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不同实验条件对淋病奈瑟球菌体外转化效率的影响
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作者 李晓蝶 朱琳 +3 位作者 洪毅勇 黄影 赖维 龚子鉴 《中华皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期240-245,共6页
目的探讨不同实验条件对淋病奈瑟球菌(淋球菌)体外转化效率的影响。方法以淋球菌D株DNA为模板扩增penA基因,采用重叠延伸PCR制备penAA501V(耐药突变)基因,购买淋球菌penAH041基因(耐药阳性对照)。制备含penA/penAA501V/penAH041基因的... 目的探讨不同实验条件对淋病奈瑟球菌(淋球菌)体外转化效率的影响。方法以淋球菌D株DNA为模板扩增penA基因,采用重叠延伸PCR制备penAA501V(耐药突变)基因,购买淋球菌penAH041基因(耐药阳性对照)。制备含penA/penAA501V/penAH041基因的质粒转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞,采用蓝白筛选培养基克隆扩增;分别采用日本TaKaRa公司质粒提取试剂盒和天根生化科技(北京)有限公司高纯度质粒小提试剂盒提取质粒。以penA质粒、penAA501V质粒、penAH041质粒、penAA501V基因、penAH041基因为底物采用直接孵育法转化淋球菌受体菌株A43、A49,测定转化率(CFU/μg)及头孢曲松(CRO)的最小抑菌浓度(MIC)。以penAA501V、penAH041基因为底物,采用脂质体法转化受体菌株A43、A49,观察转化效率及头孢曲松的MIC。结果以D株淋球菌DNA为模板,成功获得1749 bp的penA及penAA501V基因。提取质粒并电泳后,TaKaRa试剂盒提取的含淋球菌penA、penAA501V、penAH041基因的质粒主要集中在2500 bp处,迁移速度较快;天根试剂盒提取的质粒主要集中在5000 bp处,迁移速度较慢。直接孵育法转化时,含野生型penA的A43株的MIC为0.001μg/ml,转入penA质粒后MIC上升至0.002μg/ml,转入penAA501V质粒和penAA501V基因转化株MIC均为0.004μg/ml,转入阳性对照penAH041质粒和penAH041基因后MIC均升至0.512μg/ml;各底物孵育后CRO对A49株的MIC值与空白对照相同,均为0.016μg/ml。脂质体法转化时,含野生型penA的A43株对CRO的MIC是0.002μg/ml,A49株MIC为0.016μg/ml;penAA501V基因转化A43株后MIC升至0.004μg/ml,转化A49株后仍为0.016μg/ml;阳性对照penAH041基因转化A43和A49株后MIC均升至0.250μg/ml,较空白对照分别升高至125倍和15.6倍。结论选择质粒为底物采用直接孵育法对A43株淋球菌有较好转化效率,不同质粒提取方法可能影响转化效率,对于直接孵育法转化效率不高的A49株可采用脂质体法。 展开更多
关键词 淋病奈瑟球菌 转化 细菌 质粒 头孢曲松 抗药性 细菌 pena基因 最小抑菌浓度
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新penA镶嵌等位基因致淋病奈瑟菌头孢菌素耐药的分子机制 被引量:1
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作者 向波 向辉 +5 位作者 熊文 刘龙亚 印道春 王永杰 向敏 符自清 《医学理论与实践》 2020年第21期3531-3534,共4页
目的:追踪湖南首例头孢菌素耐药淋病奈瑟菌株wls18099分子流行病学信息,并探讨耐药机制。方法:采用NG-MAST对wls18099菌株分型。应用PCR扩增penA、mtrR、penB和ponA这4种与头孢菌素耐药密切相关的基因。将PCR产物测序得到的碱基数据与... 目的:追踪湖南首例头孢菌素耐药淋病奈瑟菌株wls18099分子流行病学信息,并探讨耐药机制。方法:采用NG-MAST对wls18099菌株分型。应用PCR扩增penA、mtrR、penB和ponA这4种与头孢菌素耐药密切相关的基因。将PCR产物测序得到的碱基数据与野生型菌株M32091比对,筛选出可疑耐药突变位点。用筛选的wls18099菌株耐药基因penA的PCR产物转化标准菌株WHO M、WHO L和临床分离的头孢菌素敏感菌株wls11020,验证其耐药性。结果:wls18099属于ST14155,其基因组含一种新的penAwlsⅩⅩⅩⅣ/K503P镶嵌等位基因。三种菌株转化该等位基因后均产生头孢曲松与头孢克肟耐药现象,MIC值上升4~62倍。结论:这种新的penA wlsⅩⅩⅩⅣ/K503P镶嵌等位基因可能导致wls18099菌株对头孢克肟和头孢曲松耐药。湖南及周边省份应加强对其监控,以防播散。 展开更多
关键词 淋病奈瑟菌 抗菌素耐药 头孢菌素类 pena基因
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头孢曲松低敏淋球菌中penA基因的初步研究 被引量:1
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作者 其木格 张秀丽 +1 位作者 塔娜 董磊 《内蒙古医学杂志》 2013年第4期389-391,共3页
目的:检测头孢曲松低敏淋球菌中penA基因的改变,探讨其是否与淋球菌对头孢曲松敏感性降低有关。方法:通过对5株头孢曲松低敏和1株头孢曲松敏感的淋球菌进行penA基因全基因测序,进一步了解penA基因的碱基置换或插入情况及青霉素结合蛋白2... 目的:检测头孢曲松低敏淋球菌中penA基因的改变,探讨其是否与淋球菌对头孢曲松敏感性降低有关。方法:通过对5株头孢曲松低敏和1株头孢曲松敏感的淋球菌进行penA基因全基因测序,进一步了解penA基因的碱基置换或插入情况及青霉素结合蛋白2(PBP2)的结构模式。结果:5株头孢曲松低敏淋球菌的penA基因中有多个碱基置换或突变,没有发现含有镶嵌状penA基因结构模式。结论:penA基因的多个碱基置换或突变可能与淋球菌对头孢曲松敏感性降低相关。 展开更多
关键词 淋病奈瑟球菌 头孢曲松 pena基因
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penA和mtrR基因突变在体外诱导淋球菌对头孢曲松耐药作用的研究
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作者 其木格 董磊 +3 位作者 张秀丽 张立忠 李艳飞 王杰 《中华皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期369-372,共4页
目的探讨penA、mtrR基因突变在淋球菌对头孢曲松耐药中的作用。方法分别选取淋球菌标准菌株(ATCC-49226)、临床头孢曲松敏感菌株(2012.4052、2012.15361)及低敏菌株(2012.5616),体外次抑菌浓度诱导对头孢曲松耐药,提取诱导... 目的探讨penA、mtrR基因突变在淋球菌对头孢曲松耐药中的作用。方法分别选取淋球菌标准菌株(ATCC-49226)、临床头孢曲松敏感菌株(2012.4052、2012.15361)及低敏菌株(2012.5616),体外次抑菌浓度诱导对头孢曲松耐药,提取诱导前原代菌株及诱导后子代耐药菌株的DNA,对penA和mtrR基因进行扩增与测序。结果菌株2012—5616和ATCC.49226分别在诱导至第26和28代时获得最低抑菌浓度(MIC)≥1mg/L的耐药菌株,菌株2012—4052和2012.15361分别在诱导至第22和36代时获得MIC≥0.5mg/L的耐药菌株。penA基因测序结果显示,ATCC-49226菌株诱导后出现A501T和G542S突变位点,另3株菌诱导前后penA基因均未出现新的突变位点;4株突变菌株的青霉素结合蛋白2(PBP2)基因序列型都为XⅧ,未检测到penA镶嵌状结构模式。mtrR基因测序结果显示,2012—5616和ATCC-49226菌株在诱导前后均发生A39T突变,2012-4052菌株诱导后在mtrR编码区发生A39T突变。结论penA基因中的A501T和G542S突变与mtrR基因发生的A39T突变可能在头孢曲松耐药中发挥作用。 展开更多
关键词 淋病奈瑟球菌 头孢曲松 β内酰胺抗药性 pena基因 MTRR基因
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Shashi-Pena综合征1家系遗传学分析
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作者 史停停 任增果 +6 位作者 杨科 秦利涛 雷星星 霍晓东 张冰 廖世秀 王莉 《中华实用诊断与治疗杂志》 2024年第6期618-622,共5页
目的 分析1家系Shashi-Pena综合征患儿的临床资料,探讨其遗传学病因,对该家系进行遗传咨询及产前诊断。方法 2022年4月河南省人民医院诊治1家系Shashi-Pena综合征患儿,收集临床资料,采集先证者及其父母外周血,行染色体G显带核型分析及... 目的 分析1家系Shashi-Pena综合征患儿的临床资料,探讨其遗传学病因,对该家系进行遗传咨询及产前诊断。方法 2022年4月河南省人民医院诊治1家系Shashi-Pena综合征患儿,收集临床资料,采集先证者及其父母外周血,行染色体G显带核型分析及全外显子组测序,采用生物信息学软件分析可疑致病性突变位点,检索ExAC、1000Genomes、gnomeAD数据库对基因突变位点进行比对,采用Sanger测序法验证致病基因突变情况。应用UCSC软件分析人、黑猩猩、恒河猴、狼、牛、小鼠、大鼠7个物种基因突变位点的保守性,应用Swiss-Model软件分析基因突变位点的蛋白结构,依据ACMG指南对突变进行致病性评级。采集先证者母亲羊水,行基因检测并培养羊水细胞行胎儿染色体核型分析,胎儿出生后随访至6个月龄。结果 先证者存在智力障碍、语言运动发育迟缓、大头畸形及特殊面容等表现。先证者存在ASXL2基因c.1230delA(p.Lys410Asnfs*13)杂合突变;先证者父母该位点均为野生型,该突变为首次报道的新发突变。人、黑猩猩、恒河猴、狼、牛、小鼠、大鼠7个物种ASXL2基因编码的第410位氨基酸均呈高度保守;ASXL2基因c.1230delA位点突变为移码突变,导致ASXL2蛋白结构改变;该突变在ExAC、1000Genomes、gnomeAD数据库均未见收录;ACMG指南评级为致病性突变。结合该家系患儿临床表现、遗传特征、基因测序及致病性分析结果,诊断为ASXL2基因突变引起的Shashi-Pena综合征。胎儿未携带ASXL2基因c.1230delA突变,染色体核型分析未见明显异常;出生后随访至6个月龄,未出现特殊面容,发育未见明显异常。结论 ASXL2基因c.1230delA(p.Lys410Asnfs*13)杂合突变是该家系Shashi-Pena综合征患儿的遗传学病因,可为该家系夫妇遗传咨询及胎儿产前诊断提供依据。 展开更多
关键词 Shashi-pena综合征 ASXL2基因 全外显子组测序 产前诊断
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镶嵌状penA X基因在淋球菌中对头孢曲松敏感性的作用研究 被引量:1
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作者 覃晓琳 赵云虎 +7 位作者 吴兴中 黄进梅 薛耀华 唐三梅 陈文韬 杨结仪 廖仪文 郑和平 《皮肤性病诊疗学杂志》 2018年第4期195-199,共5页
目的:探讨pen A X基因在淋球菌中对头孢曲松敏感性的影响。方法:构建重组质粒p ET-28apen A X,将重组质粒转化到淋球菌WHO P标准株,通过PCR进行鉴定。采用琼脂稀释法测定菌株对头孢曲松的最小抑菌浓度(MIC),观察转化了p ET-28a-pen A X... 目的:探讨pen A X基因在淋球菌中对头孢曲松敏感性的影响。方法:构建重组质粒p ET-28apen A X,将重组质粒转化到淋球菌WHO P标准株,通过PCR进行鉴定。采用琼脂稀释法测定菌株对头孢曲松的最小抑菌浓度(MIC),观察转化了p ET-28a-pen A X质粒的淋球菌对头孢曲松敏感性的变化。结果:成功构建p ET-28a-pen A X重组质粒,并成功转化了淋球菌WHO P标准株。药敏结果显示转化了p ET-28a-pen A X质粒的淋球菌比对照株(p ET-28a-pen A和p ET-28a转化株)对头孢曲松的MIC值提高了3.75倍。结论:pen A X基因降低了淋球菌WHO P标准株对头孢曲松的敏感性。 展开更多
关键词 淋球菌 pena X基因 头孢曲松 敏感性
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