3、6、9 g/L)。采用克隆形成、5-乙炔基-2′-脱氧尿苷(EDU)细胞增殖实验检测H1975细胞的增殖能力;Transwell迁移和Transwell侵袭实验检测H1975细胞迁移和侵袭能力;Hoechst 33342染色法和流式细胞术Annexin V-FITC/PI双染检测H1975细胞凋亡情况。采用蛋白免疫印迹法(Western blot)测定H1975细胞上皮间质转化(EMT)相关蛋白,凋亡相关蛋白,磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)通路蛋白的表达水平。结果:莲甲散结方对肺腺癌H1975细胞的48 h半数抑制浓度(IC50)为7.51 g/L。与空白组比较,莲甲散结方各剂量组克隆数目减少,EDU阳性数目减少(P<0.05,P<0.01);与空白组相比,莲甲散结方各剂量组迁移能力下降,侵袭能力减弱(P<0.05,P<0.01);与空白组相比,莲甲散结方各剂量组促进H1975细胞的凋亡率显著增加(P<0.01)。Western blot结果显示,与空白组相比,莲甲散结方中、高剂量组E-cadherin表达升高(P<0.05,P<0.01),N-cadherin表达降低(P<0.01)。与空白组相比,莲甲散结方各剂量组Cleaved Caspase-3、Bax表达均升高(P<0.05,P<0.01),Bcl-2表达均下降(P<0.05,P<0.01)。与空白组相比,莲甲散结方中、高剂量组p-PI3K表达下降(P<0.05,P<0.01),莲甲散结方各剂量组p-Akt表达均下降(P<0.05,P<0.01),且呈浓度依赖性。结论:莲甲散结方可以抑制肺腺癌细胞H1975的恶性表型,诱导H1975细胞的凋亡,抑制PI3K/Akt信号通路的活化,下调PI3K/Akt的蛋白磷酸化水平可能是其机制之一。 展开更多

关键词 非小细胞肺癌 莲甲散结方 磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶b(pi3k/akt)信号通路 增殖 凋亡 上皮间质转化

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ART调节PI3K/AKT通路对肝癌细胞增殖及迁移的影响

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作者 张雄 周江 +7 位作者 李涛 郝琪伟 李胜 杨刚 李腾 李建雄 乔培宇 张鑫 《海南医学》 CAS 2023年第15期2129-2134,共6页

目的探究青蒿琥酯(artesunate,ART)调节磷脂酞肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路对肝癌细胞增殖及迁移的影响。方法体外培养HepG2细胞,分为对照组以及不同浓度(30μg/mL、60μg/mL和120μg/mL)ART组。比较不同组别HepG2细胞的细... 目的探究青蒿琥酯(artesunate,ART)调节磷脂酞肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路对肝癌细胞增殖及迁移的影响。方法体外培养HepG2细胞,分为对照组以及不同浓度(30μg/mL、60μg/mL和120μg/mL)ART组。比较不同组别HepG2细胞的细胞增殖率、细胞迁移数量、侵袭数量以及Ki-67蛋白、凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2、Caspase-3)、基质金属蛋白酶2(MMP2)、MMP9和PI3K/AKT通路相关蛋白[磷脂酞肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化的磷脂酞肌醇3-激酶(p-PI3K)、磷酸化的蛋白酶B(p-AKT)]的表达水平。结果不同浓度ART作用于HepG2细胞后,30μg/mL组、60μg/mL组和120μg/mL组的细胞增殖率分别为(81.73±8.39)%、(65.26±6.48)%、(44.27±4.66)%,Ki-67蛋白表达分别为0.76±0.11、0.43±0.09、0.29±0.04,分别与对照组的(100.00±10.51)%、0.98±0.16比较均明显降低,且ART浓度越高,细胞增殖率和Ki-67蛋白表达越低,差异均有统计学意义(P<0.05);不同浓度ART作用于HepG2细胞后,30μg/mL组、60μg/mL组和120μg/mL组的细胞凋亡率分别为(24.84±4.91)%、(36.02±7.35)%、(50.27±10.02)%,Bax蛋白表达分别为0.26±0.05、0.39±0.06、0.58±0.08,Bcl-2蛋白表达分别为0.62±0.07、0.48±0.06、0.33±0.04,Caspase-3蛋白表达分别为10.26±0.68、12.47±0.77、14.96±0.81,分别与对照组的(5.75±1.63)%、0.17±0.03、0.83±0.09、8.73±0.46比较,细胞凋亡率、Bax和Caspase-3蛋白表达明显升高,Bcl-2表达明显降低,且ART浓度越高,细胞凋亡率、Bax和Caspase-3蛋白表达越高,Bcl-2表达越低,差异均有统计学意义(P<0.05);不同浓度ART作用于HepG2细胞后,30μg/mL组、60μg/mL组和120μg/mL组的细胞迁移数量分别为(189.11±16.73)个、(162.29±15.03)个、(134.26±13.26)个,细胞侵袭数量分别为(144.13±13.46)个、(121.61±10.23)个、(90.26±8.71)个,MMP2蛋白表达分别为0.46±0.08、0.38±0.06、0.29±0.05,MMP9蛋白表达分别为0.41±0.09、0.33±0.06、0.24±0.03,分别与对照组的(234.28±20.64)个、(187 展开更多

关键词 青蒿琥酯 磷脂酞肌醇3-激酶/蛋白激酶b通路 肝癌细胞 细胞增殖 细胞迁移

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基于网络药理学探讨保肺康颗粒对肺纤维化大鼠模型PI3K/Akt信号通路的调节作用 被引量：1

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作者 黄帅阳 王佳美 +4 位作者 黄贵锐 弓雪峰 吕明圣 候丹 崔红生 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第18期169-176,共8页

目的基于网络药理学及动物实验验证的方法探讨保肺康颗粒(保肺康)对治疗肺纤维化的作用靶点及机制。方法借助相关中药药理学数据库和分析平台筛选保肺康的有效成分及靶点;于各疾病数据库中检索肺间质纤维化疾病相关靶点,提取保肺康与肺... 目的基于网络药理学及动物实验验证的方法探讨保肺康颗粒(保肺康)对治疗肺纤维化的作用靶点及机制。方法借助相关中药药理学数据库和分析平台筛选保肺康的有效成分及靶点;于各疾病数据库中检索肺间质纤维化疾病相关靶点,提取保肺康与肺纤维化的共同靶点,利用蛋白相互作用数据库(STRING)构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络,通过Cytoscape 3.8.0软件对关键靶点进行网络拓扑学分析,建立“保肺康关键活性成分-核心靶基因”网络,对核心靶基因进行基因本体(GO)及京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析以探究保肺康治疗肺纤维化可能的分子机制。以博来霉素气管滴注的方式建立肺间质纤维化大鼠模型,分为正常组、模型组、保肺康组(27.18 g·kg^(-1))、醋酸泼尼松组(1.17 mg·kg^(-1)),灌胃21 d,对各组肺组织用苏木素-伊红(HE)染色进行形态学观察,运用免疫组化(IHC)对大鼠肺组织内的磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)和蛋白激酶B(Akt)蛋白进行检测。结果网络药理学方法筛选出保肺康治疗肺间质纤维化疾病关键基因18个,包括Akt1、丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)、核蛋白类癌基因(MYC)、低氧诱导因子-1α(HIF-1α)重组蛋白、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(CDKN1A)、表皮生长因子受体(EGFR)、核心结合因子2(RUNX2)等。KEGG富集分析预测保肺康主要是通过PI3K/Akt信号通路、肿瘤坏死因子(TNF)信号通路、白细胞介素-17(IL-17)信号通路等发挥抗纤维化作用。IHC结果显示,与模型组比较,保肺康组内PI3K、Akt蛋白表达均明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论保肺康在治疗肺纤维化上具有毒性低、多层次、多靶点的特点,其可能通过调控PI3K/Akt信号通路影响肺纤维化程度,从而达到改善肺功能的作用。 展开更多

关键词 保肺康颗粒 网络药理学 肺纤维化 实验验证 磷脂酰肌醇-3-激酶(pi3k)/蛋白激酶b(akt)信号通路

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