真菌毒素ELISA检测方法新进展 被引量：23

1

作者 胡骁飞 职爱民 +4 位作者 刘庆堂 王磊 孙亚宁 邓瑞广 张改平 《中国农学通报》 CSCD 北大核心 2010年第8期100-103,共4页

真菌毒素(mycotoxin)对人类及动物危害严重。人们建立了各种毒素检测方法,酶联免疫吸附试验(ELISA)是其中的一种。笔者对ELISA结合胶体金标技术检测霉菌毒素,以及与应用噬菌体展示技术产生的毒素模拟表位肽结合检测毒素的优点进行了综述。

关键词 真菌毒素 ELISA 胶体金 噬菌体展示技术 模拟表位肽

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鼻咽癌人源抗独特型单链抗体的制备及筛选 被引量：13

2

作者 何小鹃 李官成 +2 位作者 朱建高 李跃辉 周国华 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第2期124-129,共6页

背景与目的:抗独特型抗体作为肿瘤抗原替代物可用于肿瘤治疗,这已在临床试验中得到证实。但由于目前所使用的抗独特型抗体多为鼠源性,用于人体可产生人抗鼠抗体反应,从而影响疗效。本实验拟构建噬菌体人源抗独特型抗体库,并从中筛选出... 背景与目的:抗独特型抗体作为肿瘤抗原替代物可用于肿瘤治疗,这已在临床试验中得到证实。但由于目前所使用的抗独特型抗体多为鼠源性,用于人体可产生人抗鼠抗体反应,从而影响疗效。本实验拟构建噬菌体人源抗独特型抗体库,并从中筛选出能模拟鼻咽癌相关抗原的β型抗独特型单链抗体scFv(Ab2βscFv),以解决鼠源性抗独特型抗体用于临床所产生的人抗鼠抗体反应。方法:体外致敏并用EB病毒(Epstein-Barrvirus,EBV)转化鼻咽癌患者的外周血单个核细胞(peripheralbloodmononuclearcell,PBMC),用RT-PCR分别扩增VH和VL基因并连接成scFv基因,将scFv基因与载体fUSE5连接后,转化大肠杆菌MC1061,构建噬菌体呈现型scFv库。在用单抗FC2对文库进行4轮筛选后,用SandwichELISA和结合抑制法从中筛选出β型Ab2scFv。结果:用单抗FC2体外致敏并经EBV转化的10例鼻咽癌患者的PBMC中,8例有鼻咽癌抗独特型抗体产生。经PCR分别扩增出5种VH(γ、μ)和7种VL(κ、λ)基因,经连接组成14种scFv基因。在与载体连接后,导入大肠杆菌MC1061,得到库容为1.5×108的初级噬菌体抗独特型抗体库。经富集筛选后,从中随机挑取270个克隆进行ELISA筛选,得到91个Ab2scFv单克隆,阳性率为33.7%。再用结合抑制法从中初步筛选出5个可能为β型的Ab2scFv。 展开更多

关键词 鼻咽癌 人源抗独特型单链抗体 噬菌体呈现技术 EB病毒 免疫治疗

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单链抗体的研究进展 被引量：9

3

作者 尹惠琼 《动物医学进展》 CSCD 2003年第2期24-26,共3页

抗体在疾病的诊断、治疗和预防中发挥着重要的作用,其生产制备经历了抗血清多克隆抗体和单克隆抗体(Monoclonalantibodies,McAb)阶段,现已进入了基因工程抗体的时代。基因工程抗体主要包括单链抗体(ScFv)、Fab抗体、F(ab`)2抗体等小分... 抗体在疾病的诊断、治疗和预防中发挥着重要的作用,其生产制备经历了抗血清多克隆抗体和单克隆抗体(Monoclonalantibodies,McAb)阶段,现已进入了基因工程抗体的时代。基因工程抗体主要包括单链抗体(ScFv)、Fab抗体、F(ab`)2抗体等小分子抗体、嵌合抗体和改形抗体。本文就单链抗体的研究进展作了综述。 展开更多

关键词 单链抗体 基因工程抗体 噬菌体展示技术

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蛋白质组学研究进展 被引量：5

4

作者 程彦伟 祖恩普 +1 位作者 赵江 李欢庆 《河南工业大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2008年第4期77-83,共7页

蛋白质组学是在后基因组时代出现的一个新的研究领域,它是对机体、组织或细胞的全部蛋白质的表达和功能模式进行研究.简要介绍蛋白质组学的概念、研究内容并对近年来蛋白质组学主要研究技术进行了介绍.

关键词 蛋白质组学 双向电泳 质谱 蛋白质芯片 酵母双杂交系统 噬菌体展示技术

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噬菌体展示技术在肿瘤研究中的应用 被引量：5

5

作者 陈贻玲 曹广文 邓松华 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 2009年第4期311-314,共4页

目的:总结噬菌体展示技术在肿瘤研究中的应用现状。方法:检索PubMed central及CNKI期刊全文数据库,以"噬菌体展示技术"和"肿瘤"等为关键词,筛选2004-2008年的110篇相关文献。纳入标准:1)噬菌体展示技术的原理;2)噬... 目的:总结噬菌体展示技术在肿瘤研究中的应用现状。方法:检索PubMed central及CNKI期刊全文数据库,以"噬菌体展示技术"和"肿瘤"等为关键词,筛选2004-2008年的110篇相关文献。纳入标准:1)噬菌体展示技术的原理;2)噬菌体展示技术的发展;3)噬菌体展示技术在肿瘤研究中的应用。根据标准最终精选23篇文献纳入分析。结果:噬菌体展示技术在肿瘤研究的很多方面都有重要用途,如探索蛋白质之间的相互作用,寻找肿瘤抗原和治疗性靶肽,制备抗体和研制疫苗等;但在临床应用上仍存在一些限制,需进一步深入研究和发展。结论:噬菌体展示技术在肿瘤研究领域已得到广泛应用,但大量投入临床仍需完善。 展开更多

关键词 噬菌体展示技术 肿瘤 靶肽 抗体 疫苗 综述文献

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噬菌体展示技术在食源性致病菌检测中的应用 被引量：6

6

作者 胡雨欣 何早 +1 位作者 陈力力 刘霞 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2015年第11期236-239,共4页

噬菌体展示技术是20世纪80年代逐步建立并发展起来的一种分子生物学新技术,目前用于构建展示文库的噬菌体主要有丝状噬菌体、λ噬菌体、T4噬菌体和T7噬菌体。该技术在筛选噬菌体、单链抗体及多肽以建立食品安全检测体系方面,具有广阔的... 噬菌体展示技术是20世纪80年代逐步建立并发展起来的一种分子生物学新技术,目前用于构建展示文库的噬菌体主要有丝状噬菌体、λ噬菌体、T4噬菌体和T7噬菌体。该技术在筛选噬菌体、单链抗体及多肽以建立食品安全检测体系方面,具有广阔的应用前景。本文在介绍噬菌体展示技术系统的基础上,对该技术在食源性致病菌检测中的应用进行综述。 展开更多

关键词 噬菌体展示技术 食品致病菌 检测

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大容量天然鸡源噬菌体单链抗体库的构建

7

作者 范佳铭 龙丽瑾 +10 位作者 刘文韬 翟康乐 宫雅楠 胡源 孟凡亮 魏销玥 郭亚慧 赵雅坤 王婉婷 张建中 闫笑梅 《疾病监测》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期466-471,共6页

目的本研究拟构建大容量天然鸡源噬菌体单链抗体库,用于传染病诊断用抗体筛选。方法选取未经免疫的5周龄白来航鸡包括普通级别和无特定病原体级别、罗曼鸡、洛岛红鸡、洛岛白鸡和贵妃鸡,每个品种各5只,共30只。从法氏囊中提取总RNA,通... 目的本研究拟构建大容量天然鸡源噬菌体单链抗体库,用于传染病诊断用抗体筛选。方法选取未经免疫的5周龄白来航鸡包括普通级别和无特定病原体级别、罗曼鸡、洛岛红鸡、洛岛白鸡和贵妃鸡,每个品种各5只,共30只。从法氏囊中提取总RNA,通过反转录合成cDNA。利用聚合酶链式反应技术扩增全套编码抗体可变区的基因序列。通过重叠延伸反应,将重链可变区和轻链可变区基因连接成为单链抗体。将经过回收并酶切纯化的单链抗体克隆到噬菌体载体上,电转化大肠埃希菌TG1感受态细胞。结果成功构建库容量达1010的鸡源天然单链抗体库细胞库,噬菌体展示库滴度达1012菌落形成单位/mL以上。随机挑选165个单克隆进行菌落PCR鉴定,转化阳性插入率为96.97%(160/165);随机选取72株阳性克隆进行测序,抗体互补决定区3碱基序列及长度存在显著差异,表明构建的抗体库多样性良好。结论本研究成功构建了大容量鸡源天然单链抗体库,为后续从中筛选出具有应用价值的特异性单链抗体奠定了基础。 展开更多

关键词 鸡源 天然抗体库 单链抗体 噬菌体展示技术

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噬菌体展示技术研究进展 被引量：3

8

作者 刘倩 赵玉军 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2007年第6期96-99,共4页

噬菌体表面展示技术是一种将外源蛋白或抗体可变区与噬菌体表面特定蛋白质融合并展示于其表面,构建蛋白质或抗体库,并从中筛选特异蛋白质或抗体的基因工程技术。介绍这一技术的原理、相关展示系统以及在蛋白质相互作用的研究,抗体及疫... 噬菌体表面展示技术是一种将外源蛋白或抗体可变区与噬菌体表面特定蛋白质融合并展示于其表面,构建蛋白质或抗体库,并从中筛选特异蛋白质或抗体的基因工程技术。介绍这一技术的原理、相关展示系统以及在蛋白质相互作用的研究,抗体及疫苗的制备、多肽药物的研制等方面的应用潜力和独特的优点。 展开更多

关键词 噬菌体 噬菌展示技术 融合蛋白

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噬菌体在口腔医学领域的应用研究进展

9

作者 李忆博 刘桢 +1 位作者 罗文欣 周丹 《中国实用口腔科杂志》 CAS CSCD 2023年第5期630-634,共5页

噬菌体是地球上极为丰富的生命形式,自发现以来为人体健康做出了巨大贡献。口腔是噬菌体在机体中的重要栖息地,口腔噬菌体学是生命科学中噬菌体研究的重要组成部分。随着噬菌体的深入研究和相关技术的发展,噬菌体在口腔医学领域中的应... 噬菌体是地球上极为丰富的生命形式,自发现以来为人体健康做出了巨大贡献。口腔是噬菌体在机体中的重要栖息地,口腔噬菌体学是生命科学中噬菌体研究的重要组成部分。随着噬菌体的深入研究和相关技术的发展,噬菌体在口腔医学领域中的应用也越来越广泛,其在机制研究、疾病诊断、感染治疗与预防、预后监测等方面都发挥了重要作用。文章分析了噬菌体在口腔医学领域应用的可能性及价值,并介绍了噬菌体疗法和噬菌体展示技术在口腔医学领域应用的具体实例,总结了最新的一些研究进展,为后续噬菌体用于口腔疾病的预防、诊断及治疗提供借鉴。 展开更多

关键词 噬菌体疗法 口腔噬菌体 噬菌体展示技术 口腔医学

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抗SARS抗体独特型单链抗体的筛选及鉴定 被引量：4

10

作者 何峰容 王晓娟 +4 位作者 周小欧 李曼君 朱慧芬 吴万敏 沈关心 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期224-226,共3页

目的从人源噬菌体抗体库中筛选抗SARS独特型抗体为SARS的诊断及疫苗的研究奠定基础。方法以混合SARS病人恢复期血清免疫球蛋白(Ig)作为筛选分子,从噬菌体抗体库中筛选出能与病人血清IgG(IgM)结合的抗体,并通过与混合正常人血清Ig作负性... 目的从人源噬菌体抗体库中筛选抗SARS独特型抗体为SARS的诊断及疫苗的研究奠定基础。方法以混合SARS病人恢复期血清免疫球蛋白(Ig)作为筛选分子,从噬菌体抗体库中筛选出能与病人血清IgG(IgM)结合的抗体,并通过与混合正常人血清Ig作负性筛选,从而获得抗SARS病毒的独特型抗体(AId)。通过4轮“吸附-洗涤-扩增”,从最后一轮所得单克隆菌株中分别通过ELISA筛选出能和SARS病人恢复期血清Ig结合的菌株,提取质粒DNA,并对PCR扩增产物进行DNA序列测定,最后用所筛选的克隆通过与不同人群血清反应,证实其特异性。结果随机挑选经第4轮筛选后的200个单克隆菌落,其中有10个与SARS病人恢复期血清Ig结合的OD值明显高于其与正常人Ig结合的OD值;以上10个克隆经PCR扩增,其中有6个克隆于1 000 bp处有电泳条带;其DNA序列经与BLAST数据库和IMGT/QUEST软件比对有5个均与人的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)高度同源,且与其同源性最高的人Ig的VH属VHI亚群,VL属k链,属VKⅡ亚群;最后确认有3个克隆其噬菌体抗体和SARS病人血清Ig结合的OD值均明显高于与正常人血清Ig结合的OD值。结论利用抗体库技术可不经免疫制备特异性抗SARS抗体独特型抗体,为SARS诊断及疫苗的研制奠定基础。 展开更多

关键词 SARS 噬菌体抗体库技术 独特型抗体(AId) 单链抗体(ScFv)

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重组白细胞介素4受体(IL-4R)噬菌体单链抗体库构建及筛选 被引量：5

11

作者 杨光勇 郭海涛 +5 位作者 刘茜明 何光志 田维毅 蔡琨 王平 王文佳 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期829-833,共5页

目的应用噬菌体展示技术构建重组白细胞介素4受体（IL-4R）噬菌体单链抗体（sc Fv）库,并从抗体库中进行筛选。方法利用重组人IL-4R（rh IL-4R）蛋白免疫BALB/c小鼠,提取总RNA,反转录PCR扩增V_H和V_L基因,经重叠延伸PCR扩增出带有限制... 目的应用噬菌体展示技术构建重组白细胞介素4受体（IL-4R）噬菌体单链抗体（sc Fv）库,并从抗体库中进行筛选。方法利用重组人IL-4R（rh IL-4R）蛋白免疫BALB/c小鼠,提取总RNA,反转录PCR扩增V_H和V_L基因,经重叠延伸PCR扩增出带有限制性酶切位点的sc Fv,用限制性内切酶SfiⅠ和NotⅠ分别双酶切sc Fv和p CANTAB5E载体,利用T4连接酶进行连接,转入感受态细菌E.coli TG1中制备转化子;在培养基中培养得到噬菌体单链抗体库;通过3轮富集和筛选,选择抗原亲和力最强的克隆进行测序分析。结果经过3轮筛选,构建了库容为2×10~8的rh IL-4R单链抗体库,测序结果显示抗rh IL-4R蛋白sc Fv基因全长741 bp,编码247个氨基酸。通过VBASE2数据库分析,抗rh IL-4R蛋白的V_H和V_L基因序列都存在3个互补决定区和4个骨架区。结论成功构建了抗rh IL-4R蛋白噬菌体sc Fv库。 展开更多

关键词 重组人白细胞介素4(rhIL-4R) 噬菌体展示技术 单链抗体

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T7 cDNA噬菌体展示文库筛选乙型肝炎病毒前S2蛋白结合蛋白 被引量：5

12

作者 刘霞 林森 +1 位作者 魏红山 陈京龙 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2007年第1期8-10,共3页

目的以乙型肝炎病毒前S2蛋白(HBVPre-S2)为靶蛋白,寻找该蛋白相应的结合蛋白。方法应用噬菌体表面展示技术,以纯化的HBV前S2蛋白为固相筛选蛋白,用正常人肝细胞的噬菌体T7cDNA文库进行5轮生物筛选,经噬斑PCR,对筛选克隆进行DNA序列分析... 目的以乙型肝炎病毒前S2蛋白(HBVPre-S2)为靶蛋白,寻找该蛋白相应的结合蛋白。方法应用噬菌体表面展示技术,以纯化的HBV前S2蛋白为固相筛选蛋白,用正常人肝细胞的噬菌体T7cDNA文库进行5轮生物筛选,经噬斑PCR,对筛选克隆进行DNA序列分析,将推断的氨基酸序列在蛋白质库中进行搜索,自GenBank中获得与HBVPre-S2有结合作用蛋白的cDNA和基因组的全长序列,并用ELISA验证筛选的结合蛋白。结果噬菌体经过5轮生物富集后,将随机筛选的200个噬斑裂解液做PCR,得到120个插入片段长短不一的克隆,ELISA证实获得43个阳性克隆。将其PCR产物序列测定后进行同源搜索,初步确定30个人体肝脏中固有的与乙型肝炎病毒前S2蛋白结合的蛋白,其中含细胞色素P450Ⅰ类A型亚基克隆2个、3个PI-3激酶相关激酶SMG-1同类蛋白、2个细胞生长抑制蛋白42,1个膜联蛋白A11转录变异体、3个转录激活因子5、2个α酸性糖蛋白、5个未知功能蛋白等。结论应用T7cDNA噬菌体表面展示技术和生物信息学方法筛选并验证了HBVPre-S2蛋白结合蛋白,为进一步研究Pre-S2蛋白的生物学功能提供新了思路。 展开更多

关键词 肝炎病毒 乙型 前S2蛋白 结合蛋白 噬菌体表面展示技术

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丙型肝炎病毒包膜蛋白E2人源单链可变区抗体的筛选与鉴定 被引量：3

13

作者 钟彦伟 成军 +2 位作者 施双双 王刚 陈菊梅 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期53-54,共2页

采用噬菌体表面展示技术 ,以重组的HCV结构蛋白E2为固相包被抗原 ,从半合成的噬菌体单链可变区抗体库中经过 3轮“吸附 洗脱 扩增”筛选过程 ,获得抗原特异性和结合活性较强的HCVE2人源单链可变区抗体 (ScFv)片段 ,片段为 771bp,阳性克... 采用噬菌体表面展示技术 ,以重组的HCV结构蛋白E2为固相包被抗原 ,从半合成的噬菌体单链可变区抗体库中经过 3轮“吸附 洗脱 扩增”筛选过程 ,获得抗原特异性和结合活性较强的HCVE2人源单链可变区抗体 (ScFv)片段 ,片段为 771bp,阳性克隆 ,对其进行免疫学检测 ,并对HCVE2特异性ScFv的编码基因序列进行测定分析。结果筛选得到的HCVE2ScFv片段 (771bp) 展开更多

关键词 丙型肝炎病毒 包膜蛋白E2 人源单链可变区抗体 筛选 鉴定

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噬菌体展示技术在食品真菌毒素检测领域的应用 被引量：4

14

作者 张园园 裴世春 郑东和 《中国农学通报》 CSCD 2008年第3期87-90,共4页

噬菌体展示技术(Phage display technology)是20世纪80年代逐步建立并发展起来的一项分子生物学新技术。它以噬菌体或噬粒为载体,使外源肽或蛋白基因与噬菌体表面特定蛋白基因在其表面进行融合表达,进而通过亲和富集法筛选表达有特异肽... 噬菌体展示技术(Phage display technology)是20世纪80年代逐步建立并发展起来的一项分子生物学新技术。它以噬菌体或噬粒为载体,使外源肽或蛋白基因与噬菌体表面特定蛋白基因在其表面进行融合表达,进而通过亲和富集法筛选表达有特异肽或蛋白质的噬菌体。利用噬菌体表面展示技术可以构建抗体库、随机肽库、蛋白质突变体库和cDNA文库,从而广泛用于单链抗体的筛选、先导化合物的筛选、疫苗的研制等,尤其是在单链抗体、模拟抗原表位的筛选及建立食品安全快速检测体系方面,具有广阔的应用前景。本文跟踪了目前噬菌体展示技术在真菌毒素检测领域的最新研究进展和发展前景。 展开更多

关键词 噬菌体展示技术 食品安全 单链抗体 模拟表位

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噬菌体展示技术发展 被引量：4

15

作者 罗扬拓 朱承睿 +1 位作者 武元 李骢 《现代生物医学进展》 CAS 2011年第12期2389-2390,2349,共3页

噬菌体表面展示技术是一种将外源蛋白或抗体可变区与噬菌体表面特定蛋白质融合并展示于其表面,构建蛋白质或抗体库,并从中筛选特异蛋白质或抗体的基因工程技术。随着该项技术的不断完善和发展,噬菌体展示技术已被广泛应用于生命科学研... 噬菌体表面展示技术是一种将外源蛋白或抗体可变区与噬菌体表面特定蛋白质融合并展示于其表面,构建蛋白质或抗体库,并从中筛选特异蛋白质或抗体的基因工程技术。随着该项技术的不断完善和发展,噬菌体展示技术已被广泛应用于生命科学研究的不同领域,并显示了良好的应用前景。 展开更多

关键词 噬菌体展示技术 原理 应用

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抗体库优化策略对特异性抗肝癌单链抗体的人源化 被引量：3

16

作者 叶刚 杨冬华 +3 位作者 汤绍辉 黄卫 丁世华 罗静兰 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2008年第11期1144-1150,共7页

目的:对特异性抗肝癌单链抗体(single chain variable fragment,scFv)DM同步进行人源化和优化,以获得亲和力高和免疫原性低的人源化抗肝癌单链抗体.方法:通过分子结构和序列分析,确定对抗原结合位点的构象有重要影响的骨架区(FR)残基,... 目的:对特异性抗肝癌单链抗体(single chain variable fragment,scFv)DM同步进行人源化和优化,以获得亲和力高和免疫原性低的人源化抗肝癌单链抗体.方法:通过分子结构和序列分析,确定对抗原结合位点的构象有重要影响的骨架区(FR)残基,把难以判断回复突变残基的人、鼠源副本同时编入人源化抗体序列中;通过重叠延伸PCR技术合成人源化抗体全基因,利用噬菌体展示技术构建人源化组合抗体库;通过肝癌细胞筛选阳性克隆,ELISA方法测定各个克隆抗原结合活性;用硫氰酸盐洗脱法测定并比较亲本抗体和人源化scFv的相对亲和力.结果:成功构建人源化组合抗体库,实际库容4.77×105,包含由25不同重链和22不同轻链组成的128种人源化DM;经过筛淘及ELISA鉴定,获得HDM1、HDM2和HDM33个阳性克隆,相对亲和力指数分别为HDM11.6mol/L、HDM21.2mol/L和HDM32.2mol/L.结论:抗体库优化法是一个高效、简便的人源化方法;获得的3株阳性克隆HDM1、HDM2、HDM3与亲本抗体DM同样具有良好的抗原结合特异性和较高的亲和力. 展开更多

关键词 人源化 单链抗体 组合抗体库 肝癌 重叠延伸PCR 硫氰酸盐洗脱法 酶联免疫吸附试验 噬菌体展示技术

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人源抗狂犬病病毒scFv噬菌体抗体库的构建及筛选 被引量：4

17

作者 毕司英 毛晓燕 +1 位作者 陈继军 秦海艳 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2012年第12期1578-1582,共5页

目的构建人源抗狂犬病病毒单链抗体(Single-chain fragment variable,scFv)噬菌体抗体库,并进行筛选。方法以接种过狂犬病疫苗的21份高效价的健康人外周血为原料,提取淋巴细胞总RNA,PCR扩增VH、Vκ、Vλ基因,重叠延伸PCR扩增获得scFv基... 目的构建人源抗狂犬病病毒单链抗体(Single-chain fragment variable,scFv)噬菌体抗体库,并进行筛选。方法以接种过狂犬病疫苗的21份高效价的健康人外周血为原料,提取淋巴细胞总RNA,PCR扩增VH、Vκ、Vλ基因,重叠延伸PCR扩增获得scFv基因,克隆入噬菌粒pS100,电转化E.coli TG1,建立scFv初级抗体库,并进行基因序列分析及鉴定。以灭活的狂犬病病毒为抗原,进行3轮scFv噬菌体抗体库的富集筛选,随机挑取单克隆,制备噬菌体抗体颗粒,并进行ELISA分析,阳性克隆进行序列分析,采用快速荧光灶抑制试验(Rapid fluorescent facus inhibition test,RFFIT)检测噬菌体抗体颗粒的中和活性。结果获得了库容为1.7×108的人源抗狂犬病病毒scFv噬菌体抗体库,该抗体库具有较好的序列正确率和多样性,经3轮筛选后,ELISA分析显示,共获得24个序列各不相同的针对狂犬病病毒的阳性克隆,对其中7个克隆的噬菌体抗体颗粒进行RFFIT检测,均具有中和活性。结论已成功构建了人源抗狂犬病病毒scFv噬菌体抗体库,并建立了筛选方法。 展开更多

关键词 狂犬病病毒 单链抗体 噬菌体展示技术 抗体库

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运用噬菌体随机肽库分析系统性红斑狼疮的Sm抗原模拟表位 被引量：3

18

作者 谢红付 树叶 +2 位作者 张慧 施为 冯浩 《临床皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第10期600-603,共4页

目的:应用噬菌体呈现技术分析系统性红斑狼疮(SLE)Sm抗原的模拟表位。方法:以鼠单克隆抗Sm抗体为筛选配基,对噬菌体随机12肽库进行3轮亲和筛选。分离10个噬菌体克隆进行Dot-ELISA和双抗体夹心ELISA鉴定。将阳性克隆进行DNA序列测定,并... 目的:应用噬菌体呈现技术分析系统性红斑狼疮(SLE)Sm抗原的模拟表位。方法:以鼠单克隆抗Sm抗体为筛选配基,对噬菌体随机12肽库进行3轮亲和筛选。分离10个噬菌体克隆进行Dot-ELISA和双抗体夹心ELISA鉴定。将阳性克隆进行DNA序列测定,并将混合阳性克隆与患者血清反应。结果:经3轮筛选,每轮筛选的投入与产出比逐轮升高,显示良好的富集效果。两种ELISA鉴定9个噬菌体克隆具有特异性。经过DNA测序得到6个不同的序列,推导出保守的氨基酸序列为RR/PR/IS。混合克隆诊断sLE血清的敏感性是51.72％,特异性是100.00％,结论:噬菌体呈现技术能够分析Sm抗原的模拟表位,将有利于研制表位水平的诊断试剂。 展开更多

关键词 红斑狼疮 系统性 噬菌体呈现技术 抗原 SM 表位

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抗盐酸克伦特罗人源ScFv抗体筛选与鉴定 被引量：2

19

作者 马巍娜 贾雷立 +5 位作者 刘雪林 宋宏彬 高志贤 钟彦伟 张传福 徐元勇 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期287-288,共2页

目的筛选盐酸克伦特罗(CLB)人源单链可变区(ScFv)抗体,为研究快速检测试剂(盒)提供基础依据。方法采用噬菌体表面展示技术,以CLB作为抗原,从噬菌体单链可变区抗体库中经过3轮"吸附-洗脱-扩增"筛选过程,随机挑选抗CLB的60个克... 目的筛选盐酸克伦特罗(CLB)人源单链可变区(ScFv)抗体,为研究快速检测试剂(盒)提供基础依据。方法采用噬菌体表面展示技术,以CLB作为抗原,从噬菌体单链可变区抗体库中经过3轮"吸附-洗脱-扩增"筛选过程,随机挑选抗CLB的60个克隆,利用酶联免疫吸附法(ELISA)、交叉反应及竞争抑制实验,对其进行免疫学检测和鉴定,获得与CLB结合活性较强的ScFv阳性克隆,从噬菌体抗体阳性克隆中提取质粒,经酶切鉴定SfiⅠ/NotⅠ后,亚克隆到pCANTAB5E载体;转化大肠埃希菌XL1-B lue,提取质粒进行DNA序列测定;并对CLB ScFv的编码基因序列分析。结果经过筛选60个克隆中有15株克隆ELISA的吸光度(A490nm)值较高,将这些噬菌体上清与牛血清白蛋白(BSA)进行交叉反应,确定有7株交叉反应较弱,结合3次ELISA重复实验的A值及竞争抑制实验结果,最后确定1株阳性克隆。亚克隆到pCANTAB5E载体;转化大肠埃希菌XL1-B lue,提取质粒进行DNA序列测定;DNA为750 bp;经BLAST分析,此片段属于新抗体基因序列,GenBank注册号为:EU681272。结论本实验用噬菌体抗体库技术能够初步获得抗CLB的ScFv抗体,为下一步其特异性亲和力的研究创造了条件。 展开更多

关键词 噬菌体表面展示技术 盐酸克伦特罗 人源单链可变区抗体(ScFv)

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抗人DR5单链抗体噬菌体展示文库的建立和筛选 被引量：3

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作者 刘瑞敏 季泽俊 +4 位作者 孙颖川 张爱红 朱诗白 白慧玲 马远方 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期945-948,共4页

目的应用噬菌体展示技术构建抗人DR5(death receptor 5,DR5)单链抗体(single chain Fv,scFv)文库,从中筛选抗DR5 scFv。方法利用重组人DR5抗原免疫小鼠,分别扩增小鼠VH和VL基因,经重叠延伸PCR将VH和VL基因拼接成scFv基因,以SfiⅠ位点定... 目的应用噬菌体展示技术构建抗人DR5(death receptor 5,DR5)单链抗体(single chain Fv,scFv)文库,从中筛选抗DR5 scFv。方法利用重组人DR5抗原免疫小鼠,分别扩增小鼠VH和VL基因,经重叠延伸PCR将VH和VL基因拼接成scFv基因,以SfiⅠ位点定向插入PAK100噬菌粒载体,转化E.coli XL1-Blue,构建了库容为1×106的抗DR5单链抗体库。对抗体库进行5轮富集筛选后,phage-ELISA检测阳性克隆的抗原特异性,取1株阳性克隆进行测序分析。结果抗DR5 scFv基因序列长747 bp,编码249个氨基酸,具有和DR5结合的特异性。结论本文利用噬菌体抗体库筛选到了抗DR5 scFv,为研制临床免疫治疗的新型抗体奠定了实验基础。 展开更多

关键词 噬菌体展示技术 死亡受体5 单链抗体

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